一种加拿大紫荆组织培养的方法

文档序号:10628937阅读:404来源:国知局
一种加拿大紫荆组织培养的方法
【专利摘要】本发明涉及一种加拿大紫荆组织培养的方法,所述的方法包括:1)外植体的选取,2)外植体消毒,3)初始诱导培养,4)增殖培养,5)生根培养,6)炼苗和移栽。采用本方法繁育加拿大紫荆,可以降低生产成本,提高繁殖速度和成活率。
【专利说明】
一种加拿大紫荆组织培养的方法
技术领域
[0001]本发明涉及植物组织培养技术领域,尤其是一种加拿大紫荆组织培养的方法技术领域。【背景技术】
[0002]加拿大紫荆(Cercis canadensis)为豆科紫荆属小乔木。原产美国,分部于美国东部、中西部和加拿大安大略省。木材密度大,坚硬,条纹细密,树高7-llm,冠幅7.5-10.5米, 主树干短,有几个主要分枝;花期长,4-5月开花,先花后叶,花有玫瑰粉红色,淡红紫色,少有白色;叶片蜡质;荚果7-8月成熟。长5cm,中间宽1.4cm,两端渐尖,荚内有4-5粒种子。加拿大紫荆耐寒性强。喜充足的阳光,略耐阴,冬春阳光充足时开花良好,夏季高温时则需适当蔽荫。对土壤要求不严,酸性土、碱性土或稍黏重的土壤都能生长。耐一定程度的干旱和水湿,但以湿润而排水良好的土壤为好。
[0003]目前,加拿大紫荆多采用种子繁育来进行生产栽培,这繁育技术提高品种的纯度, 保持了品种特性,但繁殖速度较慢,制约了加拿大紫荆产业的发展。而组织培养育苗技术既可以保持种的纯度和特性,也可以降低生产成本,提高繁殖速度和成活率。
[0004]现有技术中,尚无加拿大紫荆的组织培养方法的报道。
【发明内容】

[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种加拿大紫荆组织培养的方法,可实现加拿大紫荆快速大量繁殖。
[0006]为了解决上述技术问题,本发明提出下列技术方案:
[0007]—种加拿大紫荆组织培养的方法,其特征在于所述的方法包括以下步骤:
[0008]1)外植体的选取:取当年生直径2_5mm的加拿大紫荆幼嫩茎尖或至少带一个单芽的茎段为外植体,剪去叶片后将茎尖或至少带一个单芽的茎段剪成2-3cm长以备用;
[0009]2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20KHZ超声波清洗机中保持温度30-35°C处理30-45min,然后以自来水冲洗10-20min;随后在超净工作台上用75%的酒精消毒 25-45秒,0.1 %升汞溶液中处理7-12min,然后以无菌水冲洗4-5遍,置于无菌培养皿备用;
[0010]3)初始诱导培养:将灭菌后的外植体各剪去2-3mm,外植体基部向下插入初始诱导培养基中培养,培养条件为光强1500-2000LX、光周期10-14h/d,温度25°C ± 2°C ;培养6-8d 后将其中未污染的外植体转接到新的初始诱导培养基中,并继续培养12-18d至新芽长出; 所述的初始诱导培养基组成为:MS+6-BA0 ? 8-1 ? 2mg/L+NAA0 ? 1-0 ? 3mg/L;[〇〇11]4)增殖培养:将步骤3)培养出的新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中,培养条件为光强1800-2500LX、光周期12h/d,温度25°C±2°C;培养20d后,至新芽长出并伸长至Ijlcm以上;所述的新芽伸长和增殖培养基组成为MS+6-BA1.2-2.2mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+ IBAO?3-0?8mg/L+KT0?5-1?2mg/L;
[0012]5)生根培养:将步骤4)的培养出的新芽剪下,转接到生根培养基中,培养条件为光强1500-2000LX、光周期12h/d,温度25°C ± 2°C ;培养15d后,生出新根;生根培养基的配方为 1/2MS+NAA0?1-0?3mg/L+IBA0?2-0?5mg/L+PVP0?8-2mg/L;
[0013]6)炼苗和移栽:将有生根的加拿大紫荆幼苗的培养基瓶盖打开,室温下炼苗3-5d 后,取出幼苗,洗去根部培养基,移栽至装有河沙基质的苗床上,保持温度20-25°C,湿度 70%-80%,适当遮荫即可;
[0014]所述的MS培养基配方为:大量元素:硝酸钾KN〇3 1900mg/L,硝酸铵NH4N031650mg/ L,磷酸二氢钾KH2PO3 170mg/L,硫酸镁MgS〇4 ? 7H20 370mg/L;钙盐:氯化钙CaCl2 ? 2H2〇4 40mg/L;微量元素:碘化钾K1 ? 83mg/L,硼酸H3B0 36 ? 2mg/L,硫酸猛MnS〇4 ? 4H2〇2 2 ? 3mg/L, 硫酸锌ZnS04 ? 7H20 8.6mg/L,钼酸钠Na2Mo〇4 ? 2H200.25mg/L,硫酸铜CuS〇4 ? 5H20 0.025mg/L,氯化钴CoC12 ? 6H20 0.025mg/L;铁盐:乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA 37.25mg/L, 硫酸亚铁FeS〇4 ? 7H2〇27 ? 85mg/L;有机酸:肌醇lOOmg/L,甘氨酸2mg/L,盐酸硫胺素0 ? 5mg/L, 盐酸吡哆醇0 ? 5mg/L,烟酸0 ? 5mg/L;蔗糖30g/L,琼脂粉7g/L,pH为5 ? 8;[0〇15] 所述的1/2MS培养基配方为:大量元素:硝酸钾KN03 950mg/L,硝酸铵NH4N03825mg/ L,磷酸二氢钾KH2P03 85mg/L,硫酸镁MgS〇4.7H20 185mg/L;余同上述MS培养基;
[0016]所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤;
[0017]所述的NAA为a-萘乙酸;[〇〇18] 所述的IBA为吲哚-3-丁酸;[〇〇19]所述的KT为激动素;[〇〇2〇]所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。[〇〇21] 优选的,所述步骤3)中初始诱导培养基组成为:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L。
[0022]优选的,所述步骤4)中新芽伸长和增殖培养用培养基为:MS + 6-BA2mg/L + NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/L+KTl.0mg/L〇
[0023]优选的,所述步骤5)中生根培养基为:1/2MS+NAA0 ? 2mg/L+IBA0 ? 4mg/L+PVPlmg/L。
[0024]采用本发明繁殖加拿大紫荆,可实现加拿大紫荆组培苗的大量组织培养,为加拿大紫荆生产栽培和品种改良奠定基础。[〇〇25]为了更好的阐述技术方案,下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步的说明,但本发明所要求的保护范围不限于下列实施例。【具体实施方式】
[0026]实施例1
[0027]1)外植体的选取:取当年生直径2_5mm的加拿大紫荆幼嫩茎尖或至少带一个单芽的茎段为外植体,剪去叶片后将茎尖或至少带一个单芽的茎段茎段剪成2-3cm长以备用; [〇〇28]2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗中保持温度30 °C处理30min,然后以自来水冲洗10min;随后在超净工作台上以75%的酒精消毒25秒,0.1 % 升汞溶液中处理7min,然后以无菌水冲洗4遍,置于无菌培养皿备用;
[0029]3)初始诱导培养:将灭菌后外植体各剪去2-3_,外植体基部向下插入初始诱导培养基中培养,培养条件为光强1500-2000LX、光周期10-14h/d,温度25°C ± 2°C ;培养8d后将其中未污染的外植体转接到新的初始诱导培养基中,并继续培养18d至新芽长出;所述的初始诱导培养基组成为:MS+6-BA0 ? 8mg/L+NAA0 ? lmg/L;
[0030]4)增殖培养:将步骤3)新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中,培养条件为光强1800-2500LX、光周期10h/d,温度25°C±2°C;培养20d后,至新芽长出并伸长到lcm以上;所述的培养基组成 MS+6-BA1 ? 2mg/L+NAA0 ? lmg/L+IBAO ? 3mg/L+KT0 ? 5mg/L;[0031 ] 5)生根培养:将步骤4)的新芽剪下,转接到生根培养基中,培养条件为光强1500-2000Lx、光周期12h/d,温度25°C±2°C;培养15d后,生出新根;生根培养基的配方为1/2MS+ NAA0.lmg/L+IBA0.2mg/L+PVP0.8mg/L;
[0032]6)炼苗和移栽:将有生根的加拿大紫荆幼苗的培养基瓶盖打开,室温下炼苗3d后,取出幼苗,洗去根部培养基,移栽装有河沙基质的苗床上,保持温度20_25°C,湿度70%-80%,适当遮荫即可。[〇〇33]经试验,采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为88.6%。[〇〇34] 实施例2
[0035]1)外植体的选取:1)外植体的选取:取当年生直径2-5_的加拿大紫荆幼嫩茎尖或至少带一个单芽的茎段为外植体,剪去叶片后将茎尖或至少带一个单芽的茎段剪成2-3cm 长以备用;[〇〇36] 2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度35 °(:处理451^11,然后以自来水冲洗2〇111111;随后在超净工作台上用75%的酒精消毒45秒, 0.1 %升汞溶液中处理12min,,然后以无菌水冲洗5遍,置于无菌培养皿备用;
[0037] 3)初始诱导培养:将灭菌后的外植体各剪去2_3mm,外植体基部向下插入初始诱导培养基中培养,培养条件为光强1500-2000LX、光周期10-14h/d,温度25°C ± 2°C ;培养6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中,并继续培养12d至新芽长出;所述的初始诱导培养基组成为:MS+6-BAl ? 2mg/L+NAA0 ? 3mg/L;
[0038]4)增殖培养:将步骤3)培养出的新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中,培养条件为光强1800-2500LX、光周期12h/d,温度25°C±2°C;培养20d后,至新芽长出并伸长至ljlcm以上;所述的新芽伸长和增殖培养基组成为MS+6-BA2 ? 2mg/L+NAA0 ? 3mg/L+IBAl ? 2mg/ L+KT1.2mg/L;
[0039] 5)生根培养:将步骤4)的培养出的新芽剪下,转接到生根培养基中,培养条件为光强1500-2000LX、光周期12h/d,温度25°C ± 2°C ;培养15d后,生出新根;生根培养基的配方为 1/2MS+NAA0.3mg/L+IBA0.5mg/L+PVP2mg/L;
[0040]6)炼苗和移栽:将有生根的加拿大紫荆幼苗的培养基瓶盖打开,室温下炼苗5d后, 取出幼苗,洗去根部培养基,移栽至装有河沙基质的苗床上,保持温度20-25 °C,湿度70 % -80%,适当遮荫即可;[〇〇41 ]经试验,采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为90.7 %。[〇〇42] 实施例3
[0043]1)外植体的选取:取当年生直径2_5mm的加拿大紫荆幼嫩茎尖或至少带一个单芽的茎段为外植体,剪去叶片后将茎尖或至少带一个单芽的茎段剪成2-3cm长以备用;[〇〇44] 2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度35 °(:处理351^11,然后以自来水冲洗15111111;随后在超净工作台上用75%的酒精消毒35秒, 0.1 %升萊溶液中处理lOmin,然后以无菌水冲洗5遍,置于无菌培养皿备用;
[0045] 3)初始诱导培养:将灭菌后的外植体各剪去2_3mm,外植体基部向下插入初始诱导培养基中培养,培养条件为光强1500-2000Lx、光周期10-14h/d,温度25°C ± 2°C ;培养7d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中,并继续培养15d至新芽长出;所述的初始诱导培养基组成为:MS+6-BAl ? Omg/L+NAAO ? 2mg/L;
[0046]4)增殖培养:将步骤3)培养出的新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中,培养条件为光强1800-2500LX、光周期12h/d,温度25°C±2°C;培养20d后,至新芽长出并伸长至Ijlcm以上;所述的新芽伸长和增殖培养基组成为MS+6-BA2mg/L+NAA0 ? 2mg/L+IBA0 ? 5mg/L+ KT1.0mg/L;
[0047]5)生根培养:将步骤4)的培养出的新芽剪下,转接到生根培养基中,培养条件为光强1500-2000LX、光周期12h/d,温度25°C ± 2°C ;培养15d后,生出新根;生根培养基的配方为 1/2MS+NAA0.2mg/L+IBA0.4mg/L+PVPlmg/L;
[0048]6)炼苗和移栽:将有生根的加拿大紫荆幼苗的培养基瓶盖打开,室温下炼苗5d后, 取出幼苗,洗去根部培养基,移栽至装有河沙基质的苗床上,保持温度20-25 °C,湿度70 % -80%,适当遮荫即可;
[0049]经试验,采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为94.5%。
【主权项】
1.一种加拿大紫荆组织培养的方法,其特征在于所述的方法包括以下步骤:1)外植体的选取:取当年生直径2-5mm的加拿大紫荆幼嫩茎尖或至少带一个单芽的茎 段为外植体,剪去叶片后将茎尖或至少带一个单芽的茎段剪成2-3cm长以备用;2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度30-35 °C 处理30-45min,然后以自来水冲洗10-20min;随后在超净工作台上用75%的酒精消毒25-45 秒,0.1 %升汞溶液中处理7-12min,然后以无菌水冲洗4-5遍,置于无菌培养皿备用;3)初始诱导培养:将灭菌后的外植体各剪去2-3mm,外植体基部向下插入初始诱导培养 基中培养,培养条件为光强1500-2000LX、光周期10-14h/d,温度25°C ± 2°C ;培养6-8d后将 其中未污染的外植体转接到新的初始诱导培养基中,并继续培养12-18d至新芽长出;所述 的初始诱导培养基组成为:MS+6-BA0 ? 8-1 ? 2mg/L+NAA0 ? 1-0 ? 3mg/L;4)增殖培养:将步骤3)培养出的新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中,培养条 件为光强1800-2500LX、光周期12h/d,温度25°C±2°C;培养20d后,至新芽长出并伸长到lcm 以上;所述的新芽伸长和增殖培养基组成为MS+6-BA1.2-2.2mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+ IBAO?3-0?8mg/L+KT0?5-1?2mg/L;5)生根培养:将步骤4)的培养出的新芽剪下,转接到生根培养基中,培养条件为光强 1500-2000LX、光周期12h/d,温度25°C±2°C;培养15d后,生出新根;生根培养基的配方为: 1/2MS+NAA0?1-0?3mg/L+IBA0?2-0?5mg/L+PVP0?8-2mg/L;6)炼苗和移栽:将有生根的加拿大紫荆幼苗的培养基瓶盖打开,室温下炼苗3-5d后,取 出幼苗,洗去根部培养基,移栽至装有河沙基质的苗床上,保持温度20-25°C,湿度70%-80%,适当遮荫即可;所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤;所述的NAA为a-萘乙酸;所述的IBA为吲哚-3-丁酸;所述的KT为激动素;所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。2.根据权利要求1所述一种加拿大紫荆组织培养的方法,其特征在于所述步骤3)中初 始诱导培养基组成为:MS+6-BAl ? 0mg/L+NAA0 ? 2mg/L。3.根据权利要求1所述一种加拿大紫荆组织培养的方法,其特征在于所述步骤4)中新 芽伸长和增殖培养用培养基为:MS+6-BA2mg/L+NAA0 ? 2mg/L+IBA0 ? 5mg/L+KTl ? Omg/L。4.根据权利要求1所述一种加拿大紫荆组织培养的方法,其特征在于所述步骤5)中生 根培养基为:1/2MS+NAA0 ? 2mg/L+IBA0 ? 4mg/L+PVPlmg/L。
【文档编号】A01H4/00GK105993942SQ201610339784
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月20日
【发明人】戴勤, 王冬梅, 李慧珍
【申请人】芜湖欧标农业发展有限公司
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