一种研究趋避物质对小菜蛾产卵行为影响的方法
【专利摘要】本发明涉及昆虫行为研究，通过在液体琼脂培养基中加入试验所需的趋避物质，制备得到了可用于研究不同趋避物质对小菜蛾产卵行为影响的产卵饵基。给小菜蛾成虫创造一个封闭环境，并放入产卵饵基供其产卵。根据需求及时更换产卵饵基，并统计数据。可根据数据获得小菜蛾对不同趋避物质或不同浓度的趋避物质的产卵趋避性，产卵前期时长，产卵时间规律等产卵行为数据。所述产卵饵基有较好的热熔性，并能提供一定湿度，在室温状态下能具有光滑的表面，能给小菜蛾成虫提供空间支撑。本发明方法可用于进行不同情况下小菜蛾产卵行为的各项参数统计，在室内环境探究小菜蛾对不同物质产卵趋避性，为田间昆虫防治方案提供新型研究方法。
【专利说明】
一种研究趋避物质对小菜蛾产卵行为影响的方法
技术领域
[0001]本发明涉及昆虫行为研究领域，具体地说，涉及小菜蛾产卵行为研究。
【背景技术】
[0002]小菜蛾是一种常见的十字花科作物害虫，最早发生于地中海地区，现已广泛分布于世界各地，因其发生面积巨大，为害时期长，抗性发展迅速，防治难度较大，现已代替菜青虫成为十字花科蔬菜头号杀手。小菜蛾的繁殖能力极强，自然条件下，每雌可产150-400粒卵，可使种群迅速扩大。它对于寄主也有极强的选择性，对于不同的植物表现出趋避性。对于异硫氰酸酯含量高的作物，例如芥菜、白菜等展现特殊偏好，并且在不同的寄主上，产卵特征也不尽相同，有些为散产，有些作堆。小菜蛾的产卵行为与小菜蛾种群发展密切相关，研究小菜蛾的产卵行为能为田间防治提供新思路;寻找小菜蛾产卵趋避性物质能为田间防治提供新方法。
[0003]目前用于小菜蛾产卵行为调查的方法包括大田抽样统计和实验室活体植株、离体组织饲养统计。大田抽样统计是最常用的方法，该统计方法需要在田间完成且受天气和环境影响较大；以往的室内统计方法需要使用植株或组织，无法探究小菜蛾对于某一特定物质产卵的趋避性，也无法研究不同物质浓度(种植密度)对于小菜蛾产卵行为的影响。
[0004]周琼等通过将待测样品滴加到滤纸上，研究了苍耳留醇类物质对小菜蛾的产卵及趋向行为选择的影响(苍耳留醇类物质对小菜蛾的产卵及趋向行为选择的影响，周琼等，环境昆虫学报，Mar ch 2011，3 3 (I): 5 2-5 7)。然而该方法中滤纸的表面粗糙且湿度难以维持，无法满足小菜蛾对产卵环境的高湿度和光滑表面的要求，导致小菜蛾对滤纸和周围环境的选择性相近。本发明提供了一种能长时间维持湿度并提供光滑表面的产卵饵基，小菜蛾成虫对此饵基的选择性极高，统计数据准确且大幅降低更换频率，减少人工成本。
【发明内容】
[0005]为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种研究趋避物质对小菜蛾产卵行为影响的方法。
[0006]为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下:
[0007]—种研究趋避物质对小菜蛾产卵行为影响的方法，利用含有趋避物质的产卵饵基，研究趋避物质对小菜蛾产卵行为的影响;所述产卵饵基的成分包括:琼脂、趋避物质和抗生素。
[0008]可选的，所述抗生素为卡那霉素。添加卡那霉素用于防止细菌在培养基上生长，因为部分菌落也为黄色圆形，和卵形态相似，干扰统计。根据实际情况也可更换为其他抗生素。
[0009]优选地，所述产卵饵基中，琼脂的质量浓度为I?2%。浓度太低，琼脂块不易成型，难以给成虫提供支持空间;浓度太高，凝结速度太快，无法添加物质搅匀。
[0010]趋避物质的浓度可以根据实验需求随意调整。本基质可以比较不同浓度趋避物质的效果，因此趋避物质的浓度是一个变量。
[0011]卡那霉素的浓度依照一般培养基的惯例添加，优选卡那霉素终浓度50ug/mL。
[0012]进一步地，所述产卵饵基的制备方法为:向不高于40°C的液体琼脂培养基中加入趋避物质和卡那霉素，搅拌均匀，冷却凝固后即得。高于40°C将影响趋避物质和卡那霉素发挥效力。
[0013]进一步地，搅拌均匀后，分装至直径3cm的培养皿中，每皿5mL。该用量即可保证产卵饵基中相应成分效力的发挥，还可保证一定的水平，且产卵饵基的厚度适中，适于用于小菜蛾产卵行为的研究。
[0014]进一步地，研究趋避物质对小菜蛾产卵行为影响的方法具体包括如下步骤:
[0015](I)产卵环境制作:将任意对发育状况相近的敏感小菜蛾蛹放入养虫笼内，当笼内雌虫开始羽化时，在笼内放置所述产卵饵基供其产卵；
[0016]所述产卵饵基的放置数量依小菜蛾蛹数量而定，每3?4对小菜蛾蛹配置一个产卵令耳基;
[0017](2)按照实验需求设置更换产卵饵基的频率h:统计产卵特性时，将频率h设定为4?12小时;统计产卵趋避性时，将频率h设定为12?48小时；
[0018](3)数据收集:出现第一个卵粒时产卵饵基的批次N;单粒卵数量ai和作堆卵块数量a2;在第η批产卵饵基和培养皿内壁的卵量An;其中，η为产卵饵基的批次；
[0019]在产卵后期，当每皿卵量小于5粒时，停止计数，并判定产卵终止；
[0020](4)产卵前期计算:Ho = N(h-0.5);
[0021 ] (5)产卵量统计:ai/a2彡I，判定小菜蛾产卵为散产，否则为作堆产卵；
[0022](6)产卵时间规律统计:在(n-1 )h到nh之间时刻，小菜蛾的平均产卵量*An/h，也可认定为(n-0.5) h时刻的产卵量，据此绘制图表，分析小菜蛾产卵时间规律；
[0023](7)产卵趋避性统计:统计小菜蛾整个产卵期的产卵总量A= Σ An，用t测验检验不同实验组的差异显著性。
[0024]所述产卵饵基的放置位置可随意，但相对于集中放置，优选为分散放置。
[0025]作为优选，为了更好的使小菜蛾保持正常生理状态，在笼内放置营养液供小菜蛾成虫维持生命。可选的，所述营养液为蜂蜜水。
[0026]进一步地，所述步骤(I)可将多对发育状况相近的敏感小菜蛾蛹平均分成多组进行观察，也可依照实验要求调整到单对每组，并设置不同的重复。
[0027]记数时，若产卵数量过大且比较均匀，可在产卵饵基的培养皿后作十字线，抽样统计1/4皿的产卵量。
[0028]本发明的有益效果在于:
[0029]本发明通过在液体琼脂培养基中加入试验所需的趋避物质，制备得到了可用于研究不同趋避物质对小菜蛾产卵行为影响的产卵饵基。给小菜蛾成虫创造一个封闭环境，并放入产卵饵基供其产卵。根据需求及时更换产卵饵基，并统计数据。可根据数据获得小菜蛾对不同趋避物质或不同浓度的趋避物质的产卵趋避性，产卵前期时长，产卵时间规律等产卵行为数据。所述产卵饵基有较好的热熔性，并能提供一定湿度，在室温状态下能具有光滑的表面，能给小菜蛾成虫提供空间支撑。
[0030]本发明取材简单，结果直观明了，可用于进行不同情况下小菜蛾产卵行为的各项参数统计，在室内环境探究小菜蛾对不同物质产卵趋避性，为田间昆虫防治方案提供新型研究方法。不仅克服了传统观察方法的地域限制以及无法探究小菜蛾对于某一特定物质趋避性的缺陷，也克服了现有技术中利用滤纸进行小菜蛾对趋避物质产卵趋性统计法中小菜蛾对滤纸选择性不强的缺陷。
【附图说明】
[0031]图1为本发明所述产卵基质与产卵饵基。
[0032 ]图2为本发明实施例2中的小菜蛾产卵时间统计。
[0033 ]图3为本发明实施例3中的小菜蛾产卵趋避性统计。
【具体实施方式】
[0034]以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0035]下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
[0036]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0037]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0038]实施例1小菜蛾产卵前期测定
[0039]1.研究对象
[0040]本实施例的研究对象为实验室饲养多代的小菜蛾种群。
[0041]2.方法
[0042]利用本发明所述产卵饵基引诱小菜蛾产卵，统计产卵前期长度。
[0043]2.1产卵饵基的配制
[0044]在45ml蒸馏水内加入Ig琼脂粉，120°C、30分钟高压蒸汽灭菌，冷却到45°C待用。在上述液体琼脂培养基中，加入5ml蒸馈水，卡那霉素50ul(50mg/ml)，迅速搅拌均勾，用胶头滴管分装至直径3cm养皿中，每皿5ml，室温冷却凝固得到含趋避物质的产卵饵基。
[0045]2.2产卵环境制作:
[0046]将150对发育状况相近的敏感小菜蛾蛹平均分成三组，放入养虫笼内。当笼内雌虫开始羽化时，在笼内放入产卵t耳基，摆放位置随机且尽量分散，每8小时一换。在笼内放入蜂蜜水供成虫维持生命，维持温度20?25°C，相对湿度50%?75%，光照16L:8D。
[0047]2.3数据统计
[0048]记录第一个出现小菜蛾卵粒的产卵饵基的如下数据:
[0049]N=3 ο
[0050]在第三个产卵饵基上第一次出现卵粒，小菜蛾的产卵前期约为20小时。
[0051 ]实施例2小菜蛾产卵时间规律
[0052]1.研究对象
[0053]本实施例的研究对象为实验室饲养多代的小菜蛾种群。
[0054]2.方法
[0055]利用本发明所述产卵饵基引诱小菜蛾产卵，统计产卵前期长度。
[0056]2.1趋避物质制作
[0057]圆白菜处理:圆白菜叶洗净晾干，选取叶脉较少部分，除去可见叶脉，待用。
[0058]称取圆白菜叶肉15g，剪碎。放至研钵内，反复研磨直至组织完全被破坏。在锥形漏斗内垫上8层纱布，并润湿。用金属勺将研磨内容转移至漏斗中，挤压过滤，并用少量蒸馏水洗涤研钵，勺子和研磨内容，再次挤压过滤。收集过滤物，用蒸馈水定容至1ml。
[0059]2.2产卵饵基的配制
[0060]在45ml蒸馏水内加入Ig琼脂粉，120°C、30分钟高压蒸汽灭菌，冷却到45°C待用。在上述液体琼脂培养基中，加入5ml上述引诱物质，卡那霉素50ul(50mg/ml)，迅速搅拌均勾，用胶头滴管分装至直径3cm养皿中，每皿5ml，室温冷却凝固得到含趋避物质的产卵饵基，在对照组内加入和趋避物质等量的蒸馏水。
[0061 ] 2.2产卵环境制作:
[0062]将150对发育状况相近的敏感小菜蛾蛹平均分成三组，放入养虫笼内。当笼内雌虫开始羽化时，在笼内放入产卵t耳基，摆放位置随机且尽量分散，每24小时一换。在笼内放入蜂蜜水供成虫维持生命，维持温度20?25°C，相对湿度50%?75%，光照16L:8D。
[0063]2.3数据统计
[0064]记录每个皿内小菜蛾卵粒数量。
[0065]小菜蛾产卵时间曲线明显呈现一个峰(如图2)，不同引诱物质呈现的峰也不一样。
[0066]实施例3小菜蛾产卵趋避性统计
[0067]1.研究对象
[0068]本实施例的研究对象为实验室饲养多代的小菜蛾种群。
[0069]2.方法
[0070]利用本发明所述产卵饵基引诱小菜蛾产卵，统计产卵前期长度。
[0071]2.1引诱物质制作
[0072]圆白菜处理:圆白菜叶洗净晾干，选取叶脉较少部分，除去可见叶脉，待用。
[0073]萝卜苗处理:选取健康的长至6cm的萝卜苗，剪断胚轴，收集带子叶部分，并除去子叶未出种壳幼苗，待用。
[0074]称取圆白菜叶肉或者萝卜苗15g，剪碎。放至研钵内，反复研磨直至组织完全被破坏。在锥形漏斗内垫上8层纱布，并润湿。用金属勺将研磨内容转移至漏斗中，挤压过滤，并用少量蒸馏水洗涤研钵，勺子和研磨内容，再次挤压过滤。收集过滤物，用蒸馏水定容至1ml ο
[0075]2.2产卵基质配制
[0076]在45ml蒸馏水内加入Ig琼脂粉，120°C、30分钟高压蒸汽灭菌，冷却到45°C待用。在上述液体琼脂培养基中，加入5ml上述引诱物质，卡那霉素50ul(50mg/ml)，迅速搅拌均勾，用胶头滴管分装至直径3cm养皿中，每皿5ml，室温冷却凝固得到含趋避物质的产卵饵基，在对照组内加入和趋避物质等量的蒸馏水(见图1)。
[0077]2.2产卵环境制作:
[0078]将150对发育状况相近的敏感小菜蛾蛹平均分成三组，放入养虫笼内。当笼内雌虫开始羽化时，在笼内放入产卵t耳基，摆放位置随机且尽量分散，每8小时一换。在笼内放入蜂蜜水供成虫维持生命，维持温度20?25°C，相对湿度50%?75%，光照16L:8D。
[0079]2.3数据统计
[0080]记录每个皿内小菜蛾卵粒数量。
[0081]不同处理的产卵饵基上卵粒累加结果如图3，通过t测验，可直观得出小菜蛾对于不同物质的趋避性。
[0082]虽然上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1.一种研究趋避物质对小菜蛾产卵行为影响的方法，其特征在于，利用含有趋避物质的产卵饵基，研究趋避物质对小菜蛾产卵行为的影响;所述产卵饵基的成分包括:琼脂、趋避物质和抗生素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述产卵饵基中，琼脂的质量浓度为I?3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述产卵饵基的制备方法为:向不高于40°C的液体琼脂培养基中加入趋避物质和卡那霉素，搅拌均匀，冷却凝固后即得。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，搅拌均匀后，分装至直径3cm的培养皿中，每皿5mL。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤: (1)产卵环境制作:将任意对发育状况相近的敏感小菜蛾蛹放入养虫笼内，当笼内雌虫开始羽化时，在笼内放置所述产卵饵基供其产卵； 所述产卵饵基的放置数量依小菜蛾蛹数量而定，每3?4对小菜蛾蛹配置一个产卵饵基; (2)按照实验需求设置更换产卵饵基的频率h:统计产卵特性时，将频率h设定为4?12小时;统计产卵趋避性时，将频率h设定为12?48小时； (3)数据收集:出现第一个卵粒时产卵饵基的批次N;单粒卵数量&1和作堆卵块数量a2;在第η批产卵饵基和培养皿内壁的卵量An;其中，η为产卵饵基的批次； 在产卵后期，当每皿卵量小于5粒时，停止计数，并判定产卵终止； (4)产卵前期计算:Ho= N(h-0.5); (5)产卵量统计:ai/a2多I，判定小菜蛾产卵为散产，否则为作堆产卵； (6)产卵时间规律统计:在(n-l)h到nh之间时刻，小菜蛾的平均产卵量为An/h，也可认定为(n-0.5) h时刻的产卵量，据此绘制图表，分析小菜蛾产卵时间规律； (7)产卵趋避性统计:统计小菜蛾整个产卵期的产卵总量A=ΣΑη，用t测验检验不同实验组的差异显著性。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述产卵饵基分散放置。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在笼内放置营养液供小菜蛾成虫维持生命O8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述营养液为蜂蜜水。9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)可将多对发育状况相近的敏感小菜蛾蛹平均分成多组进行观察，也可依照实验要求调整到单对每组，并设置不同的重复。10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，若产卵数量过大且比较均匀，可在产卵饵基的培养皿后作十字线，抽样统计1/4皿的产卵量。
【文档编号】A01K67/033GK106035239SQ201610371816
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月30日
【发明人】高希武, 李楚蕊, 刘晓岚
【申请人】中国农业大学