一种巴豆组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种巴豆组织培养的快速繁殖方法，包括巴豆种子的消毒、无菌苗的获得、丛生芽的增殖、生根培养、壮苗培养、炼苗移栽等步骤，本发明方法建立了巴豆再生体系，该体系可应用于其种质资源的保存、繁殖及遗传改良的研究，以弥补以往人们采用传统模式改良巴豆种质的不足。
【专利说明】
一种巴豆组织培养的快速繁殖方法
技术领域
[0001]本发明涉及巴豆组织培养的快繁方法，属于植物栽培技术领域。【背景技术】
[0002] 巴豆，大戟科，又称双眼龙、江子、猛子树等，Croto/3，灌木或小乔木， 高3-6米，嫩枝被稀疏星状柔毛，枝条无毛，叶纸质，卵形，稀椭圆形，总状花序，顶生，蒴果椭圆状，被疏生短星状毛或近无毛，种子椭圆状，长约1厘米，直径6-7毫米，花期4-6月，生于村旁或山地疏林中，喜温暖湿润气候，不耐寒，怕霜冻，喜阳光，在气温17-19°C、年雨量 1000mm、全年日照1000h、无霜期300d以上的地区适宜栽培，当温度低于3°C时幼苗叶全部枯死，以阳光充足、土层深厚、疏松肥沃、排水良好的砂质壤土栽培为宜，产于浙江南部、福建、 江西、湖南、广东、海南、广西、贵州、四川和云南等省区。巴豆辛热，有大毒，属于热性泻药， 可温肠泻积、逐水消胀、宿食积滞以及涤荡肠胃中的沉寒痼冷，也常用于外疗疮疡，破积解毒。此外，巴豆油对皮肤黏膜有刺激，内服有峻泻作用，有很强的杀虫抗菌能力。目前巴豆主要用种子繁殖，自然成活率低，不能满足市场的需求。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供巴豆的快速繁殖方法，本发明方法建立了巴豆再生体系，该体系可应用于其种质资源的保存、繁殖及遗传改良的研究，以弥补以往人们采用传统模式改良巴豆种质的不足。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:水筛去除空壳巴豆种子，饱和洗衣粉浸泡30min，流水冲洗干净，无菌水浸泡2d，充分吸胀，临接种的前一天晚上换上1%KI浸泡15h，正式接种前，75%乙醇浸泡lmin，0.1%升汞浸泡消毒25min，无菌水冲洗5遍，沥干备用，消毒处理过的巴豆种子接入VW培养基中进行无菌苗的诱导，附加蔗糖45g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8,光照20001x，温度25°C，诱导出来的无菌苗切去根部接入培养基3/4VW+NAA0.2mg/L+Ad0.25mg/L进行芽增殖培养，附加蔗糖30g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8,光照20001x，温度25°C，增殖后的芽苗在4°C冷藏10天，接入培养基3/4VW+ NAA0.2mg/L中进行生根诱导，附加蔗糖50g/L，卡拉胶4.5g/L，pH5.85，光照lOOOOlx，温度28 °C，生根后的试管苗放入VW+乙酸镧3-5mg/L+烯效唑0.1-1.0mg/L培养基中进行壮苗培养， 附加蔗糖50g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8,光照150001X，温度28°C，将长高至15cm、长根大于5根的组培苗带瓶移至大棚内，放置5天打开瓶盖，在28°C，湿度85%，光照80001x条件下炼苗5 天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到消毒处理过的腐殖土:草炭:蛭石= 2:1:1的混合基质中，温度保持28°C，前3d湿度控制在90%，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。
[0005]采用本发明制备的巴豆生长健壮，成活率高，生长周期短，操作简单，无污染。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
水筛去除空壳巴豆种子，饱和洗衣粉浸泡30min，流水冲洗干净，无菌水浸泡2d，充分吸胀，临接种的前一天晚上换上1%KI浸泡15h，正式接种前，75%乙醇浸泡Imin，0.1%升汞浸泡消毒25min，无菌水冲洗5遍，沥干备用，消毒处理过的巴豆种子接入VW培养基中进行无菌苗的诱导，附加蔗糖45g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8，光照20001x，温度25°C，诱导出来的无菌苗切去根部接入培养基3/4VW+ NAA0.2mg/L+Ad0.25mg/L进行芽增殖培养，附加蔗糖30g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8，光照20001x，温度25°C，增殖后的芽苗在4°C冷藏10天，接入培养基3/4VW+NAA0.2mg/L中进行生根诱导，附加蔗糖50g/L，卡拉胶4.5g/L，pH5.85，光照ΙΟΟΟΟΙχ，温度280C，生根后的试管苗放入VW+乙酸镧3mg/L+烯效唑0.lmg/L培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖50g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8，光照150001x，温度28°C，将长高至15cm、长根大于5根的组培苗带瓶移至大棚内，放置5天打开瓶盖，在280C，湿度85%，光照80001x条件下炼苗5天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到消毒处理过的腐殖土:草炭:蛭石=2:1:1的混合基质中，温度保持28°C，前3d湿度控制在90%，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，巴豆的成活率89%。
[0008]实施例2
水筛去除空壳巴豆种子，饱和洗衣粉浸泡30min，流水冲洗干净，无菌水浸泡2d，充分吸胀，临接种的前一天晚上换上1%KI浸泡15h，正式接种前，75%乙醇浸泡Imin，0.1%升汞浸泡消毒25min，无菌水冲洗5遍，沥干备用，消毒处理过的巴豆种子接入VW培养基中进行无菌苗的诱导，附加蔗糖45g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8，光照20001x，温度25°C，诱导出来的无菌苗切去根部接入培养基3/4VW+NAA0.2mg/L+Ad0.25mg/L进行芽增殖培养，附加蔗糖30g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8，光照20001x，温度25°C，增殖后的芽苗在4°C冷藏10天，接入培养基3/4VW+NAA0.2mg/L中进行生根诱导，附加蔗糖50g/L，卡拉胶4.5g/L，pH5.85，光照ΙΟΟΟΟΙχ，温度28°C，生根后的试管苗放入VW+乙酸镧5mg/L+烯效唑1.0mg/L培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖50g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8，光照150001x，温度28°C，将长高至15cm、长根大于5根的组培苗带瓶移至大棚内，放置5天打开瓶盖，在280C，湿度85%，光照80001x条件下炼苗5天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到消毒处理过的腐殖土:草炭:蛭石=2:1:1的混合基质中，温度保持28°C，前3d湿度控制在90%，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，巴豆的成活率91%。
[0009]实施例3
水筛去除空壳巴豆种子，饱和洗衣粉浸泡30min，流水冲洗干净，无菌水浸泡2d，充分吸胀，临接种的前一天晚上换上1%KI浸泡15h，正式接种前，75%乙醇浸泡Imin，0.1%升汞浸泡消毒25min，无菌水冲洗5遍，沥干备用，消毒处理过的巴豆种子接入VW培养基中进行无菌苗的诱导，附加蔗糖45g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8，光照20001x，温度25°C，诱导出来的无菌苗切去根部接入培养基3/4VW+NAA0.2mg/L+Ad0.25mg/L进行芽增殖培养，附加蔗糖30g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8，光照20001x，温度25°C，增殖后的芽苗在4°C冷藏10天，接入培养基3/4VW+NAA0.2mg/L中进行生根诱导，附加蔗糖50g/L，卡拉胶4.5g/L，pH5.85，光照ΙΟΟΟΟΙχ，温度280C，生根后的试管苗放入VW+乙酸镧4mg/L+烯效唑0.5mg/L培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖50g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8,光照150001x，温度28°C，将长高至15cm、长根大于5根的组培苗带瓶移至大棚内，放置5天打开瓶盖，在28°C，湿度85%，光照80001x条件下炼苗5天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到消毒处理过的腐殖土:草炭:蛭石=2:1:1的混合基质中，温度保持28°C，前3d湿度控制在90%，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，巴豆的成活率93%。
【主权项】
1.一种巴豆组织培养的快速繁殖方法，包括巴豆种子的消毒、无菌苗的获得、丛生芽的增殖、生根培养、壮苗培养、炼苗移栽，其主要步骤如下: (1)取巴豆的种子，进行消毒处理； (2)取步骤(I)消毒处理过的巴豆种子接入VW培养基中进行无菌苗的诱导，附加蔗糖458/1，卡拉胶78/1，？!15.8，光照200011，温度25°(:; (3)取步骤(2)诱导出来的无菌苗切去根部接入培养基3/4VW+NAA0.2mg/L+Ad0.25mg/L进行芽增殖培养，附加蔗糖30g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8，光照20001x，温度25°C ; (4)取步骤(3)增殖后的芽苗接入培养基3/4VW+NAA0.2mg/L中进行生根诱导，附加蔗糖50g/L，卡拉胶4.5g/L，pH5.85，光照1000lx，温度28°C ； (5)取步骤(4)生根后的试管苗放入VW+乙酸镧3-5mg/L+烯效唑0.1-1.0mg/!培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖50g/L，卡拉胶7g/L，pH5.8，光照15000Ix，温度28°C ; (6)取步骤(5)壮苗后的巴豆试管苗进行炼苗移栽。2.按照权利要求1所述的一种巴豆组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述巴豆无菌种子的获得为:水筛去除空壳巴豆种子，饱和洗衣粉浸泡30min，流水冲洗干净，无菌水浸泡2d，充分吸胀，临接种的前一天晚上换上1%KI浸泡15h，正式接种前，75%乙醇浸泡Imin，0.1%升萊浸泡消毒25min，无菌水冲洗5遍，沥干备用。3.按照权利要求1所述的一种巴豆组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(3)增殖培养后的巴豆芽苗在4°C冷藏10天，再转接到生根培养基中。4.按照权利要求1所述的一种巴豆组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(6)中巴豆试管苗炼苗移栽的方法为将长高至15cm、长根大于5根的组培苗带瓶移至大棚内，放置5天打开瓶盖，在28 °C，湿度85%，光照80001x条件下炼苗5天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到消毒处理过的重量比为腐殖土:草炭:蛭石=2:1:1的混合基质中，温度保持28°C，前3d湿度控制在90%，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。
【文档编号】A01H4/00GK106069758SQ201610455617
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月22日
【发明人】杨成东
【申请人】南京泽朗生物科技有限公司