一种阔叶十大功劳提取物及其制备方法和在抗烟草黑胫病中的应用
【专利摘要】一种阔叶十大功劳提取物，是以阔叶十大功劳为提取原料，以乙醇溶液作为提取溶剂，经至少两次加热醇提、醇提液再经减压浓缩后制备得到；制备的具体步骤为：先将原料及乙醇溶液加入提取容器中；开启加热装置对提取容器加热，一次提取完成后进行抽滤，将所得的滤渣再次加入到提取容器中，开启加热装置对提取容器加热，二次提取完成后进行抽滤，合并一次醇提液和二次醇提液，然后置于浓缩设备中进行减压浓缩得到膏状的阔叶十大功劳提取物，保存备用。本发明的提取物具有高效低毒、容易降解无残留、无污染、生态环保、成本低等优点，可以用于防治烟草黑胫病。
【专利说明】
一种阔叶十大功劳提取物及其制备方法和在抗烟草黑胫病中 的应用
技术领域
[0001] 本发明属于植物源制剂杀菌技术领域，尤其涉及一种十大功劳提取物及其制备方 法和在抗烟草黑胫病中的应用。
【背景技术】
[0002] 烟草黑腔病Phytophthora parasitica var.nicotianae(Vann Breda de Haan) 是我国烟草主要病害之一，在中国烟草平均发病率为5%~12%，严重田块发病率高达 75%，甚至造成绝收，给烟草生产造成了巨大的经济损失。据不完全统计，在1989-1991年的 烟草生产中，烟草花叶病毒病、赤星病、黑胫病、青枯病和根结线虫病5种主要病害导致的产 值损失超过15亿元。这5种病害中，烟草黑胫病导致的经济损失高达3.69亿元，黑胫病一旦 发生就会迅速蔓延，危害烟株健康，甚至造成烟田绝收，严重影响烟叶生产。
[0003] 如今，化学防治虽然仍然是主要的防治措施，但许多化学杀菌剂对烟叶的质量、生 态环境产生巨大的影响，已不能适应社会的发展。以植物提取物作为杀菌剂，具有易降解、 不污染环境、无残留的优点，同时，病原菌不易产生抗药性，对病原菌有很强的控制作用，因 此，利用植物提取物来防治烟草黑胫病，对提高烟叶品质、保障其安全性以及保持生态平衡 具有十分重要的意义。然而，现有技术中涉及防治烟草黑胫病的植物提取物的报导相对较 少，今早开发一种高效、低毒、广谱、不易产生抗性且低成本的植物提取物来防治烟草黑胫 病，就成为本领域人员亟待解决的技术难题。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是，克服以上【背景技术】中提到的不足和缺陷，提供一 种高效低毒、容易降解无残留、无污染、生态环保、成本低的阔叶十大功劳提取物，还相应提 供一种工艺简单、操作简便、原料来源广泛、成本低的阔叶十大功劳提取物的制备方法以及 其在抗烟草黑胫病中的应用。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为一种阔叶十大功劳提取物，所述 阔叶十大功劳提取物是以阔叶十大功劳为提取原料，以乙醇溶液作为提取溶剂，经至少两 次加热醇提、醇提液再经减压浓缩后制备得到。
[0006] 本发明上述技术方案的一大特点在于：首次提出了以药用植物阔叶十大功劳 (Mahonia bealei (Fort. )Carr)作为提取原料，来制备抗烟草黑腔病的药剂。阔叶十大功劳 的根茎中含有小檗碱、掌叶防己碱、药根碱、木兰碱等多种生物碱，具有清热解毒、消炎止痛 的功效，对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠菌有抑制作用，主治人体的痢疾、胃肠炎、传染 性肝炎、支气管炎等疾病，但是几乎没有人提出过将阔叶十大功劳应用于烟草黑胫病的防 治。我们将其应用于烟草黑胫病的防治上，这是我们经过反复研究对比后的重大发现，在现 有抗烟草黑胫病的植物提取药剂中几乎没有涉及到阔叶十大功劳这一原料，我们经过大量 试验研究，发现阔叶十大功劳提取物对烟草黑胫病具有极好的抑制作用。
[0007] 上述药用植物阔叶十大功劳的植物形态特征为小檗科十大功劳属植物，别名：十 大功劳、黄天竹、土黄柏、猫儿刺、土黄连、八角刺、刺黄柏；叶倒卵形至倒卵状披针形，总状 花序，花黄色；花瓣长圆形；花期7-9月，果期9-11月。阔叶十大功劳属暖温带植物，抗逆性 强、生物量大，也可进行人工栽培生产，作为植物源农药开发的原材料来源完全可以得到保 障，开发潜力大，具有良好的市场前景。
[0008] 作为一个总的技术构思，本发明还提供一种上述的阔叶十大功劳提取物的制备方 法，包括以下步骤：
[0009] (1)称取阔叶十大功劳作为原料，将原料及乙醇溶液加入提取容器中；
[0010] (2)开启加热装置对提取容器加热，控制加热温度不超过100°C，提取时间不少于 20min，一次提取完成后进行抽滤，得到一次醇提液和滤渣；
[0011] (3)将所得的滤渣再次加入到提取容器中，开启加热装置对提取容器加热，控制加 热温度不超过l〇〇°C，提取时间不少于20min，二次提取完成后进行抽滤，得到二次醇提液和 滤渣；
[0012] (4)合并所述的一次醇提液和二次醇提液，然后至于浓缩设备中进行减压浓缩得 到膏状的阔叶十大功劳提取物，保存备用。
[0013] 上述的制备方法，优选的，所述乙醇溶液的体积百分数控制在70%-80%。
[0014] 上述的制备方法，优选的，所述步骤(1)中，原料与乙醇溶液的质量比控制在1/(6-10)〇
[0015]上述的制备方法，优选的，所述步骤(2)和步骤(3)中，提取时的加热温度控制在90 。(:_95°C，提取时间控制在25min-35min。
[0016] 上述的制备方法，优选的，所述步骤（3)中，二次提取时滤渣与乙醇溶液的质量比 控制在1/(3-5)。
[0017] 上述的制备方法，优选的，所述步骤(4)中，所述浓缩设备为旋转蒸发仪，减压浓缩 时的转速为60_75r/min;制冷温度为-2°C . _10°C。.
[0018] 作为一个总的技术构思，本发明还提供一种上述本发明的阔叶十大功劳提取物在 抗烟草黑胫病中的应用。
[0019] 本发明在制得上述的阔叶十大功劳提取物后，采用室内毒力测定(平板抑菌试验 法)及活体药效试验(大田盆栽试验)相结合的方法，测试该本发明的提取物对烟草黑胫病 的防治作用。室内毒力测定结果表明：在平板抑菌试验中，本发明的提取物对黑胫病病原菌 的抑菌圈直径平均约为〇.6cm，试验结果表明该提取物的制剂对烟草黑胫病病原菌具有较 强的抑制活性。而盆栽活体试验结果表明：本发明的阔叶十大功劳提取物对盆栽烟草黑胫 病表现出了较好的防治效果，对烟草黑胫病的防治效果可高达80%左右。
[0020] 与现有技术相比，本发明的优点在于：
[0021] 1.本发明采用的阔叶十大功劳提取物是植物源制剂，利用本发明生产的提取物对 烟草黑胫病具有较好的离体及盆栽防治效果，可用于烟草黑胫病的有效防治。
[0022] 2.本发明的阔叶十大功劳提取物还具有容易降解、无残留的优点，其推广应用必 然可减少其他金属类化学药剂的施入，降低了土壤农残，对环境无污染，绿色、生态、环保。
[0023] 3.本发明的阔叶十大功劳提取物提取工艺流程简单，操作方便，容易提取生产。
[0024] 4.本发明的阔叶十大功劳植物分布广，容易大面积栽培生产，原料来源广，生产成 本低，将其开发成抗烟草黑胫病用杀菌药剂，可有效提高阔叶十大功劳的资源利用率，具有 较好的应用前景。
【附图说明】
[0025] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明 的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据 这些附图获得其他的附图。
[0026] 图1为本发明【具体实施方式】中对黑胫病菌抑制效果的对比照片;其中：CK是无菌水 对照、乙醇CK是5 %的乙醇溶液、处理12是指用5 %的乙醇溶液溶解的阔叶十大功劳提取物 溶剂。
【具体实施方式】
[0027] 为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明作更全 面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体的实施例。
[0028] 除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义 相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明 的保护范围。
[0029] 除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市 场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
[0030] 实施例：
[0031 ] -种本发明的阔叶十大功劳提取物，该阔叶十大功劳提取物是以阔叶十大功劳为 提取原料，以乙醇溶液作为提取溶剂，经至少两次加热醇提、醇提液再经减压浓缩后制备得 到。
[0032] 本实施例中阔叶十大功劳提取物的制备方法，具体包括以下步骤：
[0033] (1)首先将阔叶十大功劳粉碎，过200目筛，称取100.00g阔叶十大功劳作为原料， 倒入一电热套圆形瓶中，再将75%的乙醇溶液1000ml加入电热套圆形瓶中；
[0034] (2)开启加热装置(电热套)对电热套圆形瓶加热，控制加热温度为95°C，提取时间 为30min，一次提取完成后进行抽滤，得到一次醇提液和滤渣；
[0035] (3)将所得的滤渣再次加入到电热套圆形瓶中，并倒入75%的酒精500ml，开启加 热装置对电热套圆形瓶加热，控制加热温度为95°C，提取时间为30min，二次提取完成后进 行抽滤，得到二次醇提液和滤渣；
[0036] (4)合并所述的一次醇提液和二次醇提液，然后置于浓缩设备旋转蒸发仪圆形瓶 中（不超越总体积1/3)进行减压浓缩、旋转蒸发至膏状(旋转参数:60-75r/min;制冷温度 2.0°C~10°C )，得到膏状的阔叶十大功劳提取物，将其倒入瓶中，做好记载，贴好标签，保存 至冰箱中备用。
[0037]应用实施例1:平板抑菌试验。
[0038]采用菌丝生长速率法生物测定技术进行测定。
[0039]先将上述实施例中得到的阔叶十大功劳提取物用5%的乙醇溶液溶解，配制成500 倍浓度溶液备用，用打孔器在长满烟草黑胫病病原菌的培养基上切取菌饼，将菌饼放入提 取物溶液中浸泡5分钟，再转移到无菌空培养皿(直径90mn)中，置于25°C恒温箱中培养，3天 和5天后，以5%的乙醇溶液和无菌水作为空白对照，用十字交叉法测定抑菌圈直径。实验结 果如图1和下表1所示。
[0040] 表1:所示阔叶十大功劳提取物对黑胫病病原菌的抑制果。
[0041]
[0042]以上实验结果表明，阔叶十大功劳提取物对烟草黑胫病病原菌的抑菌圈直径平均 值为0.58cm，而5 %乙醇对照的菌圈直径平均值4.63cm，清水对照菌圈直径平均值5.23cm， 这表明上述制备方法获得的阔叶十大功劳提取物对烟草黑胫病病原菌的生长有明显的抑 制作用。
[0043]应用实施例2:盆栽活体实验。
[0044] 1.黑胫病病原菌由我们自行培养制备，阔叶十大功劳提取物采用本发明上述实施 例所述的方法制备获得的提取物，阳性对照药剂为精甲霜灵锰锌悬浮剂(市购），空白对照 为清水。
[0045] 2.供试烟苗采用的烤烟品种为K326，试验盆为直径33cm、高35cm的塑料桶，装土， 将长势一致的烟苗栽入盆中，供试验用。
[0046] 3.接种及调查方法。接种方法为灌根接种。接种的游动孢子液方法为:将在培养基 平板上培养了 7d的烟草黑胫病菌的菌丝连同培养基产生大量的孢子囊后加无菌水捣碎，制 成含有游动孢子的悬浮液每株烟灌l〇〇ml孢子液，灌根前松动根标土壤，造成根系微伤口。 接种后每天浇水1次保湿。接种后的烟株置于自然条件进行常规管理，病原菌接种后第24小 时进行第一次施药，施药方法为灌根，空白对照每株灌l〇〇〇ml无菌水，阳性对照灌1000ml甲 霜灵锰锌，试验对象每株灌l〇〇〇ml阔叶十大功劳提取物溶液，施药浓度为500倍液。一周以 后进行第二次施药。接种后30d调查各处理的发病情况，计算病情指数及防治效果。
[0047] 4.病情分级
[0048] 0级:全株无病。
[0049] 1级:茎部病斑不超过茎围的三分之一，或三分之一以下叶片凋萎。
[0050] 3级:茎部病斑环绕茎围三分之一至二分之一，或三分之一至二分之一叶片轻度凋 萎，或下部少数叶片出现病斑。
[0051 ] 5级：茎部病斑超过茎围的二分之一，但未全部环绕茎围，或二分之一至三分之二 叶片凋萎。
[0052] 7级:茎部病斑全部环绕茎围，或三分之二以上叶片凋萎。
[0053] 9级:病株基本枯死。
[0054] 5.调查数据及计算
[0055]药效计算方法参照以下方法进行：
[0056]
[0057]
[0058]
[0059] 6.试验结果
[0060] 通过盆栽试验发现，通过接种黑胫病病原菌后，各处理均有一定的发病，与清水对 照（不施药)相比较，CK药剂和阔叶十大功劳提取物的发病率、病情指数和防治效果均存在 极显著差异，具体数据见下表2,这说明阔叶十大功劳提取物对烟草黑胫病有极显著的防治 效果。
[0061 ]表2:阔叶十大功劳提取物防治黑胫病的防治效果（％ )
[0062]
【主权项】
1. 一种阔叶十大功劳提取物，其特征在于，所述阔叶十大功劳提取物是以阔叶十大功 劳为提取原料，以乙醇溶液作为提取溶剂，经至少两次加热醇提、醇提液再经减压浓缩后制 备得到。2. -种如权利要求1所述的阔叶十大功劳提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步 骤： (1) 称取阔叶十大功劳作为原料，将原料及乙醇溶液加入提取容器中； (2) 开启加热装置对提取容器加热，控制加热温度不超过100°C，提取时间不少于 20min，一次提取完成后进行抽滤，得到一次醇提液和滤渣； (3) 将所得的滤渣再次加入到提取容器中，开启加热装置对提取容器加热，控制加热温 度不超过l〇〇°C，提取时间不少于20min，二次提取完成后进行抽滤，得到二次醇提液和滤 渣； (4) 合并所述的一次醇提液和二次醇提液，然后置于浓缩设备中进行减压浓缩得到膏 状的阔叶十大功劳提取物，保存备用。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇溶液的体积百分数控制在 70%-80%〇4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中，原料与乙醇溶液的质 量比控制在1/(6-10)。5. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)和步骤(3)中，提取时的 加热温度控制在90°C-95°C，提取时间控制在25min-35min。6. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，二次提取时滤渣与乙 醇溶液的质量比控制在1/(3-5)。7. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述浓缩设备为旋转 蒸发仪，减压浓缩时的转速为60_75r/min;制冷温度为-2°C_10°C。8. -种如权利要求1所述的或者如权利要求2-7中任一项所述制备方法获得的阔叶十 大功劳提取物在抗烟草黑胫病中的应用。
【文档编号】A01N65/08GK105994386SQ201610383334
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月2日
【发明人】周佳民, 巢进, 朱三荣, 宋荣, 曹亮, 朱校奇
【申请人】湖南省农业生物资源利用研究所