一种辽藁本愈伤组织的培养方法
【专利摘要】本发明提供了辽藁本的组织培养方法，将新鲜辽藁本叶片，以MS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，添加2,4?二氯苯氧乙酸、6?糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇作为培养基进行培养。以总培养基计，MS，2,4?二氯苯氧乙酸、6?糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇的重量组成比：1000g:0.2~0.5mg:0.04~0.08mg:6~9g：1.2~2g:0.01~0.03g。目前，有关辽藁本组织培养的文献报道未见报道，采用本发明得到的愈伤组织，在组合培养基上，不仅愈伤组织长得快且大，而且外观为嫩绿色，长势好。
【专利说明】
一种辽藁本愈伤组织的培养方法
技术领域
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[0001]本发明涉及辽藁本的愈伤组织的培养方法，属于中药的技术领域。
【背景技术】
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[0002]辽藁本(Ligusticum jeholense Nakai et Kitag)为伞形科藁本属多年生草本植物，是《中华人民共和国药典》收载的大宗常用中药藁本的主要来源之一，主要分布于辽宁、吉林、山西及山东地区。辽藁本味辛、温。具有祛风，散寒，除湿，止疼作用。用于风寒感冒，颠顶疼痛，风湿痹痛。现代药理研究表明其具有治疗风寒泄泻、周身疼痛、疥癣、腹痛等疾病。
[0003]由于没有规范化管理以及经济利益的驱使，多年来对野生资源不可持续的采挖，使辽藁本的产量不断下降，野生藁本资源遭到严重破坏。野生辽藁本的引种和人工栽培实践中，种群以无性更新为主。而以根茎进行抚育和移栽工作进展缓慢，为了保护这一野生资源，本发明对辽藁本进行了愈伤组织培养的研究，提出科学有效地恢复和扩大辽藁本种群的提供新途径。
【发明内容】
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[0004]本发明的目的在于提供辽藁本愈伤组织培养在获得辽藁本中的应用。
[0005]本发明的另一个目的是提供辽藁本愈伤组织培养的方法。
[0006]本发明是通过如下方案实现的:
[0007]取辽藁本嫩叶灭菌，以MS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，添加2，4-二氯苯氧乙酸、6-糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇作为培养基进行培养。
[0008]所述的基础培养基为:MS培养基。
[0009]所述的MS培养基、2，4-二氯苯氧乙酸、6-糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇的重量组成比为:100g: 0.2?0.5mg: 0.04?0.08mg: 6?9g:1.2?2g: 0.01 ?0.03g。
[0010]进一步地，所述的2，4_二氯苯氧乙酸的重量为:MS:2，4_二氯苯氧乙酸=100g:
0.2?0.3mg0
[0011]所述的6-糖基氨基嘌呤的重量组成为:MS:6-糖基氨基嘌呤= 100g:0.04?0.06mgo
[0012]所述的蔗糖的重量组成为:MS:蔗糖=100g: 6?7.5g。
[0013]所述的琼脂的重量组成为:MS:琼脂= 100g: 1.2?1.5g。
[0014]所述的肌醇的重量组成为:MS:肌醇= 1000g:0.01?0.015g。
[0015]具体地，本发明的培养方法为:
[0016]将辽藁本的嫩叶进行灭菌，剪成0.5X0.5cm的小块，以100gMS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，添加2.0?2.5mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸1mL?15mL，0.4?0.5mg/L 6-糖基氛基嘌吟10?15mL，30?35g/L鹿糖20?25mL，6?8g/L琼脂20?25mL，0.I?0.15g/L肌醇10?15mL，调节PH=5.8?6.0的组合培养基，每种培养基接种培养40?50个嫩叶小块，培养60?70天，即可。
[0017]本发明针对没有文献报道辽藁本的愈伤组织培养，采用组合培养基，进行辽藁本嫩叶的组织培养，从而得到外观为嫩绿色，长势好的愈伤组织。
【具体实施方式】
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[0018]实施例1:
[0019]①将采集的新鲜辽藁本的嫩叶去掉茎;放于磨口广口瓶中用自来水冲洗2小时，再用70%酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次，2%次氯酸钠洗3分钟，无菌水洗6次，放入无菌培养皿中用滤纸吸干表面水;将已经灭菌的叶片切成0.5 X0.5cm的小块，作为愈伤组织诱导培养的材料；
[0020]②以100gMS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，向其中添加2.0mg/L 2，4_二氯苯氧乙酸1mL?15mL，0.4mg/L 6-糖基氛基嘌吟1mL?15mL，30g/L鹿糖20mL?25mL，6g/L琼脂20mL?25mL;
[0021]③调节组合培养基的P H=5.8?6.0;
[0022]④培养基接种培养50个叶片小块，培养60?70天，结果愈伤组织外观为黄褐色，组织生长缓慢，长势不好。
[0023]实施例2:
[0024]①将采集的新鲜辽藁本的嫩叶去掉茎;放于磨口广口瓶中用自来水冲洗2小时，再用70%酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次，2%次氯酸钠洗3分钟，无菌水洗6次，放入无菌培养皿中用滤纸吸干表面水;将已经灭菌的嫩茎切成0.5cm的小块，作为愈伤组织诱导培养的材料；
[0025]②以100gMS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，向其中添加0.4mg/L6_糖基氨基嘌吟10!111^?151111^，3(^/1^鹿糖201111^?251111^，68/1^琼脂201111^?251111^;0.lg/Uj/UflO?15mL;
[0026]③调节组合培养基的PH=5.8?6.0;
[0027]④培养基接种培养50个叶片小块，培养60?70天，结果愈伤组织外观为黄褐色，组织生长较少，长势不好。
[0028]实施例3:
[0029]①将采集的新鲜辽藁本嫩叶去掉茎;放于磨口广口瓶中用自来水冲洗2小时，再用70%酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次，2%次氯酸钠洗3分钟，无菌水洗6次，放入无菌培养皿中用滤纸吸干表面水;将已经灭菌的叶片切成0.5X0.5cm的小块，作为愈伤组织诱导培养的材料；
[0030]②以100gMS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，向其中添加2.0mg/L 2，4_二氯苯氧乙酸1mL?15mL，30g/L鹿糖20mL?25mL，6g/L琼脂20mL?25mL，0.lg/Uj/UflO?15mL;
[0031]③调节组合培养基的PH=5.8?6.0;
[0032]④培养基接种培养50个叶片小块，培养60?70天，结果愈伤组织外观为黄褐色，组织生长较少，长势不好。
[0033]实施例4:
[0034]①将采集的新鲜辽藁本嫩叶去掉茎;放于磨口广口瓶中用自来水冲洗2小时，再用70%酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次，2%次氯酸钠洗3分钟，无菌水洗6次，放入无菌培养皿中用滤纸吸干表面水;将已经灭菌的叶片切成0.5X0.5cm的小块，作为愈伤组织诱导培养的材料；
[0035]②以100gMS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，向其中添加2.0mg/L 2，4_二氯苯氧乙酸1mL?15mL，0.4mg/L 6-糖基氛基嘌吟1mL?15mL，30g/L鹿糖20mL?25mL，6g/L琼脂 20mL ?25mL ,0.1 g/L 肌醇 10?15mL;
[0036]③调节组合培养基的ΡΗ=7.0?7.5;
[0037]④培养基接种培养50个叶片小块，培养60?70天，结果愈伤组织外观为褐色，组织生长很缓慢几乎不生长，长势非常不好。
[0038]实施例5:
[0039]①将采集的新鲜辽藁本嫩叶去掉茎;放于磨口广口瓶中用自来水冲洗2小时，再用70%酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次，2%次氯酸钠洗3分钟，无菌水洗6次，放入无菌培养皿中用滤纸吸干表面水;将已经灭菌的叶片切成0.5X0.5cm的小块，作为愈伤组织诱导培养的材料；
[0040]②以100gMS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，向其中添加2.0mg/L 2，4_二氯苯氧乙酸1mL?15mL，0.4mg/L 6-糖基氛基嘌吟1mL?15mL，30g/L鹿糖20mL?25mL，6g/L琼脂 20mL ?25mL ,0.1 g/L 肌醇 10?15mL;
[0041 ] ③调节组合培养基的PH=5.8?6.0;
[0042]④培养基接种培养50个叶片小块，培养60?70天，结果愈伤组织外观为嫩绿色，长得快且大，长势好。
[0043]实验结论:各种激素及PH值对辽藁本的愈伤组织生长影响较大，在各种激素适量及PH= 5.8?6.0时生长效果最好;在组合生长调节剂的培养基上，嫩叶不仅愈伤组织长得快且大，而且外观为嫩绿色，长势好。
【主权项】
1.辽藁本愈伤组织培养在获得辽藁本中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，取辽藁本嫩叶灭菌，以MS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，添加2，4-二氯苯氧乙酸、6-糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇作为培养基进行培养。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的基础培养基为: MS培养基。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，以总培养基计，MS，2，4-二氯苯 氧乙酸、6-糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇的重量组成比为:100g: 0.2-0.5mg: 0.04~0.08mg:6~9g:1.2~2g: 0.01~0.03go5.如权利要求2或4所述的应用，其特征在于，2，4-二氯苯氧乙酸的重量为: MS: 2，4-二氯苯氧乙酸=100g: 0.2-0.3mg。6.如权利要求2或4所述的应用，其特征在于，6-糖基氨基嘌呤的重量为: MS: 6-糖基氨基嘌呤=100g: 0.04?0.06mg。7.如权利要求2或4所述的应用，其特征在于，蔗糖的重量为:MS:蔗糖 =1000g:6~7.5go8.如权利要求2或4所述的应用，其特征在于，琼脂的重量为:MS:琼脂 =100g:1.2?1.5g09.如权利要求2或4所述的应用，其特征在于，肌醇的重量为:MS:肌醇 =1000g:0.01~0.015go10.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，将辽藁本的嫩叶进行灭菌， 剪成0.5X0.5cm的小块，以100gMS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，添加2.0?2.5mg/L 2,4_二氣苯氧乙酸1mL?15mL，0.4?0.5mg/L 6-糖基氛基嘌吟 10?15mL，30?35g/L蔗糖20?25mL，6?8g/L琼脂20?25mL ,0.1-0.15g/L肌醇10?15mL，调节PH=5.8-6.0的组合培养基，每种培养基接种培养40?50个嫩叶小块，培养60?70天，即可。
【文档编号】A01H4/00GK105900839SQ201610261764
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月25日
【发明人】贾凌云, 路金才, 李娜, 赵玥, 王晶, 李敬, 程珍
【申请人】沈阳药科大学