一种大戟的组织培养快速繁殖方法

文档序号:9894488阅读:703来源:国知局
一种大戟的组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
[0001 ]本发明设及一种植物繁殖方法,特别是一种大戟组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002] 大戟,为大戟科植物大戟(Euphorbia pekinensis Rupr.),多年生常绿草本。根圆 柱状,长20-30厘米。花期5-8月,果期6-9月。广布于全国(除台湾、云南、西藏和新疆),北方 尤为普遍。生于山坡、灌丛、路旁、荒地、草丛、林缘和疏林内。根入药,具有较高的药用价值, 约100元/公斤,具有逐水通便,消肿散结,主治水肿,并有通经之效,用于治疗慢性肾炎,治 疗晚期血吸虫病腹水或其他肝硬变腹水等症。近年来其资源遭到了严重破坏,且对生长环 境要求苛刻,随着市场需求量的不断增加,野生大戟资源溯临枯竭了,生产上难W实现大面 积栽培。采用生物技术组织培养技术,可W有效快速地提高大戟种苗的繁殖速度和质量,实 现大戟优质种苗的工厂化育苗,W满足生产及药用上的需要。

【发明内容】

[0003] 本发明的目的是提供一种大戟组织培养快速繁殖方法,它能够快速繁殖出大量适 合移栽的优良大戟种苗。
[0004] 本发明通过W下技术方案达到上述目的, 一种大戟组织培养快速繁殖方法,包括W下步骤: (1) 外植体的选择与消毒:取大戟顶芽作为外植体,依次用2%洗洁精水溶液浸泡5~ lOmin、线状自来水冲洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 s、0.1% Hgcl2(添加了2~3滴 吐溫-20)消毒8~lOmin、无菌水冲洗3~5次,最后用消毒滤纸吸去表面水分,得到外植体,其 中无菌水为经高压灭菌的蒸馈水; (2) 顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS繁殖培养基 中,在培养溫度为23~26°C,光照强度1400~20001UX,光照时间为10~12小时/天的条件下培 养30天,侧芽分化后获得丛生芽;其中MS繁殖培养基中含0. . 4mg/L的KT、1.0~2. Omg/L的 6-BA、1.0~2. Omg/L的NAA、20~30g/L薦糖和3.8~4.8g/L的琼脂,培养基的抑值为5.8; (3) 丛生芽壮苗培养:将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养 溫度23~26°C,光照强度1400~20001UX,光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到健 壮植株。其中MS壮苗培养基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L薦糖和 3.8~4.8g/L的琼脂,培养基的抑值为5.8; (4) 健壮植株生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养溫 度23~26°C,光照强度1400~20001UX,光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到带根 的完整植株。其中MS生根培养基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0 mg/L的IBA、25~30g/L薦 糖和3.8~4.8g/L的琼脂,培养基的抑值为5.8。
[0005] 采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高,可在短期内提供大量适合移栽 的大戟优质种苗,有效解决了大戟的规模化育苗问题。
【具体实施方式】
[0006] 下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0007] -种大戟组织培养快速繁殖方法,包括W下步骤: (1)外植体的选择与消毒:取大戟顶芽作为外植体,依次用2%洗洁精水溶液浸泡5~ lOmin、线状自来水冲洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 s、0.1% Hgcl2(添加了2~3滴 吐溫-20)消毒8~lOmin、无菌水冲洗3~5次,最后用消毒滤纸吸去表面水分,得到外植体,其 中无菌水为经高压灭菌的蒸馈水。
[000引(2)顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基 中,在培养溫度为23~26°C,光照强度1400~20001UX,光照时间为10~12小时/天的条件下培 养30天,侧芽分化后获得丛生芽。
[0009] 其中 MS繁殖培养基中含0.1 ~0.4mg/L 的 KT、1.0~2. Omg/L 的 6-BA、1.0~2. Omg/L 的 NAA、20~30g/L薦糖和3.8~4.8g/L的琼脂,培养基的抑值为5.8,观察发现,培养基中6-BA和 NAA浓度增加,大戟丛生芽数均增加;结果,在培养基中添加0.2mg/L的KT、2. Omg/L的6-BA和 1.5mg/L的NAA丛生芽效果最好。
[0010] 注:芽增殖倍数=(30天后芽数一接种时芽数)/接种时芽数 (3)丛生芽壮苗培养:将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养 溫度23~26°C,光照强度1400~20001UX,光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到健 壮植株。
[0011] 其中MS壮苗培养基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L薦糖和 3.8~4.8g/L的琼脂,培养基的抑值为5.8,观察发现,培养基中添加 1.0 mg/L的6-BA和0.6mg/ L的IAA时壮苗效果最好,株高达到5.37cm。
[0012] (4)健壮植株生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培 养溫度23~26° C,光照强度1400~20001UX,光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到 带根的完整植株。
[0013] 其中MS生根培养基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0 mg/L的IBA、25~30g/L薦糖和 3.8~4.8g/L的琼脂,培养基的抑值为5.8,观察发现,培养基中IAA浓度增加,组培苗的生根 率也增加;培养基中添加2. Omg/L的IBA和1. Omg/L的IAA生根效果最好,生根率达93.1%,平 均根长达到4.49cm。
【主权项】
1. 一种大戟的组织培养快速繁殖方法,其特征在于:该方法包括以下步骤: (1) 外植体的选择与消毒:取大戟顶芽作为外植体,依次用2 %洗洁精水溶液浸泡5~ lOmin、线状自来水冲洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 s、0.1% Hgcl2消毒8~lOmin、 无菌水冲洗3~5次,最后用消毒滤纸吸去表面水分,得到外植体; (2) 顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS繁殖培养基 中,在培养温度为23~26° C,光照强度1400~20001ux,光照时间为10~12小时/天的条件下培 养30天,侧芽分化后获得丛生芽; (3) 丛生芽壮苗培养:将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养 温度23~26° C,光照强度1400~20001ux,光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到健 壮植株; (4) 健壮植株生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养温 度23~26°C,光照强度1400~20001ux,光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到带根 的完整植株。2. 如权利要求1所述的大戟的组织培养快速繁殖方法,其特征在于:所述无菌水为经高 压灭菌的蒸馏水。3. 如权利要求1所述的大戟的组织培养快速繁殖方法,其特征在于:所述MS繁殖培养基 中含0 · 1~0 · 4mg/L的KT、1 · 0~2 · Omg/L的6-BA、1 · 0~2 · Omg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3 · 8~ 4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8。4. 如权利要求1所述的大戟的组织培养快速繁殖方法,其特征在于:所述MS壮苗培养基 中含0 · 5~1 · 5mg//L的6-BA、0 · 2~0 · 6mg/L的IAA、20~30g/L蔗糖和3 · 8~4 · 8g/L的琼脂,培养基 的pH值为5.8。5. 如权利要求1所述的大戟的组织培养快速繁殖方法,其特征在于:所述MS生根培养基 中含0 · 5~1 · 5mg/L的IAA、1 · 0~2 · 0 mg/L的IBA、25~30g/L蔗糖和3 · 8~4 · 8g/L的琼脂,培养基 的pH值为5.8。
【专利摘要】本发明公开了一种大戟的组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:(1)取大戟顶芽作为外植体进行消毒;(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽;(3)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株;(4)将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高,可在短期内提供大量大戟的优质种苗,有效解决了大戟的规模化育苗问题。<b />
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105660412
【申请号】CN201610108413
【发明人】李翠, 张占江, 吕惠珍, 缪剑华, 韦莹, 韦坤华, 李林轩, 王一诺, 肖冬
【申请人】广西壮族自治区药用植物园
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年2月29日
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