一种防治植物根结线虫的微生物制剂及应用
【专利摘要】本发明公开了一种防治植物根结线虫的微生物制剂及其应用。该制剂由淡紫拟青霉，枯草芽孢杆菌，贝壳粉，虾壳粉，风化煤腐殖酸，草炭土混合而成。添加了贝壳粉、虾壳粉来诱导淡紫拟青霉产生几丁质酶。该制剂可室温保存，在25℃保存90天后，淡紫拟青霉存活率大于80%。本发明通过番茄盆栽试验和黄瓜大田试验验证了该制剂具有显著的防治根结线虫作用；同时，通过土壤定殖试验验证了该制剂中淡紫拟青霉在土壤中定殖情况良好。
【专利说明】
一种防治植物根结线虫的微生物制剂及应用
技术领域
[0001] 本发明涉及生物防治技术领域，特别是涉及一种防治植物根结线虫的微生物制剂 及其应用。
【背景技术】
[0002] 植物线虫病害是由植物寄生线虫侵入和寄生引起的病害。调查发现受线虫病害影 响的植物或作物有3000多种。主要有粮食类作物，如小麦、甘薯、水稻;蔬菜类作物，番茄、辣 椒、菠菜;及其他类作物。植物线虫病害在我国常有发生且危害严重，发生面积时有扩大，尤 其是重茬作物，根结线虫尤其严重。线虫侵入植物后使植物正常的生长发育受到迫害，从而 使产量和质量下降。线虫防治一直是农业生产中急需解决的问题。
[0003] 目前，常用的线虫防治方法主要是化学药剂，市场中常见的农药如阿维菌素，噻唑 膦，丁硫克百威等。然而，化学防治只能在短时间内有效果，农户需要定期用药且给作物和 土壤带来一定的危害，造成大量农药残留，影响地下水、土壤环境及产品质量。
[0004] 研究表明生物防治技术可以做到无公害且有效防治植物线虫。食线虫真菌是自然 界中控制线虫数量的重要生物因子。目前，生防菌中使用较多且效果显著的是淡紫拟青霉 (Paeciioffijces Jiiacious)，属半知菌纲，丝孢菌目，丝孢菌科，拟青霉属，其广泛分布于世 界各地，具有功效高、寄主广、易培养等优点。
[0005] 由于淡紫拟青霉生长温度广泛，在8_38°C都可以萌发生长，且在高温下容易死亡， 所以在实际的应用中往往受到保存条件的影响，从而大大限制了淡紫拟青霉的开发应用。 现有的淡紫拟青霉制剂生产要经过各种工艺加工，添加各种溶剂、稳定剂、助剂等，方 法复杂，其他辅助成分的添加增加了生产成本，并且防治效果并不够好。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的就是针对上述存在的缺陷而提供一种防治植物根结线虫的微生物 制剂及其应用，该制剂在25°C可以有效保存，使淡紫拟青霉在生产应用中的稳定性限制在 一定程度上得到解决。本发明生产操作简单，无需包埋，挤压，造粒等特殊工艺；同时添加成 本较低的风化煤腐殖酸和草炭土，在室温条件下使得该制剂保存时间得以延长，利于规模 性推广;枯草芽孢杆菌与淡紫拟青霉配合能够有效定殖防治植物线虫，还具有促进植物生 长，提高作物产量等多种功能。
[0007] 本发明的一种防治植物根结线虫的微生物制剂及其应用技术方案为，包括以下成 分:淡紫拟青霉菌剂，枯草芽孢杆菌菌剂，贝壳粉，虾壳粉，风化煤腐殖酸，草炭土。
[0008] 每100 g防治植物根结线虫的微生物制剂中含有： 淡紫拟青霉菌剂:2-4 g， 枯草芽孢杆菌菌剂:2-4 g， 贝壳粉:2 g， 4下壳粉:2 g， 风化煤腐殖酸:50 g， 草炭土 :38-42 g。
[0009] 所述的贝壳粉和虾壳粉为10-60目。
[0010] 淡紫拟青霉菌剂为固体粉剂，初始有效活菌数在80-100亿/g，防治植物根结线虫 的微生物制剂中，淡紫拟青霉活孢子数多2亿/g。
[0011] 枯草芽孢杆菌菌剂为固体粉剂，初始有效活菌数在80-100亿/g。
[0012] 所述的微生物制剂在抑制秀丽隐杆线虫的生长方面的应用。
[0013] 所述的微生物制剂在防治番茄根结线虫病方面的应用。
[0014] 所述的微生物制剂在防治黄瓜根结线虫病方面的应用。
[0015] 本发明的一种防治植物根结线虫的微生物制剂及其应用有益效果为:该制剂由淡 紫拟青霉，枯草芽孢杆菌，贝壳粉，虾壳粉，风化煤腐殖酸，草炭土混合而成，本发明生产操 作简单，无需包埋，挤压，造粒等特殊工艺。添加了贝壳粉、虾壳粉来诱导淡紫拟青霉产生几 丁质酶，同时添加成本较低的风化煤腐殖酸和草炭土，使得该制剂可室温保存，在25°C保存 90天后，淡紫拟青霉存活率大于80%，使淡紫拟青霉在生产应用中的稳定性限制得到解决， 利于规模性推广。枯草芽孢杆菌与淡紫拟青霉配合能够有效定殖防治植物线虫，还具有促 进植物生长，提高作物产量等多种功能。本发明通过番茄盆栽试验和黄瓜大田试验验证了 该制剂具有显著的防治根结线虫作用；同时，通过土壤定殖试验验证了该制剂中淡紫拟青 霉在土壤中定殖情况良好。
[0016]
【附图说明】： 图1所示为本发明防治植物根结线虫的微生物制剂对秀丽隐杆线虫抑制效果对比图； 图2所示为本发明防治植物根结线虫的微生物制剂对番茄根结线虫抑制效果对比图； 图3所示为微生物制剂中淡紫拟青霉在土壤中的定殖情况。
[0017]
【具体实施方式】： 为了更好地理解本发明，下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案，但是本发明 并不局限于此。
[0018] 本发明的一种防治植物根结线虫的微生物制剂，包括以下成分:淡紫拟青霉菌剂， 枯草芽孢杆菌菌剂，贝壳粉，虾壳粉，风化煤腐殖酸，草炭土。各成分均通过商业途径购买， 实施例中所用成分： 淡紫拟青霉菌剂:湖北启明生物工程有限公司， 枯草芽孢杆菌菌剂:湖北启明生物工程有限公司， 贝壳粉、虾壳粉(10-60目）:海兴海之源饲料有限公司， 风化煤腐殖酸：山东创新腐植酸科技股份有限公司， 草炭土:抚顺沃野园艺资材有限公司。
[0019] 实施例1 淡紫拟青霉稳定性试验 取一定量的淡紫拟青霉菌剂分成4份，分别放于25 °C、30 °C、35 °C、40 °C的干燥环境中， 定时取样采用梯度稀释法检测孢子存活情况，以初步确定淡紫拟青霉的保存温度，具体请 见表1、表2所不。
[0020] 表1淡紫拟青霉在25 °C、30 °C和35 °C的保存情况
[0021]表2淡紫拟青霉在40 °C的保存情况
[0022]表1和表2试验结果表明，在25°C条件下淡紫拟青霉保存9天后，孢子存活率保持在 75%以上；随着温度的升高，孢子存活率降低；在40°C时保存24小时后孢子存活率下降到 73%。初步得出结论在25°C，能够使淡紫拟青霉的保存时间有所延长，高温会导致孢子死 亡。
[0023] 实施例2 防治植物根结线虫的微生物制剂的制备 制备本发明防治植物根结线虫的微生物制剂100 g的各成分及含量如下： 淡紫拟青霉菌剂:2 g， 枯草芽孢杆菌菌剂:2 g， 贝壳粉:2 g， 4下壳粉:2 g， 风化煤腐殖酸:50 g， 娃藻土 :42 g。
[0024]按照配方称取各成分，混合在一起后搅拌均匀，并密封保存即可。
[0025] 实施例3 防治植物根结线虫的微生物制剂的制备 制备本发明防治植物根结线虫的微生物制剂100 g的各成分及含量如下： 淡紫拟青霉菌剂:4 g， 枯草芽孢杆菌菌剂:4 g， 贝壳粉:2 g， 4下壳粉:2 g， 风化煤腐殖酸:50 g， 娃藻土 ：38 g。
[0026] 按照配方称取各成分，混合在一起后搅拌均匀，并密封保存即可。
[0027] 实施例4 防治植物根结线虫的微生物制剂保存温度试验 按照实施例2和实施例3配方分别制成防治植物根结线虫的微生物制剂。取该防治植物 根结线虫的微生物制剂，分别放于25°C、30°C、35°C的环境中，定时取样采用梯度稀释法检 测孢子存活情况，见表3和表4。
[0028]表3防治植物根结线虫的微生物制剂在25°C条件下的存放情况
[0029]表4防治植物根结线虫的微生物制剂在30°C和35°C条件下的存放情况
[0030] 由表3和表4可以看出，在25°C条件下，本发明防治植物根结线虫的微生物制剂保 存90天后，孢子的有效存活率仍可以维持在80%以上。在30°C到35°C可以分别保存50-40天 左右，孢子存活率在80%以上。说明加工成制剂后，孢子存活率明显提高。因此，淡紫拟青霉 菌剂:2-4 g，枯草芽孢杆菌菌剂:2-4 g，贝壳粉:2 g，虾壳粉:2 g，风化煤腐殖酸:50 g，草 炭土:38-42 g，制备成防治植物根结线虫的微生物制剂能够有效延长淡紫拟青霉在室温条 件下的保存时间。
[0031] 实施例5 防治植物根结线虫的微生物制剂对秀丽隐杆线虫抑制试验 线虫培养： 试验使用的线虫为模式生物秀丽隐杆线虫，能够以大肠杆菌（cA e r i cA i a c 〇 2 i 0P50)为食进行生长繁殖。取适量大肠杆菌稀释液涂布于LB平板上，37°C培养24 h后，使菌 落长满平板。将秀丽隐杆线虫接到长满大肠杆菌的LB平板上，20°C培养3-4天后，在显微镜 下观察其生长情况，备用。
[0032]试验设计如下：对照组采用空白处理，实验组采用本发明的防治植物根结线虫的 微生物制剂。
[0033] 1.按照PDA和LB的混合成分配制培养基并制成平板，配方如下:胰蛋白胨10 g/L， 酵母提取物5 g/L，氯化钠10 g/L，马铃薯200 g/L，葡糖20 g/L，琼脂15 g/L。取适量大肠杆 菌稀释液涂布于混合培养基平板上，37°C培养24 h，使菌落长满平板，备用。
[0034] 2.对照组为不做任何处理的1述长满菌落的平板。
[0035] 3.试验组为本发明的防治植物根结线虫的微生物制剂，称取该制剂10 g到90 mL 无菌水中，震荡均匀，取20 uL滴加到1述长满菌落的平板。
[0036] 4.滴加稀释液的方法为，在平板上离中心约2 cm处的同一半径上均匀选取3个 点，滴加稀释液。
[0037] 6.将各组平板30°C培养，待试验组长出淡紫拟青霉菌落后，取出各组平板，将线 虫接种于平板中央。
[0038]各处理平板置于20°C下培养3-4天。使用显微镜观察各处理平板上线虫的生长情 况。选取滴加稀释液周围的培养基进行拍照，对比不同处理对线虫生长的影响。
[0039]结果分析： 从说明书附图图1可以看出，对照组平板上线虫以大肠杆菌为食进行生长繁殖;试验组 的微生物制剂，淡紫拟青霉孢子在平板上萌发成菌落，线虫生长受到抑制。
[0040]由此可以得出结论： 防治植物根结线虫的微生物制剂能够较明显的抑制线虫的生长。
[0041 ] 试验例6 防治植物根结线虫的微生物制剂对番茄根线虫的防治 用下述试验验证本发明防治植物根结线虫的微生物制剂对番茄根结线虫的防治效果： 取根结线虫严重的大棚土于花盆中，在番茄移栽时将供试制剂采用穴施的方法，施于番茄 根部，采用多株重复试验。试验期间适时浇水，精心管理。一定时间后挖出番茄根，观察根部 的线虫侵染情况。说明书附图图2可以看出对照组的番茄根部受到线虫侵染严重，根结数量 多;试验组经过供试制剂的处理，线虫侵染得到有效防治，根部无明显根结。
[0042] 试验例7 防治植物根结线虫的微生物制剂对黄瓜根线虫的防治 选取根结线虫严重的大棚做本发明制剂的田间药效对比试验。每个处理采用多株重复 试验，于黄瓜苗移栽前穴施。分别于处理30天和60天后，调查植株的根结线虫侵染情况。试 验共3个处理，分别为空白组，噻唑膦对照组，本发明防治植物根结线虫的微生物制剂试验 组。
[0043]大田试验结果表明：黄瓜苗移栽30天后，空白组线虫侵染情况严重，根结明显；噻 唑膦和本制剂组线虫无明显侵染，黄瓜根部没有根结。60天后，空白组黄瓜除根部表现出根 结严重外，黄瓜植株底部叶片开始发黄;噻唑膦对照组的黄瓜根部开始受到线虫的侵染，根 结明显;本发明防治植物根结线虫的微生物制剂试验组与对照组相比防治效果要好，黄瓜 根部无明显根结。由此得出结论:本发明制剂的线虫防治效果优于噻唑膦，防线虫效果持续 时间更长。
[0044] 试验例8 防治植物根结线虫的微生物制剂中淡紫拟青霉在土壤中定殖情况 对施入土壤的微生物制剂中淡紫拟青霉进行定殖检测，采用平板涂布方法获得目的菌 株的定殖情况。
[0045]说明书附图图3中依次为空白处理的土壤，施用本发明制剂的番茄根部土壤和黄 瓜根部土壤中淡紫拟青霉定殖情况。可以看出盆栽番茄和大棚黄瓜试验中，施入本发明防 治植物根结线虫的微生物制剂后，淡紫拟青霉能够在土壤中定殖，从而起到防治根结线虫 的作用，同时抑制了其他有害真菌的繁殖。而没有使用该制剂的空白对照土壤中杂菌较多， 有益菌较少，没有分离到淡紫拟青霉。
【主权项】
1. 一种防治植物根结线虫的微生物制剂，其特征在于，包括以下成分：淡紫拟青霉菌 剂，枯草芽孢杆菌菌剂，贝壳粉，虾壳粉，风化煤腐殖酸，草炭土。2. 根据权利要求1所述的一种防治植物根结线虫的微生物制剂，其特征在于，每100 g 防治植物根结线虫的微生物制剂中含有： 淡紫拟青霉菌剂:2-4 g， 枯草芽孢杆菌菌剂:2-4 g， 贝壳粉:2 g， 4下壳粉:2 g， 风化煤腐殖酸:50 g， 草炭土 ：38-42 g。3. 根据权利要求1所述的一种防治植物根结线虫的微生物制剂，其特征在于，所述的贝 壳粉和奸壳粉为10-60目。4. 根据权利要求1所述的一种防治植物根结线虫的微生物制剂，其特征在于，淡紫拟青 霉菌剂为固体粉剂，初始有效活菌数在80-100亿/g，防治植物根结线虫的微生物制剂中，淡 紫拟青霉活孢子数多2亿/g。5. 根据权利要求1所述的一种防治植物根结线虫的微生物制剂，其特征在于，枯草芽孢 杆菌菌剂为固体粉剂，初始有效活菌数在80-100亿/g。6. 如权利要求1所述的微生物制剂在抑制秀丽隐杆线虫的生长方面的应用。7. 如权利要求1所述的微生物制剂在防治番茄根结线虫病方面的应用。8. 如权利要求1所述的微生物制剂在防治黄瓜根结线虫病方面的应用。
【文档编号】A01N63/00GK105994383SQ201610385950
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月3日
【发明人】黄道跟, 杨春玉, 阎鹏, 高超, 李恒
【申请人】山东鲁虹肥料研究院, 山东大学