鳖雄性四倍体纯系的高效育成方法
【专利摘要】本发明公开了一种鳖雄性四倍体纯系的高效育成方法，包括如下步骤：他莫昔芬喂养料的配备、对母鳖进行投喂他莫昔芬喂养料、热休克处理、雌激素抑制剂溶液的配制、获得鳖的雄性四倍体纯系。通过此方法，可获得100%的鳖的雄性四倍体纯系，不仅有效地育成鳖的四倍体，而且提高了四倍体的育成率与出苗率；为生产三倍体不育鳖奠定了坚实的基础。
【专利说明】
鳖雄性四倍体纯系的高效育成方法
技术领域
[0001] 本发明涉及鳖的多倍体繁育方法，具体涉及鳖雄性四倍体纯系的高效育成方法。
【背景技术】
[0002] 鳖，以中华鳖为优，又称团鱼、甲鱼等。隶属爬行纲、龟鳖目、鳖科，常见的为二倍 体，鳖肉味道鲜美，营养丰富，有清热养阴，平肝熄风，软坚散结等作用，二倍体生长缓慢，养 殖周期达4-5年。因三倍体的不育特征，使鳖在生长速度、抗病性、肉质等方面表现出更为显 著的优势。现有技术中，要获得三倍体不育鳖，最快捷有效的方法是通过四倍体鳖与二倍体 鳖倍间杂交获得，那么就需要建立遗传稳定、纯度极高的四倍体鳖纯系。但在鳖的遗传育种 中，到目前为止还未见四倍体全雄鳖高效育成的报道。
【发明内容】
[0003] 针对上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提供一种方法稳定、种群纯度高 达100%的鳖鱼雄性四倍体纯系高效育成方法。
[0004] 为达到上述目的，本发明的技术方案如下： 鳖雄性四倍体纯系的高效育成方法，包括如下步骤： (1) 他莫昔芬喂养料的配备:取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到鳖常规饲养饲 料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为8~10g/500g饲料，待用； (2) 投喂:在母鳖产蛋前，按常规饲料投喂方法对母鳖进行投喂他莫昔芬喂养料，每天 三次，早上8:00每100g母鳖投喂15~18g，中午12点每100g母鳖投喂10~15g，下午6:00每 100g母鳖投喂5~IOg，直至产蛋； (3) 热休克处理:把受精蛋放入温度为25~32°C、湿度为40~80%的恒温孵化器中，在一 次卵裂前2~3min，把温度快速升至39~42°C，保持3~5min;然后温度降至28~32°C ; (4) 雌激素抑制剂溶液的配制:将氯米芬和睾酮一起溶于80%~90%的乙醇中，再加蒸馏 水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为180~250mg/l，睾 酮的浓度为100~150mg/l; (5) 用步骤(4)所制备的雌激素抑制剂溶液，放入喷雾器中，对经过步骤(3)处理的受精 蛋进行均匀喷雾，用量每100只受精蛋为8~15ml，保持孵化器的温度28~32°C、湿度40~ 80%，进行孵化;从而获得100%鳖的雄性四倍体纯系。
[0005] 本发明的优点：1、本发明中对母本进行添加他莫昔芬饲料投喂，起到抑制DNA分裂 和促雄性的双重作用的同时，将受精蛋第一次卵裂的时间推迟了 3~5min，并提高所有受精 蛋第一次卵裂的同步程度(可达99%)，为操作下一步提供时间保障和奠定染色体加倍基础； 2、采用热休克短时间处理受精蛋，不仅有效减少对受精蛋的不良影响，提高受精蛋的成活 率;而且进一步加强了四倍体的形成机率;3、雌激素抑制剂溶液喷洒，再一次强化与保证其 雄性的转化率。因而通过此方法，可获得100%的鳖的雄性四倍体纯系。此方法，不仅有效地 育成鳖的四倍体，而且提高了四倍体的育成率与出苗率;为生产三倍体不育鳖奠定了坚实 的基础。
【具体实施方式】
[0006] 现结合具体实施例，对本发明作进一步描述。
[0007] 实施例一 鳖雄性四倍体纯系的高效育成方法，包括如下步骤： (1) 他莫昔芬喂养料的配备:取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到鳖鱼常规饲养 饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为10g/500g饲料，待用； (2) 投喂:在母鳖产蛋前，按常规饲料投喂方法对母本进行投喂他莫昔芬喂养料，每天 三次，早上8:00每100g鳖鱼投喂15g喂养料，中午12:00每100g鳖鱼投喂15g喂养料，下午6: 00每100g鳖鱼投喂IOg喂养料，直至产蛋； (3) 热休克处理:把受精蛋放入温度为32°C、湿度为80%的恒温孵化器中，在一次卵裂前 3min，把温度快速升至42°C，保持3min;然后温度降至32°C ; (4) 雌激素抑制剂溶液的配制:将氯米芬和睾酮一起溶于90%的乙醇中，再加蒸馏水配 制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为250mg/l，睾酮的浓度为 150mg/l； (5) 用步骤(4)所制备的雌激素抑制剂溶液，放入喷雾器中，对经过步骤(3)处理的受精 蛋进行均匀喷雾，用量每100只受精蛋为8ml，保持孵化器的温度32°C、湿度80%，进行孵化； 从而获得1 〇〇%鳖的雄性四倍体纯系。
[0008] 实施例二 鳖雄性四倍体纯系的高效育成方法，包括如下步骤： (1) 他莫昔芬喂养料的配备:取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到鳖鱼常规饲养 饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为8g/500g饲料，待用； (2) 投喂:在母鳖产蛋前，按常规饲料投喂方法对母本进行投喂他莫昔芬喂养料，每天 三次，早上8:00每100g鳖鱼投喂18g，中午12:00每100g鳖鱼投喂15g喂养料，下午6:00每 100g鳖鱼投喂IOg; (3) 热休克处理:把受精蛋放入温度为28°C、湿度为60%的恒温孵化器中，在一次卵裂前 3min，把温度快速升至42°C，保持5min;然后温度降至28°C ; (4) 雌激素抑制剂溶液的配制:将氯米芬和睾酮一起溶于80%的乙醇中，再加蒸馏水配 制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为230mg/l，睾酮的浓度为 140mg/l； (5) 用步骤(4)所制备的雌激素抑制剂溶液，放入喷雾器中，对经过步骤(3)处理的受精 蛋进行均匀喷雾，用量每100只受精蛋为15ml，保持孵化器的湿度60%、温度28°C，进行孵化； 从而获得1 〇〇%鳖的雄性四倍体纯系。
[0009] 上述两个实施例仅为本发明的优选方案之二，并不能限制本发明的保护范围，任 意与本发明等同或相似的技术手段视为本发明的保护范围。以下附上本发明部分处理方式 及结果统计。
[0010] 附:鳖雄性四倍体育成结果统计
注:上述结果是一次卵裂前3min、热休克保持5min所取得的结果，其中热休克时恒温孵 化器的温度为28°C、湿度为60%。
【主权项】
1.鳖雄性四倍体纯系的高效育成方法，包括如下步骤： (1) 他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到鳖常规饲养饲 料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为8~10g/500g饲料，待用； (2) 投喂：在母鳖产蛋前，按常规饲料投喂方法对母鳖进行投喂他莫昔芬喂养料，每天 三次，早上8: OO每100g母鳖投喂15~18g，中午12点每100g母鳖投喂10~15g，下午6: OO每 100g母鳖投喂5~IOg，直至产蛋； (3) 热休克处理:把受精蛋放入温度为25~32°C、湿度为40~80%的恒温孵化器中，在一 次卵裂前2~3min，把温度快速升至39~42°C，保持3~5min;然后温度降至28~32°C ; (4) 雌激素抑制剂溶液的配制:将氯米芬和睾酮一起溶于80%~90%的乙醇中，再加蒸馏 水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为180~250mg/l，睾 酮的浓度为100~150mg/l; (5) 用步骤(4)所制备的雌激素抑制剂溶液，放入喷雾器中，对经过步骤(3)处理的受精 蛋进行均匀喷雾，用量每100只受精蛋为8~15ml，保持孵化器的温度28~32°C、湿度40~ 80%，进行孵化;从而获得100%鳖的雄性四倍体纯系。
【文档编号】A01K67/027GK105941330SQ201610495560
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年6月30日
【发明人】杨品红, 韩庆, 邹万生
【申请人】湖南文理学院