一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法

文档序号:10618923阅读:580来源:国知局
一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法
【专利摘要】本发明涉及有机合成领域,公开了一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,包括以下步骤:制备培养基、制备悬浮液、培养、连续培养增殖数代。本发明培养可在任何时间进行繁殖,不受季节、环境等外部因素影响,且成本较低,占用空间资源较少;为泥炭藓原丝体的生长提供必要的生长元素和环境。同时,能够快速繁殖泥炭藓原丝体,解决了生长速度慢、受环境影响大的技术问题。本发明选出的pH值与泥炭藓自然生境偏酸土壤吻合。本发明加入的蔗糖提供了碳源,极大提高了泥炭藓原丝体产量。本发明选用6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)作为细胞分裂素,对泥炭藓原丝体的作用大于其他生长素。本发明筛选出激素6-BA的最佳浓度为0.05-0.2μmol/L,大于或小于此浓度反而抑制生长。
【专利说明】
一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法
技术领域
[0001]本发明涉及园艺栽培技术领域,尤其涉及一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法。
【背景技术】
[0002]泥炭富含有机质和腐殖酸,可直接作为栽培介质,也可用作改良土壤的肥料,近年来,园艺产业的高速发展带动了泥炭产业的形成。然而,泥炭的市场需求量不断增多,泥炭湿地被过度开采,面积也不断缩小,我国已经从泥炭出口国逐渐转变为进口国。泥炭湿地的破坏不仅对植被分布、生态多样性造成严重威胁,还会导致自然碳汇功能降低、人类居住环境恶化等一系列后果。为实现泥炭资源的可持续利用,同时不影响农业和园艺产业的发展,找到泥炭的替代品是亟待解决的问题。
[0003]泥炭藓(Sphagnum, sp.)又称水笞,是泥炭藓属植物的统称,也是泥炭形成的主要来源。德国等欧美园艺发达国家已经研究将泥炭藓替代泥炭作为生长基质,并成功应用于杜鹃、欧石楠等植物的栽培。因此,泥炭藓的开发与应用能够促进园艺产业的发展。

【发明内容】

[0004]本发明针对现有中的缺点,公开了一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法。
[0005]为了解决上述技术问题,本发明通过下述技术方案得以解决。
[0006]一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,包括以下步骤,
A.每I升水中加入0.1-0.3g的硝酸铵、0.05-0.15g的氯化钙、0.05-0.15g的磷酸二氢钾、0.05-0.15g的硫酸镁、0.02-0.035g的氯化铁;将pH值调节到5_6,再添加5_10g的蔗糖和0.05-0.2 μ mo I的6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基;高压灭菌处理培养基;
B.粉碎泥炭藓原丝体,过滤,将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液;
C.向步骤A制备的培养基中加入步骤B制备的悬浮液,其中每1ml培养基中加入0.5-1.5ml悬浮液,放入摇床,转速130-150r/min,光照为2800_35001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h;该培养条件解决了泥炭藓原丝体生长速度慢、易受环境影响的技术问题。
[0007]D.培养20天后,再次粉碎泥炭藓原丝体,过滤后分装至步骤A制备的培养基中,其中每1ml培养基中加入0.5-1.5ml悬浮液,放入摇床,转速130_150r/min,光照为2800-35001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h ;培养20天后,原瓶中培养基养分耗尽,将增殖的原丝体再次粉碎。该培养条件解决了泥炭藓原丝体生长速度慢的技术问题,达到快速增殖的目的。
[0008]E.重复步骤D,连续培养增殖数代。
[0009]本发明采用的培养基为Beneck培养基。培养基为泥炭藓原丝体的生长提供必要的生长元素和环境,所以培养基的筛选在整个快速繁殖过程中占有重要地位。研究过程中,进行了基本培养基的筛选,试验培养基分别为:Beneck、Knop、BCD、MS、l/2MS、水。通过不同培养基的培养试验发现,低盐度的Beneck和Knop培养基较适合泥炭藓的生长;而同样是笞藓常用培养基的BCD培养基则不适合泥炭藓生长;高盐度的不同浓度MS更不利于泥炭藓的生长,甚至随着培养时间的延长,原丝体会逐渐变黄。
[0010]研究过程中,进行了 pH值的筛选,试验pH梯度分别为4、5、6、7、8。研究结果显示,泥炭藓原丝体也在pH较低的培养基上增殖较快,pH5.0-6.0是其最适宜的生长酸碱度,随着PH的升高,泥炭藓原丝体生长量减少,甚至停止生长。这与泥炭藓自然生境偏酸土壤吻入口 ο
[0011]加入的蔗糖提供了碳源,极大提高了泥炭藓原丝体产量。研究过程中,进行了碳源及其浓度的筛选,试验碳源分别为蔗糖和葡萄糖,浓度分别为5 g/L、10 g/L、20 g/L、40g/Lo研究结果显示,碳源的添加极大提高了泥炭藓原丝体产量:蔗糖和葡萄糖均对其有显著效果,但对蔗糖的利用效率较高,低浓度的蔗糖(5-1Og/L )更有利于泥炭藓的增殖,增殖效率比高浓度处理多2.7-4.3倍。
[0012]本发明选用6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)作为细胞分裂素,对泥炭藓原丝体的作用大于其他生长素,比如6-BA对泥炭藓原丝体的作用大于生长素吲哚丁酸(IBA),IBA对原丝体增殖无显著作用。本发明筛选出激素6-BA的最佳浓度为0.05-0.2 ymol/L,大于或小于此浓度反而抑制生长。研究过程中,进行了激素及其浓度的筛选,试验激素分别为IBA和6-BA,浓度分别为0.1 μ mol/L, I μ mol/L, 10 μ mol/L0研究结果显示,细胞分裂素6-BA对泥炭藓原丝体的作用大于生长素IBA。IBA对泥炭藓原丝体增殖作用较小,高浓度(10 μ mol/L)还会抑制其生长。低浓度(0.05-0.2 μ mol/L) 6-BA显著提高泥炭藓产量,随着浓度升高促进作用减弱。
[0013]作为优选,步骤A中,每I升水中加入0.2g的硝酸铵、0.1g的氯化钙、0.1g的磷酸二氢钾、0.1g的硫酸镁、0.028g的氯化铁;将pH值调节到5-6,再添加1g的蔗糖和0.1ymol的6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基。本发明筛选出的最佳培养基的配方??每I升水中加入0.2g的硝酸铵、0.1g的氯化钙、0.1g的磷酸二氢钾、0.1g的硫酸镁、0.028g的氯化铁。培养基为泥炭藓原丝体的生长提供必要的生长元素和环境,该配比的培养基能够快速繁殖泥炭藓原丝体。
[0014]作为优选,步骤A中,硫酸镁为MgSO4.7H20o
[0015]作为优选,步骤A中,氯化铁为FeCl3.6 H2O0
[0016]作为优选,步骤A中,将培养基装入500ml三角瓶中,每瓶装约200ml,高压灭菌待用。
[0017]作为优选,步骤B中,泥炭藓原丝体在超净工作台粉碎lmin,粉碎速率为18000r/min, 200目细胞筛过滤;将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液。
[0018]作为优选,步骤C中,每1ml培养基中加入Iml悬浮液。
[0019]作为优选,步骤C中,放入摇床,转速140r/min,光照为30001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 ho
[0020]作为优选,步骤D中,放入摇床,转速140r/min,光照为30001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 ho
[0021]作为优选,步骤D中,每1ml培养基中加入Iml悬浮液。
[0022]与现有技术相比,本发明的有益效果为:
本发明培养可在任何时间进行繁殖,不受季节、环境等外部因素影响,且成本较低,占用空间资源较少;为泥炭藓原丝体的生长提供必要的生长元素和环境。同时,能够快速繁殖泥炭藓原丝体,解决了生长速度慢、受环境影响大的技术问题。
[0023]本发明选出的最佳pH值为5-6,与泥炭藓自然生境偏酸土壤吻合。本发明加入的蔗糖提供了碳源,极大提高了泥炭藓原丝体产量。本发明选出的最佳碳源为蔗糖,利用效率最高,且泥炭藓原丝体的产量达到最高。本发明选用6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)作为细胞分裂素,对泥炭藓原丝体的作用大于其他生长素,比如6-BA对泥炭藓原丝体的作用大于生长素吲哚丁酸(IBA),IBA对原丝体增殖无显著作用。本发明筛选出激素6-BA的最佳浓度为
0.05-0.2 μ mol/L,大于或小于此浓度反而抑制生长。
【具体实施方式】
[0024]实施例1
一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,包括以下步骤,
A.每I升水中加入0.2g的硝酸铵、0.1g的氯化钙、0.1g的磷酸二氢钾、0.1g的硫酸镁、0.028g的氯化铁;将pH值调节到5,再添加1g的蔗糖和0.1 μ mol的6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基;高压灭菌处理培养基;
B.粉碎泥炭藓原丝体,过滤,将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液;
C.向步骤A制备的培养基中加入步骤B制备的悬浮液,其中每1ml培养基中加入Iml悬浮液,放入摇床,转速140r/min,光照为30001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h ;
D.培养20天后,再次粉碎泥炭藓原丝体,过滤后分装至步骤A制备的培养基中,其中每1ml培养基中加入Iml悬浮液,放入摇床,转速140r/min,光照为30001ux,光周期为昼/ 夜 10 h/ 14 h ;
E.重复步骤D,连续培养增殖数代。
[0025]实施例2
一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,包括以下步骤,
A.每I升水中加入0.1g的硝酸铵、0.05g的氯化钙、0.05g的磷酸二氢钾、0.05g的硫酸镁、0.02g的氯化铁;将pH值调节到5,再添加5g的蔗糖和0.05 μ mol的6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基;高压灭菌处理培养基;
B.泥炭藓原丝体在超净工作台粉碎lmin,粉碎速率为18000r/min,200目细胞筛过滤;将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液;
C.向步骤A制备的培养基中加入步骤B制备的悬浮液,其中每1ml培养基中加入
0.5ml悬浮液,放入摇床,转速130r/min,光照为28001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h ;
D.培养20天后,再次粉碎泥炭藓原丝体,过滤后分装至步骤A制备的培养基中,其中每1ml培养基中加入0.5ml悬浮液,放入摇床,转速130r/min,光照为28001ux,光周期为昼 / 夜 10 h/ 14 h ;
E.重复步骤D,连续培养增殖数代。
[0026]实施例3
一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,包括以下步骤,
A.每I升水中加入0.3g的硝酸铵、0.15g的氯化钙、0.15g的磷酸二氢钾、0.15g的硫酸镁、0.035g的氯化铁;将pH值调节到6,再添加1g的蔗糖和0.2 μ mol的6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基;将培养基装入500ml三角瓶中,每瓶装约200ml,高压灭菌待用。
[0027]B.粉碎泥炭藓原丝体,过滤,将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液;
C.向步骤A制备的培养基中加入步骤B制备的悬浮液,其中每1ml培养基中加入
1.5ml悬浮液,放入摇床,转速150r/min,光照为35001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h ;
D.培养20天后,再次粉碎泥炭藓原丝体,过滤后分装至步骤A制备的培养基中,其中每1ml培养基中加入1.5ml悬浮液,放入摇床,转速150r/min,光照为35001ux,光周期为昼 / 夜 10 h/ 14 h ;
E.重复步骤D,连续培养增殖数代。
[0028]实施例4
一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,包括以下步骤,
A.每I升水中加入0.15g的硝酸铵、0.08g的氯化钙、0.08g的磷酸二氢钾、0.08g的MgSO4.7Η20、0.025g 的 FeCl3.6 H2O ;将 pH 值调节到 5.5,再添加 6g 的蔗糖和 0.08 μ mol的6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基;高压灭菌处理培养基;
B.粉碎泥炭藓原丝体,过滤,将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液;
C.向步骤A制备的培养基中加入步骤B制备的悬浮液,其中每1ml培养基中加入
0.8ml悬浮液,放入摇床,转速135r/min,光照为29001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h ;
D.培养20天后,再次粉碎泥炭藓原丝体,过滤后分装至步骤A制备的培养基中,其中每1ml培养基中加入0.8ml悬浮液,放入摇床,转速135r/min,光照为29001ux,光周期为昼 / 夜 10 h/ 14 h ;
E.重复步骤D,连续培养增殖数代。
[0029]实施例5
一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,包括以下步骤,
A.每I升水中加入0.28g的硝酸铵、0.12g的氯化钙、0.12g的磷酸二氢钾、0.14g的硫酸镁、0.032g的氯化铁;将pH值调节到6,再添加9g的蔗糖和0.18 μ mol的6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基;高压灭菌处理培养基;
B.粉碎泥炭藓原丝体,过滤,将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液;
C.向步骤A制备的培养基中加入步骤B制备的悬浮液,其中每1ml培养基中加入
1.2ml悬浮液,放入摇床,转速140r/min,光照为34001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h ;
D.培养20天后,再次粉碎泥炭藓原丝体,过滤后分装至步骤A制备的培养基中,其中每1ml培养基中加入1.2ml悬浮液,放入摇床,转速140r/min,光照为34001ux,光周期为昼 / 夜 10 h/ 14 h ;
E.重复步骤D,连续培养增殖数代。
[0030]实施例6
一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,包括以下步骤,
A.每I升水中加入0.2g的硝酸铵、0.1g的氯化钙、0.1g的磷酸二氢钾、0.1g的硫酸镁、0.028g的氯化铁;将pH值调节到5,再添加1g的蔗糖和0.1 μ mol的6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基;高压灭菌处理培养基;
B.泥炭藓原丝体在超净工作台粉碎lmin,粉碎速率为18000r/min,200目细胞筛过滤;将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液; C.向步骤A制备的培养基中加入步骤B制备的悬浮液,其中每1ml培养基中加入Iml悬浮液,放入摇床,转速140r/min,光照为30001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h ;
D.培养20天后,再次粉碎泥炭藓原丝体,过滤后分装至步骤A制备的培养基中,其中每1ml培养基中加入Iml悬浮液,放入摇床,转速140r/min,光照为30001ux,光周期为昼/ 夜 10 h/ 14 h ;
E.重复步骤D,连续培养增殖数代。
[0031]实施例7
一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,包括以下步骤,
A.每I升水中加入0.2g的硝酸铵、0.1g的氯化钙、0.1g的磷酸二氢钾、0.1g的MgSO4.7Η20、0.028g的FeCl3.6 H2O ;将pH值调节到5,再添加1g的蔗糖和0.1 μ mo I的
6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基;高压灭菌处理培养基;
B.粉碎泥炭藓原丝体,过滤,将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液;
C.向步骤A制备的培养基中加入步骤B制备的悬浮液,其中每1ml培养基中加入Iml悬浮液,放入摇床,转速140r/min,光照为30001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h ;
D.培养20天后,再次粉碎泥炭藓原丝体,过滤后分装至步骤A制备的培养基中,其中每1ml培养基中加入Iml悬浮液,放入摇床,转速140r/min,光照为30001ux,光周期为昼/ 夜 10 h/ 14 h ;
E.重复步骤D,连续培养增殖数代。
[0032]总之,以上所述仅为本发明的较佳实施例,凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰,皆应属本发明专利的涵盖范围。
【主权项】
1.一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,其特征在于:包括以下步骤, A.每I升水中加入0.1-0.3g的硝酸铵、0.05-0.15g的氯化钙、0.05-0.15g的磷酸二氢钾、0.05-0.15g的硫酸镁、0.02-0.035g的氯化铁;将pH值调节到5_6,再添加5_10g的蔗糖和0.05-0.2 μ mo I的6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基;高压灭菌处理培养基; B.粉碎泥炭藓原丝体,过滤,将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液; C.向步骤A制备的培养基中加入步骤B制备的悬浮液,其中每1ml培养基中加入0.5-1.5ml悬浮液,放入摇床,转速130-150r/min,光照为2800_35001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h ; D.培养20天后,再次粉碎泥炭藓原丝体,过滤后分装至步骤A制备的培养基中,其中每1ml培养基中加入0.5-1.5ml悬浮液,放入摇床,转速130_150r/min,光照为2800-35001ux,光周期为昼 / 夜 10 h/ 14 h ; E.重复步骤D,连续培养增殖数代。2.根据权利要求1所述的泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,其特征在于:步骤A中,每I升水中加入0.2g的硝酸铵、0.1g的氯化钙、0.1g的磷酸二氢钾、0.1g的硫酸镁、0.028g的氯化铁;将PH值调节到5-6,再添加1g的蔗糖和0.1ymol的6-苄氨基腺嘌呤,得到培养基。3.根据权利要求1所述的泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,其特征在于:步骤A中,硫酸镁为 MgSO4.7H20o4.根据权利要求1所述的泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,其特征在于:步骤A中,氯化铁为 FeCl3.6 H2O05.根据权利要求1所述的泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,其特征在于:步骤A中,将培养基装入500ml三角瓶中,每瓶装约200ml,高压灭菌待用。6.根据权利要求1所述的泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,其特征在于:步骤B中,泥炭藓原丝体在超净工作台粉碎lmin,粉碎速率为18000r/min,200目细胞筛过滤;将粉碎好的泥炭藓原丝体移入无菌水中,制成悬浮液。7.根据权利要求1所述的泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,其特征在于:步骤C中,每1ml培养基中加入Iml悬浮液。8.根据权利要求1所述的泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,其特征在于:步骤C中,放入摇床,转速140r/min,光照为30001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h。9.根据权利要求1所述的泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,其特征在于:步骤D中,放入摇床,转速140r/min,光照为30001ux,光周期为昼/夜10 h/ 14 h。10.根据权利要求1所述的泥炭藓原丝体快速繁殖的方法,其特征在于:步骤D中,每1ml培养基中加入Iml悬浮液。
【文档编号】A01G31/00GK105981636SQ201510070439
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月11日
【发明人】尹丽娟, 王铖, 沈烈英
【申请人】上海市园林科学研究所
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