一种大高良姜组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种大高良姜组织培养的快速繁殖方法，包括大高良姜茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽等步骤，本发明方法通过探讨培养基添加剂和激素用量等因子对大高良姜组织培养的影响，确定了适应大高良姜生长的最适条件，缩短了生长周期，提高成活率，为选育优良的植物性状提供了机会。
【专利说明】
一种大高良姜组织培养的快速繁殖方法
技术领域
[0001]本发明涉及大高良姜组织培养的快繁方法，属于植物栽培技术领域。【背景技术】
[0002] 大高良姜，姜科，别名大良姜、山姜、良姜大高良姜， 多年生丛生草本，高1.5-2.5m，根茎粗壮，圆形，有节，棕红色并略有辛辣味，叶2列，无叶柄或极短;叶片长圆形或宽披针形，圆锥花序顶生，花冠管与萼管略等长，裂片3,长圆形，唇瓣倒卵形至长圆形，子房下位，无毛，花柱细长，柱头略膨大，蒴果长圆形，不开裂，熟时橙红色。种子多角形，棕黑色，花期6-7月，果期7-10月，生于山坡、旷野的草地或灌丛中，分布于广东、海南、广西、云南。根茎含栓皮酸甲酯，樟脑，桉叶素，丁香油酚，和￠-蒎烯(pinene)， 柠檬烯，具有温胃；散寒;行气止痛之功效，目前通过国内外文献检索，尚未发现有关大高良姜栽培的报道。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供大高良姜组织培养的快速繁殖方法，本发明通过探讨培养基添加剂和激素用量等因子对大高良姜组织培养的影响，确定了适应大高良姜生长的最适条件，缩短了生长周期，提高成活率，为选育优良的植物性状提供了机会。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:取生长情况良好的大高良姜的带芽茎段，用软毛刷将其表面的灰尘轻轻刷去，再使用超声波清洗仪对大高良姜茎段表面进行清洗，然后清水冲净，用紫外灯照射20min，超净工作台上75%酒精浸泡10s，1%的溴水溶液浸泡15min，无菌水浸泡5次，每次浸泡lOmin，消毒处理过的大高良姜带芽茎段接入F14+KT0.lmg/L+IAA0.lmg/L+ZT0.lmg/L+100yg/mL的硫酸链霉素培养基中进行腋芽的诱导，硫酸链霉素采用过滤灭菌，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L， PH5.8,光照15001x，光期12h，温度25°C，诱导出来的腋芽接入培养基F14+TDZ0.5mg/L+ IAA0.lmg/L，并添加精氨酸20-30mg/L、天冬氨酸30-40mg/L、谷氨酸40-50mg/L进行增殖培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.58/1，？耶.8，光照300011，光期1211，温度25°(:，增殖后的芽苗接入培养基F14+NAA0 ? 2mg/L+ZT0 ? 5mg/L+5-氨基乙酰丙酸l-3mg/L中进行生根诱导，附加蔗糖 15g/L，琼脂5g/L，pH5.85，光照180001X，温度28°C，苗出瓶前先移到自然的散射光下，拧松瓶盖锻炼一周，洗净培养基，用600倍的甲基托布津淋苗定根，淋足淋透，使苗根与基质土紧密接触，移植后一周室内湿度接近100%，一周以后揭盖透气，逐渐延长透气时间，最终苗完全适应自然环境。
[0005]采用本发明制备的大高良姜成活率高，培养过程简单易控，无污染，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取生长情况良好的大高良姜的带芽茎段，用软毛刷将其表面的灰尘轻轻刷去，再使用超声波清洗仪对大高良姜茎段表面进行清洗，然后清水冲净，用紫外灯照射20min，超净工作台上75%酒精浸泡1s，1%的溴水溶液浸泡15min，无菌水浸泡5次，每次浸泡1min，消毒处理过的大高良姜带芽茎段接入F14+KT0.lmg/L+IAA0.lmg/L+ZT0.lmg/L+100yg/mL的硫酸链霉素培养基中进行腋芽的诱导，硫酸链霉素采用过滤灭菌，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，PH5.8，光照15001x，光期12h，温度25°C，诱导出来的腋芽接入培养基F14+TDZ0.5mg/L+IAA0.lmg/L，并添加精氨酸20mg/L、天冬氨酸30mg/L、谷氨酸40mg/L进行增殖培养，附加鹿糖3(^/1，琼脂6.58/1，？!15.8，光照300011，光期1211，温度25°(:，增殖后的芽苗接入培养基F14+NAA0.2mg/L+ZT0.5mg/L+5_氨基乙酰丙酸lmg/L中进行生根诱导，附加蔗糖15g/L，琼脂5g/L，pH5.85，光照18000Ix，温度28°C，苗出瓶前先移到自然的散射光下，拧松瓶盖锻炼一周，洗净培养基，用600倍的甲基托布津淋苗定根，淋足淋透，使苗根与基质土紧密接触，移植后一周室内湿度接近100%，一周以后揭盖透气，逐渐延长透气时间，最终苗完全适应自然环境，大高良姜成活率90%。
[0008]实施例2
取生长情况良好的大高良姜的带芽茎段，用软毛刷将其表面的灰尘轻轻刷去，再使用超声波清洗仪对大高良姜茎段表面进行清洗，然后清水冲净，用紫外灯照射20min，超净工作台上75%酒精浸泡1s，1%的溴水溶液浸泡15min，无菌水浸泡5次，每次浸泡1min，消毒处理过的大高良姜带芽茎段接入F14+KT0.lmg/L+IAA0.lmg/L+ZT0.lmg/L+100yg/mL的硫酸链霉素培养基中进行腋芽的诱导，硫酸链霉素采用过滤灭菌，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，PH5.8，光照15001x，光期12h，温度25°C，诱导出来的腋芽接入培养基F14+TDZ0.5mg/L+ΙΑΑ0.lmg/L，并添加精氨酸30mg/L、天冬氨酸40mg/L、谷氨酸50mg/L进行增殖培养，附加鹿糖3(^/1，琼脂6.58/1，？!15.8，光照300011，光期1211，温度25°(:，增殖后的芽苗接入培养基F14+NAA0.2mg/L+ZT0.5mg/L+5_氨基乙酰丙酸3mg/L中进行生根诱导，附加蔗糖15g/L，琼脂5g/L，pH5.85，光照18000Ix，温度28°C，苗出瓶前先移到自然的散射光下，拧松瓶盖锻炼一周，洗净培养基，用600倍的甲基托布津淋苗定根，淋足淋透，使苗根与基质土紧密接触，移植后一周室内湿度接近100%，一周以后揭盖透气，逐渐延长透气时间，最终苗完全适应自然环境，大高良姜成活率91%。
[0009]实施例3
取生长情况良好的大高良姜的带芽茎段，用软毛刷将其表面的灰尘轻轻刷去，再使用超声波清洗仪对大高良姜茎段表面进行清洗，然后清水冲净，用紫外灯照射20min，超净工作台上75%酒精浸泡1s，1%的溴水溶液浸泡15min，无菌水浸泡5次，每次浸泡1min，消毒处理过的大高良姜带芽茎段接入F14+KT0.lmg/L+IAA0.lmg/L+ZT0.lmg/L+100yg/mL的硫酸链霉素培养基中进行腋芽的诱导，硫酸链霉素采用过滤灭菌，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，PH5.8，光照15001x，光期12h，温度25°C，诱导出来的腋芽接入培养基F14+TDZ0.5mg/L+ΙΑΑ0.lmg/L，并添加精氨酸30mg/L、天冬氨酸30mg/L、谷氨酸50mg/L进行增殖培养，附加鹿糖3(^/1，琼脂6.58/1，？!15.8，光照300011，光期1211，温度25°(:，增殖后的芽苗接入培养基F14+NAA0 ? 2mg/L+ZT0 ? 5mg/L+5-氨基乙酰丙酸2mg/L中进行生根诱导，附加蔗糖15g/L，琼脂 5g/L，pH5.85，光照180001X，温度28°C，苗出瓶前先移到自然的散射光下，拧松瓶盖锻炼一周，洗净培养基，用600倍的甲基托布津淋苗定根，淋足淋透，使苗根与基质土紧密接触，移植后一周室内湿度接近100%，一周以后揭盖透气，逐渐延长透气时间，最终苗完全适应自然环境，大高良姜成活率93%。
【主权项】
1.一种大高良姜组织培养的快速繁殖方法，包括大高良姜外植体的无菌处理、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽，其主要步骤如下: (1)取大高良姜的带芽茎段，对其进行消毒处理； (2)取步骤(I)消毒处理过的大高良姜带芽茎段接入F14+KT0.1mg/L+IAA0.1mg/L+ZT0.lmg/L培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照1500Ix，光期1211，温度25°(:; (3)取步骤(2)诱导出来的腋芽接入培养基F14+TDZ0.5mg/L+IAA0.1mg/L，并添加精氨酸20-30mg/L、天冬氨酸30-40mg/L、谷氨酸40-50mg//L进行增殖培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照3000Ix，光期12h，温度25°C ； (4)取步骤(3)增殖后的芽苗接入培养基F14+NAA0.2mg/L+ZT0.5mg/L+5_氨基乙酰丙酸l-3mg/L中进行生根诱导，附加蔗糖15g/L，琼脂5g/L，pH5.85，光照180001x，温度28°C; (5)取步骤(4)生根后的试管苗进行炼苗移栽。2.按照权利要求1所述的一种大高良姜组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(1)中所述大高良姜带芽茎段的消毒方法为:取生长情况良好的大高良姜的带芽茎段，用软毛刷将其表面的灰尘轻轻刷去，再使用超声波清洗仪对大高良姜茎段表面进行清洗，然后清水冲净，用紫外灯照射20min，超净工作台上75%酒精浸泡10s，1%的溴水溶液浸泡15min，无菌水浸泡5次，每次浸泡I Omin。3.按照权利要求1所述的一种大高良姜组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)中添加抗生素100yg/mL的硫酸链霉素，采用过滤灭菌。4.按照权利要求1所述的一种大高良姜组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(3)中添加的精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和步骤(4)中添加的5-氨基乙酰丙酸高温宜分解，都采用过滤灭菌。5.按照权利要求1所述的一种大高良姜组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(5)中大高良姜炼苗移栽的方法为:苗出瓶前先移到自然的散射光下，拧松瓶盖锻炼一周，洗净培养基，用600倍的甲基托布津淋苗定根，淋足淋透，使苗根与基质土紧密接触，移植后一周室内湿度接近100%，一周以后揭盖透气，逐渐延长透气时间，最终苗完全适应自然环境。
【文档编号】A01H4/00GK106069762SQ201610455940
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月22日
【发明人】杨成东
【申请人】南京泽朗生物科技有限公司