一种毛梾组培苗的继代培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种毛梾组培苗的继代培养方法，它包括以下步骤：将达到继代要求的毛梾无菌组培苗，在无菌条件下将＜1cm的芽丛接种于增殖培养基中，将组培苗中≥1cm的壮芽接种于伸长培养基中，同时满足增殖扩繁和高枝壮苗的增殖要求。本发明利用不同培养基建立一套可操作性强、增殖伸长生长结合的毛梾组培苗的继代培养技术，平均增殖系数在10以上，平均株高3.5cm以上，且组培苗长势良好，经过多代培养增殖系数稳定，可应用于毛梾组培苗大规模生产中，具有良好的经济效益和社会效益。
【专利说明】
一种毛楝组培苗的继代培养方法
技术领域
[0001]本发明涉及植物组织培养领域，具体为一种毛株组培苗的继代培养方法。
【背景技术】
[0002]毛株(Cornus walteri Wanger.)属山茱萸科株木属，又名车梁木。落叶乔木，高达8-15m。东北起辽宁，南至湖南，西南到云南、贵州，东自江苏、浙江，西至甘肃、青海均有分布，其中山东、河南、陕西、山西分布较为集中。毛株根系发达，适应力强，对土壤要求不严，在我国大部分地区的荒山荒坡上都适宜生长。毛株不仅是优良的用材树种，同时也是优良的城市绿化和水土保持树种，更是发展林业生物柴油的良好树种。毛株果肉和种仁均含油月旨，果实含油率31.8%-41.3%，其油既可食用，又可作为工业原料，特别是可制成生物柴油原料油。
[0003]由于对毛株的果实油脂价值的开发和利用，目前发展毛株树种还需要大量优质无性系种苗，而市场上能提供造林的种苗还远远不够，并且品质参差不一。过去毛株繁殖方法以种子育苗为主，但种子繁殖的后代容易失去原有的优良性状，且实生苗造林一般要6-8年开始结果，产量高低不一;嫁接苗造林一般2-3年开始结果，但成本较高且缺少优株接穗;扦插繁殖目前比较困难，生根率低，因此均无法满足生产的需求。
[0004]现代育苗技术中，植物组培快繁技术能够在短时间内快速大量繁殖，并获得基因型一致的优良种苗，适用于毛株树种苗木的工厂化生产。但目前关于毛株组织培养方面的研究鲜有报道，仅限于初代培养，且仍存在许多问题。因此特别需要一种适合毛株组培苗继代培养的方法，以解决上述现有存在的技术问题。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于解决毛株组培苗继代培养增殖系数低、伸长生长缓慢无高枝等问题，优化培养基配方，提供一种增殖系数高和伸长生长的毛株组培苗的继代培养方法。
[0006]本发明的一种毛株组培苗的继代培养方法，通过下述技术方案实现，包括以下步骤:
[0007](I)增殖培养:将达到继代要求的毛株无菌组培苗，在超净工作台上将<lcm的芽丛切分成小丛接种于增殖培养基中，培养条件为22-28°C，光照强度1800-25001x，每日光照12-16h，经过1-2个继代周期后形成丛生芽；
[0008](2)伸长培养:将达到继代要求的毛株无菌组培苗，在超净工作台上将组培苗中多Icm的壮芽枝条切分成多0.5cm且至少含一对芽的茎段，接种于伸长培养基中，培养条件为22-28°C，光照强度1800-25001x，每日光照12-16h，2-3个继代周期后可得到高枝壮苗。
[0009]以上所述的增殖培养基配方为:DKW+6-BA 0.1-1.0mg/L+IBA0.1-0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉 6.5g/L，pH调至 5.8-6.5。
[0010]以上所述的伸长培养基配方为:DKW+6-BA0.2-1.0mg/L+NAA0.05-0.5mg/L+GA30.5-1.0mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂粉 6.5g/L，pH 调至 5.8-6.5。
[0011]以上所述的毛株继代组培苗的继代周期为20d。
[0012]以上所述的毛株继代组培苗的平均增殖系数为10以上，进行伸长培养的毛株组培苗平均每株含I.36个高枝(株高>2.5cm的枝条)以上，平均株高为3.5cm以上。
[0013]本发明的有益效果为:本发明通过调节植物生长调节剂类型和浓度，研究其对毛株组培苗继代增殖的影响，筛选出对应培养基配方，为毛株组培苗不同目的继代培养提供了均衡合理的营养需求，增殖培养基可以实现芽的分化扩繁，提高了增殖系数;伸长培养基可以有效的促进节间伸长，能够快速形成高枝;对毛株组培苗< Icm的芽丛和多Icm的壮芽枝条分别使用对应的培养基，满足增殖扩繁和高枝壮苗的增殖要求;建立了一套可操作性强、增殖伸长生长结合毛株组培苗的继代培养技术，增殖系数达到10以上，平均株高3.5cm以上，且组培苗长势良好，经过多代培养增殖系数稳定，可应用于毛株组培苗大规模生产中，具有良好的经济效益和社会效益。
【具体实施方式】
[0014]以下实施例是对本发明进一步的详述，不是对本发明的限制。
[0015]实施例1:
[0016]本发明的一种毛株组培苗的继代培养方法，包括以下步骤:
[0017](I)增殖培养:将达到继代要求的毛株无菌组培苗，在超净工作台上将<lcm的芽丛切分成小丛接种于DKW+6-BA 0.25mg/L+IBA0.lmg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L的增殖培养基中，培养条件为25°C，光照强度18001x，每日光照14h，经过I个继代增殖周期后形成丛生芽，平均增殖系数10.27;
[0018](2)伸长培养:将达到继代要求的毛株无菌组培苗，在超净工作台上将组培苗中多1(3111的壮芽枝条切分成彡0.5(3111且至少含一对芽的茎段，接种于01(￥+6-840.2511^/1^+NAA0.3mg/L+GA30.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L的伸长培养基中，培养条件为25°C，光照强度25001x，每日光照15h，2个继代增殖周期后可得到高枝壮苗，平均每株含1.36个高枝(株高>2.5cm的枝条)，平均株高为3.51cm，增殖系数平均为10.18。
[0019]实施例2:
[0020]本发明的一种毛株组培苗的继代培养方法，包括以下步骤:
[0021](I)增殖培养:将达到继代要求的毛株无菌组培苗，在超净工作台上将<lcm的芽丛切分成小丛接种于DKW+6-BAlmg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L的增殖培养基中，培养条件为25°C，光照强度20001x，每日光照14h，经过2个继代增殖周期后形成丛生芽，平均增殖系数12.33;
[0022](2)伸长培养:将达到继代要求的毛株无菌组培苗，在超净工作台上将组培苗中多1(3111的壮芽枝条切分成彡0.5(3111且至少含一对芽的茎段，接种于01(￥+6-840.511^/1^NAA0.4mg/L+GA30.8mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L的伸长培养基中，培养条件为25°C，光照强度25001x，每日光照15h，2个继代增殖周期后可得到高枝壮苗，平均每株含1.77个高枝(株高>2.5cm的枝条)，平均株高为3.83cm，增殖系数平均为12.35。
[0023]实施例3:
[0024]本发明的一种毛株组培苗的继代培养方法，包括以下步骤:
[0025](I)增殖培养:将达到继代要求的毛株无菌组培苗，在超净工作台上将<lcm的芽丛切分成小丛或单芽接种于DKW+6-BA 0.5mg/L+IBA0.8mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L的增殖培养基中，培养条件为25°C，光照强度18001x，每日光照14h，经过2个继代增殖周期后形成丛生芽，平均增殖系数14.18；
[0026](2)伸长培养:将达到继代要求的毛株无菌组培苗，在超净工作台上将组培苗中多Icm的壮芽枝条切分成彡0.5cm且至少含一对芽的茎段，接种于DKW+6-BAlmg/L+NAA0.5mg/L+6知111^/1+蔗糖3(^/1+琼脂粉6.5g/L的伸长培养基中，培养条件为25°C，光照强度25001x，每日光照15h，3个继代增殖周期后可得到高枝壮苗，平均每株含2.04个高枝(株高>2.5cm的枝条)，平均株高为4.07cm，增殖系数平均为13.38。
[0027]以上实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下对本发明的技术方案进行各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
【主权项】
1.一种毛株组培苗的继代培养方法，其特征在于包括以下步骤: (1)增殖培养:将达到继代要求的毛株无菌组培苗，在超净工作台上将<lcm的芽丛切分成小丛接种于增殖培养基中，培养条件为22?28°C，光照强度1800?25001x，每日光照12?16h，经过1-2个继代周期后形成丛生芽； (2)伸长培养:将达到继代要求的毛株无菌组培苗，在超净工作台上将组培苗中多Icm的壮芽枝条切分成多0.5cm且至少含一对芽的茎段，接种于伸长培养基中，培养条件为22?28 °C，光照强度1800?25001X，每日光照12?16h，2-3个继代周期后可得到高枝壮苗。2.根据权利要求1所述的毛株组培苗的继代培养方法，其特征在于:步骤(I)(2)中所述的继代周期为20d。3.根据权利要求1所述的毛株组培苗的继代培养方法，其特征在于:步骤(I)中所述的增殖培养基配方为:DKW+6-BA 0.I?I.0mg/L+IBA0.I?0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L，pH 调至 5.8 ?6.5。4.根据权利要求1所述的毛株组培苗的继代培养方法，其特征在于:步骤(I)中所述增殖培养基得到的毛株组培苗平均增殖系数为10以上。5.根据权利要求1所述的毛株组培苗的继代培养方法，其特征在于:步骤(2)中所述的伸长培养基配方为:DKW+6-BA 0.2?I.0mg/L+NAA0.05?0.5mg/L+GA30.5?I.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉 6.5g/L，pH 调至 5.8 ?6.5。6.根据权利要求1所述的毛株组培苗的继代培养方法，其特征在于:步骤(2)中所述伸长培养基得到的毛株组培苗平均增殖系数为10以上，平均每株含1.36个高枝(株高>2.5cm的枝条)以上，平均株高为3.5cm以上。
【文档编号】A01H4/00GK105981651SQ201510847105
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年11月30日
【发明人】苏淑钗, 暴甜
【申请人】北京林业大学