紫茎组织培养快速繁育方法
【专利摘要】本发明提供一种紫茎组织培养快速繁育方法，包括外植体选择与消毒、从生芽诱导、丛生芽增殖、生根培养、壮苗培养和苗床培养等步骤。与紫茎传统育苗方法相比，本发明的方法不受紫茎种子数量和种子发芽率的限制，利用紫茎当年生新梢进行组织培养，获得紫茎幼苗，并将幼苗移栽到苗床中继续培养获得紫茎移栽苗，该繁育方法可有效提高紫茎的繁育系数，保留紫茎的优良遗传特性，幼苗成活率高达95％，移栽苗野外移栽成活率高达80％，可实现紫茎苗木的规模化生产和野外大面积育林生长，并为紫茎这一珍稀濒危植物的有效保护提供技术支持。
【专利说明】
紫茎组织培养快速繁育方法
技术领域
[0001] 本发明属于植物繁殖技术领域，具体涉及一种紫茎组织培养快速繁育方法。
【背景技术】
[0002] 紫莖(拉丁学名：Stewartia sinensis Rehd.et Wils·)属山茶科紫莖属多年生木 本植物。由于植被不断被破坏，天然更新力差，紫茎植株已日益减少，在中国红皮书被列为 "渐危种"。紫茎为中国特有的残遗植物，对研究东亚-北美植物区系有科学意义，其树皮片 状脱裂，内皮棕黄光洁，斑驳奇丽，花白瓣黄蕊，清秀淡雅，常用于装饰庭院;材质坚重，经久 耐用色美丽，为制造家具有优良用材;根皮、茎皮、果可入药;种子油可食用或制肥皂及润滑 油，故紫茎具有较高的经济价值，尤其是随着人们生活水平的提升，对物质的追求也不断的 提升，用紫茎装饰庭院，以紫茎这一优质而又美观的木材制作的家具，也会得到越来越多的 人士的青睐，其市场前景广阔。
[0003] 紫茎在自然状况下以种子进行繁殖，由于受到种子数量和种子发芽率的限制，不 能实现苗木规模化生产，且采用种子培育的实生苗木性状差异大，不适合大面积育林生长。 组织培养是一种植株快速繁殖技术，其所需植株原材料少，不受生长季节限制，培养周期 短，变异低，可保持母本的优良遗传特性，可用于拯救濒危珍稀植物，解决其无法短时大量 繁殖的难题，实现模化生产。但目前关于紫茎的组织培养研究还未见报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优 点。
[0005] 本发明还有一个目的是提供一种紫茎组织培养快速繁育方法，利用紫茎当年生新 梢进行组织培养，获得紫茎幼苗，并将幼苗移栽到苗床中继续培养获得紫茎移栽苗，该繁育 方法不受紫茎种子数量和种子发芽率的限制，可有效提高紫茎的繁育系数，保留紫茎的优 良遗传特性，幼苗成活率高达95 %，移栽苗野外移栽成活率高达80%，可实现紫茎苗木的规 模化生产和野外大面积育林生长，有利于紫茎这一珍稀濒危植物的有效保护。
[0006] 本发明还有一个目的是提供一种紫茎组织培养快速繁育方法，包括以下步骤：
[0007] A、选取性状优异的紫茎植株作母本，剪取其当年生新梢，取其顶端5-lOcm的枝条， 将所述枝条用质量分数为2%的洗洁精水溶液浸泡20min，取出，用线状自来水冲洗15-2〇min，再放入天然消毒液中浸泡30min，最后将所述枝条用无菌水冲洗3-5次并用消毒滤纸 除去其表面水分，得外植体，其中，
[0008] 所述天然消毒液的制备方法为:将10-12重量份代代、7-9重量份白千层、7-9重量 份蓝按、6_8重量份大蒜、5_7重量份梓樣草和4_6重量份丁香粉碎至50-100目，加入500重量 份的水室温下浸泡lh，再于60°C下真空回流提取2-4h，过滤，所得滤液即为所述天然消毒 液；
[0009] B、将步骤A中得到的所述外植体用无菌解剖刀切割成0.5-0.8cm的小段并转接到 丛生芽诱导培养基中，于22-26°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养28-30 天，得第一丛生芽，其中，
[0010] 所述丛生芽诱导培养基是以3/41^培养基为基本培养基，还包括2.0-2.511^/12丁 (玉米素），1 · 0-1 · 5mg/L 6-KT(激动素），1 · 0-1 · 5mg/L 2 · 4 · 5-T (2 · 4 · 5-三氯苯氧乙酸），15-20g/L蛋黄液，4-6g/L大豆肽，30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH值为5.5-5.8;
[00?1 ] 第一光照条件下培养时，光照强度为2000-22001ux，光照时间为14_16h/天；
[0012] 所述蛋黄液是取新鲜蛋黄，经充分搅拌后，用80目滤布过滤制得；
[0013] C、将步骤B中得到的所述第一丛生芽用无菌解剖刀切割成带有1-2个芽的小块并 分别转接到增殖培养基中，于22-26Γ，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养 28_30天，得第二丛生芽，其中，
[0014] 所述增殖培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.0-2.511^/121'，1.5-2 · Omg/L 6-KT，1 · 2-1 · 5mg/L ΝΑΑ(α-萘乙酸），15-20g/L蛋黄液，4-6g/L大豆肽，30g/L鹿糖 和8g/L琼脂，pH值为5.5-5.8;
[0015] D、将步骤C中得到的所述第二丛生芽转接到生根养基中，于22-26Γ，黑暗条件下 培养6天后，转入第二光照条件下培养18-20天，得完整植株，其中，
[0016] 所述生根培养基是以1/21^培养基为基本培养基，还包括1.2-1.511^/1祖4,0.8-1 · Omg/L IBA(吲噪丁酸），0 · 8-1 · Omg/L多效挫，l-3g/L大豆肽，35g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值 为5.5-5.8;
[0017] 第二光照条件下培养时，光照强度2200-24001ux，光照时间为14-16h/天；
[0018] E、向所述生根培养基中加入0.5cm厚的无菌水，敞口培养7天后，将所述完整植株 取出，转入壮苗培养基中，第三光照条件下培养28-30天，得幼苗，其中，
[0019] 所述壮苗培养基是以MS培养基为基本培养基，还包括2.0-2.511^/1^184，1.5-1 · 8mg/L ZT，0 · 8-1 · Omg/L 6-BA(6-苄氨基嘌呤），0 · 8-1 · Omg/L多效唑，20-25g/L蛋黄液，3-5g/L活性炭，30g/L蔗糖和10g/L琼脂，pH值为5.5-5.8;
[0020] 第三光照条件下培养时，光照强度2200-24001UX，光照时间为14-16h/天，光照时 培养温度为22-26°C，非光照时培养温度为16-20°C ;
[0021] F、将步骤E中得到的所述幼苗移栽到苗床中继续培养5-6个月，得紫茎移栽苗，最 后将所述紫茎移栽苗进行野外移栽。
[0022] 优选的是，所述的紫茎组织培养快速繁育方法，苗床中培养时，培养温度为16-20 °C、湿度为70-80 %、阴蔽度为20-30 %。
[0023]优选的是，所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述苗床由床体和基质组成，其 中，所述床体，其包括：
[0024]床架，其为上表面开口的中空长方体，其长为3-9m、宽为1-1.8m、高为20-25cm;所 述床架的平行于长度方向的右侧面和与其相邻的前侧面、后侧面及底面可拆卸连接;所述 右侧面的下方设有与竖直方向呈30-60°的向下倾斜的滑槽，所述滑槽与所述底面边缘固定 连接；
[0025] 喷雾装置，其包括间隔设置在所述床架的内部上方并与所述床架的长度方向平行 的多个进水管和间隔设置在所述进水管上的多个旋转喷头；
[0026] 温控装置，其为设置在所述床架的内部下方的呈波浪形排列的热交换管；
[0027]自动控制系统，其包括设置在所述床架的内部的多个温湿度传感器和设置在所述 前侧面的外表面上的控制面板。
[0028]优选的是，所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述基质，其包括：
[0029] 第一基质层，其由15-20重量份稻壳、15-20重量份珍珠岩和10-12重量份锯末经高 温灭菌制得，其厚度为6-8cm;
[0030]第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由20-30重量份厩肥、15-20重量份废 蜜液、15-20份蛋壳、10-15重量份豆渣、10-15重量份秸杆和0.8-1份酵素菌经发酵后再加入 40-50重量份黄壤土混合制得，其厚度为13-15cm;
[0031 ]第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为l-2cm的表层腐殖土。
[0032]优选的是，所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述丛生芽诱导培养基中ZT浓度 为2 · 2mg/L，6-KT浓度为1 · 2mg/L，2 · 4 · 5-T浓度为1 · 2mg/L，蛋黄液浓度为18g/L，大豆肽浓度 为58/1，？!1值为5.8。
[0033]优选的是，所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述增殖培养基中ZT浓度为 2 · 2mg/L，6-KT浓度为1 · 8mg/L，NAA浓度为1 · 3mg/L，蛋黄液浓度为18g/L，大豆肽浓度为5/L， pH值为5.8〇
[0034]优选的是，所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述生根培养基中NAA浓度为 1 · 3mg/L，IBA浓度为0 · 9mg/L，多效唑浓度为0 · 9mg/L，大豆肽浓度为2/L，pH值为5 · 8。
[0035]优选的是，所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述壮苗培养基中IBA浓度为 2 · 2mg/L，ZT浓度为1 · 7mg/L，6-BA浓度为0 · 9mg/L，多效唑浓度为0 · 9mg/L，蛋黄液浓度为 23g/L，活性炭浓度为4g/L，pH值为5.8。
[0036]本发明至少包括以下有益效果：
[0037] 第一、与紫茎传统育苗方法相比，本发明的方法不受紫茎种子数量和种子发芽率 的限制，利用紫茎当年生新梢进行组织培养，获得紫茎幼苗，并将幼苗移栽到苗床中继续培 养获得紫茎移栽苗，该繁育方法可有效提高紫茎的繁育系数，保留紫茎的优良遗传特性，幼 苗成活率高达95%，移栽苗野外移栽成活率高达80%，可实现紫茎苗木的规模化生产和野 外大面积育林生长，并为紫茎这一珍稀濒危植物的有效保护提供技术支持；
[0038] 第二、将具有一定消毒杀菌作用的中草药代代、白千层、蓝桉、大蒜、柠檬草和丁香 进行配伍，通过真空回流提取其有效成分，制备成天然消毒液并对紫茎新梢进行消毒处理， 可避免传统的酒精和升汞消毒法对紫茎新梢的损害，降低组织培养过程中产生畸形苗的概 率；
[0039] 第三、通过将21'、6-〇、2.4.5-1'、蛋黄液和大豆肽以适宜比例加入3/413培养基中 制备丛生芽诱导培养基，ZT、6-KT、2.4.5-T和蛋黄液组合，可刺激紫茎外植体内酶的活性， 促进紫茎细胞的增殖、分裂和分化，蛋黄液和大豆肽中的蛋白质、小分子肽、游离氨基酸、糖 类、磷脂类和微量元素等成分进一步促进了紫茎细胞的生长、繁殖，培养28-30天即可得到 健壮的第一丛生芽；
[0040] 第四、通过将21\6-10'、祖4、蛋黄液和大豆肽以适宜的比例加入3/413培养基中制 备增殖培养基，可显著提高第一丛生芽的增殖效果，增殖系数高，平均增殖系数达5.0;
[0041 ] 第五、通过将NAA、IBA、多效唑和大豆肽以适宜的比例加入1/2MS培养基中制备生 根培养基，可消除第二丛生芽的顶端优势，刺激第二丛生芽基部的细胞分裂，诱导生根，生 根率高达98 %，且根系健壮发达；
[0042] 第六、通过将184、21\6-84、多效唑、蛋黄液和活性炭以适宜的比例加入1^培养基 中制备壮苗培养基，IBA、ZT、6-BA、多效唑和蛋黄液可有效促进植株根系和茎叶的生长或伸 展，活性炭的加入，可使生长调节剂IBA、ZT、6-BA和多效唑在壮苗培养过程中缓慢释放，使 植株在壮苗培养期内均健壮生长；
[0043] 第七、通过床体自动控制系统将苗床的温度和湿度控制在适宜范围，可避免传统 大棚培养中温湿度控制不均的问题，提高幼苗的成活率；
[0044] 第八、根据紫茎幼苗的生长特点和营养需要配制专用的培养基质，基质中的第一 基质层由稻壳、珍珠岩和锯末经杀菌制得，其疏松通气，吸水保水且不含病原菌;第二基质 层由厩肥、废蜜液、蛋壳、豆渣、秸杆和酵素菌经发酵后与黄壤土混合制得，其可为幼苗生长 提供丰富的易于吸收的营养，发酵还可使第二基质层中产生大量的有益细菌，可增强幼苗 的抗病虫害能力；第三基质层为表层腐殖土，可为幼苗生长提供一定营养并减缓第二基质 层中养分和水分的散失，确保幼苗在其上长势好，无病虫害，所得移栽苗健壮，提高了移栽 苗野外移栽的成活率，且移栽后长势好。
[0045] 本发明的其他优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【附图说明】
[0046] 图1为本发明床体的结构示意图。
[0047]其中，1、床架；11、右侧面;12、前侧面;13、后侧面;14、底面;15、滑槽;2、进水管;3、 旋转喷头;4、热交换管;5、温湿度传感器;6、控制面板。
【具体实施方式】
[0048] 下面结合实施例和附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照 说明书文字能够据以实施。
[0049] 需要说明的是，下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述 试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得；在本发明的描述中，术语"横向"、"纵 向"、"上"、"下"、"前"、"后"、"左"、"右"、"竖直"、"水平"、"顶"、"底"、"内"、"外"等指示的方 位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述， 并不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因 此不能理解为对本发明的限制。
[0050] 实施例1:
[0051] -种紫茎组织培养快速繁育方法，包括以下步骤：
[0052] A、选取性状优异的紫茎植株作母本，剪取其当年生新梢，取其顶端5cm的枝条，将 所述枝条用质量分数为2%的洗洁精水溶液浸泡20min，取出，用线状自来水冲洗15min，再 放入天然消毒液中浸泡30min，最后将所述枝条用无菌水冲洗3次并用消毒滤纸除去其表面 水分，得外植体，其中，
[0053]所述天然消毒液的制备方法为:将10重量份代代、7重量份白千层、7重量份蓝桉、6 重量份大蒜、5重量份柠檬草和4重量份丁香粉碎至50目，加入500重量份的水室温下浸泡 lh，再于60°C下真空回流提取2h，过滤，所得滤液即为所述天然消毒液；
[0054] B、将步骤A中得到的所述外植体用无菌解剖刀切割成0.5cm的小段并转接到丛生 芽诱导培养基中，于22°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养28天，得第一丛 生芽，其中，
[0055] 所述丛生芽诱导培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.0mg/LZT， 1 · Omg/L 6-KT，1 · Omg/L 2 · 4 · 5-T，15g/L蛋黄液，4g/L大豆肽，30g/L鹿糖和5g/L琼脂，pH值 为 5.5;
[0056] 第一光照条件下培养时，光照强度为20001UX，光照时间为14h/天；
[0057] C、将步骤B中得到的所述第一丛生芽用无菌解剖刀切割成带有1个芽的小块并分 别转接到增殖培养基中，于22°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养28天，得 第二丛生芽，其中，
[0058] 所述增殖培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.〇11^/121'，1.51^/16-KT，1.2mg/L NAA，15g/L蛋黄液，4g/L大豆肽，30g/L鹿糖和8g/L琼脂，pH值为5.5;
[0059] D、将步骤C中得到的所述第二丛生芽转接到生根养基中，于22°C，黑暗条件下培养 6天后，转入第二光照条件下培养18天，得完整植株，其中，
[0060] 所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，还包括1.2mg/L NAA，0.8mg/L IBA，0 · 8mg/L多效唑，lg/L大豆肽，35g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为5 · 5;
[0061 ] 第二光照条件下培养时，光照强度22001ux，光照时间为14h/天；
[0062] E、向所述生根培养基中加入0.5cm厚的无菌水，敞口培养7天后，将所述完整植株 取出，转入壮苗培养基中，第三光照条件下培养28天，得幼苗，其中，
[0063] 所述壮苗培养基是以MS培养基为基本培养基，还包括2.0mg/L IBA，1.5mg/L ZT， 0 · 8mg/L 6-BA，0 · 8mg/L多效唑，20g/L蛋黄液，3g/L活性炭，30g/L蔗糖和10g/L琼脂，pH值为 5.5；
[0064] 第三光照条件下培养时，光照强度22001ux，光照时间为14h/天，光照时培养温度 为22°C，非光照时培养温度为16°C ;
[0065] F、将步骤E中得到的所述幼苗移栽到苗床中继续培养5个月，得紫茎移栽苗，最后 将所述紫茎移栽苗进行野外移栽。
[0066] 所述的紫茎组织培养快速繁育方法，苗床中培养时，培养温度为16 °C、湿度为 70%、阴蔽度为20 %。
[0067] 所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述苗床由床体和基质组成，其中，所述床体 如图1所示，其包括：
[0068]床架1，其为上表面开口的中空长方体，其长为3m、宽为lm、高为20cm;所述床架1的 平行于长度方向的右侧面11和与其相邻的前侧面12、后侧面13及底面14可拆卸连接;所述 右侧面11的下方设有与竖直方向呈60°的向下倾斜的滑槽15,所述滑槽15与所述底面14边 缘固定连接;喷雾装置，其包括间隔设置在所述床架的内部上方并与所述床架的长度方向 平行的多个进水管2和间隔设置在所述进水管上的多个旋转喷头3;温控装置，其为设置在 所述床架的内部下方的呈波浪形排列的热交换管4;自动控制系统，其包括设置在所述床架 的内部的多个温湿度传感器5和设置在所述前侧面的外表面上的控制面板6。
[0069] 所述床架自动控温控湿的工作原理为，温湿度传感器将采集到的温湿度信息传递 给控制面板，控制面板通过比对程序与设定值进行对比，当测定值与设定值不相等时，控制 面板则通过控制程序控制热交换管和喷雾装置工作，直至测定值与设定值相等时，控制面 板则通过控制程序控制热交换管和喷雾装置停止工作。
[0070] 所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述基质，其包括：
[0071] 第一基质层，其由15重量份稻壳、15重量份珍珠岩和10重量份锯末经高温灭菌制 得，其厚度为6cm;
[0072] 第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由20重量份厩肥、15重量份废蜜液、 15份蛋壳、10重量份豆渣、10重量份秸杆和0.8份酵素菌经发酵后再加入40重量份黄壤土混 合制得，其厚度为13cm;
[0073] 第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为lcm的表层腐殖土。
[0074] 实施例2:
[0075] -种紫茎组织培养快速繁育方法，包括以下步骤：
[0076] A、选取性状优异的紫茎植株作母本，剪取其当年生新梢，取其顶端8cm的枝条，将 所述枝条用质量分数为2%的洗洁精水溶液浸泡20min，取出，用线状自来水冲洗18min，再 放入天然消毒液中浸泡30min，最后将所述枝条用无菌水冲洗4次并用消毒滤纸除去其表面 水分，得外植体，其中，
[0077] 所述天然消毒液的制备方法为:将11重量份代代、8重量份白千层、8重量份蓝桉、7 重量份大蒜、6重量份柠檬草和5重量份丁香粉碎至80目，加入500重量份的水室温下浸泡 lh，再于60°C下真空回流提取3h，过滤，所得滤液即为所述天然消毒液；
[0078] B、将步骤A中得到的所述外植体用无菌解剖刀切割成0.6cm的小段并转接到丛生 芽诱导培养基中，于25°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养29天，得第一丛 生芽，其中，
[0079] 所述丛生芽诱导培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.2mg/L ZT， 1 · 2mg/L 6-KT，1 · 2mg/L 2 · 4 · 5-T，18g/L蛋黄液，5g//L大豆肽，30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH值 为 5.8;
[0080] 第一光照条件下培养时，光照强度为21001ux，光照时间为15h/天；
[0081] C、将步骤B中得到的所述第一丛生芽用无菌解剖刀切割成带有2个芽的小块并分 别转接到增殖培养基中，于25°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养29天，得 第二丛生芽，其中，
[0082] 所述增殖培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.211^/121'，1.81^/16-KT，1.3mg/L NAA，18g/L蛋黄液，5g/L大豆肽，30g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为5.8;
[0083] D、将步骤C中得到的所述第二丛生芽转接到生根养基中，于25°C，黑暗条件下培养 6天后，转入第二光照条件下培养19天，得完整植株，其中，
[0084] 所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，还包括1.3mg/L NAA，0.9mg/L IBA，0 · 9mg/L多效唑，2g/L大豆肽，35g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为5 · 8;
[0085] 第二光照条件下培养时，光照强度23001ux，光照时间为15h/天；
[0086] E、向所述生根培养基中加入0.5cm厚的无菌水，敞口培养7天后，将所述完整植株 取出，转入壮苗培养基中，第三光照条件下培养29天，得幼苗，其中，
[0087] 所述壮苗培养基是以MS培养基为基本培养基，还包括2.2mg/L IBA，1.7mg/L ZT， Ο · 9mg/L 6-BA，Ο · 9mg/L多效唑，23g/L蛋黄液，4g/L活性炭，30g/L蔗糖和lOg/L琼脂，pH值为 5.8；
[0088] 第三光照条件下培养时，光照强度23001UX，光照时间为15h/天，光照时培养温度 为25°C，非光照时培养温度为18°C ;
[0089] F、将步骤E中得到的所述幼苗移栽到苗床中继续培养5.5个月，得紫茎移栽苗，最 后将所述紫茎移栽苗进行野外移栽。
[0090] 所述的紫茎组织培养快速繁育方法，苗床中培养时，培养温度为18 °C、湿度为 75%、阴蔽度为25%。
[0091] 所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述苗床由床体和基质组成，其中，所述床体 如图1所示，其包括：
[0092]床架1，其为上表面开口的中空长方体，其长为6m、宽为1.5m、高为22cm;所述床架1 的平行于长度方向的右侧面11和与其相邻的前侧面12、后侧面13及底面14可拆卸连接;所 述右侧面11的下方设有与竖直方向呈60°的向下倾斜的滑槽15,所述滑槽15与所述底面14 边缘固定连接;喷雾装置，其包括间隔设置在所述床架的内部上方并与所述床架的长度方 向平行的多个进水管2和间隔设置在所述进水管上的多个旋转喷头3;温控装置，其为设置 在所述床架的内部下方的呈波浪形排列的热交换管4;自动控制系统，其包括设置在所述床 架的内部的多个温湿度传感器5和设置在所述前侧面的外表面上的控制面板6。
[0093] 所述床架自动控温控湿的工作原理为，温湿度传感器将采集到的温湿度信息传递 给控制面板，控制面板通过比对程序与设定值进行对比，当测定值与设定值不相等时，控制 面板则通过控制程序控制热交换管和喷雾装置工作，直至测定值与设定值相等时，控制面 板则通过控制程序控制热交换管和喷雾装置停止工作。
[0094]所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述基质，其包括：
[0095] 第一基质层，其由18重量份稻壳、18重量份珍珠岩和11重量份锯末经高温灭菌制 得，其厚度为7cm;
[0096] 第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由25重量份厩肥、18重量份废蜜液、 18份蛋壳、12重量份豆渣、12重量份秸杆和0.9份酵素菌经发酵后再加入45重量份黄壤土混 合制得，其厚度为14cm;
[0097] 第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为lcm的表层腐殖土。
[0098] 实施例3:
[0099] 一种紫茎组织培养快速繁育方法，包括以下步骤：
[0100] A、选取性状优异的紫茎植株作母本，剪取其当年生新梢，取其顶端10cm的枝条，将 所述枝条用质量分数为2 %的洗洁精水溶液浸泡20min，取出，用线状自来水冲洗20min，再 放入天然消毒液中浸泡30min，最后将所述枝条用无菌水冲洗5次并用消毒滤纸除去其表面 水分，得外植体，其中，
[0101] 所述天然消毒液的制备方法为:将12重量份代代、9重量份白千层、9重量份蓝桉、8 重量份大蒜、7重量份柠檬草和6重量份丁香粉碎至100目，加入500重量份的水室温下浸泡 lh，再于60°C下真空回流提取4h，过滤，所得滤液即为所述天然消毒液；
[0102] B、将步骤A中得到的所述外植体用无菌解剖刀切割成0.8cm的小段并转接到丛生 芽诱导培养基中，于26°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养30天，得第一丛 生芽，其中，
[0103] 所述丛生芽诱导培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.5mg/L ZT， 1 · 5mg/L 6-KT，1 · 5mg/L 2 · 4 · 5-T，20g/L蛋黄液，6g/L大豆肽，30g/L鹿糖和5g/L琼脂，pH值 为 5.8;
[0104] 第一光照条件下培养时，光照强度为22001ux，光照时间为16h/天；
[0105] C、将步骤B中得到的所述第一丛生芽用无菌解剖刀切割成带有2个芽的小块并分 别转接到增殖培养基中，于26°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养30天，得 第二丛生芽，其中，
[0106] 所述增殖培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.511^/121'，2.〇1^/16-KT，1.5mg/L NAA，20g/L蛋黄液，6g/L大豆肽，30g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为5.8;
[0107] D、将步骤C中得到的所述第二丛生芽转接到生根养基中，于26°C，黑暗条件下培养 6天后，转入第二光照条件下培养20天，得完整植株，其中，
[0108] 所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，还包括1.5mg/L NAA，1.0mg/L IBA，1 · Omg/L多效唑，3g/L大豆肽，35g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为5 · 8;
[0109] 第二光照条件下培养时，光照强度24001ux，光照时间为16h/天；
[0110] E、向所述生根培养基中加入0.5cm厚的无菌水，敞口培养7天后，将所述完整植株 取出，转入壮苗培养基中，第三光照条件下培养30天，得幼苗，其中，
[0111] 所述壮苗培养基是以MS培养基为基本培养基，还包括2.5mg/L IBA，1.8mg/L ZT， 1 · Omg/L 6-BA，1 · Omg/L多效唑，25g/L蛋黄液，5g/L活性炭，30g/L蔗糖和10g/L琼脂，pH值为 5.8；
[0112] 第三光照条件下培养时，光照强度24001ux，光照时间为16h/天，光照时培养温度 为26°C，非光照时培养温度为20°C ;
[0113] F、将步骤E中得到的所述幼苗移栽到苗床中继续培养6个月，得紫茎移栽苗，最后 将所述紫茎移栽苗进行野外移栽。
[0114] 所述的紫茎组织培养快速繁育方法，苗床中培养时，培养温度为2 0 °C、湿度为 80%、阴蔽度为30 %。
[0115]所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述苗床由床体和基质组成，其中，所述床体 如图1所示，其包括：
[0116] 床架1，其为上表面开口的中空长方体，其长为9m、宽为1.8m、高为25cm;所述床架1 的平行于长度方向的右侧面11和与其相邻的前侧面12、后侧面13及底面14可拆卸连接;所 述右侧面11的下方设有与竖直方向呈60°的向下倾斜的滑槽15,所述滑槽15与所述底面14 边缘固定连接;喷雾装置，其包括间隔设置在所述床架的内部上方并与所述床架的长度方 向平行的多个进水管2和间隔设置在所述进水管上的多个旋转喷头3;温控装置，其为设置 在所述床架的内部下方的呈波浪形排列的热交换管4;自动控制系统，其包括设置在所述床 架的内部的多个温湿度传感器5和设置在所述前侧面的外表面上的控制面板6。
[0117] 所述床架自动控温控湿的工作原理为，温湿度传感器将采集到的温湿度信息传递 给控制面板，控制面板通过比对程序与设定值进行对比，当测定值与设定值不相等时，控制 面板则通过控制程序控制热交换管和喷雾装置工作，直至测定值与设定值相等时，控制面 板则通过控制程序控制热交换管和喷雾装置停止工作。
[0118]所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述基质，其包括：
[0119] 第一基质层，其由20重量份稻壳、20重量份珍珠岩和12重量份锯末经高温灭菌制 得，其厚度为8cm;
[0120] 第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由30重量份厩肥、20重量份废蜜液、 20份蛋壳、15重量份豆渣、15重量份秸杆和1份酵素菌经发酵后再加入50重量份黄壤土混合 制得，其厚度为15cm;
[0121] 第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为2cm的表层腐殖土。
[0122] 实施例4:
[0123] -种紫茎组织培养快速繁育方法，包括以下步骤：
[0124] A、选取性状优异的紫茎植株作母本，剪取其当年生新梢，取其顶端5cm的枝条，将 所述枝条用质量分数为2%的洗洁精水溶液浸泡20min，取出，用线状自来水冲洗15min，再 放入天然消毒液中浸泡30min，最后将所述枝条用无菌水冲洗5次并用消毒滤纸除去其表面 水分，得外植体，其中，
[0125] 所述天然消毒液的制备方法为:将12重量份代代、7重量份白千层、7重量份蓝桉、8 重量份大蒜、7重量份柠檬草和6重量份丁香粉碎至100目，加入500重量份的水室温下浸泡 lh，再于60°C下真空回流提取4h，过滤，所得滤液即为所述天然消毒液；
[0126] B、将步骤A中得到的所述外植体用无菌解剖刀切割成0.8cm的小段并转接到丛生 芽诱导培养基中，于25°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养28天，得第一丛 生芽，其中，
[0127] 所述丛生芽诱导培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.5mg/L ZT， 1 · 5mg/L 6-KT，1 · Omg/L 2 · 4 · 5-T，20g/L蛋黄液，4g/L大豆肽，30g/L鹿糖和5g/L琼脂，pH值 为 5.6;
[0128] 第一光照条件下培养时，光照强度为22001ux，光照时间为14h/天；
[0129] C、将步骤B中得到的所述第一丛生芽用无菌解剖刀切割成带有1个芽的小块并分 别转接到增殖培养基中，于25°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养28天，得 第二丛生芽，其中，
[0130] 所述增殖培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.511^/121'，1.51^/16-KT，1.2mg/L NAA，15g/L蛋黄液，6g/L大豆肽，30g/L鹿糖和8g/L琼脂，pH值为5.6;
[0131] D、将步骤C中得到的所述第二丛生芽转接到生根养基中，于25°C，黑暗条件下培养 6天后，转入第二光照条件下培养18天，得完整植株，其中，
[0132] 所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，还包括1.5mg/L NAA，0.8mg/L IBA，0 · 8mg/L多效唑，lg/L大豆肽，35g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为5 · 6;
[0133] 第二光照条件下培养时，光照强度22001ux，光照时间为14h/天；
[0134] E、向所述生根培养基中加入0.5cm厚的无菌水，敞口培养7天后，将所述完整植株 取出，转入壮苗培养基中，第三光照条件下培养28天，得幼苗，其中，
[0135] 所述壮苗培养基是以MS培养基为基本培养基，还包括2.0mg/L IBA，1.5mg/L ZT， 1 · Omg/L 6-BA，1 · Omg/L多效唑，25g/L蛋黄液，5g/L活性炭，30g/L蔗糖和10g/L琼脂，pH值为 5.6；
[0136] 第三光照条件下培养时，光照强度22001ux，光照时间为14h/天，光照时培养温度 为25°C，非光照时培养温度为16°C ;
[0137] F、将步骤E中得到的所述幼苗移栽到苗床中继续培养6个月，得紫茎移栽苗，最后 将所述紫茎移栽苗进行野外移栽。
[0138] 所述的紫茎组织培养快速繁育方法，苗床中培养时，培养温度为18 °C、湿度为 80%、阴蔽度为20 %。
[0139] 所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述苗床由床体和基质组成，其中，所述床体 如图1所示，其包括：
[0140]床架1，其为上表面开口的中空长方体，其长为6m、宽为1.5m、高为25cm;所述床架1 的平行于长度方向的右侧面11和与其相邻的前侧面12、后侧面13及底面14可拆卸连接;所 述右侧面11的下方设有与竖直方向呈60°的向下倾斜的滑槽15,所述滑槽15与所述底面14 边缘固定连接;喷雾装置，其包括间隔设置在所述床架的内部上方并与所述床架的长度方 向平行的多个进水管2和间隔设置在所述进水管上的多个旋转喷头3;温控装置，其为设置 在所述床架的内部下方的呈波浪形排列的热交换管4;自动控制系统，其包括设置在所述床 架的内部的多个温湿度传感器5和设置在所述前侧面的外表面上的控制面板6。
[0141] 所述床架自动控温控湿的工作原理为，温湿度传感器将采集到的温湿度信息传递 给控制面板，控制面板通过比对程序与设定值进行对比，当测定值与设定值不相等时，控制 面板则通过控制程序控制热交换管和喷雾装置工作，直至测定值与设定值相等时，控制面 板则通过控制程序控制热交换管和喷雾装置停止工作。
[0142] 所述的紫茎组织培养快速繁育方法，所述基质，其包括：
[0143] 第一基质层，其由15重量份稻壳、20重量份珍珠岩和10重量份锯末经高温灭菌制 得，其厚度为8cm;
[0144] 第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由30重量份厩肥、15重量份废蜜液、 20份蛋壳、10重量份豆渣、10重量份秸杆和1份酵素菌经发酵后再加入50重量份黄壤土混合 制得，其厚度为15cm;
[0145] 第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为2cm的表层腐殖土。
[0146] 对比例1:
[0147] 通过对比例1来进一步说明本发明天然消毒液的有益效果。其中，对照组的外植体 消毒采用传统酒精和升汞消毒法，对照组的其余操作条件同实施例2,实验结果见表1。
[0148] 表1不同消毒方法对紫茎幼苗的影响
[0149]
[0150]由表1可知，消毒方法对紫茎幼苗的增殖系数影响不显著，但对畸形苗率有显著影 响，采用天然消毒液的紫茎幼苗畸形苗率仅为0.5%，而采用酒精和升汞消毒法的紫茎幼苗 畸形率高达7%，说明天然消毒液消毒可显著降低紫茎幼苗的畸形苗率。
[0151]尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地 实现另外的修改。因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的实例。
【主权项】
1. 一种紫茎组织培养快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤： A、 选取性状优异的紫茎植株作母本，剪取其当年生新梢，取其顶端5-lOcm的枝条，将所 述枝条用质量分数为2%的洗洁精水溶液浸泡20min，取出，用线状自来水冲洗15-20min，再 放入天然消毒液中浸泡30min，最后将所述枝条用无菌水冲洗3-5次并用消毒滤纸除去其表 面水分，得外植体，其中， 所述天然消毒液的制备方法为:将10-12重量份代代、7-9重量份白千层、7-9重量份蓝 桉、6_8重量份大蒜、5_7重量份梓檬草和4_6重量份丁香粉碎至50-100目，加入500重量份的 水室温下浸泡lh，再于60°C下真空回流提取2-4h，过滤，所得滤液即为所述天然消毒液； B、 将步骤A中得到的所述外植体用无菌解剖刀切割成0.5-0.8cm的小段并转接到丛生 芽诱导培养基中，于22-26°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养28-30天，得 第一丛生芽，其中， 所述丛生芽诱导培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.0-2.5mg/L ZT，1.0-? · 5mg/L 6-KT ， 1 · 0-1 · 5mg/L 2 · 4 · 5-T ， 15-20g/L 蛋黄液， 4-6g//L 大豆肽， 30g/L 蔗糖和 5g/L 琼脂，pH值为5.5-5.8; 第一光照条件下培养时，光照强度为2000-220011?，光照时间为14-1611/天； C、 将步骤B中得到的所述第一丛生芽用无菌解剖刀切割成带有1-2个芽的小块并分别 转接到增殖培养基中，于22-26°C，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养28-30 天，得第二丛生芽，其中， 所述增殖培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.0-2.5mg/L ZT，1.5-2. Omg/ L 6-KT，1.2-1.5mg/L NAA，15-20g/L蛋黄液，4-6g/L大豆肽，30g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为 5.5~5.8； D、 将步骤C中得到的所述第二丛生芽转接到生根养基中，于22-26Γ，黑暗条件下培养6 天后，转入第二光照条件下培养18-20天，得完整植株，其中， 所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，还包括1.2-1.511^/1^财4,0.8-1 · Omg/L IBA，0 · 8-1 · Omg/L多效唑，l-3g/L大豆肽，35g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为5 · 5-5 · 8; 第二光照条件下培养时，光照强度2200-24001ux，光照时间为14-16h/天； E、 向所述生根培养基中加入0.5cm厚的无菌水，敞口培养7天后，将所述完整植株取出， 转入壮苗培养基中，第三光照条件下培养28-30天，得幼苗，其中， 所述壮苗培养基是以MS培养基为基本培养基，还包括2.0-2.5mg/L IBA，1.5-1.8mg/L ZT，0 · 8-1 · Omg/L 6-BA，0 · 8-1 · Omg/L多效唑，20-25g//L蛋黄液，3-5g/L活性炭，30g/L蔗糖和 l〇g/L 琼脂，pH 值为 5·5-5·8; 第三光照条件下培养时，光照强度2200-24001ux，光照时间为14-16h/天，光照时培养 温度为22-26°C，非光照时培养温度为16-20°C ; F、 将步骤E中得到的所述幼苗移栽到苗床中继续培养5-6个月，得紫茎移栽苗，最后将 所述紫茎移栽苗进行野外移栽。2. 如权利要求1所述的紫茎组织培养快速繁育方法，其特征在于，苗床中培养时，培养 温度为16_20°C、湿度为70-80%、阴蔽度为20-30%。3. 如权利要求2所述的紫茎组织培养快速繁育方法，其特征在于，所述苗床由床体和基 质组成，其中，所述床体，其包括： 床架，其为上表面开口的中空长方体，其长为3-9m、宽为1-1.8111、高为20-25(^;所述床 架的平行于长度方向的右侧面和与其相邻的前侧面、后侧面及底面可拆卸连接;所述右侧 面的下方设有与竖直方向呈30-60°的向下倾斜的滑槽，所述滑槽与所述底面边缘固定连 接； 喷雾装置，其包括间隔设置在所述床架的内部上方并与所述床架的长度方向平行的多 个进水管和间隔设置在所述进水管上的多个旋转喷头； 温控装置，其为设置在所述床架的内部下方的呈波浪形排列的热交换管； 自动控制系统，其包括设置在所述床架的内部的多个温湿度传感器和设置在所述前侧 面的外表面上的控制面板。4. 如权利要求3所述的紫茎组织培养快速繁育方法，其特征在于，所述基质，其包括： 第一基质层，其由15-20重量份稻壳、15-20重量份珍珠岩和10-12重量份锯末经高温灭 菌制得，其厚度为6-8cm; 第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由20-30重量份厩肥、15-20重量份废蜜 液、15-20份蛋壳、10-15重量份豆渣、10-15重量份秸杆和0.8-1份酵素菌经发酵后再加入 40-50重量份黄壤土混合制得，其厚度为13-15cm; 第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为l_2cm的表层腐殖土。5. 如权利要求1所述的紫茎组织培养快速繁育方法，其特征在于，所述丛生芽诱导培养 基中ZT浓度为2 · 2mg/L，6-KT浓度为1 · 2mg/L，2 · 4 · 5-T浓度为1 · 2mg/L，蛋黄液浓度为18g/L， 大豆肽浓度为5g/L，pH值为5.8。6. 如权利要求1所述的紫茎组织培养快速繁育方法，其特征在于，所述增殖培养基中ZT 浓度为2.2mg/L，6-KT浓度为1.8mg/L，NAA浓度为1.3mg/L，蛋黄液浓度为18g/L，大豆肽浓度 为5/1，?!1值为5.8。7. 如权利要求1所述的紫茎组织培养快速繁育方法，其特征在于，所述生根培养基中 NAA浓度为1.3mg/L，IBA浓度为0.9mg/L，多效唑浓度为0.9mg/L，大豆肽浓度为2/L，pH值为 5.8〇8. 如权利要求1所述的紫茎组织培养快速繁育方法，其特征在于，所述壮苗培养基中 IBA浓度为2.2mg/L，ZT浓度为1.7mg/L，6-BA浓度为0.9mg/L，多效唑浓度为0.9mg/L，蛋黄液 浓度为23g/L，活性炭浓度为4g/L，pH值为5.8。
【文档编号】A01H4/00GK105993951SQ201610362924
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】陈思
【申请人】陈思