专利名称：生产食用、药用真菌液体菌种的方法
技术领域：
本发明是食、药用真菌液体菌种的生产方法，更确切说是利用生产酒精的废糟液采用深层发酵技术生产食、药用真菌液体菌种的一种方法。
传统的制种工艺是生产二级原种需将斜面母种直接接到原种培养基上；生产三级栽培种是将原种直接接到栽培种培养基上。这种生产方法制种时间长，大约需要3个月时间，经常因为制种晚而错过最佳栽培季节；另外传统制种方法菌种转代次数多，不易保证菌种质量；老的制种方法，接种是固体菌种接到固体培养基上，菌种之间互相接触面小，发菌慢，吃料慢，容易污染。本发明制种时间可以大大缩短(液体菌种生产周期10-15天)，而且不存在二级原种和三级栽培种的区别，转代次数大大减少，菌种质量好。液体菌种利于工厂化生产，成功率高，污染少，发菌快，吃料能力强。既可以大面积栽培做栽培种使用，也可以做二级原种使用。
采用酒精废糟液为原料，生产食、药用真菌液体菌种一是减少了酒精厂排放废水的污染，使酒精生产厂家的废水得到利用；二是生产菌种的成本大大降低。具有显著的经济效益和社会效益。
一、斜面菌种的选择处理1、菌种选择采用灵芝GL-903，黑木耳888、香菇4号、平菇(佛罗里达)、双孢蘑菇(夏菇93)等优良菌种。菌种来源为辽宁省朝阳市食用菌研究所和山东省金乡县食用菌研究所。
2、斜面菌种的制备与处理斜面菌种培养基采用PDA综合培养基(马铃薯200克，白糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，水1000ml)，接种后于25-30℃下培养10-15天。食、药用真菌菌种在斜面培养基上附着能力很强，如果铲下后直接置于培养基中，上摇床培养，则易形成大菌块，甚至只有一个大菌快，不利于进一步培养。所以在接入一级斜面菌种前要对一级斜面菌种进行破碎(使用接种针进行手工破碎)，破碎处理后，菌种接入新的液体培养基后能漂浮于液体表面，菌种分散性好，发菌点多，使菌种量及菌球密度增加。
二、一级液体菌种制备1、培养基的制备玉米酒精废糟液过滤液96.8-100％(6-8层纱布过滤)，添加0-2％淀粉，0-1％蔗糖，0-0.2％酵母粉，PH为5.5-6.5。
2、一级液体菌种制备在250ml的锤形瓶中加入70-90ml培养基，15磅灭菌30分钟，冷却至30℃时接入斜面菌种碎块，接种量为10％，先在28℃下静置24小时，再置旋转式摇床上180rpm，28℃培养48-72小时。
三、液体菌种的制备1、培养基的制备玉米酒精废糟液96-100％(离心20分钟，异去沉淀物)，加入0-2％蔗糖，0-2％可溶性淀粉，PH5.5-6.5。
2、液体菌种制备将玉米酒精废糟液培养基置于发酵罐中，灭菌冷却后，接种一级液体菌种6-10％。通风搅拌罐培养条件0-12小时，搅拌速度为80rpm，通气为0.5∶1vvm；12-72小时，搅拌速度为120rpm，通气为0.5∶1vvm；72-96小时，搅拌速度为180rpm，通气为0.5∶1vvm。
3、液体菌种的后处理将培养好的液体菌种静置沉淀24小时，抽走菌丝体上部的培养液，然后补充等量的蒸馏水。
4、包装在无菌的条件下罐装，置4-28℃条件下保存，保质期为6个月。在保存和运输中防止超过30℃高温，使用接种前，摇匀后使用。
四
图1是本发明的工艺流程图。
五、本发明具有如下优点1、酒精废糟液得到充分利用。
2、用酒精废糟液工厂化生产菌种。
3、解决了酒精废糟液的环境污染。
六、酒精废液处理的国内外情况发酵法生产酒精是各国生产酒精采用的主要生产方法，生产中产生大量废液，每生产一吨酒精要排放10-15吨废液。至1990年止，我国每年排放的酒精废液量达1500万吨以上，再加上液态白酒厂(车间)的排放量，估计每年可达4000万吨。这不仅浪费了大量粮食，同时也严重污染了环境，如谷物原料的废液中的COD值高达40000-50000mg/l，BOD5达20000-30000mg/l。糖蜜酒精废液的数值就更高，一般COD值50000-80000mg/l，B0D530000-50000mg/l。
酒精废液中含有丰富的营养物质，如粮食酒精废液中，含有蛋白质、纤维素、聚戊糖、灰分、脂肪、焦糖、丰富的B族维生素和生长素；糖蜜酒精废液中除含丰富的碳源、氮源和磷源外，富含钾盐、钙盐等。酒精废液的主要组成如表1所示。
表1酒精废液的组成
国内外综合利用酒精废液的各种情况①生产(SCP)饲料②生产全价干饲料(DDGS)③沼气发酵。
实施例一级液体菌种培养基配方(按百分比)1、玉米酒精废糟液过滤液(6-8层纱布过滤)，100，PH6.5。
2、玉米酒精废糟液过滤液(6-8层纱布过滤)，98.4，淀粉1，蔗糖0.5，酵母粉0.1，PH6.5。
3、玉米酒精废糟液过滤液(6-8层纱布过滤)，96.8，淀粉2，蔗糖1，酵母粉0.2，PH6.5。
液体菌种培养基配方(按百分比)1、玉米酒精废糟液(离心20分钟，异去沉淀物)100，PH6.5。
2、玉米酒精废糟液(离心20分钟，异去沉淀物)98，蔗糖1，淀粉1，PH6.5。
3、玉米酒精废糟液(离心20分钟，异去沉淀物)96，蔗糖2，淀粉2，PH6.5。
权利要求
1.生产食、药用真菌液体菌种的方法，其特征在于①一级液体菌种制备a、培养基的制备酒精废糟液滤液，PH值5.5-6.5，b、一级液体菌种的制备在250毫升的锤形瓶中加入70-90毫升培养基，15磅灭菌30分钟，冷却至30℃时接入斜面菌种碎块，接种量为10％，先在28℃下静置24小时，再置旋转式摇床上180转/分钟，28℃培养48-72小时，②液体菌种的制备a、培养基的制备酒精废糟液除去沉淀物，PH值5.5-6.5，b、液体菌种的制备将酒精废糟液培养基置于发酵罐中，灭菌冷却后，接种一级液体菌种6-10％，通风搅拌罐培养条件0-12小时，搅拌速度80转/分钟，通气为0.5∶1vvm；12-72小时，搅拌速度为120转/分钟，通气为0.5∶1vvm；72-96小时，搅拌速度为180转/分钟，通气为0.5∶1vvm，c、液体菌种的后处理将培养好的液体菌种静置沉淀24小时，抽走菌丝体上部的培养液，然后补充等量的蒸馏水，d、包装在无菌的条件下罐装，置4-28℃条件下保存，保质期为6个月，在保存和运输中防止超过30℃高温，使用接种前，摇匀后使用。
2.根据权利要求1所说的方法，其特征在于a、制备一级液体菌种的培养基是取玉米酒精废糟液滤液97-100％，淀粉0-2％，蔗糖0-1％，酵母粉0-0.2％，PH5.5-6.5，b、制备液体菌种的培养基是取除去沉淀物的玉米酒精废糟液96-100％，蔗糖0-2％，可溶性淀粉0-2％，PH5.5-6.5。
全文摘要
一种生产食用、药用真菌液体菌种的方法,主要是利用酒精废糟液加入淀粉、蔗糖、酵母粉配制成培养基,先制备一级液体菌种,然后利用该培养基,采用深层发酵工艺,生产食、药用真菌菌种,实现菌种的工厂化生产,既解决了酒精厂排放废水的污染,又使生产菌种的成本大大降低,菌种转代次数减少,菌种质量好,适应食用菌的产业化发展。
文档编号A23L1/28GK1297993SQ0012338
公开日2001年6月6日 申请日期2000年12月8日 优先权日2000年12月8日
发明者曹文伟, 刘永宏, 刘永昶 申请人:曹文伟, 刘永宏, 刘永昶