一种姜黄组织培养快速繁殖方法

文档序号:9794962阅读:823来源:国知局
一种姜黄组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种姜黄组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]药材姜黄又名宝鼎香、黄姜,为姜科植物,姜黄(Curcumalonga L.)的干燥根莖,具有破血、行气、通经、止痛的功效,用于治疗风湿、肩臂酸痛、胸胁疼痛、痛经以及损伤瘀痛等。
[0003]现代研究表明,姜黄根茎以姜黄素类为主,含有倍半萜类化合物、酸性多糖、挥发油类、菜油甾醇厚等多种复杂成分,具有保护免疫系统(抗炎、创伤愈合等)、消化系统(抗溃疡、解痉)、心血管系统(降压、降血脂、抗血凝)和保肝利胆作用,以及兴奋子宫、抗生育、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗艾滋病、抗老年痴呆、抗病原微生物及原虫等广泛药理活性,且无毒副作用。
[0004]我国己经开发出多种以姜黄为主要原料的中成药,如:马应龙麝香痔疮膏、舒肝片、珊瑚癣净等。美国国立肿瘤研究所将姜黄素列为第三代癌化学预防药。除了用于临床中药配方、作为多种传统中成药和抗菌消炎、抗肿瘤类新药开发的重要原料外,姜黄色素还被广泛用作食品添加剂、饮料原料、染料添加剂,以及香水等日化用品,出口东南亚和欧美等国家,表现广阔的开发潜力和市场前景。因此,随着规模开发利用的需求,姜黄的种植面积不断扩大。
[0005]植物姜黄主要分布于四川、福建、江西、在广西、湖北、陕西、台湾、云南等地也有栽培。但是,姜黄开花很少,大多数种子不充实,栽培上主要利用根茎繁殖,称为“种姜”,即“老母姜”,但不能使用老母姜作种,要待子姜繁殖出的长成后的母姜,即“二母姜”才行,因此,姜黄和繁殖速度慢、效率低下。迄今尚无姜黄组织培养研究的报道。

【发明内容】

[0006]本发明通过以下技术方案达到上述目的,一种姜黄组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:
[0007](I)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外为植体,先用2v/v%的洗洁精水溶液浸泡20min,线状自来水冲洗15-20min,再用添加了2-3滴吐温-20的0.lm/v%的升汞消毒10-15min,无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸吸去除外植体表面水份,其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水;
[0008](2)块茎发芽培养和获得无菌试管苗:将步骤(I)中获得的外植体接种到MS发芽培养基中培养得到无菌试管苗,其中MS发芽培养基中添加IAA 0.1-0.5mg/L、6-BA 0.5-
2.0mg/L、鹿糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8 ;
[0009](3)试管苗快速繁殖和获得丛生芽:将步骤(2)中得到的试管苗接种至MS丛芽培养基中培养25-30d,获得丛生芽,其中,MS丛芽培养基中添加ZT 0.1-1.0mg/L、IBA 0.1-
1.0mg/L、鹿糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8 ;
[0010](4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的丛生芽转接至MS壮苗培养基中培养25-35d,得到健壮植株,其中MS壮苗培养基中添加6-BA 0.5-1.5mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8 ;
[0011](5)生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株转接至I/2MS生根培养基中培养25-35d,得到带根完整植株,其中1/2MS培养基中添加NAA 0.1-1.0mg/L ,I BA 0.1-0.5mg/L、蔗糖 15mg/L、琼脂 5mg/L,pH值5.8 ;
[0012](6)炼苗与移栽:室温下打开组培瓶盖,加入少量自来水,炼苗7天;待培养基表面形成角质后,取出幼苗,洗净根部培养基,移栽到沙床中;在沙床中生长27-33d,移栽到大田。
[0013]本发明突出的优点在于:
[0014](I)通过姜黄组织培养,在短时间内培育出大量适合移栽的姜黄种苗,显著提高姜黄种苗的增殖系数和种苗质量,实现规模化生产,满足市场需求。
[0015]在MS发芽诱导培养基中添加6-BA 0.5_2.0mg/L,可显著促使芽萌动,添加IAA0.1_0.5mg/L,可促使芽伸展,从而产生大量丛生芽;在MS壮苗培养基添加NAA0.1-0.5mg/L可促进丛生芽长高和展叶。
[0016](2)采用本发明培养所得到的组培苗增殖系数达到10-15倍,获得组培苗生根率在98 %以上,移栽苗床成活率在95 %以上,有效解决了姜黄工厂化育苗的问题。
【具体实施方式】
[0017]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明,
[0018]实施例1
[0019]本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的一个实例,包括如下步骤:
[0020](I)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外植体,依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡20分钟,用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土,用解剖刀切取带芽的块茎,用线状自来水冲洗
15-20分钟,添加了 2-3滴吐温-20的0.lm/v %升汞消毒10_15分钟,无菌水冲洗3_5次,在超净工作台上用无菌解剖刀切取芽点,剥去芽点外层,最后用消毒滤纸去除表面水份,得到外植体。其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
[0021](2)芽点萌发,获得无菌试管苗:将步骤(I)中获得的外植体接种到MS培养基中,在温度为22-26°C,光照强度15001uX,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,获得无菌试管苗。其中,MS培养基中添加NAA 0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,培养基pH值5.8。
[0022](3)试管苗丛生芽快速地繁殖培养:将步骤(2)中得到的试管苗置于MS繁殖培养基中,在温度为22-26°(:,光照强度150011?,光照时间8-1011/(1的条件下培养30(1,获得无菌试管苗丛生芽。其中,MS繁殖培养基中添加ZT0.5-2.0mg/L IBA 0.2-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂511^/1,培养基?!1为5.8。
[0023](4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在温度为22-26°C,光照强度15001ux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到健壮植株。其中,MS壮苗培养基中添加6-BA 0.5-1.5mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,培养基pH为5.8。
[0024](5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在温度为22-26°C,光照强度15001ux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到带根完整植株。其中,1/2MS生根培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼月旨511^/1,培养基?!1为5.8。
[0025](6)炼苗与移栽:在室温下打开瓶盖,瓶中加入少量自来水,炼苗7天,待表面角质形成后,取出幼苗,洗净根部培养基,立即移栽到沙床中,在沙床中生长一个月后移栽到大田。
[0026]实施例2
[0027]本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的另一个实例,包括如下步骤:
[0028](I)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外植体,依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡20min,用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土,线状自来水冲洗15-20min,用添
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