一种檵木组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种檵木组织培养的快速繁殖方法，包括种子的消毒、无菌苗的获得、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根诱导、炼苗移栽等步骤。本发明方法以檵木为材料，通过对比分析不同的激素配比对檵木快速繁殖的影响，以期为该植物快繁体系的建立以及种质遗传改良等奠定一定的基础。
【专利说明】
一种繼木组织培养的快速繁殖方法
技术领域
[0001]本发明涉及组培条件下檻木组培的培养，属于生物技术领域。【背景技术】
[0002]檻木，Zo_r〇j〇eta_/? cAiflaosis (R.Br.) Oliv?，金缕梅科，又称白花檻木，灌木， 稀为小乔木，高达12米，径30厘米;小枝有锈色星状毛，4种及1变种，分布于亚洲东部的亚热带地区，我国有3种及1变种，产长江中下游及其以南、北回归线以北地区。喜阴植物，但不排斥阳光，常用做绿化苗木，比如蓠笆，绿化带，多生于山野及丘陵灌丛中。花含槲皮素和异槲皮苷;叶含没食子酸、鞣质、黄酮类(主要是槲皮素)。根、叶、花果均能入药，能解热止血、通经活络、收敛止血，清热解毒，止泻。目前主要采用播种或扦插的方法进行繁殖，繁殖率普遍较低，组织培养可以为檻木的繁殖提供新的途径，但至今尚未见报道。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供檻木组织培养的快速繁殖方法，本发明以檻木为材料，通过对比分析不同的激素配比对檻木快速繁殖的影响，以期为该植物快繁体系的建立以及种质遗传改良等奠定一定的基础。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案:选用檻木的种子，先用自来水冲洗lh左右，然后用50%(v/v)硫酸在30°C下水浴lOmin， 自来水冲洗5min后用研钵研磨5min以去除种皮，清水冲洗，消毒用75%(v/v)酒精溶液处理 20S，再用0.1%(w/v)升汞溶液消毒8min，无菌水漂洗5遍，每次3min，接种在改良⑶+ZT2mg/L +NAA0.05mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂培养基上进行无菌苗培养，将诱导出来的无菌苗切去根部接入培养基改良GD+6-BA2 ? 0mg/L+NAA0 ? 5mg/L+IBA0 ? 15g/L+Ce(N〇3)2〇 ? 5-1 ? 0mg/L+ Na2M〇040.5-1.0mg/L+蔗糖15mg/L+7g/L琼脂培养基中进行丛生芽增殖培养，无菌苗和丛生芽诱导的培养条件为自然光照，温度25 °C，湿度65%，增殖培养继代2次后接入MS+2,4-D0.02mg/L+维生素B2 1-1.5g/L+ABT0.3-0.5g/L培养基中进行生根诱导，条件为附加蔗糖 2%，琼脂0.6%，光照强度80001x，光照10h/d，温度25°C，湿度65%，直到幼苗长成(约3-4周)， 待根长至4cm，根数大于3，将带根幼苗洗去根部残留培养基后，移栽到含黄心土:花卉营养土(1:2)的营养钵中，前一周内用大烧杯罩苗，以保持湿度，有利于保持组培苗的驯化，待幼苗生长健壮后，定植于温室。
[0005]采用本发明制备的檻木，组培成活率高，遗传性状稳定，生长周期短。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。【具体实施方式】
[0007]实施例1选取檻木的种子，先用自来水冲洗lh左右，然后用50%(v/v)硫酸在30°C下水浴10min，自来水冲洗5min后用研钵研磨5min以去除种皮，清水冲洗，消毒用75%(v/v)酒精溶液处理20S，再用0.1%(w/v)升汞溶液消毒8min，无菌水漂洗5遍，每次3min，接种在改良⑶+ZT2mg/L+NAA0.05mg/L+30g/L蔗糖+7g/lJ京脂培养基上进行无菌苗培养，将诱导出来的无菌苗切去根部接入培养基改良GD+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.15g/L+Ce (NO3)20.5mg/L+Na2MoO40.5mg/L+蔗糖15mg/L+7g/L琼脂培养基中进行丛生芽增殖培养，无菌苗和丛生芽诱导的培养条件为自然光照，温度25°C，湿度65%，增殖培养继代2次后接入MS+2，4-D0.02mg/L+维生素B2 lg/L+ABT0.3g/L培养基中进行生根诱导，条件为附加蔗糖2%，琼脂0.6%，光照强度80001x，光照10h/d，温度25°C，湿度65%，直到幼苗长成(约3-4周)，待根长至4cm，根数大于3，将带根幼苗洗去根部残留培养基后，移栽到含黄心土:花卉营养土(1:2)的营养钵中，前一周内用大烧杯罩苗，以保持湿度，有利于保持组培苗的驯化，待幼苗生长健壮后，定植于温室，30天后成活率89%。
[0008]实施例2
选取檻木的种子，先用自来水冲洗Ih左右，然后用50%(v/v)硫酸在30°C下水浴lOmin，自来水冲洗5min后用研钵研磨5min以去除种皮，清水冲洗，消毒用75%(v/v)酒精溶液处理20S，再用0.1%(w/v)升汞溶液消毒8min，无菌水漂洗5遍，每次3min，接种在改良⑶+ZT2mg/L+NAA0.05mg/L+30g/L蔗糖+7g/lJ京脂培养基上进行无菌苗培养，将诱导出来的无菌苗切去根部接入培养基改良GD+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.15g/L+Ce (NO3) 2l.0mg/L+Na2MoOU.0mg/L+蔗糖15mg/L+7g/L琼脂培养基中进行丛生芽增殖培养，无菌苗和丛生芽诱导的培养条件为自然光照，温度25°C，湿度65%，增殖培养继代2次后接入MS+2，4-D0.02mg/L+维生素B2 1.5g/L+ABT0.5g/L培养基中进行生根诱导，条件为附加蔗糖2%，琼脂0.6%，光照强度8000Ix，光照10h/d，温度25°C，湿度65%，直到幼苗长成(约3_4周)，待根长至4cm，根数大于3，将带根幼苗洗去根部残留培养基后，移栽到含黄心土:花卉营养土(1:2)的营养钵中，前一周内用大烧杯罩苗，以保持湿度，有利于保持组培苗的驯化，待幼苗生长健壮后，定植于温室，30天后成活率91%。
[0009]实施例3
选取檻木的种子，先用自来水冲洗Ih左右，然后用50%(v/v)硫酸在30°C下水浴lOmin，自来水冲洗5min后用研钵研磨5min以去除种皮，清水冲洗，消毒用75%(v/v)酒精溶液处理20S，再用0.1%(w/v)升汞溶液消毒8min，无菌水漂洗5遍，每次3min，接种在改良⑶+ZT2mg/L+NAA0.05mg/L+30g/L蔗糖+7g/lJ京脂培养基上进行无菌苗培养，将诱导出来的无菌苗切去根部接入培养基改良GD+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.15g/L+Ce (NO3) 2l.0mg/L+Na2MoO40.5mg/L+蔗糖15mg/L+7g/L琼脂培养基中进行丛生芽增殖培养，无菌苗和丛生芽诱导的培养条件为自然光照，温度25°C，湿度65%，增殖培养继代2次后接入MS+2，4-D0.02mg/L+维生素B2 lg/L+ABT0.5g/L培养基中进行生根诱导，条件为附加蔗糖2%，琼脂0.6%，光照强度80001x，光照10h/d，温度25°C，湿度65%，直到幼苗长成(约3-4周)，待根长至4cm，根数大于3，将带根幼苗洗去根部残留培养基后，移栽到含黄心土:花卉营养土(1:2)的营养钵中，前一周内用大烧杯罩苗，以保持湿度，有利于保持组培苗的驯化，待幼苗生长健壮后，定植于温室，30天后成活率92%。
【主权项】
1.一种檻木组织培养的快速繁殖方法，其特征是:檻木的种子经消毒处理，接种在改良⑶+ZT2mg/L+NAA0.05mg/L+30g//L蔗糖+7g/l琼脂培养基上进行无菌苗培养，将诱导出来的无菌苗切去根部接入培养基改良GD+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.15g/L+Ce(N03)20.5-1.0mg/L+Na2Mo040.5-1.0mg/L+蔗糖15mg/L+7g/L琼脂培养基中进行丛生芽增殖培养，增殖培养继代2次后接入MS+2，4-D0.02mg/L+维生素B2 1-1.5g/L+ABT0.3-0.5g/L培养基中进行生根诱导，待根长至4cm，根数大于3时取出炼苗移栽。2.根据权利要求1所述的一种檻木组织培养的快速繁殖方法，其特征是:所述的消毒处理为:选用檻木的种子，先用自来水冲洗Ih左右，然后用50%(v/v)硫酸在30 °C下水浴1min，自来水冲洗5min后用研钵研磨5min以去除种皮，清水冲洗，消毒用75%(v/v)酒精溶液处理20S，再用0.l%(w/v)升萊溶液消毒8min，无菌水漂洗5遍，每次3min。3.根据权利要求1所述的一种檻木组织培养的快速繁殖方法，其特征是:无菌苗和丛生芽诱导的培养条件为自然光照，温度25°C，湿度65%。4.根据权利要求1所述的一种檻木组织培养的快速繁殖方法，其特征是:生根诱导的条件为附加蔗糖2%，琼脂0.6%，光照强度80001x，光照10h/d，温度25°C，湿度65%。5.A根据权利要求1所述的一种檻木组织培养的快速繁殖方法，其特征是:炼苗移栽的方法为直到幼苗长成(约3-4周)，将带根幼苗洗去根部残留培养基后，移栽到含黄心土:花卉营养土(1:2)的营养钵中，前一周内用大烧杯罩苗，以保持湿度，有利于保持组培苗的驯化，待幼苗生长健壮后，定植于温室。
【文档编号】A01H4/00GK106069760SQ201610455632
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月22日
【发明人】杨成东
【申请人】南京泽朗生物科技有限公司