一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明属于肌间骨染色的方法，更具体涉及一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法，同时还涉及一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法在团头鲂肌间骨形态以及其他同类型鱼类肌间骨研究中的用途。它适用于染色获得团头鲂成鱼透明标本后，清楚的观察团头鲂肌间骨的附着位置与形态。
【背景技术】
[0002]团头妨(Megalobramaamblycephala)隶属于趣形目(Cypriniformes)，趣科(Cyprinidae)，舶亚科(Cul ter inae)，鲂属(Megalobrama)。是我国特有的重要草食性经济鱼类之一，由于其食性广、成本低、生长快、成活率高、易捕捞，且具有味美、头小、含肉率高、体形好、规格适中等优点，因而被作为优良的草食性鱼类品种在全国普遍推广。团头鲂从养殖推广至今，养殖产量逐年增加，居我国淡水养殖产量的第六位，成为了国内淡水养殖的后起之秀和市场上的畅销鱼类。但是团头鲂肌间骨的存在，对团头鲂的加工与食用造成了很大的不利影响，所以了解肌间骨在其体内的分布位置和形态，对于团头鲂的加工和食用以及其肌间骨发生发育的研究都具有辅助意义。
[0003]鱼类的肌间骨(intermuscular bone)也称肌间刺，是由肌膈结缔组织连续同源骨化而来的膜骨，包括髓弓小骨、脉弓小骨和椎体小骨三种类型。通过团头鲂成鱼肌间骨染色的方法可以制作团头鲂成鱼肌间骨的标本，用于清楚的观察其肌间骨的形态以及附着位置。通过检索还未见有文献报道鱼类成鱼肌间骨染色的方法。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是在于提供了一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法，方法易行，操作过程简单，无需复杂的仪器，所用药品都是实验室常规的。获得身体透明、肌间骨染色为深紫色的团头鲂成鱼标本。获得的标本可清楚观察团头鲂成鱼肌间骨的附着位置及形态。
[0005]本发明的另一个目的是在于提供了一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法在团头鲂肌间骨形态以及其他同类型鱼类肌间骨研究中的应用，通过此方法染色的团头鲂和黄鳝，可以清楚地看到肌间骨的形态及附着位置，同时还可制作为标本，供人参观欣赏。
[0006]为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施:
一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法，其步骤是:
1、用95%(体积比)的无水乙醇固定团头鲂成鱼(体重为400—600g)样本3— 4天(若鱼体标本体重是600—800g，应适当加长时间为5—6天)；
2、用50%(体积比)无水乙醇、30%(体积比)无水乙醇和蒸馏水对团头鲂成鱼标本分别进行复水，每次时间需要10 — 14h左右(若鱼体标本是600—80 Og，应适当加长时间为15 —24h)；
3、用TBST溶液(50mmol/LTris, PH 7.4; 150 mmol/L NaCl;0.l%Tritonx_100)浸泡团头鲂成鱼标本8—12h(若鱼体标本体重是600—800g，应适当加长时间为12—24h)； 4、用蒸馏水浸泡团头鲂成鱼标本10— 14h，洗去残余的TBST溶液(若鱼体标本体重是600—800g，应适当加长时间为15 — 20h);
5、用新配1%(质量比)的KOH溶液透明团头鲂成鱼标本46— 52h(若鱼体标本体重是600—800g，应适当加长时间52—58h);
6、将标本转移至新的I% (质量比)的K O H溶液中，然后滴加茜素红染液(I g茜素红溶于10ml 1%(质量比)的KOH溶液中)，直至溶液变为深紫色，染色时间为24—36h(若鱼体标本体重是600—800g，应适当加长36—48h)；
7、将标本转移至新的1%(质量比)的KOH溶液中，洗去团头鲂成鱼标本的染色液；
8、将团头鲂成鱼标本转移至50%(体积比)的甘油、100%(体积比)的甘油中脱水分别保存46 — 50h，最终保存在100%的甘油中。最终获得如图1所示的标本。
[0007]—种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法在黄鳝肌间骨形态研究以及其他同类型鱼类肌间骨研究中的应用，其步骤是:
1、用95%(体积比)的无水乙醇保存黄鳝标本3天；
2、将黄鳝标本转移至1%(体积比)的双氧水中浸泡12h;
3、将黄鳝标本转移至蒸馏水中复水12h;
4、将黄鳝标本转移至1%(质量比)的KOH溶液中浸泡48h左右，在透明时，若KOH溶液变浑浊，要更换新的1%(质量比)的KOH溶液；
5、将黄鳝标本转移至新的1%(质量比)的KOH溶液，然后滴加茜素红染液(Ig茜素红溶于100 ml 1%(质量比)的KOH溶液中)，直至溶液变为深紫色，染色时间约24h;
6、将标本转移至新的1%(质量比)的KOH溶液中，洗去黄鳝标本的染色液；
7、将黄鳝标本转移至50%和100%(体积比)的甘油中脱水分别保存48h，(在换甘油时，要注意保持标本的完整性)，最终保存在100%的甘油中。
[0008]本发明具有以下优点和效果:
一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法，方法易行，操作过程简单，无需复杂的仪器，所用药品都是实验室常规的；获得身体透明、肌间骨染色为深紫色的团头鲂成鱼标本，可清楚观察团头鲂成鱼肌间骨的附着位置及形态，从而应用于团头鲂肌间骨形态以及其他同类型鱼类肌间骨研究中。同时，用此方法制作的鱼体颜色为紫红色，整体观赏价值高，可制作为标本，供人参观欣赏。
【附图说明】
[0009]
图1为一种团头鲂成鱼肌间骨染色整体标本示意图。
[0010]可以清楚地看到团头鲂肌间骨的形态以及排列方式。
[0011]图2为一种团头鲂成鱼肌间骨染色标本的髓弓小骨示意图。
[0012]位于轴上肌的肌间骨为髓弓小骨。
[0013]图3为一种团头鲂成鱼肌间骨染色标本的脉弓小骨示意图。
[0014]位于轴下肌的肌间骨为脉弓小骨。
[0015]图4为一种黄鳝局部肌间骨染色示意图。
[0016]以上4个图展示了采用此方法染色的团头鲂和黄鳝成鱼标本整体或局部染色情况，标本整体染色为紫红色，骨骼染色清晰，可清楚观察鱼体内肌间骨的附着位置及形态。
【具体实施方式】
[0017]
一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法，其步骤是:
1.取标本:用冰水混合物或乌来糖(氨基甲酸乙酯)水溶液麻醉团头鲂成鱼样本，体重为400—600 g；
2.用95%(体积比)的无水乙醇固定团头鲂成鱼标本3天(在固定标本时，若溶液变浑浊，要换新的95%(体积比)的无水乙醇；换溶液时，要注意清除容器内鱼类标本体表脱落的杂质)；
3.用50%(体积比)无水乙醇、30%(体积比)无水乙醇和蒸馏水对团头鲂成鱼标本分别进行复水，每次时间需要10 h(换溶液时，要注意清除容器内鱼类标本体表脱落的杂质)；
4.用TBST溶液(50mmol/LTris，PH7.4;150mmol/LNaCl; 0.l%Tritonx_100)浸泡团头鲂成鱼标本1h(换溶液时，要注意清除容器内鱼类标本体表脱落的杂质)；
5.用蒸馏水浸泡团头鲂成鱼标12h(换溶液时，要注意清除容器内鱼类标本体表脱落的杂质)，洗去残余的TBST溶液；
6.用新配1%(质量比)的KOH溶液透明团头鲂成鱼标本50h，在透明时，若KOH溶液变浑浊，要更换新的1%(质量比)的KOH溶液，在换KOH溶液的间隙，去除标本体表的鳞片以及内脏器官(换溶液时，要注意清除容器内鱼类标本体表脱落的杂质);
7.将标本转移至新的1%(质量比)的KOH溶液中，然后滴加茜素红染液(Ig茜素红溶于100 ml 1%(质量比)的KOH溶液中)，直至溶液变为深紫色，染色时间约24—36h;
8.将标本转移至新的1%(质量比)的KOH溶液中，洗去团头鲂成鱼标本的染色液；
9.将团头鲂成鱼标本转移至50%和100%的甘油中脱水分别保存50h，在保存期间，若保存标本甘油颜色变紫，要替换新的甘油保存标本(在换甘油时，要注意保持标本的完整性)，最终保存在100%的甘油中。在成鱼的躯体上，可以清楚到看到肌间骨的形态及附着位置。最终获得如图1一图3所不的标本。
[0018]实施例2:
一种黄鳝肌间骨染色的方法在黄鳝肌间骨形态研究中的应用，其步骤是:
1、取标本:用冰水混合物或乌来糖(氨基甲酸乙酯)水溶液麻醉黄鳝成鱼样本，体重为100—150g；
2、用95%的无水乙醇固定团头鲂成鱼标本3天(在固定标本时，若溶液变浑浊，要换新的95%的无水乙醇;换溶液时，要注意清除容器内鱼类标本体表脱落的杂质)；
3、将黄鳝标本转移至1%(体积比)双氧水浸泡标本12h左右，去除黄鳝体表的色素；
4、将黄鳝标本转移至蒸馏水中复水12h(洗去容器内黄鳝体表脱落的杂质)；
5、将黄鳝标本转移至1%(质量比)的KOH溶液中浸泡48h左右，在透明时，若KOH溶液变浑浊，要更换新的1%的KOH溶液(换溶液时，要注意清除容器内鱼类标本体表脱落的杂质)；
6、将黄鳝标本转移至新的1%(质量比)的KOH溶液，然后滴加茜素红染液(Ig茜素红溶于100 ml 1%(质量比)的KOH溶液中)，直至溶液变为深紫色，染色时间约24h;
7、将标本转移至新的1%(质量比)的KOH溶液中，洗去黄鳝标本的染色液； 8、将黄鳝标本转移至50%和100%(体积比)的甘油中脱水分别保存48h，在保存期间，若保存标本甘油颜色变紫，要替换新的甘油保存标本(在换甘油时，要注意保持标本的完整性)，最终保存在100%的甘油中，获得如图4所示的标本。
【主权项】
1.一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法，其步骤是: 1)用95%体积比的无水乙醇固定团头鲂成鱼样本3-4天； 2)用50%、30%体积比无水乙醇、蒸馏水对团头鲂成鱼标本复水，每次时间10-14h; 3)用TBST溶液浸泡团头鲂成鱼标本8-12h; 4)用蒸馏水浸泡团头鲂成鱼标本10-14h，洗去残余的TBST溶液； 5)用新配1%质量比的KOH溶液透明团头鲂成鱼标本46-52h; 6)将标本转移至新的1%质量比的KOH溶液中，然后滴加茜素红染液，直至溶液变为深紫色，染色时间为24-36h; 7)将标本转移至新的1%质量比的KOH溶液中，洗去团头鲂成鱼标本的染色液； 8)将团头鲂成鱼标本转移至50%体积比的甘油、100%体积比的甘油中脱水分别保存46-50h，最终保存在100%的甘油中。2.权利要求1所述的一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法在黄鳝肌间骨形态研究中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种团头鲂成鱼肌间骨染色的方法，其步骤：1、用无水乙醇固定团头鲂成鱼样本；2、用无水乙醇、蒸馏水对团头鲂成鱼标本复水；3、用TBST溶液浸泡团头鲂成鱼标本过夜处理；4、用蒸馏水浸泡团头鲂成鱼标本，洗去残余的TBST溶液；5、用新配的KOH溶液透明团头鲂成鱼标本；6、将标本转移至新的KOH溶液中，然后滴加茜素红染液染色，直至溶液变为深紫色；7、将标本转移至新的KOH溶液中，洗去团头鲂成鱼标本的染色液；8、将团头鲂成鱼标本转移至甘油中脱水保存。此方法易行，操作过程简单，无需复杂的仪器，获得身体透明、肌间骨染色为深紫色的团头鲂成鱼标本，标本可清楚观察团头鲂成鱼肌间骨的附着位置及形态。
【IPC分类】A01N1/02
【公开号】CN105532642
【申请号】CN201511003963
【发明人】高泽霞, 聂春红, 万世明, 张伟卓, 关柠楠, 王卫民
【申请人】华中农业大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年12月25日