一种东南亚普通野生稻自交系胚性愈伤组织的诱导培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种诱导培养基和诱导方法，具体涉及一种东南亚普通野生稻自交系 胚性愈伤组织的诱导培养基和诱导方法。
【背景技术】
[0002] 植物脱分化与分化受到多种因素的影响，如基因型、外植体选择、培养基类型以及 它们之间的互作，但是至今为止，并没有能够建立一种适应所有基因型的"万能培养基" (Bolibok，2006)。但是野生稻的基因组和栽培稻基因组相差较大，因此适用于栽培稻的培 养体系不能对所有的野生稻产生同样的积极作用。如药用野生稻的离体培养就受到基因型 的限制，较难获得药用野生稻的胚性愈伤组织(丁玉梅，2003);高杆野生稻叶诱导愈伤的效 率较低（倪文津，2007);然而从普通野生稻的冷冻保存的愈伤中能够分化成成熟植株 (Zeliang，2010)。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供了一种东南亚普通野生 稻自交系胚性愈伤组织的诱导培养基和诱导方法。
[0004] 为实现上述目的，所采取的技术方案：一种东南亚普通野生稻胚性愈伤组织的诱 导培养基，所述诱导培养基包括以下浓度的组分：
[0007]所述诱导培养基的pH为5.4。
[0008]本发明诱导培养基是在N6D培养基的基础上通过比较不同激素对东南亚普通野生 稻自交系胚性愈伤组织的影响后得到的。
[0009]本发明提供了一种东南亚普通野生稻自交系胚性愈伤组织的诱导方法，所述方法 是将脱壳的东南亚普通野生稻自交系种子接种于上述所述的诱导培养基上进行诱导培养 的。
[0010] 优选地，所述诱导培养温度为25~28 °C。
[0011]优选地，所述诱导培养时间为12~18天。
[0012]优选地，所述诱导培养是在光照下进行的。
[0013] 优选地，所述光照强度为300001X，光照时间为16h/d。
[0014] 优选地，在将脱壳的东南亚普通野生稻种子接种于所述诱导培养基之前，对所述 东南亚普通野生稻种子进行消毒处理。
[0015] 优选地，所述消除处理包括以下步骤:将所述东南亚普通野生稻自交系种子先用 75 %乙醇溶液浸泡2min，然后用20 %NaC10溶液振荡消毒50min，再用无菌水冲洗6~7次，最 后吹干所述东南亚普通野生稻自交系种子。所述75%乙醇溶液是指质量浓度为75%的乙醇 水溶液，所述20%NaC10溶液是指质量浓度为20%的NaCIO水溶液。
[0016] 本发明的有益效果在于:本发明提供了一种东南亚普通野生稻自交系胚性愈伤组 织的诱导培养基，在该培养基上诱导培养能够提高出愈率，增加愈伤直径，提高愈伤质量。
【附图说明】
[0017] 图1为本发明实施例1中所述诱导培养基上诱导东南亚普通野生稻自交系产生胚 性愈伤的形态图。
【具体实施方式】
[0018] 为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明 作进一步说明。
[0019] 实施例1
[0020] 1、材料和方法
[0021] 1.1、材料
[0022]东南亚普通野生稻自交系，现保存于国家种质南宁野生稻圃内，采取池栽方式进 行异位种植管理。
[0023] 1.2、东南亚普通野生稻自交系胚性愈伤组织的诱导培养基如表1 [0024] 表1诱导培养基组成
[0027]所述诱导培养基的pH为5.4。
[0028] 对照培养基:将上述培养基中的NAA、IAA和KT去掉后的培养基。
[0029] 1.3、试剂
[0030] IAA、NAA、2，4-D、6-BA、KT与各类组织培养所用化学试剂均为国产分析纯。
[0031] 1.4、东南亚普通野生稻自交系胚性愈伤组的诱导培养方法
[0032]将新收获的东南亚普通野生稻自交系种子放入烘箱35°C烘干24h，将烘干的野生 稻自交系种子脱壳，然后用75 %乙醇浸泡2min，再用20 %NaC10振荡消毒50min，无菌水冲洗 6~7次，然后置于无菌滤纸上吸干水分，于超净台中吹干30min并分别接种在愈伤组织诱导 培养基(表1)和对照培养基上，每皿放置20粒作为1个重复，每种培养基设置3个重复。于28 °C条件下进行光照培养，光照强度为300001X，光照时间为16h/d。接种15d后计算出愈率，出 愈率=长出愈伤组织的种子数/接种种子数X 100%。
[0033] 2、结果
[0034] 通过对比不同培养基上诱导的愈伤率，结果发现，本发明所述诱导培养基的出愈 率为19.00 %，比对照组培养基的出愈率高5 %。
[0035]通过比较不同培养基上诱导的胚性愈伤的直径，结果发现本发明所述诱导培养基 上生长的愈伤直径达到0 · 25cm，而对照培养基的愈伤直径为0 · 23cm〇 [0036]在胚性愈伤质量方面，对照培养基培养的愈伤，色泽乳白，疏松膨大，有颗粒状突 起;本发明所述诱导培养基上生长的愈伤，色泽偏黄，质地紧密，颗粒突起较多（如图1所 示）。说明本发明诱导培养基能够改善愈伤健康情况，提高愈伤质量。
[0037] 另外，本发明发现诱导培养的优选温度为25_28°C，并且培养12天就可观察到愈 伤。
[0038] 最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保 护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当 理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质 和范围。
【主权项】
1. 一种东南亚普通野生稻自交系胚性愈伤组织的诱导培养基，其特征在于，所述诱导 培养基包括以下浓度的组分： KNO^ 2830mg/L (NH4)2S〇4 463 mg/L MgS04,7H20 185 mg/L CaCl?/2H20 166 mg/L KH2P〇4 400 mg/L Na2EDTA 37.3 mg/L FeS〇4 · 7H20 27.8 mg/L MnS〇4*4H20 4,4 mg/L ZnS04,7H20 1.5 mg/L KI 0.6 mg/L H,B〇^ 1.6 mg/L 酪蛋白氨基酸 200 mg/L 甘氨酸 2.0 mg/L L-脯氨酸 2800 mg/L 肌醇 100 mg/L 烟酸 0.5 mg/L 盐酸维生素 B6: 0.5 mg/L 维生素 B1 1.0 mg/L 2, 4-D 2.0 mg/L NAA 2.0 mg/L IAA 1.5 mg/L KT 0.5 mg/L 植物凝胶 2500 mg/L 蔗糖 30000 mg/L; 所述诱导培养基的pH为5.4。2. -种东南亚普通野生稻自交系胚性愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述方法是 将脱壳的东南亚普通野生稻自交系种子接种于如权利要求1所述的诱导培养基上进行诱导 培养的。3. 根据权利要求2所述的诱导方法，其特征在于，所述诱导培养温度为25~28°C。4. 根据权利要求2所述的诱导方法，其特征在于，所述诱导培养时间为12~18天。5. 根据权利要求2所述的诱导方法，其特征在于，所述诱导培养是在光照下进行的。6. 根据权利要求5所述的诱导方法，其特征在于，所述光照强度为300001X，光照时间为 16h/d〇7. 根据权利要求2所述的诱导方法，其特征在于，在将脱壳的东南亚普通野生稻自交系 种子接种于所述诱导培养基之前，对所述东南亚普通野生稻种子进行消毒处理。8. 根据权利要求7所述的诱导方法，其特征在于，所述消除处理包括以下步骤:将所述 东南亚普通野生稻自交系种子先用75%乙醇溶液浸泡2min，然后用20%NaC10溶液振荡消 毒50min，再用无菌水冲洗6~7次，最后吹干所述东南亚普通野生稻自交系种子。
【专利摘要】本发明提供了一种东南亚普通野生稻自交系胚性愈伤组织的诱导培养基，所述诱导培养基是在N6D培养基的基础上添加特定浓度的特定激素得到的，在该培养基上诱导培养能够提高出愈率，增加愈伤直径，提高愈伤质量。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105613290
【申请号】CN201511018196
【发明人】潘英华, 梁云涛, 徐志健, 黄娟
【申请人】广西壮族自治区农业科学院水稻研究所
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2015年12月29日