一种三疣梭子蟹家系高效选育方法
【专利摘要】一种三疣梭子蟹家系高效选育方法，属于水产育种领域，所述方法为收集三疣梭子蟹不同野生地理群体，通过人工控制定向交尾技术完成亲蟹交配，交尾后取雄蟹大螯肌肉?80℃超低温保存，交尾雌蟹经过越冬、排幼，构建家系，排幼后取雌蟹大螯肌肉?80℃超低温保存；家系幼体发育至II期幼蟹时，转移至室外养殖，每个家系等比例混合放苗建立测试群体，同时每个家系分别建立保种群体；120日龄时，测量测试群每个个体生长性状，然后利用筛选的微卫星引物，对个体进行家系鉴定，统计家系成活率、生长性状；根据家系成活率、生长性状，计算综合指数，进行家系选育，需要留种家系，从保种群内，进行家系内个体选择，通过室内人工定向交尾技术完成亲蟹交配，实现家系精准选育。
【专利说明】
-种Ξ巧梭子蟹家系高效选育方法
技术领域
[0001] 本发明属于水产育种领域，具体地设及一种Ξ痛梭子蟹家系高效选育方法。
【背景技术】
[0002] Ξ痛梭子蟹（Portunustri化berculatus)是一种重要的海洋经济动物，目前养殖 面积40余万亩，产量达11万吨，已成为我国海水养殖主导种类之一。目前，Ξ痛梭子蟹养殖 业主要还是依靠捕拱野生蟹来满足生产育苗的需要，运种状态限制了其发展。一方面，运些 捕拱的野生Ξ痛梭子蟹可能携带感染性病毒，导致养殖成活率极低(5-10%)，给产业和区 域经济的发展造成重大损失;另一方面，生长速度是重要的经济性状，大规格Ξ痛梭子蟹的 经济价值明显要高。因此培育生长速度快、成活率高的优良品种是实现Ξ痛梭子蟹产业的 可持续性发展的重要保障。传统群体选育无法兼顾生长速度和成活率两个性状，由于梭子 蟹没有合适的个体标记，也无法通过评估个体育种值进行选育。根据物种特性及目前研究 进展，采用家系的选育方式效果更佳，但由于个体标记没有解决，家系不能混养，必须在不 同的网格或池塘中单独养殖，在养殖过程中，密度是一个动态变化值，水质因子也不尽相 同，因此不能进行生长性状精确评估;而如果采用传统的分子标记辅助育种方式，首先进行 家系混养，然后再用分子标记进行个体甄别，运样可W精确评估家系生长、存活性状，但存 在如下弊端:a、个体较多，工作量巨大;b、分子标记个体甄别实验需要提取个体肌肉或其他 组织，而蟹类机体损伤后，很容易感染死亡，导致传代困难。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种Ξ痛梭子蟹家系高效选育方法，本选育方 法，收集Ξ痛梭子蟹不同野生地理群体，通过人工控制定向交尾技术完成亲蟹交配，交尾后 取雄蟹大馨肌肉-80°C超低溫保存，交尾雌蟹经过越冬、排幼，构建家系，排幼后取雌蟹大馨 肌肉-80°C超低溫保存;家系幼体发育至II期幼蟹时，转移至室外养殖，每个家系等比例混 合放苗建立测试群体，同时每个家系分别建立保种群体；120日龄时（临近交尾），测量测试 群每个个体生长性状，并分别编号、提取DNA，然后利用筛选的微卫星引物，对个体进行家系 鉴定，统计家系成活率、生长性状;根据家系成活率、生长性状进行家系选育，需要留种家 系，从保种群内，进行家系内个体选择，通过室内人工定向交尾技术完成亲蟹交配，实现家 系精准选育。
[0004] 本发明是按照W下操作技术方案完成的：
[0005] -种Ξ痛梭子蟹家系高效选育方法，包括W下步骤：
[0006] (1)收集我国不同地理群体的Ξ痛梭子蟹，进行遗传结构评估，构建基础群体；
[0007] (2)不同群体中分别挑选亲蟹，通过配合力测试，制定交配方案；
[000引（3)采用室内人工定向交尾技术，完成亲蟹交配，交配结束后，取雄蟹大馨肌肉，- 80°C超低溫冰箱保存;经过越冬、排幼，取雌蟹大馨肌肉，-80°C超低溫冰箱保存;标准化苗 种培育，构建家系，幼体发育至II期幼蟹时，转移室外建立家系测试群体和保种群体，所述 的测试群体:每个家系取300只II期幼蟹室外混合养殖，所述的保种群体:每个家系取2000 只II期幼蟹，分别放在独立的围格中养殖，每个围格的环境尽量一致；120日龄时，收集测试 群体存活个体，进行个体编号、测量生长性状，然后取每个个体大馨肌肉；提取亲本、子代 DNA，利用微卫星技术，进行家系鉴定，统计家系成活率及生长性状;根据家系生长、成活率 指标，计算综合指数，进行家系选留；选留家系，利用保种群体，进行家系内个体选择，通过 室内人工定向交尾技术完成亲蟹交配、留种；
[0009] (4)次年春天每个家系选择抱卵良好的亲蟹，进行标准化育苗与养殖，采用（3)的 选育方法继续家系选育；
[0010] (5)对筛选出的家系进行小规模示范养殖，确定和评价选育家系的养殖效益。
[0011] 进一步，所述的步骤(2)具体为从备选亲蟹中挑选亲蟹，采用人工定向交尾技术建 立家系交配组合，每种交配组合3组，雌雄比例为3:1，对建立的家系进行标准化育苗与养 殖，各家系苗种培育密度、养殖密度相同。
[0012] 进一步，所述的步骤(3)收获时测量测试群体每个个体的生长指标;采用微卫星技 术，进行亲子鉴定，统计家系成活率；W全部家系平均值作对照，计算每个家系生长、成活率 提高值，然后生长、成活率提高值分别加权70%、30%，计算综合指数，综合指数>0的家系 为选留家系；自每个选留家系保种群体中，选取健康交尾雌蟹:个体大、肥满度高、无机械损 伤；
[0013] 进一步，所述的步骤(4)中每个筛选家系的越冬亲蟹为雌蟹20只。
[0014] 本发明与现有技术相比的有益效果：
[0015] 1、本发明W生长速度、成活率2个指标，进行Ξ痛梭子蟹家系选育，综合评价家系 经济性状，选育结果既提高收获时梭子蟹规格，又提高养殖成活率，从而大幅度提高养殖效 益，同时避免单一性状选育造成的偏差。
[0016] 2、目前Ξ痛梭子蟹个体标记尚未解决，不能依靠物理标记混养，而通过分子标记 进行混养个体家系鉴别，则导致工作量大、个体损伤;本发明在Ξ痛梭子蟹选育过程中，每 个家系设置测试群体和保种群体，既能通过家系混养获得精确数据，又能得到无损伤留种 个体，实现了家系高效选育。另外可W为拟穴青蟹、中华绒馨蟹等个体标记未解决的甲壳类 新品种培育提供一种新思路。
[0017] 3、通过小规模示范养殖结果表明，筛选出的Ξ痛梭子蟹家系具明显的高产出效 果，具有良好的推广和应用价值，经小规模的示范测试和比较试验，选育1代后成活率、生长 速度均有显著提高，平均亩产量在65kgW上，上市时梭子蟹养殖产量提高10% W上。
【具体实施方式】
[0018] 下面通过实施例详细叙述本发明的技术方法：
[0019] -种Ξ痛梭子蟹家系高效选育方法，具体包括W下步骤：
[0020] (1)收集了莱州湾、鸭绿江口、海州湾、舟山4个Ξ痛梭子蟹野生群体组建基础群， 每个群体的雌、雄蟹数量均在80只W上。对4个群体的14项形态学指标进行测量，综合运用 生物学性状、免疫酶学指标、同工酶电泳、A化P分析等手段对4个不同地理群体进行群体间 遗传结构研究，发现Ξ痛梭子蟹遗传多样性较高，种质资源处于较好状态;选择体重> 250g 的个体构建基础群体，备选亲蟹符合W下特征:健康、活力强、体表光洁、附肢齐全、无机械 损伤的个体。
[0021] (2)从备选亲蟹中挑选优良个体，根据配合力测试结果，采用人工定向交尾技术建 立家系交配组合，每种交配组合3组，雌雄比例为3:1，交尾结束后，取雄蟹大馨肌肉保存于 超低溫冰箱中备用，经过越冬，次年春天，每个雌蟹在1独立水泥池中排幼，建立家系，对建 立的家系进行标准化育苗，排幼结束后，取雌蟹大馨肌肉存于超低溫冰箱中备用。
[0022] (3)亲蟹同一天排幼8只，建立8个家系，发育至II期幼蟹时，每个家系取300只混合 放入1个600m2室外养殖池中养殖，构建测试群体，同步建立备份；另外每个家系取2400只， 分别放入1个600m2室外养殖池中养殖，构建保种群体；120日龄（临近交尾），测量测试群体 每个个体体重，并进行编号取肌肉样品，利用10对多态性较好的微卫星引物进行家系鉴定， 根据鉴定结果进行每个家系生长、成活率指标统计，W8个家系平均值作为对照，计算每个 家系生长、成活率提高值，分别加权70%、30%计算综合指标，综合指标>0的3个家系为选 留家系，每个留种家系自保种群体中选择40只亲蟹(雌雄3:1)进行室内交尾。
[0023]
[0024] (4)交配结束后，取雌蟹大馨肌肉超低溫冰箱保存;每个家系选取20只交尾雌蟹进 行越冬;次年春天，每个家系挑选抱卵良好的亲蟹10只，单独进行标准化育苗，共建立25个 全同胞家系，同步建立野生对照，养殖及选育同步骤(3);留种家系按照步骤(3)中的方式进 行亲蟹交尾、越冬。
[0025] 对越冬成功的亲蟹单独进行苗种培育，分别在中国水产科学研究院下营增殖实验 站、日照开航水产有限公司2个地区进行小规模养殖示范，采用普通商品苗种作为对照组。 其中中国水产科学研究院下营增殖实验站示范面积100亩，平均亩产65kg，实现产值50余万 元，与对照组相比养殖产量提高10% W上；日照开航水产有限公司示范养殖面积120亩，收 获时平均亩产68kg，实现产值65万元，与对照组相比养殖产量提高10% W上。
【主权项】
1. 一种三疣梭子蟹家系高效选育方法，其特征在于它包括以下步骤： (1) 收集我国不同地理群体的三疣梭子蟹，进行遗传结构评估，构建基础群体； (2) 不同群体中分别挑选亲蟹，通过配合力测试，制定交配方案； (3) 采用室内人工定向交尾技术，完成亲蟹交配，交配结束后，取雄蟹大螯肌肉，-80°C 超低温冰箱保存;经过越冬、排幼，取雌蟹大螯肌肉，-80°C超低温冰箱保存;标准化苗种培 育，构建家系，幼体发育至II期幼蟹时，转移室外建立家系测试群体和保种群体，所述的测 试群体:每个家系取300只II期幼蟹室外混合养殖，所述的保种群体:每个家系取2000只II 期幼蟹，分别放在独立的围格中养殖，每个围格的环境尽量一致;120日龄时，收集测试群体 存活个体，进行个体编号、测量生长性状，然后取每个个体大螯肌肉；提取亲本、子代DNA，利 用微卫星技术，进行家系鉴定，统计家系成活率及生长性状;根据家系生长、成活率指标，计 算综合指数，进行家系选留；选留家系，利用保种群体，进行家系内个体选择，通过室内人工 定向交尾技术完成亲蟹交配、留种； (4) 次年春天每个家系选择抱卵良好的亲蟹，进行标准化育苗与养殖，采用（3)的选育 方法继续家系选育； (5) 对筛选出的家系进行小规模示范养殖，确定和评价选育家系的养殖效益。2. 根据权利要求1所述的一种三疣梭子蟹家系高效选育方法，其特征在于所述的步骤 (2) 具体为从备选亲蟹中挑选亲蟹，采用人工定向交尾技术建立家系交配组合，每种交配组 合3组，雌雄比例为3:1，对建立的家系进行标准化育苗与养殖，各家系苗种培育密度、养殖 密度相同。3. 根据权利要求1所述的一种三疣梭子蟹家系高效选育方法，其特征在于所述的步骤 (3) 收获时测量测试群体每个个体的生长指标;采用微卫星技术，进行亲子鉴定，统计家系 成活率；以全部家系平均值作对照，计算每个家系生长、成活率提高值，然后生长、成活率提 尚值分别加权70%、30%，计算综合指数，综合指数>0的家系为选留家系；自每个选留家系 保种群体中，选取健康交尾雌蟹:个体大、肥满度高、无机械损伤。4. 根据权利要求1所述的一种三疣梭子蟹家系高效选育方法，其特征在于所述的步骤 (4) 中每个筛选家系的越冬亲蟹为雌蟹20只。
【文档编号】A01K61/00GK105918173SQ201610286759
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月3日
【发明人】高保全, 刘萍, 李健, 任宪云, 吕建建, 孟宪亮
【申请人】中国水产科学研究院黄海水产研究所