一种用混合相二氧化钛抗菌的方法

文档序号:10700653阅读:633来源:国知局
一种用混合相二氧化钛抗菌的方法
【专利摘要】本发明涉及一种用混合相二氧化钛抗菌的方法,属于一种抗菌方法。本发明提供的用混合相二氧化钛抗菌的方法是采用锐钛矿和金红石质量比例不同的混合相二氧化钛用于杀伤细菌的方法,与纯相的锐钛矿和纯相的金红石型二氧化钛相比,混合型二氧化钛具有更强的抗菌效果。并且该方法简单易行,处理过程简易。本发明用锐钛矿和金红石质量比例为3:7?7:3的混合相二氧化钛对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行了抗菌检测,取得了很好的抗菌效果,锐钛矿和金红石质量比例为4:6的混合相二氧化钛的抗菌效果最佳。
【专利说明】
一种用混合相二氧化钛抗菌的方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种抗菌方法,具体涉及一种用混合相二氧化钛抗菌的方法。
【背景技术】
[0002]二氧化钛存在不同的晶型,主要有锐钛矿型,金红石型和板钛矿型。二氧化钛由于具有很强的光氧化能力,是目前最广泛使用的杀菌材料之一,在水净化,空调和材料的自清洁方面有着很重要的应用。二氧化钛的杀菌性能是在光照的条件下进行的,在光照下,二氧化钛吸收光的能量,产生电子和空穴,电子可以与环境中的氧作用,产生氧负离子,空穴可以与水生成羟基自由基,而氧负离子和羟基自由基具有强氧化性,可以损坏细菌的细胞板,细胞膜,破坏DNA等,从而达到杀菌的效果。目前,已经有报道单相锐钛矿型或金红石型二氧化钛都具有很好的杀菌性能,未见用混合相二氧化钛进行杀菌的报道。

【发明内容】

[0003]本发明的目的是提供一种杀菌效果更强的抗菌方法,进而提供一种用混合相二氧化钛抗菌的方法。
[0004]为了实现上述目的,本发明的技术方案具体如下:
[0005]—种用混合相二氧化钛抗菌的方法,包括以下步骤:
[0006](I)、制备混合相二氧化钛纳米粒子
[0007]将钛酸异丙酯溶解在正丁醇、硝酸和P123混合液中,室温下搅拌以获得暗黄色胶体,将该暗黄色胶体于120 0C处理4小时,再在900-970 V下空气环境中处理8_20小时,即可获得不同锐钛矿和金红石质量比例的混合相二氧化钛纳米粒子;
[0008](2)、对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子进行灭菌处理后配制成5mg/mL的水溶液;
[0009](3)、培养细菌,在波长600nm测试培养的细菌OD值,OD值为0.1时备用;
[0010](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子水溶液加入260yL细菌培养基(LB)配制成2.4mg/mL的纳米粒子溶液;取15(^1^ 2.411^/111]^的纳米粒子溶液和10(^1^步骤(3)得到的细菌溶液加入到96孔板中,做三个孔的平行试验;对纳米粒子溶液进行对倍稀释,纳米粒子溶液终浓度依次为:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、Oyg/mL ;将得到的96孔板用太阳光模拟器照射30min,用酶标仪测试每个孔的OD值,作为初始数值,测试完成后,将96孔板拿到摇床中,开灯培养,摇床的速度为120rpm,后每隔一个小时测一次,一共米集之后6个点,制作不同浓度纳米粒子溶液条件下随时间变化的细菌生长曲线。
[0011]在上述技术方案中,所得混合相二氧化钛纳米粒子的锐钛矿和金红石质量比例为3:7-7:3o
[0012]在上述技术方案中,所得混合相二氧化钛纳米粒子的锐钛矿和金红石质量比例为4:6。
[0013]在上述技术方案中,步骤(I)的具体步骤为:
[0014]在150mL烧瓶中,将0.0lmol钛酸异丙酯溶解在0.094mol正丁醇、0.016mol硝酸和1.72 X 10—4H1l P123混合液中,室温下强力搅拌以获得透明的暗黄色胶体,将获得的暗黄色胶体120 0C处理4小时,再在900-970 °C下空气环境中处理8_20小时,即可获得不同锐钛矿和金红石质量比例的混合相二氧化钛纳米粒子。
[0015]在上述技术方案中,步骤(2)的具体步骤为:
[0016 ] 对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子用水和乙醇各清洗两次,用0.4 5μπι的滤膜进行过滤,收集滤液中的纳米粒子,在60 0C烘箱烘干,配制成5mg/mL的水溶液,并进行超声处理24h。
[0017]在上述技术方案中,步骤(3)的具体步骤为:
[0018]将细菌菌种20yL放入ImL LB中,放在摇床中,摇床的速度是120rpm,温度为37°C,开灯进行培养,用比色皿测细菌在波长600nm的OD值,当OD值为0.1时备用。
[0019]在上述技术方案中,步骤(4)用涂布平板法对混合相二氧化钛进行抗菌检测,具体步骤如下:
[0020]将步骤(3)得到的细菌溶液稀释10000倍,取1yL稀释后的细菌溶液与90yL800yg/mL的纳米粒子溶液混合,光照30min后涂布,涂布时取20yL混合液,放置30min,待细菌溶液完全被培养基吸收后,倒置培养,过夜后照相。
[0021]本发明的有益效果是:
[0022]本发明提供的用混合相二氧化钛抗菌的方法是采用锐钛矿和金红石混合相二氧化钛用于杀伤细菌的方法,与纯相的锐钛矿和纯相的金红石型二氧化钛相比,混合型二氧化钛具有更强的抗菌效果。并且该方法简单易行,处理过程简易。
[0023]本发明用锐钛矿和金红石质量比例为3:7-7:3的混合相二氧化钛对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行了抗菌检测,取得了很好的抗菌效果,锐钛矿和金红石质量比例为4:6的混合相二氧化钛的抗菌效果最佳。
【附图说明】
[0024]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明作进一步详细说明。
[0025]图1为不同锐钛矿和金红石质量比例的混合相二氧化钛的XRD图。
[0026]图2为加入二氧化钛纳米粒子后,不同时间测试的大肠杆菌在600nm的吸收图。
[0027]图3为加入二氧化钛纳米粒子后,不同时间测试的金黄色葡萄球菌在600nm的吸收图。
[0028]图4为加入二氧化钛纳米粒子后,平板涂布法涂布后,大肠杆菌培养过夜的细菌生长图。
[0029]图5为加入二氧化钛纳米粒子后,平板涂布法涂布后,金黄色葡萄球菌培养过夜的细菌生长图。
【具体实施方式】
[0030]下面结合附图对本发明做以详细说明。
[0031 ] 一种用混合相二氧化钛抗菌的方法,包括以下步骤:
[0032](I)、制备混合相二氧化钛纳米粒子
[0033]在150mL烧瓶中,将0.0111101(2.848)钛酸异丙酯溶解在0.09411101(78)正丁醇、0.016mo I (I g)硝酸和1.72 X I O—4mo I P123混合液中,室温下强力搅拌以获得透明的暗黄色胶体,将获得的暗黄色胶体120°C处理4小时,再在900-970°C下空气环境中处理8-20小时,即可获得不同锐钛矿和金红石质量比例的混合相二氧化钛纳米粒子;
[0034](2)、对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子用水和乙醇各清洗两次,用0.45μm的滤膜进行过滤,收集滤液中的纳米粒子,在60 0C烘箱烘干,配制成5mg/mL的水溶液,并进行超声处理24h。
[0035](3)、将金黄色葡萄球菌(简称S)或大肠杆菌(简称E)菌种20yL放入ImLLB中,放在摇床中,摇床的速度是120rpm,温度为37°C,开灯进行培养,用比色皿测上述两种细菌在波长600nm的OD值,当OD值为0.1时备用。
[0036](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子水溶液加入260yL细菌培养基(LB)配制成2.4mg/mL的纳米粒子溶液;取15(^1^ 2.411^/111]^的纳米粒子溶液和10(^1^步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液加入到96孔板中,做三个孔的平行试验;对纳米粒子溶液进行对倍稀释,纳米粒子溶液终浓度依次为:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/1^;将得到的96孔板用太阳光模拟器照射301^11,用酶标仪测试每个孔的00值,作为初始数值,测试完成后,将96孔板拿到摇床中,开灯培养,摇床的速度为120rpm,后每隔一个小时测一次,一共采集之后6个点,制作不同浓度纳米粒子溶液条件下随时间变化的细菌生长曲线。
[0037]用涂布平板法对混合相二氧化钛进行抗菌检测,具体步骤如下:
[0038](I)、制备混合相二氧化钛纳米粒子
[0039]在150mL烧瓶中,将0.0111101(2.848)钛酸异丙酯溶解在0.09411101(78)正丁醇、0.016mo I (I g)硝酸和1.72 X I O—4mo I P123混合液中,室温下强力搅拌以获得透明的暗黄色胶体,将获得的暗黄色胶体120°C处理4小时,再在900-970°C下空气环境中处理8-20小时,即可获得不同锐钛矿和金红石质量比例的混合相二氧化钛纳米粒子;
[0040](2)、对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子用水和乙醇各清洗两次,用0.45μm的滤膜进行过滤,收集滤液中的纳米粒子,在60 0C烘箱烘干,配制成5mg/mL的水溶液,并进行超声处理24h。
[0041 ] (3)、将金黄色葡萄球菌(简称S)或大肠杆菌(简称E)菌种20yL放入ImLLB中,放在摇床中,摇床的速度是120rpm,温度为37 V,开灯进行培养,用比色皿测细菌在波长600nm的OD值,当OD值为0.1时备用。
[0042](4)将步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液稀释10000倍,取1yL稀释后的细菌溶液与90yL 800yg/mL的纳米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子溶液是取144yL5mg/ml的纳米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的),光照30min后涂布,涂布时取20yL混合液,放置30min,待细菌溶液完全被培养基吸收后,倒置培养,过夜后照相。
[0043]实施例1
[0044](I)、在150mL烧瓶中,将0.0lmol (2.84g)钛酸异丙酯溶解在0.094mol (7g)正丁醇,0.01611101(18)硝酸_03和1.72\10—411101 P123混合液中,室温下强力搅拌以获得透明的暗黄色胶体,将获得的暗黄色胶体120 °C处理4小时。再在900°C下空气环境中处理8小时,得到锐钛矿和金红石质量比例为7:3的混合相二氧化钛(标记为A7:R3)。
[0045](2)、对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子用水和乙醇各清洗两次,用0.45μm的滤膜进行过滤,收集滤液中的纳米粒子,在60 0C烘箱烘干,配制成5mg/mL的水溶液,并进行超声处理24h。
[0046](3)、将金黄色葡萄球菌(简称S)或大肠杆菌(简称E)菌种20yL放入ImLLB中,放在摇床中,摇床的速度是120rpm,温度为37°C,开灯进行培养,用比色皿测金黄色葡萄球菌或大肠杆菌在波长600nm的OD值,当OD值为0.1时备用。
[0047](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子水溶液加入260yL LB配制成2.4mg/mL的纳米粒子溶液;取150yL 2.4mg/mL的纳米粒子溶液和I OOyL步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液加入到96孔板中,做三个孔的平行试验;对纳米粒子溶液进行对倍稀释,纳米粒子溶液终浓度依次为:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/mL;将得到的96孔板用太阳光模拟器照射30min,用酶标仪测试每个孔的OD值,作为初始数值,测试完成后,将96孔板拿到摇床中,开灯培养,摇床的速度为120rpm,后每隔一个小时测一次,一共采集之后6个点,制作不同浓度纳米粒子溶液条件下随时间变化的细菌生长曲线。
[0048]用涂布平板法对混合相二氧化钛进行抗菌检测,具体步骤如下:
[0049]步骤(I)、步骤(2)和步骤(3)同上。
[0050](4)将步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液稀释10000倍,取1yL稀释后的细菌溶液与90yL 800yg/mL的纳米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子溶液是取144yL5mg/ml的纳米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的),光照30min后涂布,涂布时取20yL混合液,放置30min,待细菌溶液完全被培养基吸收后,倒置培养,过夜后照相。
[0051 ] 实施例2
[0052](I)、在150ml烧瓶中,将0.0lmol (2.84g)钛酸异丙酯溶解在0.094mol (7g)正丁醇,0.01611101(18)硝酸_03和1.72\10—411101 P123混合液中,室温下强力搅拌以获得透明的暗黄色胶体,将获得的暗黄色胶体120°C处理4小时。再在950°C下空气环境中处理13小时,得到锐钛矿和金红石质量比例为4:6的混合相二氧化钛(标记为A4:R6)。
[0053](2)、对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子用水和乙醇各清洗两次,用0.45μm的滤膜进行过滤,收集滤液中的纳米粒子,在60 0C烘箱烘干,配制成5mg/mL的水溶液,并进行超声处理24h。
[0054](3)、将金黄色葡萄球菌(简称S)或大肠杆菌(简称E)菌种20yL放入ImLLB中,放在摇床中,摇床的速度是120rpm,温度为37°C,开灯进行培养,用比色皿测金黄色葡萄球菌或大肠杆菌在波长600nm的OD值,当OD值为0.1时备用。
[0055](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子水溶液加入260yL LB配制成2.4mg/mL的纳米粒子溶液;取150yL 2.4mg/mL的纳米粒子溶液和I OOyL步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液加入到96孔板中,做三个孔的平行试验;对纳米粒子溶液进行对倍稀释,纳米粒子溶液终浓度依次为:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/mL;将得到的96孔板用太阳光模拟器照射30min,用酶标仪测试每个孔的OD值,作为初始数值,测试完成后,将96孔板拿到摇床中,开灯培养,摇床的速度为120rpm,后每隔一个小时测一次,一共采集之后6个点,制作不同浓度纳米粒子溶液条件下随时间变化的细菌生长曲线。
[0056]用涂布平板法对混合相二氧化钛进行抗菌检测,具体步骤如下:
[0057]步骤(I)、步骤(2)和步骤(3)同上。
[0058](4)将步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液稀释10000倍,取1yL稀释后的细菌溶液与90yL 800yg/mL的纳米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子溶液是取144yL 5mg/ml的纳米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的),光照30min后涂布,涂布时取20yL混合液,放置30min,待细菌溶液完全被培养基吸收后,倒置培养,过夜后照相。
[0059]实施例3
[0060](I)、在150ml烧瓶中,将0.0lmol (2.84g)钛酸异丙酯溶解在0.094mol (7g)正丁醇,0.01611101(18)硝酸_03和1.72\10—411101 P123混合液中,室温下强力搅拌以获得透明的暗黄色胶体,将获得的暗黄色胶体120°C处理4小时。再在970°C下空气环境中处理20小时,得到锐钛矿和金红石质量比为3:7的混合相二氧化钛(标记为A3:R7)。
[0061](2)、对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子用水和乙醇各清洗两次,用0.45μm的滤膜进行过滤,收集滤液中的纳米粒子,在60 0C烘箱烘干,配制成5mg/mL的水溶液,并进行超声处理24h。
[0062](3)、将金黄色葡萄球菌(简称S)或大肠杆菌(简称E)菌种20yL放入ImLLB中,放在摇床中,摇床的速度是120rpm,温度为37°C,开灯进行培养,用比色皿测金黄色葡萄球菌或大肠杆菌在波长600nm的OD值,当OD值为0.1时备用。
[0063](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子水溶液加入260yL LB配制成2.4mg/mL的纳米粒子溶液;取150yL 2.4mg/mL的纳米粒子溶液和I OOyL步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液加入到96孔板中,做三个孔的平行试验;对纳米粒子溶液进行对倍稀释,纳米粒子溶液终浓度依次为:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/mL;将得到的96孔板用太阳光模拟器照射30min,用酶标仪测试每个孔的OD值,作为初始数值,测试完成后,将96孔板拿到摇床中,开灯培养,摇床的速度为120rpm,后每隔一个小时测一次,一共采集之后6个点,制作不同浓度纳米粒子溶液条件下随时间变化的细菌生长曲线。
[0064]用涂布平板法对混合相二氧化钛进行抗菌检测,具体步骤如下:
[0065]步骤(I)、步骤(2)和步骤(3)同上。
[0066](4)将步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液稀释10000倍,取1yL稀释后的细菌溶液与90yL 800yg/mL的纳米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子溶液是取144yL 5mg/ml的纳米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的),光照30min后涂布,涂布时取20yL混合液,放置30min,待细菌溶液完全被培养基吸收后,倒置培养,过夜后照相。
[0067]对比例I
[0068](I)、在150ml烧瓶中,将0.0lmol (2.84g)钛酸异丙酯溶解在0.094mol (7g)正丁醇,
0.01611101(18)硝酸_03和1.72\10—411101 P123混合液中,室温下强力搅拌以获得透明的暗黄色胶体,将获得的暗黄色胶体120 °C处理4小时。再在600 °C下空气环境中处理4小时,得到锐钛矿型二氧化钛(标记为A)。
[0069](2)、对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子用水和乙醇各清洗两次,用0.45μm的滤膜进行过滤,收集滤液中的纳米粒子,在60 0C烘箱烘干,配制成5mg/mL的水溶液,并进行超声处理24h。
[0070](3)、将金黄色葡萄球菌(简称S)或大肠杆菌(简称E)菌种20yL放入ImLLB中,放在摇床中,摇床的速度是120rpm,温度为37°C,开灯进行培养,用比色皿测金黄色葡萄球菌或大肠杆菌在波长600nm的OD值,当OD值为0.1时备用。
[0071](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子水溶液加入260yL LB配制成2.4mg/mL的纳米粒子溶液;取150yL 2.4mg/mL的纳米粒子溶液和I OOyL步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液加入到96孔板中,做三个孔的平行试验;对纳米粒子溶液进行对倍稀释,纳米粒子溶液终浓度依次为:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/mL;将得到的96孔板用太阳光模拟器照射30min,用酶标仪测试每个孔的OD值,作为初始数值,测试完成后,将96孔板拿到摇床中,开灯培养,摇床的速度为120rpm,后每隔一个小时测一次,一共采集之后6个点,制作不同浓度纳米粒子溶液条件下随时间变化的细菌生长曲线。
[0072]用涂布平板法对混合相二氧化钛进行抗菌检测,具体步骤如下:
[0073]步骤(I)、步骤(2)和步骤(3)同上。
[0074](4)将步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液稀释10000倍,取1yL稀释后的细菌溶液与90yL 800yg/mL的纳米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子溶液是取144yL 5mg/ml的纳米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的),光照30min后涂布,涂布时取20yL混合液,放置30min,待细菌溶液完全被培养基吸收后,倒置培养,过夜后照相。
[0075]对比例2
[0076](I)、在150ml烧瓶中,将0.0lmol (2.84g)钛酸异丙酯溶解在0.094mol (7g)正丁醇,
0.01611101(18)硝酸_03和1.72\10—411101 P123混合液中,室温下强力搅拌以获得透明的暗黄色胶体,将获得的暗黄色胶体120 °C处理4小时。再在1000°C下空气环境中处理24小时,得到金红石型二氧化钛(标记为R)。
[0077](2)、对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子用水和乙醇各清洗两次,用0.45μm的滤膜进行过滤,收集滤液中的纳米粒子,在60 0C烘箱烘干,配制成5mg/mL的水溶液,并进行超声处理24h。
[0078](3)、将金黄色葡萄球菌(简称S)或大肠杆菌(简称E)菌种20yL放入ImLLB中,放在摇床中,摇床的速度是120rpm,温度为37°C,开灯进行培养,用比色皿测金黄色葡萄球菌或大肠杆菌在波长600nm的OD值,当OD值为0.1时备用。
[0079](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子水溶液加入260yL LB配制成
2.4mg/mL的纳米粒子溶液;取150yL 2.4mg/mL的纳米粒子溶液和I OOyL步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液加入到96孔板中,做三个孔的平行试验;对纳米粒子溶液进行对倍稀释,纳米粒子溶液终浓度依次为:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/mL;将得到的96孔板用太阳光模拟器照射30min,用酶标仪测试每个孔的OD值,作为初始数值,测试完成后,将96孔板拿到摇床中,开灯培养,摇床的速度为120rpm,后每隔一个小时测一次,一共采集之后6个点,制作不同浓度纳米粒子溶液条件下随时间变化的细菌生长曲线。
[0080]用涂布平板法对混合相二氧化钛进行抗菌检测,具体步骤如下:
[0081]步骤(I)、步骤(2)和步骤(3)同上。
[0082](4)将步骤(3)得到的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌溶液稀释10000倍,取1yL稀释后的细菌溶液与90yL 800yg/mL的纳米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子溶液是取144yL 5mg/ml的纳米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的),光照30min后涂布,涂布时取20yL混合液,放置30min,待细菌溶液完全被培养基吸收后,倒置培养,过夜后照相。
[0083 ]图1为不同锐钛矿和金红石质量比例的二氧化钛的XRD图。通过XRD计算,可以看出来,随着高温处理温度的不同,锐钛矿和金红石型的质量比例发生了变化。
[0084]图2为加入二氧化钛纳米粒子后,不同时间测试的大肠杆菌在600nm的吸收值;从图中可以看出加入混合型二氧化钛后,大肠杆菌的生长明显被抑制。
[0085]图3为加入二氧化钛纳米粒子后,不同时间测试的金黄色葡萄球菌在600nm的吸收值;从图中可以看出加入混合型二氧化钛后,金黄色葡萄球菌的生长明显被抑制。
[0086]图4为加入二氧化钛纳米粒子后,平板涂布法涂布后,大肠杆菌培养过夜的照片;从图中可以看出加入混合型二氧化钛后,大肠杆菌的生长非常缓慢,远远落后于未加纳米粒子的。
[0087]图5为加入二氧化钛纳米粒子后,平板涂布法涂布后,金黄色葡萄球菌培养过夜的照片;从图中可以看出加入混合型二氧化钛后,金黄色葡萄球菌的生长非常缓慢,远远落后于未加纳米粒子的。
[0088]显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
【主权项】
1.一种用混合相二氧化钛抗菌的方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)、制备混合相二氧化钛纳米粒子 将钛酸异丙酯溶解在正丁醇、硝酸和P123混合液中,室温下搅拌以获得暗黄色胶体,将该暗黄色胶体于120 0C处理4小时,再在900-970 V下空气环境中处理8_20小时,即可获得不同锐钛矿和金红石质量比例的混合相二氧化钛纳米粒子; (2)、对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子进行灭菌处理后配制成5mg/mL的水溶液; (3)、培养细菌,在波长600nm测试培养的细菌OD值,OD值为0.1时备用; (4)、取240yL5mg/mL的混合相二氧化钛纳米粒子水溶液加入260yL细菌培养基(LB)配制成2.4mg/mL的纳米粒子溶液;取15(^ 2.4mg/mL的纳米粒子溶液和10yL步骤(3)得到的细菌溶液加入到96孔板中,做三个孔的平行试验;对纳米粒子溶液进行对倍稀释,纳米粒子溶液终浓度依次为:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、Oyg/mL ;将得到的96孔板用太阳光模拟器照射30min,用酶标仪测试每个孔的OD值,作为初始数值,测试完成后,将96孔板拿到摇床中,开灯培养,摇床的速度为120rpm,后每隔一个小时测一次,一共米集之后6个点,制作不同浓度纳米粒子溶液条件下随时间变化的细菌生长曲线。2.根据权利要求1所述的用混合相二氧化钛抗菌的方法,其特征在于,所得混合相二氧化钛纳米粒子的锐钛矿和金红石质量比例为3:7-7: 3。3.根据权利要求1所述的用混合相二氧化钛抗菌的方法,其特征在于,所得混合相二氧化钛纳米粒子的锐钛矿和金红石质量比例为4:6。4.根据权利要求1所述的用混合相二氧化钛抗菌的方法,其特征在于,步骤(I)的具体步骤为: 在150mL烧瓶中,将0.0111101钛酸异丙酯溶解在0.09411101正丁醇、0.01611101硝酸和1.72X 10—4H1l P123混合液中,室温下强力搅拌以获得透明的暗黄色胶体,将获得的暗黄色胶体120°C处理4小时,再在900-970°C下空气环境中处理8-20小时,即可获得不同锐钛矿和金红石质量比例的混合相二氧化钛纳米粒子。5.根据权利要求1所述的用混合相二氧化钛抗菌的方法,其特征在于,步骤(2)的具体步骤为: 对步骤(I)制备的混合相二氧化钛纳米粒子用水和乙醇各清洗两次,用0.45μπι的滤膜进行过滤,收集滤液中的纳米粒子,在60 0C烘箱烘干,配制成5mg/mL的水溶液,并进行超声处理24h。6.根据权利要求1所述的用混合相二氧化钛抗菌的方法,其特征在于,步骤(3)的具体步骤为: 将细菌菌种20yL放入ImL LB中,放在摇床中,摇床的速度是120rpm,温度为37°C,开灯进行培养,用比色皿测细菌在波长600nm的OD值,当OD值为0.1时备用。7.根据权利要求1-6任意一项所述的用混合相二氧化钛抗菌的方法,其特征在于,步骤(4)用涂布平板法对混合相二氧化钛进行抗菌检测,具体步骤如下: 将步骤(3)得到的细菌溶液稀释10000倍,取1yL稀释后的细菌溶液与90yL800yg/mL的纳米粒子溶液混合,光照30min后涂布,涂布时取20yL混合液,放置30min,待细菌溶液完全被培养基吸收后,倒置培养,过夜后照相。
【文档编号】A01P1/00GK106070322SQ201610464637
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月24日
【发明人】张海元, 孙秀娟, 常赟, 程岩
【申请人】中国科学院长春应用化学研究所
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