酸溶性铜-铵络合物和铜-锌-铵络合物、组合物、制备、方法和用图

酸溶性铜-铵络合物和铜-锌-铵络合物、组合物、制备、方法和用图
【专利摘要】本发明披露一种抗微生物组合物，其含有有效抵抗诸如医院或环境细菌、真菌、病毒等微生物的酸溶性铜铵络合物或铜?锌铵络合物。该抗微生物组合物可用以制备用于治疗微生物或微生物感染的药剂，且可含有载剂以产生乳膏、皂剂、洗剂、喷雾剂、敷剂、清洁剂、化妆产品、局部药物产品或其他抗微生物产品。
【专利说明】
酸溶性铜-铵络合物和铜-锌-铵络合物、组合物、制备、方法和 用途
技术领域
[0001] 本发明大体来说涉及具有抗微生物活性的组合物，且更具体地涉及含有酸溶性 铜-铵络合物或酸溶性铜-锌-铵络合物作为活性成份的组合物。
【背景技术】
[0002] 人们自古已知铜金属和铜盐的抗微生物效应。铜作为抗微生物药剂的作用首次描 述于史密斯纸草文稿（Smith Papyrus)(大约在公元前2，600年书写的埃及医学文本）中，其 描述施加铜以对胸部伤口和饮用水灭菌。
[0003] 希腊人、罗马人和阿兹特克人通常使用铜金属或其化合物来治疗慢性感染且用于 卫生保健中。例如，在希波克拉底选集(Hippocratic Collection)中，推荐用铜治疗与静脉 曲张有关的腿部溃疡。为预防新伤口感染，希腊人将由氧化铜和硫酸铜构成的干粉喷洒于 伤口上。当时的另一杀菌性伤口治疗为蜂蜜和红色氧化铜的煮沸混合物。希腊人可容易地 获得铜，这是因为该金属在塞浦路斯(Kypros、Cyprus)岛上易于获得，铜的拉丁名cuprum就 是由此衍生的。
[0004] 古印度阿育吠陀文本揭罗迦集(Charaka Samhita)(公元前300年）也提到铜如何 杀灭致命微生物，包含其在饮用水纯化中的作用。普利尼(Pliny)(公元23-79年)描述诸多 涉及铜的治疗法，例如，给予黑色氧化铜以及蜂蜜以去除蛔虫。
[0005] 在更近时代，在1867年公开了对铜在免疫系统中的作用的首次观察，当时报道在 1832年、1849年和1852年的巴黎霍乱流行期间，铜工人对这种疾病免疫。另外，已显示缺少 铜的动物对细菌病原体(例如沙门菌(Salmone 1 la)和利斯特菌(Li s ter ia))的敏感性增加。
[0006] 硫酸铜为发明于19世纪的杀真菌"波尔多混合物(Bordeaux mixture)"的关键活 性组份，且当前仍用于农业中，如同诸多其他基于铜的农业化学品。
[0007] 病原性微生物(例如细菌、真菌和病毒)在多细胞生物体中引发许多疾病，如通过 下列非限制性实例所阐释。
[0008] 在医药领域中，皮肤病涉及细菌感染，例如痤疮（痤疮丙酸杆菌 (Propionibacterium acnes))和湿疼（金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) )〇医疗 获得性感染（HAI)是由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（meticillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)、不动细菌属（Acinetobacter sp.)、克雷伯氏肺炎菌 (Klebsiella pneumonia)(其中最初鉴别出NDM-1酶基因）和嗜肺军团菌（Legionella pneumophila)(其为退伍军人病（Legionnaire ' s disease)的病因）引起。大肠杆菌 (Escherichia coli，E.coli)为尿道感染的常见病因。在美国，估计这些和其他HAI每年导 致近100，〇〇〇人死亡。病原性大肠杆菌0157 :H7在通过经污染食物摄入时会引起胃肠炎。由 真菌引起的疾病可相对温和，例如运动员脚病（毛癣菌属(Tricophyton sp.))、头皮肩（球 型马拉色菌(Malassezia globosa))和鶴口疮（白色念珠菌(Candida albicans))，但真菌 (例如烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus、A.fumigatus)和白色念珠菌（C.albicans))和酵 母(例如新隐球菌(Cryptococcus neoformans))可在免疫受损的患者中引起危及生命的感 染。病毒还造成普通疾病(例如感冒（鼻病毒)和流感(流感病毒A、B和C)以及冷疮(单纯疱疹 病毒））到更严重的病毒疾病(例如狂犬病和埃博拉病(ebola))。
[0009] 皮肤伤口（例如褥疮和糖尿病性腿溃疡）的细菌感染可加重病状，且已显示基于铜 盐和铜的组合物借助其抗细菌效应和其通过促进生长因子产生来刺激伤口愈合的能力有 效抵抗这些疾病。
[0010] 在化妆品领域中，例如，已显示铜或铜-锌组合物有效改善轻度到中等晒伤和轻度 烧伤的效应，以及有效减轻由昆虫叮咬引起的搔痒和发炎并减少皱纹出现。
[0011] 在农业领域中，真菌疾病当前正在美国西部杀灭石栎(枝干疫霉菌(Phytophthora ramorum))且正在欧洲杀灭灰树（白錯鞘孢菌(Chalara fraxinea))。葡萄藤、具有果实和蔬 菜的植物和谷类作物的真菌和细菌疾病是对世界食品生产的威胁。
[0012]在医院和一般环境中存在数量日益增加的抗药性病原性微生物菌株，这正变为一 大难题，如通过下列实例所阐释。病原性细菌的抗生素抗性和多药物抗性菌株现在较常见， 例如MRSA、万古霉素（vancomycin )抗性金黄色葡萄球菌（VRSA)、鲍曼不动杆菌 (Acinetobacter baumannii )、大肠杆菌和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis) 〇 病原性真菌的抗性菌株(例如酮康唑(ketoconazole)抗性白色念珠菌和烟曲霉菌)尤其在 免疫受损的患者中是日益严重的问题。杀真菌剂抗性植物病原性真菌不断进化且其治疗需 要新的抗真菌剂。例如，马铃薯晚疫病的病因马铃薯晚疫霉(Phytophthora infestans)在 20世纪晚期变得高度抵抗甲霜灵(Metalaxyl)。病原性病毒类似地对抗病毒药物发展抗性， 近期实例是H1N1 "猪流感"流感A菌株对磷酸奥司他韦（oseltamivir phosphate)( TAM丨FLU⑨，美国加利福尼亚旧金山的基因泰克公司(Genentech)的注册商标)的抗性在 过去5年中的发展。

【发明内容】

[0013]根据本发明，提供一种抗微生物组合物，其包括:包括铜盐的水溶液;碱性铵盐，其 添加到铜盐溶液中以生成不溶性铜-铵络合物;和至少一种水溶性酸，其添加到铜盐溶液中 以溶解铜-铵络合物且控制由此形成的澄清蓝色酸溶性铜-铵溶液的pH。
[0014]前一段落是通过介绍方式来提供，且并不打算限制如本说明书、权利要求书和附 图中所描述的本发明范围。
【附图说明】
[0015] 将通过参照下列图式来描述本发明，其中类似编号是指类似要素，且其中：
[0016] 图1为绘示硫酸铜和1号Cu组合物对细菌菌株S1 (金黄色葡萄球菌）的生长的效应 的图形；
[0017] 图2为绘示单独和与1号Cu组合物组合的硫酸锌对细菌菌株S1 (金黄色葡萄球菌） 的生长的效应的图形；
[0018] 图3为绘示凝胶、单独的硫酸锌（100μg/ml)和9号Cu或10号Cu组合物（200μg/ml) (单独和与硫酸锌组合)对S1(金黄色葡萄球菌)的生长的效应的条形图；
[0019] 图4为在与硫酸铜和9号Cu、10号Cu和1号Cu-Zn组合物:凝胶+9号Cu、凝胶+1号Cu- Zn-起培养24小时之后，人类皮肤细胞存活率的图形;且
[0020]图5为在与凝胶+9号Cu、凝胶+1号Cu-Zn和两种含有活性化合物水杨酸和过氧化苯 甲酰的CL.EARASIL? (英格兰伯克郡（B e r k s h i r e)的利洁时有限责任公司（R e c k i 11 Benckiser LLC)的商标)抗痤疮乳膏产品一起培养24小时之后，人类皮肤细胞存活率的图 形。
[0021]将结合优选实施例来描述本发明，然而，应理解，并不打算将本发明限于所描述实 施例。与之相反，打算涵盖所有可包含于如由本说明书、权利要求书和附图所定义的本发明 的精神和范围内的替代形式、修改和等效内容。
【具体实施方式】
[0022]将通过实例以非限制性方式来描述本发明。在阅读本说明书且观看附图之后，可 确定对本文所描述本发明的修改、改良和增加;所述修改、改良和增加可视为包含于本发明 的精神和广泛范围和本文所描述或设想的其各个实施例中。
[0023]
【发明人】已令人吃惊地发现，本文所描述的酸溶性铜-铵和铜-锌-铵络合物可用于 防治特定病原性微生物，其在某些细菌情形下具有抗生素抗性或在某些细菌和真菌菌株情 形下原本难以治疗或控制。另外，
【发明人】已令人吃惊地发现，这些酸溶性铜-铵络合物可高 度有效地抵抗难以治疗的细菌(例如MRSA和鲍曼不动杆菌），同时在类似浓度下对培养物中 的人类皮肤细胞并无毒性。
[0024] 由于在环境中且尤其在水性环境中植物和动物可安全摄入(成人每天不超过6毫 克)或耐受的铜量相对较低，因此本文所描述酸溶性铜_铵或铜_锌-铵组合物的应用主要用 于局部使用，例如用于动物和人类的皮肤或粘膜上、植物叶子上或(例如)环境中的表面上 (例如在家庭或医院）。
[0025] 局部使用的例外包含(例如）（i)处理被一或多种微生物污染的水，其可通过使用 酸溶性铜-铵组合物或酸溶性铜-锌-铵组合物去除或杀灭微生物而变得可饮用，或（i i)通 过添加一或多种本文所描述的酸溶性铜或铜-锌组合物以去除或杀灭某一结构（例如游泳 池或热浴盆)中污染水的微藻或细菌来使得水适于应用。
[0026] 本文所描述的酸溶性铜-铵络合物组合物可局部施加到患者皮肤上以用于预防或 治疗(例如)MRSA感染或真菌感染(例如白色念珠菌）。其还可通过喷雾于(例如)具有真菌感 染(例如白粉病）的植物叶子上来局部施加。一旦处于表面上，铜离子络合物的消毒性质可 在相当长的时间段中保持有效。
[0027] 还可(例如)通过喷雾或通过使用布施加来将酸溶性铜-铵络合物施加到表面上， 且可意外地同时有效抵抗多种不同病原性微生物并可提供针对所述微生物的感染和再感 染的保护。一旦处于表面上，铜离子络合物的消毒性质可在相当长的时间段中保持有效。
[0028] 本发明酸溶性铜-铵络合物和使用其浸渍的基板可极有效地抑制迄今为止难以使 用常规药物和/或常规消毒方案治疗的病原性微生物的生长。令人吃惊地，此对病原性微生 物生长的抑制可在对人类皮肤细胞无毒的浓度下进行。
[0029] 可将酸溶性铜-铵组合物制成可用于施加到皮肤和粘膜表面、植物叶子和家庭、医 院、工厂、车辆中的工作表面等的局部调配物，例如乳膏、凝胶、喷雾溶液、灌洗液和浸渍敷 剂。
[0030] 根据下文所概述的一般程序来便利地制备酸溶性铜-铵和铜-锌-铵组合物。本发 明的这些所揭示实施例例示某些优选组合物;然而，这些实例并不打算限制本发明范围。如 所属领域技术人员所明了，可在不背离本发明的精神和广泛范围的情况下作出多种变化和 修改。
[0031] 下列实例描述用于制备3号Cu酸溶性铜-铵络合物调配物的一般方案。所有化学物 质都得自西格玛-奥德里奇有限公司（Sigma-Aldrich Company Ltd.)，旧沙砖厂(The old Brickyard)，新路(New Road)，吉林厄姆(Gillingham)，多塞特郡（Dorset)SP8 4XT，英国； 或奥克艺德有限公司（Oxoid Ltd.)，韦德路(Wade Road)，贝辛斯托克(Basingstoke)，汉普 郡（Hampshire)RG24 8PW，英国。
[0032]将16.0克五水合硫酸铜添加到使用磁力搅拌器和搅拌棒的玻璃烧杯中的80毫升 蒸馏水中且剧烈混合以形成澄清蓝色溶液。将4.0克碳酸铵以0.5-1克的量添加到硫酸铜溶 液中，因二氧化碳剧烈逸出，所以在碳酸铵等份的添加之间使其平息。在将碳酸铵添加到硫 酸铜溶液中期间，形成浅蓝色不溶性铜-铵络合物，且通过剧烈搅拌使此络合物保持悬浮。 逐渐添加10.0毫升磷酸(85%溶液），其伴随着二氧化碳的逸出和铜-铵络合物的溶解。必须 添加足量酸以完全溶解铜-铵络合物且控制溶液pH。将所得澄清亮蓝色溶液再剧烈搅拌5分 钟，且然后使用蒸馏水补足到最终体积为100毫升。
[0033] 优选地，组合物中铜的元素浓度为约1克/分升到10克/分升、优选地3克/分升到7 克/分升、更优选地3.5克/分升到5克/分升，其中溶剂相为蒸馏水或去离子水。
[0034] 关于基于此方案的其他酸溶性铜-铵络合物调配物的实例，参见下表1。在该表中， 克缩写为字母g且毫升缩写为字母ml。
[0035] 表1.酸溶解铜-铵络合物组合物的实例(Cu编号）
[0038] *所指示量产生大约4.0克/分升或**3.75克/分升元素铜的储备溶液。
[0039]下列实例描述用于制备10号Cu-Zn酸溶性铜-锌-铵调配物的一般方案。
[0040]将6.0克五水合硫酸铜添加到使用磁力搅拌器和搅拌棒的玻璃烧杯中的80毫升蒸 馏水中且剧烈混合以形成澄清蓝色溶液。将6.6克七水合硫酸锌添加到硫酸铜溶液中且搅 拌直到溶解。将2.0毫升氢氧化铵（10%溶液)逐滴添加到硫酸铜/硫酸锌溶液中。在将氢氧 化铵溶液添加到硫酸铜/硫酸锌溶液期间，形成浅蓝色不溶性铜-锌-铵络合物，且通过剧烈 搅拌使此络合物保持悬浮。以大约0.5g等份逐渐添加4.0克亚磷酸以溶解铜-锌-铵络合物。 必须添加足量酸以完全溶解铜-锌-铵络合物且控制溶液pH。将所得澄清浅蓝色溶液再剧烈 搅拌5分钟且然后使用蒸馏水补足到最终体积为100毫升。
[0041 ]优选地，组合物中铜和锌的元素浓度为约1:1，其中溶剂相为蒸馏水或去离子水。
[0042] 关于基于此方案的其他酸溶性铜-锌-铵调配物，参见表2。在该表中，克缩写为字 母g且毫升缩写为字母ml。
[0043] 表2.酸溶性铜-锌组合物的实例(Cu-Zn编号）
[0045] *所指示量产生大约1.5克/分升的元素铜和元素锌二者的储备溶液。
[0046] 制备本发明基于芦荟(Aloe vera)的凝胶的方法描述于本文中，且提供实例。
[0047] 实例1.在约60°C下，在300毫升硼硅酸盐玻璃烧杯中，将1.0克黄原胶喷洒到150毫 升蒸馏水上，且使用搅拌器剧烈混合30秒以形成匀和多泡溶液。将1.0克芦荟粉末喷洒于黄 原胶溶液上且再次剧烈搅拌30秒或直到芦荟粉末完全溶于溶液中为止。添加室温蒸馏水到 最终体积为200毫升。在4°C下存储凝胶且在一个月内使用。在琼脂板抗细菌测试中使用此 凝胶稀释铜和铜/锌组合物。如果该凝胶待用于化妆品目的和/或在室温下存储，则必须添 加抗微生物防腐剂。这些抗微生物防腐剂可包含(例如)苦杏仁酸、甘油、山梨酸钾、苯氧基 乙醇、苯甲酸钠。有效组合为山梨酸钾(KS)与苯甲酸钠(NaB)。制备10.0 %重量/体积KS和 NaB的单独储备溶液且在剧烈混合下将2.0毫升每一产物添加到上述黄原胶-芦荟溶液中， 且然后添加室温蒸馏水到最终体积为200毫升。将酸溶性铜-铵或铜-锌-铵络合物组合物以 (例如）1: l〇〇vol/vol稀释到此凝胶中。
[0048] 实例2.在称重烧杯中，在室温(约20°C)下将3.0克黄原胶以约1克等份逐渐混合到 3克甘油中直到形成匀和均质膏为止。再称重烧杯和其内容物。在60°C下，在800毫升硼硅酸 盐玻璃烧杯中，逐渐将5克甘油-黄原胶混合物(在烧杯中应保留1克混合物)添加到400毫升 蒸馏水中，同时剧烈搅拌直到形成澄清多泡溶液为止。将2.5克芦荟粉末喷洒于溶液上且继 续搅拌直到芦荟粉末完全溶于溶液中为止。可在此阶段在搅拌下添加抗微生物防腐剂(例 如5.0毫升如上文所描述的KS和NaB的10%储备溶液），然后添加室温蒸馏水到最终体积为 500毫升。
[0049] 为使所属领域技术人员可阐释本发明、更容易地了解且易于实施本发明，现仅借 助非限制性实例来呈现本发明的实施例且参照附图予以描述。
[0050] 实例1.所选组合物对细菌的抗细菌效应的琼脂板测试。
[0051] 在胰蛋白胨-大豆琼脂(TSA)上培养从湿疹患者的皮肤分离的金黄色葡萄球菌菌 株(S1)，且将单一菌落在37°C下于RPMI-1640培养基中培养过夜。使用新鲜RPMI-1640培养 基以1:10稀释S1 (金黄色葡萄球菌)培养物且将0.2毫升散布于含有TSA的9厘米皮氏培养皿 (Petri dish)上且使其干燥。将痤疮丙酸杆菌菌株ATCC 11828(痤疮丙酸杆菌(P.acnes)) 在37°C和厌氧条件下使用不产气菌囊袋(AnaeroGen sachet)于含有1%葡萄糖的脑心肌浸 汤(BHI)中培养72小时。将痤疮丙酸杆菌培养物的0.2毫升试样散布于含有BHI琼脂的9厘米 皮氏培养皿上且使其干燥。
[0052]将待测试的组合物使用蒸馏水稀释且将5微升置于5毫升滤纸盘上，或以不同浓度 添加到上述基于芦荟的凝胶(不含防腐剂）中，且将一滴5微升置于琼脂表面上。然后将板在 37°C下培养24小时（在痤疮丙酸杆菌的厌氧条件下），此时以90°角使用直尺测量（以毫米 计)抑制区（Zol)两次且计算平均直径(D)。使用下式计算抑制面积(A 〇I，mm2):A〇I=3TX(D/ 2) 2。
[0053]结果：
[0054] 1.图1中的结果比较硫酸铜和溶于凝胶中的1号Cu组合物对TSA上细菌菌株S1 (金 黄色葡萄球菌）的生长的效应。显而易见，1号Cu组合物抑制S1(金黄色葡萄球菌）的生长的 功效比硫酸铜大约4倍，这是因为800微克/毫升的硫酸铜和200微克/毫升的1号Cu组合物具 有相同AoI (28mm2)。结果展示，酸溶性铜-铵络合物组合物的抗微生物性显著高于单独的硫 酸铜。
[0055] 2.图2中的结果比较单独的和与溶于凝胶中的1号Cu组合物组合的硫酸锌对TSAI 细菌菌株S1 (金黄色葡萄球菌）的生长的效应。单独的硫酸锌在任一测试浓度(50-200微克/ 毫升)下对S1(金黄色葡萄球菌）的生长均无效应。与之相比，在将1号Cu组合物（100微克/毫 升)与浓度递增的硫酸锌组合时，其对S1(金黄色葡萄球菌）的生长具有明显协同抑制效应。 因此，单独的1号Cu组合物具有3mm 2的Aol，但在与浓度为50微克/毫升、100微克/毫升和200 微克/毫升的硫酸锌组合时，此Aol分别增加到13mm 2、20mm2和28_2。这些结果令人吃惊地展 示，抗微生物酸溶性铜-铵络合物可与单独时对菌株S1 (金黄色葡萄球菌)无抗微生物活性 的硫酸锌协同作用。这些结果表明，酸溶性铜-锌-铵络合物可对某些生物体具有有利抗微 生物活性。
[0056] 3.图3展示于单独的和与凝胶中的硫酸锌（100微克/毫升)组合的凝胶中的两种组 合物9号Cu和10号Cu(200微克/毫升)对S1(金黄色葡萄球菌)的生长的效应。结果展示，单独 的凝胶和于凝胶中的硫酸锌对S1(金黄色葡萄球菌）的生长无效应。单独的于凝胶中的9号 Cu和10号Cu组合物均抑制S1 (金黄色葡萄球菌）的生长且Aol分别为20mm2和33mm2。与之相 比，在与凝胶中的硫酸锌组合时，9号Cu和10号Cu组合物展示增强的对S1(金黄色葡萄球菌） 的生长的抑制，且Aol分别为38mm 2和57mm2。这些结果证实且扩展了图2中展示的结果，从而 证实酸溶性铜-铵络合物与硫酸锌之间对菌株S1 (金黄色葡萄球菌）的生长具有明显协同抑 制效应。
[0057] 4.表3展示硫酸铜、5种不同酸溶性铜-铵络合物和一种酸溶性铜-锌-铵络合物对 如上文方法部分中所描述BHI琼脂上痤疮丙酸杆菌的生长的效应。以l:200(v〇l/v〇l)稀释 所有酸溶性铜-铵络合物储备溶液且还制备相同铜元素浓度（200微克/毫升）的硫酸铜溶 液。1号Cu-Zn组合物的储备溶液(参见表2)也以1:200稀释以供测试。所有稀释均是在蒸馏 水中进行。
[0058] 表3.硫酸铜和各种组合物(描述于表1和2中）对BHI琼脂上痤疮丙酸杆菌的生长的 效应。抗细菌活性与组合物pH之间并无关联。
[0060] 表3中的结果展示，所有酸溶性铜-铵络合物对痤疮丙酸杆菌的生长的抑制均强于 等效浓度的呈硫酸铜形式的元素铜。尽管所测试5种编号Cu组合物的Zol类似，但这些组合 物的配方极为不同 -如表1中所展不。3号Cu、9号Cu和13号Cu具有相同Zol，但用于溶解铜-铵 络合物的酸不同（分别为磷酸、盐酸和硫酸），且13号Cu包括氯化铜而非硫酸铜。12号Cu(硫 酸铜和硫酸)具有最大的抵抗痤疮丙酸杆菌的Zol，但与13号Cu的不同之处仅在于组合物中 所使用的铜盐(参见表1)。
[0061] 因使用酸溶解铜-铵和铜-锌-铵组合物，所以可表明，组合物的酸度导致其抗微生 物活性高于硫酸铜。然而，如表3中所展示，10号Cu的储备溶液的pH高于硫酸铜的等效溶液， 且对痤疮丙酸杆菌的生长仍具有更大抑制效应。另外，表3中所展示化合物/组合物的Zol和 pH之间的非参数斯皮尔曼关联测试(non-parametric Spearman correlation test)得到 关联系数=-〇. 056且p = 0.81 (使用格拉夫派得软件公司(GraphPad Sof tware)，拉荷雅(La Jolla)，加利福尼亚的普锐斯(Prism)6统计包），从而展示此实验中所测试组合物的pH与抗 微生物活性之间并无显著关联。
[0062] 有趣的是，尽管仅具有Cu编号组合物的元素铜的37.5%，但结合等摩尔浓度的元 素锌(在储备溶液中1.5克/分升），1号Cu-Zn组合物为抑制性更强的组合物之一。1号Cu-Zn 令人印象深刻的活性证实了从图2和3中所呈现结果得出的结论，即铜离子与锌离子之间存 在协同性且展示此酸溶性铜-锌-铵络合物显示高于预期的抵抗痤疮丙酸杆菌的抑制效应。 这些结果还表明，1号Cu-Zn组合物可在与痤疮丙酸杆菌高度有关的疾病痤疮的治疗中具有 治疗价值。另外，因已知痤疮丙酸杆菌在pH 4.5-5(此为"正常"皮肤的pH范围）下生长不良， 所以1号Cu-Zn酸溶性铜-锌-铵络合物可在痤疮的治疗中具有治疗价值，这是因为其强烈抑 制痤疮丙酸杆菌的生长且1号Cu-Zn于含有防腐剂的凝胶中的l%( V〇l/V〇l)调配物的pH值 为约pH 4.6。
[0063]实例2.细菌微量板培养。
[0064]从在医院病房中获取的拭子分离需氧细菌菌株鲍曼不动杆菌(A.baumannii)、耐 甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA)和克雷伯氏肺炎菌（K. pneumoniae)。大肠杆菌（NCTC 9001;大肠杆菌)为来自患者膀胱的临床分离物;所有菌株均是在RPMI-1640中培养。稀释待 测试化合物/组合物的储备溶液，从而使微量板分析中的双重稀释始于l%v〇l/V〇l浓度。在 96孔组织培养板中在RPMI-1640中制备待测试组合物的双重稀释液。使用新鲜RPMI以1:40 稀释细菌培养物且添加到组合物中。如实例1(琼脂板测试方法）中所描述来培养痤疮丙酸 杆菌且使用新鲜BHI以1:100稀释试样。如上文所描述在96孔组织培养板中在蒸馏水（100微 升）中制备待测试组合物的双重稀释液且添加100微升经稀释痤疮丙酸杆菌培养物。然后将 板在37°C下培养24小时（在用于痤疮丙酸杆菌的厌氧条件下）。组合物的最小抑制浓度 (MIC)定义为观察不到可见细菌生长时的最低浓度。
[0065] 结果
[0066] 1.表4展示硫酸铜、硫酸锌和表1和2中所描述的各种组合物的MIC结果。在1号实验 中，所测试两种基于铜的组合物(3号Cu和9号Cu)的活性是硫酸铜的两倍。令人吃惊地，硫酸 锌对痤疮丙酸杆菌的MIC低于任一基于Cu的产物且1号Cu-Zn酸溶性铜-锌-铵调配物为活性 最强的所测试组合物。与1号Cu-Zn具有等量元素铜但元素锌小6倍的3号Cu-Zn(参见表2)的 活性比1号Cu-Zn小4倍。
[0067] 表4.硫酸铜和硫酸锌和各种组合物(描述于表1和2中）对细菌微量板培养物中的 痤疮丙酸杆菌的生长的效应。
[0069]在2号实验中，硫酸铜和3号Cu对痤疮丙酸杆菌的MIC是在第一实验中观察到的两 倍，但3号Cu仍具有两倍活性。12号Cu和13号Cu与3号Cu具有相同MIC，但其包括硫酸而非3号 Cu中的磷酸；13号Cu包括氯化铜而非3号Cu和12号Cu中的硫酸铜。这些结果指示，酸溶性铜-铵络合物的活性通常高于单独的硫酸铜。如在1号实验中，1号Cu-Zn为针对痤疮丙酸杆菌的 生长的活性最强的组合物且其活性仍高于3号Cu-Zn的4倍。
[0070]总而言之，这些实验证实且扩展了描述于上文中且展示于表3中的琼脂板测试结 果。这些结果证实，酸溶性铜-铵组合物的活性高于单独的硫酸铜。本发明结果令人吃惊地 展示，硫酸锌抑制痤疮丙酸杆菌的生长，且尽管1号Cu-Zn仅含有37.5%的元素铜，但其活性 远高于任一 Cu组合物。这些结果展示，1号Cu-Zn组合物中等摩尔的元素锌和铜的组合的活 性高于单独的硫酸锌，且其活性甚至高于所含元素锌小于铜6倍的3号Cu-Zn。总而言之，这 些实验的结果证实，1号Cu-Zn可对痤疮具有治疗益处。
[0071] 2.表5展示1号到5号Cu-Zn组合物的MIC结果，所述组合物具有不同比率的元素铜 和锌，而用于制备Cu-Zn络合物的碳酸铵的量和用于溶解Cu-Zn络合物的盐酸的量保持恒定 (参见表2)。在此实验中，如同硫酸锌一般，3号Cu组合物（用作实验之间的参考）的MIC = 50 微克/毫升。如先前实验中，1号Cu-Zn组合物针对痤疮丙酸杆菌的生长的活性比3号Cu-Zn和 此实验中的2号Cu-Zn大4倍。4号和5号Cu-Zn的活性均相等地为2号和3号Cu-Zn的一半且小 于1号Cu-Zn的活性8倍。这些结果展示，包括等摩尔的元素铜和锌的1号Cu-Zn组合物为所有 所测试组合物中针对痤疮丙酸杆菌的生长的活性最强的组合物。2号和3号Cu-Zn的结果表 明，铜对痤疮丙酸杆菌的生长的作用略大于锌，但在等摩尔等量时（1号Cu-Zn)两种金属一 起的显著协同性产生迄今为止针对痤疮丙酸杆菌的生长最有效的组合物。
[0072] 表5.各种Cu-Zn组合物、3号Cu和硫酸锌对细菌微量板培养物中痤疮丙酸杆菌的生 长的效应。
[0074] 3.表6展示硫酸铜和各种Cu和Cu-Zn组合物针对微量板培养物中的MRSA、大肠杆 菌、鲍曼不动杆菌和克雷伯氏肺炎菌的生长的MIC结果。MRSA和鲍曼不动杆菌二者对硫酸 铜、Cu组合物和Cu-Zn组合物的效应比大肠杆菌和克雷伯氏肺炎菌显著更敏感，其中鲍曼不 动杆菌对Cu-Zn组合物的抑制效应非常敏感。因鲍曼不动杆菌为引起医疗获得性感染(HAI) 的特别持久的细菌，所以使用1号Cu-Zn组合物进行清洗和/或雾化尤其可用于从医院和其 他医疗设施去除此日益普遍且难以处理的微生物。
[0075] 表6 .硫酸铜和各种Cu和Cu-Zn组合物（描述于表1和2中）对细菌微量板培养物中 MRSA、大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和克雷伯氏肺炎菌的生长的效应。NT =未测试。

[0077] MRSA和大肠杆菌二者对Cu组合物的生长抑制效应比对Cu-Zn组合物和硫酸铜更敏 感，而对于鲍曼不动杆菌和克雷伯氏肺炎菌则相反。然而，大肠杆菌对所测试所有组合物的 敏感性通常小于MRSA约8倍。
[0078]应注意，使用碳酸铵或碳酸氢铵且使用乙酸酸（10号Cu)和柠檬酸（11号Cu;未展示 于表1中或未测试，这是因为在24hr之后显著沉淀）制得的某些组合物在制备数天内开始沉 淀。使用氢氧化铵制备极类似的组合物且这些组合物（l〇a号Cu和11a号Cu)经证实显著更稳 定且在制备数月之后(存储于室温下）不显示沉淀迹象。使用氢氧化铵制备三种组合物(细 节可参见表1)且针对MRSA、鲍曼不动杆菌和大肠杆菌进行测试，如表6底部所展示。3号Cu为 稳定组合物且3a号Cu同等稳定且针对所测试三种细菌菌株具有同等活性。10a号Cu与10号 Cu展示类似活性且含有柠檬酸的11a号Cu与其他编号Cu组合物具有同等活性。这些(和使用 氢氧化铵制得的其他组合物-参见下文)组合物不仅更稳定，而且其制备更快且更容易，这 是因为不释放二氧化碳，且使用氢氧化铵形成的Cu-/Cu-Zn-铵络合物的溶解所需酸更少， 因此组合物的pH可更高，此代表了其调配物的优点。
[0079] MRSA或许是引起HAI的了解最充分且最呈问题的病原性细菌，但USA300MRSA菌株 也已经特别在皮肤的社区相关感染方面越来越成问题。碳青霉稀(Carbapenem)抗性克雷伯 氏肺炎菌(CRKP)在过去10年已变为几乎完全抗药的世界性医院病原体。然而，所测试细菌 菌株对Cu编号和Cu-Zn编号组合物(表6)的敏感性表明，这些组合物可在医院、家庭和其他 建筑中用于清洗、雾化等以去除这些生物体。总而言之，因鲍曼不动杆菌也对Cu编号组合物 相当敏感，所以3号Cu可为用于清洗和消毒以从建筑去除这些病原性微生物的尤其有效的 组合物。
[0080] 实例3.使用人类鳞状上皮细胞系(A-431)的细胞毒性分析。
[0081] 在37°C和5%⑶2下，于空气气氛中，在加湿培养箱中，在补充有10%胎牛血清和 2mM L-谷氨酰胺的RPMI-1640培养基(完全培养基）中培养A-431(ATCC)。对于细胞毒性实 验，将细胞胰蛋白酶化，洗涤，计数且将2 X 104个细胞平铺于平底96孔板的孔中的完全培养 基中，并培养3天直到形成铺满单层为止。所测试产物为：（i)硫酸铜、9号Cu、10号Cu和1号 Cu-Zn，如图4中所展示，和（ii)稀释于含有防腐剂的芦荟凝胶中的9号Cu组合物和1号Cu-Zn 组合物，以及以下两种商业痤疮乳膏:含有2%水杨酸的CLEARASIL? (英格兰伯克郡的 利洁时有限责任公司的注册商标）超快作用治疗凝胶，和含有10 %过氧化苯甲酰的 CLEARASIL?(英格兰伯克郡的利洁时有限责任公司的注册商标）日清型痤疮治疗乳 膏，如图5中所展示。在完全培养基中稀释所有测试产物且然后一式三份添加到铺满的A-43 1细胞中，然后将其再培养24小时，此时使用如下文所描述的磺酰罗丹明B (sulforhodamine B，SRB)分析定量评价细胞毒性/细胞存活率。
[0082] 使用RPMI-1640培养基将细胞洗涤两次且然后使用10%三氯乙酸在4°C下固定1小 时。在使用自来水洗涤两次之后，使用SRB(于1 %乙酸中的0.4 % w/v SRB)在室温下将细胞 染色30min。在使用自来水洗涤两次之后，将剩余染料溶于10mM Tris碱中且在540nm下于蒂 娜泰克-穆尔拉特(Dynatech Multiplate)ELISA读数仪上测量各孔的吸光度。通过将测试 产物吸光度除以对照吸光度且乘以100来计算细胞存活百分比。
[0083] 结果
[0084] 图4展示，硫酸铜与9号Cu和10号Cu组合物对人类皮肤细胞具有几乎相同的细胞毒 性特征且50%细胞毒性浓度(CC5Q)为50微克/毫升，从而表明铜离子负责三种产物的细胞毒 性效应。尽管1号Cu-Zn组合物的元素铜浓度仅为其他三种产物的37.5%，但其细胞毒性略 高于其他三种产物(CC 5Q = 30微克/毫升），这可能是由于同时存在铜和锌离子所致，表明锌 离子对人类皮肤细胞的细胞毒性甚至高于铜离子和/或其增强铜离子的细胞毒性。
[0085] 重要的是，这些结果展示，本文所描述的组合物（例如3号Cu、3a号Cu、9号Cu、10号 &1、1(^号〇1、11&号(：11、12号(：11、13号〇1以及1号(：11-211和3号〇1-211)可以远低于引起对培养物 中人类皮肤细胞的细胞毒性的浓度(约30微克/毫升)的浓度(MIC 1.6-6.3微克/毫升-参见 表6)抑制诸如MRSA和鲍曼不动杆菌等细菌的生长。1号Cu-Zn还以MIC= 12.5微克/毫升(表 4)抑制痤疮丙酸杆菌的生长，在该浓度下其对人类皮肤细胞无细胞毒性。
[0086] 图5展示含有l%vol/vol 9号Cu组合物(400微克/毫升元素铜)和1号Cu-Zn组合物 (150微克/升元素铜和锌）的凝胶和两种市售CLEARAS丨L? (英格兰伯克郡的利洁时有 限责任公司的注册商标）痤疮乳膏对组织培养物中人类皮肤细胞的存活率的效应。两种 CLEARAS丨L? (英格兰伯克郡的利洁时有限责任公司的注册商标)产品（一种含有10% 过氧化苯甲酰作为活性成份且另一种含有2%水杨酸作为活性成份)产生类似的细胞毒性 特征，且CC 5Q值分别为0.02 %和0.05 %，且在约0.5 %和更高的浓度下产生100 %细胞毒性 (〇%细胞存活率）。含有1%1号Cu-Zn组合物的凝胶为用于治疗痤疮的优选组合物，其具有 4%的CC 5Q，而含有1%9号Cu组合物的凝胶在分析中即使在10%vol/vol下也未实现CC5Q。这 些凝胶调配物CC 5Q值与使用单独组合物（参见图4)所获得的CC5Q值一致。因此，显而易见， CLEARAS丨L? (英格兰伯克郡的利洁时有限责任公司的注册商标)产品对人类皮肤细胞 的毒性比任一凝胶调配物高约200倍。
[0087] 重要的是应注意，因皮肤细胞培养物与皮肤的复杂结构相比相对简单，所以需要 谨慎理解医疗护理的含义，且这些活体外结果不能转变为临床差异。然而， CLEARAS丨(英格兰伯克郡的利洁时有限责任公司的注册商标)产品中广泛用于痤疮 治疗产品的活性成份水杨酸和过氧化苯甲酰似乎对患有痤疮者的皮肤上暴露更多的皮肤 细胞尤其具有毒性。因此，含有1号Cu-Zn调配物的凝胶可对痤疮患者的皮肤损害更小，而对 痤疮相关细菌痤疮丙酸杆菌具有高活性(参见实例1和2)。
[0088] 实例4.使用植物病原性真菌的抗真菌分析。
[0089]在室温下（约22°C)于马铃薯右旋糖琼脂（PDA)上培养白蜡鞘孢菌分离物196/28 (白錯鞘孢菌(C.fraxinea))、黑曲霉(Aspergillus niger、A.niger)和从白粉菌(Pm;分离 自苹果叶)分离的菌株。为评价组合物对真菌生长的效应，将10微升稀释于无菌蒸馏水中的 测试组合物置于12孔组织培养板的孔中且通过移液管向每一孔添加1毫升PDA。搅动板以将 测试组合物均匀分布于琼脂中（使用单独蒸馏水作为对照)且然后使琼脂沉降。使用解剖刀 小心切割含有来自已确立真菌培养物的真菌菌丝的琼脂塞(3mm 2)，且插入12孔板的每一孔 中的琼脂中心的孔洞中，然后在室温(约22°C)下培养。因真菌生长速率根据菌株有所变化， 所以对于Pm在3天之后，且对于黑曲霉以3-4天的适当间隔，且对于白蜡鞘孢菌以约7天的适 当间隔来评价实验。为评价组合物对真菌生长的效应，以90°角使用直尺测量真菌菌丝的直 径两次且计算平均直径(毫米）。如果通过眼睛不能检测到真菌生长，则通过相衬显微术(40 X )观察培养物以证实如通过目测检查所判断无生长(NG)。
[0090] 结果
[0091] 1.表7展示硫酸铜和16号Cu组合物对白蜡鞘孢菌的生长的效应。16号Cu组合物在 两个时间点在125微克/毫升的浓度下显著抑制真菌生长，且对真菌生长的抑制性比硫酸铜 大约30倍(使用3.75微克/毫升16号Cu的结果极类似于使用125微克/毫升硫酸铜的结果）， 这可能是由于用已知具有抗真菌活性的亚磷酸溶解16号Cu中的铜-铵络合物(参见表1)所 致。
[0092] 表7.硫酸铜和16号Cu组合物对TOA上白蜡鞘孢菌的生长的效应。*通过相衬显微术 在40 X放大率下观察到轻微生长。**20毫米为孔宽度且代表铺满的真菌生长。
[0094] 2 .表8展示1号Cu-Zn组合物和7号Cu-Zn组合物对白蜡鞘孢菌的生长的效应。1号 Cu-Zn组合物抑制白蜡鞘孢菌的生长的有效性低于7号Cu-Zn组合物，且尽管两种组合物的 配方极为类似(表2)，但7号Cu-Zn组合物含有亚磷酸作为铜-锌溶解酸，而1号Cu-Zn组合物 则含有盐酸。已知磷酸具有抗真菌活性且其在7号Cu-Zn组合物中的使用使得抗真菌组合物 在分析的第7天和第14天的活性分别比1号Cu-Zn高3到10倍。
[0095] 1 %浓度的7号Cu-Zn含有150微克/毫升元素铜，因此比较7号Cu-Zn的效应与表7中 的硫酸铜和16号Cu的效应指示，7号Cu-Zn是有效性略低于16号Cu的白蜡鞘孢菌生长抑制 剂，但其有效性显著高于硫酸铜。
[0096] 表8. 1号Cu-Zn组合物和7号Cu-Zn组合物对TOA上白蜡鞘孢菌的生长的效应。Cu-Zn编号组合物是以储备溶液的百分比稀释液形式来使用(表2)，所以1%溶液含有150iig/ml 元素铜(和锌）。*20毫米为孔宽度且代表铺满的真菌生长。
[0098] 3.表9展示硫酸铜和16号Cu组合物对黑曲霉的生长的效应。16号Cu组合物在125微 克/毫升的浓度下完全抑制真菌生长且在所有三个时间点对真菌生长的抑制比硫酸铜高3 到1 〇倍，如使用白蜡鞘孢菌所见(表7)。
[0099] 表9.硫酸铜和16号Cu组合物对PDA上黑曲霉的生长的效应。NG指示如通过相衬显 微术在40 X放大率下所评价无生长。
[0101] 4.表10展示，两种均含有亚磷酸的Cu编号组合物抑制Pm的生长比硫酸铜更有效。 16号Cu组合物是使用碳酸氢铵制备，而27号Cu组合物含有氢氧化铵且如前文所展示(表6)， 这对组合物的抗真菌活性不造成显著差异。然而，在室温下数天后在16号Cu组合物中发现 沉淀，而在使用27号Cu时未发现沉淀，表明在使用亚磷酸溶解络合物时，氢氧化铵可非常有 利于制备铜-铵络合物。7号Cu-Zn和10号Cu-Zn组合物是对Pm生长同等有效的抑制剂，其区 别在于分别使用碳酸铵和氢氧化铵来产生在每一情形下使用亚磷酸溶解的Cu-Zn-铵络合 物(表2)。然而，在使用碳酸铵制备使用亚磷酸溶解的Cu-Zn-铵络合物时未发现沉淀。令人 吃惊地，就元素铜含量来说，Cu-Zn编号组合物是比Cu组合物更有效的Pm生长抑制剂。因此， 在1%稀释度（150微克/毫升的铜）下，Cu-Zn编号组合物完全抑制生长，如同Cu编号组合物 (但在375微克/毫升的元素铜下)一般。在0.3%稀释度(45微克/毫升的铜)下，Cu-Zn编号组 合物仍显著抑制Pm生长，而在37.5微克/毫升下，Cu编号组合物仅轻微抑制Pm生长。计算指 示，将Pm生长抑制50%所需的浓度为约40微克/毫升(对于Cu-Zn编号组合物)和约170微克/ 毫升(对于Cu编号组合物）。因此，这些结果展示，使用亚磷酸溶解的Cu-Zn编号组合物抑制 Pm生长的有效性显著高于于使用亚磷酸溶解的Cu编号组合物，不论使用何种铵盐来形成络 合物。
[0102] 表10.硫酸铜、两种Cu编号组合物和两种Cu-Zn编号组合物对在培养3天之后roA上 Pm的生长的效应。Cu-Zn编号组合物是以储备溶液的百分比稀释液形式来使用（表2)，因此 1 %溶液含有150μg/ml元素铜(和锌）JG指示如通过相衬显微术在40 X放大率下所评价无 生长。*通过相衬显微术在40 X放大率下观察到轻微生长。
[0104] 白蜡鞘孢菌是引起欧洲的严重森林问题灰树枯梢病的病因。黑曲霉在某些果实和 蔬菜(例如葡萄、洋葱和花生)上引起黑霉，且为食物的常见污染物。布氏白粉菌属真菌是广 泛分布的植物病原体，其在许多植物(包含葡萄藤、萌芦、洋葱、苹果和梨树）的叶子上引起 白粉病。上述结果展示，使用亚磷酸溶解的铜-铵和铜-锌-铵络合物可高度有效地抑制所测 试各种植物病原性真菌的生长，且由此可在农业领域中具有保护作物、植物、树、花和装饰 灌木的实用应用。令人吃惊地，7号和10号Cu-Zn抑制白粉菌生长比16号和27号Cu显著更有 效，表明这些组合物可具有针对某些植物病原体的有利抗真菌活性。
[0105] 实例5.使用人类病原体白色念珠菌和新隐球菌的抗真菌/酵母分析。
[0106] 所用白色念珠菌(C.albicans)的三种菌株1-1、3-1和4-1分别是从人类的血液、阴 道和口咽分离。使用新隐球菌(C.neoformans)菌株CCTP13。在37°C下于RPMI-1640培养基中 培养所有菌株。硫酸铜和Cu编号组合物始于200微克/毫升的高浓度，而Cu-Zn编号组合物始 于1 %储备溶液(表2)的高浓度，且硫酸锌和亚磷酸始于等效于7号和10号Cu-Zn中浓度的高 浓度(细节可参见表11的图例），在96孔组织培养板中的RPMI-1640中制备这些组合物的双 倍稀释液（100微升）。使用含有40mM MOPS缓冲液的新鲜RPMI分别以1:40和1:10稀释白色念 珠菌和新隐球菌的过夜培养物，且将90微升添加到板中的组合物中。添加刃天青A(10微升 的0.0675%的八〇1蒸馏水溶液)作为生长指示剂，且将培养物在37°(：下培养241^。化合物/ 组合物的最小抑制浓度(MIC)定义为刃天青A指示剂保持蓝色(活细胞将蓝色染料转化成粉 色）的最低浓度。
[0107] 结果
[0108] 表11展示，所测试所有菌株都对铜非常敏感，且MIC类似于使用MRSA和鲍曼不动杆 菌所见的MIC(约6微克/毫升;表6)，不论呈硫酸铜形式还是酸溶性铜-铵组合物(Cu编号)形 式。
[0109] 1号和7号酸溶性Cu-Zn-铵络合物组合物含有等摩尔量的元素铜和锌且分别含有 盐酸和亚磷酸，其是就铜离子浓度来说比硫酸铜和Cu编号组合物略微更有效的白色念珠菌 生长抑制剂(MIC = 4.7微克/毫升的元素Cu2+)。酵母新隐球菌也对铜(不论何种形式)高度敏 感，但对1号Cu-Zn不如白色念珠菌菌株敏感。白色念珠菌菌株的生长不受硫酸锌或亚磷酸 影响(MIC分别>150和>500微克/毫升）。新隐球菌的生长也不受硫酸锌影响。
[0110] 表11.各种组合物对三种白色念珠菌菌株和新隐球菌菌株的生长的效应。*Cu-Zn 编号组合物含有4.7μg/ml的Cu 2+和Zn2+。**?号和10号Cu-Zn储备组合物的l%vol/vol溶液 (参见表2)含有150μg/ml硫酸锌和500μg/ml亚磷酸。NT =未测试。
[0112] 这些结果展示，在生长于RPMI培养基中时，从各个不同解剖学位点分离的白色念 珠菌菌株均对铜的存在高度敏感。因此，可得出结论，Cu编号组合物或Cu-Zn编号组合物中 的任一者均可用于局部治疗白色念珠菌相关疾病，例如阴道鹅口疮和口腔鹅口疮。
[0113] 新隐球菌也对硫酸铜和Cu编号组合物极为敏感，但对1号Cu-Zn和硫酸锌的敏感性 远远更低。新隐球菌在HIV/AIDS患者中引起严重脑膜炎且将含铜络合物选择性递送到脑中 可为此致命疾病的潜在疗法。
[0114] 实例6.稳定性测试。
[0115] 将1号Cu组合物和具有防腐剂且含有l%V〇l/V〇l 1号Cu组合物的芦荟凝胶的试样 (3毫升)置于7毫升无菌塑料管中且将重复试样存储于以下四种条件下:在37°C下于加湿培 养箱中、在室温下（约22 °C)于药柜中、在4°C下于冷室中和在-20 °C下于冷冻器中。在存储5 个月之后，使1号Cu和含有1 % 1号Cu的凝胶的一组试样达到室温。在琼脂板测试中针对细菌 菌株S1 (金黄色葡萄球菌)测试凝胶试样(5微升)和1号Cu试样（以1:1或1: lOvol/vol稀释于 蒸馏水中且将5微升置于纸盘上），且在37°C下培养24小时之后，如实例1中所描述来测量抑 制区的直径。
[0116] 结果
[0117]含有1%1号Cu组合物的凝胶试样针对S1(金黄色葡萄球菌）均得到6毫米的抑制 区，指示在宽范围温度下存储对凝胶的抗细菌活性无影响。
[0118] 表12展示在不同温度下存储5个月的1号Cu组合物的试样的抑制区。存储于37°C下 的试样对S1(金黄色葡萄球菌)生长的抑制略高于在两种所测试浓度下得到极类似抑制区 的其他试样。这些结果展示，1号Cu组合物在宽范围温度下存储5个月之后保留其抗细菌活 性。
[0119] 表12.在不同温度下存储5个月的1号Cu组合物的试样对琼脂板测试中细菌菌株S1 (金黄色葡萄球菌)的生长的效应。
[0121]尽管已结合本发明的优选实施例来描述本发明的各个目标，但显然许多改变、修 改和变化对于所属领域技术人员将是显而易见的。因此，打算涵盖属于本说明书、权利要求 书和附图的精神和广泛范围内的所有所述改变、修改和变化。
【主权项】
1. 一种抗微生物组合物，所述抗微生物组合物包括： 一种包括一种于水中的铜盐的溶液； 一种碱性铵盐，其添加到该铜盐溶液中以生成一种不溶性铜-铵络合物;和 至少一种水溶性酸，其添加到该铜盐溶液中以溶解该铜-铵络合物且控制由此形成的 澄清蓝色酸溶性铜-铵溶液的pH。2. 如权利要求1所述的抗微生物组合物，其中该铜盐是选自由硫酸铜和氯化铜组成的 群组。3. 如权利要求1所述的抗微生物组合物，其中该碱性铵盐是选自由以下组成的群组:氢 氧化铵、碳酸铵和碳酸氢铵。4. 如权利要求1所述的抗微生物组合物，其中该水是选自由以下组成的群组：蒸馏水、 去离子水、纯化水、过滤水、医药级水、医学级水和反渗透水。5. 如权利要求1所述的抗微生物组合物，其中用于制备该溶液的该铜盐无水。6. 如权利要求1所述的抗微生物组合物，其中用于制备该溶液的该铜盐经水合。7. 如权利要求1所述的抗微生物组合物，其中该水溶性酸为一种选自由以下组成的群 组的无机酸:硫酸、盐酸、磷酸和亚磷酸。8. 如权利要求1所述的抗微生物组合物，其中该水溶性酸为一种选自由以下组成的群 组的有机酸:乙酸、抗坏血酸、柠檬酸、二氯乙酸、富里酸、苦杏仁酸和羧酸。9. 如权利要求1所述的抗微生物组合物，其中该铜盐溶液在溶液中进一步包括一等摩 尔量的一种锌盐，从而在添加该碱性铵盐后形成一种铜-锌-铵络合物。10. 如权利要求9所述的抗微生物组合物，其中该锌盐是选自由以下组成的群组:无水 硫酸锌、无水氯化锌、水合硫酸锌和水合氯化锌。11. 如权利要求9所述的抗微生物组合物，其中该铵盐溶于水中。12. 如权利要求1所述的抗微生物组合物，该抗微生物组合物进一步包括一种选自由以 下组成的群组的载剂:一种凝胶、一种软膏、一种油、一种膏、一种药剂、一种可喷雾溶液、一 种敷剂溶液、一种灌洗溶液、一种乳膏、一种皂剂、一种洗涤剂、一种洗剂和一种泡沫剂。13. 如权利要求1所述的抗微生物组合物，其中所述抗微生物组合物为一种植物保护产 品。14. 一种抗微生物组合物，该抗微生物组合物是通过以下工艺来产生： 组合一种铜盐与水； 剧烈搅拌该组合的铜盐和水混合物； 将一种碱性铵盐添加到该所得混合物中以生成一种不溶性铜-铵络合物;和 将一种水溶性酸添加到该铜-铵络合物中以溶解该铜-铵络合物且控制由此形成的澄 清蓝色溶液的pH。15. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，其中该铜盐是选自由硫酸铜和氯化铜组成 的群组。16. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，其中该水是选自由以下组成的群组：蒸馏 水、去离子水、纯化水、过滤水、医药级水、医学级水和反渗透水。17. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，其中用于制备该溶液的该铜盐无水。18. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，其中用于制备该溶液的该铜盐经水合。19. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，其中该碱性铵盐是选自由以下组成的群组： 氢氧化铵、碳酸铵和碳酸氢铵。20. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，其中该水溶性酸为一种选自由以下组成的 群组的无机酸:硫酸、盐酸、磷酸和亚磷酸。21. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，其中该水溶性酸为一种选自由以下组成的 群组的有机酸:乙酸、抗坏血酸、柠檬酸、二氯乙酸、富里酸、苦杏仁酸和羧酸。22. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，其中该铜盐溶液进一步在溶液中包括一等 摩尔量的一种锌盐，从而在添加该碳酸铵或碳酸氢铵后形成一种铜-锌-铵络合物。23. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，其中该锌盐是选自由以下组成的群组:无水 硫酸锌、无水氯化锌、水合硫酸锌和水合氯化锌。24. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，其中在与该铜盐和水混合物组合之前将该 碱性铵盐溶于水中。25. 如权利要求14所述的抗微生物组合物，该抗微生物组合物进一步包括一种选自由 以下组成的群组的载剂:一种凝胶、一种软膏、一种油、一种膏、一种药剂、一种可喷雾溶液、 一种敷剂溶液、一种灌洗溶液、一种乳膏、一种皂剂、一种洗涤剂、一种洗剂和一种泡沫剂。26. -种产生一种抗微生物组合物的方法，该方法包括以下步骤： 在水中组合一种铜盐； 剧烈搅拌该组合的铜盐和水混合物； 将一种碱性铵盐添加到该所得混合物中以生成一种不溶性铜-铵络合物;和 将一种水溶性酸添加到该铜-铵络合物中以溶解该铜-铵络合物且控制由此形成的澄 清蓝色抗微生物组合物的pH。
【文档编号】A01N59/20GK105873442SQ201480072256
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2014年12月12日
【发明人】托尼·约翰·霍尔
【申请人】麦可科学有限公司