新颖的抗真菌组合物的制作方法
【专利说明】
[00011本申请是申请号为201280011576.7的中国专利申请的分案申请，原申请是国际申 请PCT/EP2012/053509的中国国家阶段申请。
技术领域
[0002 ]本发明公开了控制植物疾病和预防作物微生物腐败（spo i I age)的新颖的抗真菌 组合物。
【背景技术】
[0003]据估计世界作物产量的约25%由于微生物腐败而损失，其中真菌导致的腐败是迄 今为止最严重的原因。从经济学观点以及人道主义观点(humane point)来看，预防食品腐 败都非常重要。毕竟世界上许多地方的人在遭受饥饿。
[0004]在抵抗植物和作物疾病以及减轻它们对产量和品质造成的损伤方面的成功大幅 取决于杀真菌剂的及时应用。由于抗性现象的发生，许多杀真菌剂(例如苯并咪唑）的长期 和频繁使用促成了它们有效性的降低。
[0005] -类重要的杀真菌剂是三唑（triazoles )。提出的第一种三唑是三唑酮 (triadimefon)。这种三唑于1976年由拜耳首次提出（见Kuck et al. ,1987)。三唑酮在植物 中提供治疗活性以及保护活性、低应用率（low application rates)和极佳的再分布 (redistribution)。过去二十年间提出了其他的三唑杀真菌剂，它们具有改进的效能和植 物安全性(例如氟环挫(epoxiconazole))、更宽的有效谱(例如丙环挫(propiconazole)、戊 P坐醇（tebuconazole))或专门的应用（例如用于种子处理的苯酿甲环唑（difenoconazole) 和灭菌唑(triticonazole))(见Kuck et al. ,1987)。除了在保护农产品方面的用途--例 如保护收获的水果或蔬菜免受致植物病的真菌(见EP 2 036 438A1)或保护谷物免受真菌 毒素污染（见W02007/009969)之外，三唑还被用于保护食品免受真菌腐蚀（见EP 0 101102A2)。
[0006] 然而，三唑杀真菌剂在其发展和维持中仍未对挑战免疫。它们对植物具有众所周 知的副作用。应用至幼芽和根上常常降低伸长并导致叶更小、更厚和更绿。经处理的植物可 能在衰老方面被延迟，根据作物的不同这会阻碍收获或提高产量(见Buchenauer, 1987)。
[0007] 更大的担心是抗性的发生，因为三唑杀真菌剂具有许多与苯并咪唑相同的特性。 对三唑杀真菌剂的抗性最初在白粉病中发生，也在其他疾病中观察到过(见Kuck et al.， 1987;Buchenauer，1987;Ma et al.，2002)。另外，尽管三唑杀真菌剂的开创为子囊菌 (Ascomycete)和担子菌(Basidiomycete)疾病提供了有效的、系统性的杀真菌剂解决方案， 但是破坏性的卵菌(Oomycete)疾病例如马铃薯晚疫病(potato late blight)和葡萄霜霉 病（grape downy mildew)的控制受到限制，并且（由疫霉属（Phytophthora)和腐酶属 (Pythium)导致的）长成的植物的根部腐朽和系统性霜霉病完全不能通过应用三唑杀真菌 剂来控制。
[0008] 几十年来，多烯大环内酯抗霉菌剂那他霉素(natamycin)已被用于预防食品如乳 酪和香肠上的真菌生长。例如，在EP O 748 588A1中描述了包含多烯抗真菌剂和咪唑抗真 菌剂的真菌组合物用于处理食品和农产品的用途。通过使用Streptomyces natalensis发 酵生产的这一天然防腐剂在全世界被广泛用作食物防腐剂，并且在食品工业中具有安全使 用的悠久历史。其针对所有已知的食物腐败真菌都非常有效。尽管那他霉素在例如乳酪工 业中被应用多年，但是迄今为止从未观察到抗性真菌物种的发生。
[0009]因此可以得出结论:对更有效的用于处理植物和作物中的真菌生长和植物和作物 上的真菌生长的抗微生物组合物(例如抗真菌组合物)具有严重的需求。
【发明内容】
[0010]本发明通过提供含有多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗 真菌化合物的新的协同抗微生物(例如抗真菌)组合物，解决了上述问题。在本文中使用时， 术语"协同的"表示组合使用时抗真菌化合物的组合效果大于他们各自使用时的效果之和。 [00 11] 通常，两种活性成分的协同活性可以例如使用处理交互作用层（treatment interaction stratum，见SI inker，1998)在方差分析模型中测试。相对有效性可以通过下 式计算：（（未经处理的对照的进化状态值-组合物的进化状态值)/(未经处理的对照的进化 状态值））X 100。然后可以通过下式计算交互作用系数：（（化合物A+化合物B的组合的相对 有效性)/(化合物A的相对有效性+化合物B的相对有效性））X 100。大于100的交互作用系数 表示化合物之间的协同作用。
[0012] 或者可以如下计算协同作用：可以通过计算与用对照组合物处理的产品上的霉菌 生长相比，用活性成分处理的产品上观察到的霉菌生长的减少，来测定个体活性成分的抗 真菌活性（以％计）。可以根据Colby方程(Colby，1967)计算包含两种活性成分的组合抗真 菌组合物的预期抗真菌活性(E，W^H+):E = X+Y-[(X · Y)/100]，其中X和Y分别是个体活性 成分X和Y的观察到的抗真菌活性（以％计）。如果组合的观察到的抗真菌活性(〇，以％计)超 出组合的预期抗真菌活性化，以％计)并且因而协同因子0/Ε>1.0,那么活性成分的组合应 用导致协同的抗真菌效应。
[0013] 在本发明的一个实施方式中，至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物选 自由吲唑横菌胺(amisulbrom)、氧环挫（azaconazole)、联苯三唑醇(bitertanol)、糖菌挫 (bromuconazole)、环丙唑醇（cyproconazole)、节氯三唑醇（diclobutrazol)、苯酿甲环挫 ((111^11〇。〇11&2〇16)、稀唑醇（(1；[11；[。011&2016)、高效稀唑醇（(1；[11；[。011&2016-]\0、氣环挫 (epoxiconazole)、乙环唑啉（etaconazole)、臆苯挫（fenbuconazole)、三氣苯挫 (fluotrimazole)、氣喹挫（fluquinconazole)、氣娃挫（flusilazole)、粉挫醇 (flutriafol)、咲菌挫（furconazole)、顺式咲菌唑（furconazole-cis)、己唑醇 (hexaconazole)、环菌挫（huanjunzuo)、亚胺挫（imibenconazole)、种菌挫（ipconazole)、 叶菌挫（metconazole)、臆菌挫（myclobutanil)、戊菌挫（penconazole)、丙环挫 (propiconazole)、丙硫菌挫（prothioconazole)、P奎挫（quinconazole)、石圭氣挫 (simeconazole)、戊挫醇（tebuconazole)、四氣酿挫（tetraconazole)、丁三挫 (triazbutil)、灭菌挫（triticonazole)、稀效挫（uniconazole)和稀效唑-P(uniconazole_ P)组成的组。在一个优选的实施方式中，至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物 选自由联苯三唑醇、环丙唑醇、苯醚甲环唑、氟环唑、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、叶菌 唑、腈菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、戊唑醇、四氟醚唑、灭菌唑和烯效唑组成的组。在一个进一步 更优选的实施方式中，至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物选自由苯醚甲环 唑、氟环唑、氟喹唑、氟娃唑、粉唑醇、丙环唑、丙硫菌唑、戊唑醇和四氟醚唑组成的组。在一 个实施方式中，组合物可还含有两种或更多不同的来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合 物。应当理解，来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的衍生物(包括但不限于来自三唑杀 真菌剂家族的抗真菌化合物的盐或溶剂合物)或来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的 经修饰的形式也可以应用在本发明的组合物中。含有三唑杀真菌剂例如丙环唑的商业产品 的例子是具有以下商品名的产品：Tilt? (丙环唑）、Projpimax? (丙环唑）、Bumper? (丙 环唑）、Quilt? (丙环唑+嘧菌酯)或Stratego? (丙环唑+肟菌酯）。含有三唑杀真菌剂如戊唑 醇的商业产品的例子是具有以下商品名的产品：Folicur?(戊唑醇）、Orius?:(戊唑醇）、 Uppercut? (戊唑醇)或HeadlineSBR?(戊唑醇+吡唑醚菌酯）。含有三唑杀真菌剂如四氟 醚唑、叶菌唑或丙硫菌唑的商业产品的例子分别是具有以下商品名的产品：Dmnark? (四 氟醚唑）、Twinline? (叶菌唑+吡唑醚菌酯）或S t r a t e g 〇 YLD? (丙硫菌唑+肟菌酯）或 Proline?(丙硫菌唑）。所述商业产品可以被并入本发明中。
[0014]在一个实施方式中，多烯抗真菌化合物选自由以下化合物组成的组:那他霉素、制 霉菌素(115^丨31：；[11)、两性霉素13、三稀菌素(1：1^611；[11)、意北霉素(61：1'118001115^；[11)、菲律宾菌 素（1^11?；[11)、钦氏菌素（(311&；[11；[11)、制皮菌素（(161'1]108七&1：；[11)、150]^)1108&1'(3；[11、杀念珠菌素 (candicidin)、金色制霉素(aureofungin)A、金色制霉素 B、哈霉素(hamycin)A、哈霉素 B和 鲁斯霉素（lucensomycin)。在一个优选的实施方案中，多稀抗真菌化合物是那他霉素。在一 个实施方案中，组合物也可含有两种或更多种不同的多烯抗真菌化合物。应当理解，多烯抗 真菌化合物的衍生物(包括但不限于多烯抗真菌化合物的盐或溶剂合物)或经修饰形式的 多烯抗真菌化合物也可以在本发明的组合物中应用。含有那他霉素的商业产品的一个例子 是商品名为Delvocid?的产品。所述产品由DSM Food Specialties(荷兰)生产，并且可以 是含有例如50% (w/w)那他霉素的固体或是含有例如2-50% (w/v)那他霉素的液体。所述商 业产品可以被并入本发明的组合物中。
[0015] 本发明的组合物通常包含从约0.005g/l到约100g/l和优选地从约O.Olg/Ι到约 50g/l的多烯抗真菌化合物。优选地，所述量为O.Olg/Ι到3g/l。
[0016] 本发明的组合物通常包含从约0.0001g/l到约2000g/l和优选地从约0.0005g/l到 约1500g/l的来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物。更优选地，所述量为从0.0 Olg/Ι到 1000g/l〇
[0017] 在一个实施方式中，本发明的组合物还包含至少一种选自下组的额外化合物，所 述组由粘着剂(sticking agent)、载剂、着色剂、保护性胶体、粘合剂(adhesive)、除草剂、 肥料、增稠剂、掩蔽剂、触变剂、表面活性剂、其他抗微生物化合物、洗涤剂、防腐剂、铺展剂、 填充剂、喷雾油、流动添加剂、矿物质、溶剂、分散剂、乳化剂、湿润剂、稳定剂、消泡剂、缓冲 剂、UV-吸收剂和抗氧化剂组成。其他抗微生物抗真菌化合物可以是抗真菌化合物(例如抑 霉唑、噻苯达唑或百菌清），或抵抗昆虫、线虫、螨虫和/或细菌的化合物。当然，根据本发明 的组合物也可以包含两种或更多种任何上述额外的化合物。在两种防抗真菌化合物被分别 应用的情况下，任何上述额外的化合物也可以与多烯抗真菌化合物和/或至少一种来自三 唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物组合。在一个实施方式中，额外的化合物是特定用途(例如 食物、饲料、药物、化妆品或农业)可接受的添加剂。适用于食物、饲料、药物、化妆品或农业 的额外的化合物是本领域技术人员已知的。
[0018] 在一个特定的实施方式中，其他抗微生物化合物是属于亚磷酸盐类的天然作物保 护化合物，例如KH2PO 3或K2HPO3或这两种亚磷酸盐的混合物。在本文中使用时，含亚磷酸根 的化合物表示包含亚磷酸根即P〇3(以例如h 2p〇3-、hp〇32-或P03 3-的形式）的化合物，或允许释 放亚磷酸根离子的任何化合物，包括化合物例如亚磷酸和膦酸及其衍生物如酯和/或碱金 属盐或碱土金属盐。在本发明的组合物包含多烯抗真菌化合物(例如那他霉素)和至少一种 含亚磷酸根的化合物的情况下，相对于每克多烯抗真菌化合物，它们优选地包