专利名称：一种微生物青贮菌株和复合菌及其用于生产青贮饲料的方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物饲料添加剂领域中的菌种及其菌种的复合菌，具体是指在青贮饲料中微生物添加剂所用的乳酸链球菌及其与其它菌种的复合菌。
本发明还涉及一种利用乳酸链球菌与其它菌种配伍的微生物青贮复合菌用于生产青贮饲料的方法。
背景技术：
我国农作物秸秆资源拥有量居世界首位，年产秸秆6亿吨，青粗饲料约5.7亿吨。其中42％直接或过腹还田，30％作为农用燃料，8％作工业或其他用途，20％约1.2亿吨剩余未被利用，造成潜在饲料资源的极大浪费。
为防止农业生产过程中对各种资源的破坏和浪费，减少农业生产对环境的污染，做到农业发展与资源和环境相互协调，是当今全球范围内对可持续发展农业的战略要求。我国是一个人口众多而农业资源相对短缺的国家，狠抓资源的节约和综合利用，在大力提高资源利用率的同时，保护生态与环境，也是我国整个农业可持续发展的一项战略措施。农作物秸秆中含有大量有机质、氮、磷、钾和微量元素，分析表明，每100千克鲜秸秆中含氮0.48千克，磷0.38千克，钾1.67千克，相当于2.4千克氮肥，3.8千克磷肥，3.4千克钾肥。根据农业部《关于1996-2000年全国秸秆养畜过腹还田项目发展纲要》，全国青贮和氨化秸秆两项合计年节约饲料用粮4000万吨，差不多相当于到本世纪末计划增产的全部粮食产量。所以利用青贮秸秆发酵养畜将是我们未来发展的一个大方向，大趋势。而高效利用秸秆青贮养畜，不仅可以获取畜产品，改善人们的膳食结构，粪肥还田，改善土壤，改善生态环境，形成农牧业的良性循环，而且可以节约大量的粮食，缓解耕地减少及粮食的供需矛盾，这对于农业发展和社会经济发展都具有十分重大的战略意义。
饲料青贮技术的研究及推广应用已有上百年的历史。青贮饲料对草食动物，尤其是对奶牛已成为不可缺少的常规饲料。近年来在我国推广的氨化饲料，不仅成本高、耗能高、与农业争化肥、污染环境，有些方法对牲畜还有毒副作用。现代青贮技术中关键技术的突破成为今后发展青贮饲料的关键因素，微生物优良菌株的选育、复合菌种的有效配伍及发酵工艺的研究成为本发明突破这项技术的核心所在。
七十年代，国外学者曾利用高活性的木霉纤维素酶在工业生产条件下，将纤维素几乎全部转化成纤维二糖与葡萄糖。日本有人结合碱化处理，用木霉纤维素酶分解粗饲料中的纤维素，其分解率(重量减少)可达80％。Jbolin(新西兰，1989)用厌氧瘤胃菌在纯净状态下发酵大麦秸秆，加快了秸秆的消化；Pemir(1989)用孢子丝菌和念珠菌粉剂固体发酵小麦秸秆，增加了氮素利用；Sukhumavasi(泰国，1989)从堆肥中分离出厌氧的纤维素分解菌Clostridium josui FERM p-9684，它对纤维素有极强的水解能力，其主要的发酵产物为乙醇和乙酸；Kostyukovskii(俄罗斯，1990)从牛瘤胃液中分离出Neocallimastix 71和Piromonas 12两种菌，它们都含有可以分解纤维素和木质素的酶；Jung等人和Sundstol等人(1992)用真菌对大麦秸秆进行处理，结果发现，秸秆经真菌好氧发酵后，其体内消化率与干物质的损失成正比，并且真菌孢子会造成饲料和环境污染，至今没有应用。U.S.Pat No4842871、4981705、5747020、6054148都是这方面有关青贮微生物菌剂的研究，但是对于综合解决青贮饲料发酵过程中抑制腐败菌、防止二次发酵，有效控制有机酸和降解木质纤维素，降低成本、易于被农民应用等方面存在问题。
我国从20世纪60年代以来，就有学者开始在该领域进行研究，主要在木霉和人工瘤胃两方面做了不少工作，均因生产工艺、设备条件不足未能推广。黄立光(1990)报道了用木霉菌发酵水稻秸秆饲喂家兔；毕东辉等(1992)利用热喷—微生物处理两步法生产秸秆饲料，其粗蛋白等成分含量有较大提高；张景宏等(1994)用多菌株联合发酵处理秸秆粉，粗蛋白提高94.5％；赵小立等(1996)研究了黑曲霉HD9478纤维素酶固体发酵条件；刘思方等(1996)用好氧菌直接发酵，对植物秸秆微生物饲料的生产工艺及饲喂效果做了研究分析；尚太成等(1998)采用双重发酵(需氧发酵、厌氧发酵)新工艺降解棉秆木质纤维素，增加微生物蛋白质和适口性，提高采食量及消化率。中国发明专利93110883公开了一种“饲用微生物添加剂制造方法及用途”，该专利合理利用了芽孢杆菌作为饲用添加剂，但只是芽孢杆菌没有涉及到其他有益的饲用添加剂的菌群。中国发明专利02112909.6申请了“一种微生物青贮饲料添加剂及其制备方法”，该项技术采用乳酸杆菌作为发酵促进剂，以长双歧杆菌作为后续发酵菌种，采用两次发酵技术，不利于青贮饲料的有效控制。中国发明专利93110883.7和01102202.7是有关“利用微生物秸秆发酵剂生产秸秆蛋白饲料的方法”，尽管在技术中采用复合菌种的优化组合，但是针对农作物黄贮秸秆生产的饲料。中国发明专利97192289.6公开一种动物饲料的技术，但是针对的是非反刍动物的饲料添加剂。
当前在青贮微生物饲料添加剂方面主要采用以下两方面技术手段。一是外加防腐剂、有机酸或无机酸，即属于添加发酵抑制剂，以停止青贮饲料中的微生物的活动，从而达到保藏的目的；另一项是微生物青贮技术的研究，即属于发酵促进剂技术领域。但是对于综合解决青贮饲料发酵过程中抑制腐败菌、防止二次发酵，控制有机酸和降解纤维素，降低成本、易于被农民应用等方面存在的问题还没有得以有效解决，而且也没有涉及到有关高产乳酸菌株的选育、菌株配伍和发酵工艺的优化控制等重要技术工艺，这已成为发展优质青贮饲料的技术瓶颈。
发明内容
针对目前存在的问题，本发明的目的在于提供一种微生物青贮菌株和复合菌及其用于生产青贮饲料的方法，通过高效选育到的乳酸链球菌和植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌三株菌组成高活性复合微生物添加剂，本发明有效解决了青贮饲料发酵中的技术难题，同时方便农民，简单实用。
本发明目的实现通过以下技术方案
本发明通过引进国外优良菌种，经过诱变、筛选出一种具有优良产乳酸特性的青贮微生物菌株，经微生物学鉴定，确定为乳酸链球菌(Streptococcus lactis CGMCC.No.0878)。
该菌种的培养基配方，包括平板培养基玉米浆2％-5％，可溶性淀粉2％-2.5％，CaCO32-3％，琼脂1-3％，PH6.8-7.0，1.0-1.6％溴甲酚酚紫乙醇溶液1.5-2.0毫升，121℃，灭菌25-40分钟；摇瓶培养基可溶性淀粉2％，玉米浆2％-4％，酵母粉0.2％-0.5％，CaCO30.05-0.15％，土温80(Tween80)0.05-0.15％，PH 6.8-7.0。
同时，在乳酸链球菌的基础上，本发明提供了一种以乳酸链球菌为主体菌与植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌混合复配生产的高活性微生物青贮菌剂。本发明还提供了这种高活性微生物青贮菌剂的生产工艺，该工艺已具备规模工业化生产能力。
本发明提供了一种乳酸链球菌株，命名为乳酸链球菌(Streptococcuslactis CGMCC.No.0878)，该菌乳酸产率高，能有效控制青贮发酵过程，抑制其它腐败病菌，防止青贮饲料二次发酵，为反刍家畜提供酸甜可口、适口性好的青贮饲料，提高其采食量。该主体乳酸链球菌菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址中国北京中关村2714信箱，邮编100080。保藏日期是2003年01月13日，保藏号是CGMCC.No.0878。该乳酸链球菌(Streptococcus lactis)，为兼性厌氧产乳酸菌。在青贮刚开始阶段，能迅速繁殖，产生大量乳酸，迅速降低PH，有效控制青贮过程。可在较大温度范围30℃-38℃内生长，最适生长温度范围为35℃-38℃，最适生长温度为37℃，生长PH范围为3.0-7.8。依照《伯杰氏系统细菌学手册》(第二卷)，鉴定为乳酸链球菌(Streptococcus lactis)。本发明进一步建立了菌种保藏、复壮及选育的系统工艺流程技术。
本发明涉及到的其它菌株都来源于国家农业微生物菌种保藏中心，可以通过市场购得。
本发明提供一种高活性微生物青贮复合菌，是以乳酸链球菌(CGMCC.No.0878)为主体菌与植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌通过不同比例混合组成青贮微生物菌剂，其达到的技术效果相同。
本发明中是由一份产朊假丝酵母菌(Candida utilis)与一至四份乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)混合配伍组成，每份以重量比计。最佳配伍比例之一为以乳酸链球菌为主体菌混合植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌组成，其用量为比是1∶(0.5-1)∶(0.5-1)∶(0.2-0.5)。
本发明还提供了以乳酸链球菌、枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌混合配伍组成的菌剂，其用量为比是1∶(0.5-1)∶(0.2-0.5)；以及乳酸链球菌、植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌混合配伍组成的菌剂，其用量为比是1∶(0.5-1)∶(0.5-1)；以及乳酸链球菌和枯草芽孢杆菌混合配伍组成的菌剂，其用量为比是1∶(0.5-1)，这几组的使用效果相同。
本发明提供一种高活性微生物青贮复合菌剂的生产工艺，其包括乳酸链球菌(CGMCC.No.0878)、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌4种菌的发酵工艺。
本发明中乳酸链球菌(CGMCC.No.0878)的发酵工艺为取斜面1支在37℃培养24小时，镜检，菌体应健壮无杂菌，挑取2-3环接种到摇瓶，接4瓶，200毫升/瓶，在37℃，100rpm条件下摇床培养15小时，OD540 30×达0.32左右时，接种至25升种子罐，在一定条件下培养6小时，OD540 30×达0.3左右进入250升发酵罐，流加氨水控制PH6.8-7，发酵4小时左右进行补料玉米浆1.7升，淀粉340克，8小时-10小时下罐离心。
本发明以选择高活性微生物青贮复合菌产量较高的发酵条件为优选工艺条件。优选发酵温度32℃-38℃，通气量2vvm-10vvm，搅拌速度为250rpm，发酵周期8小时-24小时。
本发明在中的高活性微生物青贮复合菌剂符合1999年7月26日国家农业部105号公告《允许使用的饲料添加剂品种》。本发明已通过250升、3000升发酵罐中试，发酵周期8小时-24小时，发酵液产菌率≥1.0％，总收率≥90％；菌粉质量指标菌剂水分≤7％，活菌数≥1×1010c/g，12个月内复活率≥90％，霉菌、腐败菌不得检出。
本发明生产的高活性微生物青贮菌剂可广泛用于生产青贮饲料，使用该菌剂生产青贮饲料的工艺过程控制非常重要。
一、青贮制作过程中青贮发酵的关键青贮发酵是一个复杂的微生物活动和生物化学变化过程。青贮过程中，参与活动和作用的微生物种类很多，主要以乳酸菌为主。青贮的成败主要决定于乳酸发酵的程度。青贮料之所以能长期保存不坏，是由于有机酸产生菌发酵作用使得酸性增强，抑制了腐败菌生长。要使青贮通过细菌的作用，能迅速地产生足量的乳酸，抑制其它有害菌种，从而使原料能够正常发酵，最关键的两点是(1)青贮原料要有足量的糖分，既必须含有最低需要的含糖量；(2)青贮中保证排尽空气，装填紧密，造成无氧条件。这样，厌气性的乳酸菌才能旺盛的繁衍，产生大量的乳酸，青贮饲料的发酵就进入正常过程，青贮制作就易于成功。
原料中的糖类和淀粉含量高，有利于这类微生物的生长。所以，选用含糖分2％-6％的原料可以制成优质青贮，而含糖量低于2％的则不易成优质的青贮。排气是为了造成无氧条件，除制作青贮时压紧外，还可加水提高排气成效。过干的玉米秸或使用摘穗后的玉米秸，做青贮时加水，能提高糖分的溶解度，也有利于糖分均匀分布，加速发酵。控制青贮原料的含水量65-70％是提高青贮成功率的有效手段。
二、微生物青贮复合菌制作青贮饲料的工艺1、建窖窖应建在地势高、地下水位低，排水容易、土质坚硬、距离畜舍较近的地方。青贮窖可用石块(砖)、砂、水泥等材料建造，窖底及四周应光滑平整，不渗水。最好将窖建成倒梯形，便于原料自然下沉，且窖内周壁青贮料不易变质。一般每立方米容量可装填青秸秆550千克-600千克、干秸秆450千克-500千克。建1个装4吨-5吨青贮料的窖，需建长2.5米、上口宽2米、下口宽1.5米、深1.8米的容量。若养畜头数较多，最好同时建两个窖，以利交替使用。青贮窖要在使用前7-10天建好待用，以利于密封发酵，防霉保质。
2、原料准备(1)青贮原料青贮原料要适时收割，青贮玉米选在乳熟期末至蜡熟期刈割，苜蓿宜选在现蕾期至初花期收割。应保证原料清洁、无污染、无霉烂变质。入窖前，将原料切短至2厘米-3厘米。
(2)食盐每吨原料需准备6千克-8千克食盐。
(3)聚乙烯塑料薄膜按青贮窖的大小准备适量。
3、菌剂活化每2克微生物青贮菌剂可处理青贮原料(整株玉米、玉米秸、苜蓿、各种牧草等)1吨。将青贮菌剂2克倒入200毫升清水中，每100毫升水中可加白砂糖0.8克-1克，在常温下约经0.5小时-1小时菌剂即可活化。
4、菌液配制根据需处理原料的含水量来判断加水量，含水量在65％-70％的原料，每吨需加水50千克-70千克。在适当的容器中将水配制成0.8％-1.2％食盐水溶液，然后，把预先活化好的菌剂倒入其中拌匀，备用。配制的菌种应于当日用完，最好随配随用。
5、装窖和封窖入窖原料的含水量应控制在65％-70％。检查方法是抓一把切短的原料，用力挤压30秒，如松开手后料团慢慢散开，手不湿，表明其含水量为60％-70％，正适合用于青贮。过干或过湿可加水或加料予以调节。原料应分层(大型窖分段)入窖，装填至30厘米-40厘米厚时，撒一遍食盐(按总量每层均匀分配)，喷洒一遍菌液，搅拌均匀后，人工踩压，大型窖可用小四轮或链轨式拖拉机压实，尽量排尽原料中的空气。装一层，喷洒一遍菌液，并压实。待原料装填压实到高于窖面40厘米-60厘米时，压实一次，在上面撤一层食盐(每平方米200克-300克)，覆上一层聚乙烯塑料膜，再掩盖一层20厘米-30厘米厚的黄土，将窖密封严实。原料入窖必须在1天-2天内完成，大型窖可分段装填、分段封窖，否则易造成原料腐烂、变质，影响发酵的效果。
6、检查质量装窖密封20天-30天即发酵完毕，可开窖检查。质量好的饲料呈黄绿色，有酸香味。
7、饲喂方法开窖时，应从一边开启，分段取用，在取喂贮料时，要用多少取多少，每次取出量的多少以在当天喂完为准，每次取完料时应立即再用薄膜把取口封严，以防贮料二次发酵，发霉变质。初喂时要由少到多，让牛、羊等家畜有个逐步适应的过程，适应期一般为3天-7天，逐渐增加到正常饲喂量。每天每头家畜的饲喂量是犊牛5千克-8千克，成年育肥牛15千克-18千克，羊2千克-3千克。有益效果1、青贮原料来源丰富，作物秸秆(如玉米秸秆、麦秸、稻秸等)、各种野草、牧草、地瓜秧、树叶等，都可以用作青贮的原料。饲料青贮技术可以充分利用当地丰富的饲草资源，特别是利用大量的玉米秸秆青贮饲喂肉牛，大大减少玉米秸秆的浪费。
2、青贮饲料营养丰富，在制作时，整株秸秆(包括杆、茎、叶)都可用于青贮，秸秆的绿色和叶片可以保存下来。所以，能保存作物秸秆中大部分(85％以上)的养分，粗蛋白质及胡萝卜素损失量也较小(一般青饲料晒干后养分损失30％至40％，维生素几乎全部损失)。
3、利用添加微生物青贮复合菌剂制作青贮饲料技术，厌氧发酵3天-7天PH可降至3.8-4.2，青贮30天后PH稳定于3.7-4.2，生产的青贮饲料各项指标优良，具酸香味、呈黄绿色后，纤维素、半纤维素降低10％-20％，体外消化率提高10％-20％。
4、经饲喂试验表明，适口性明显改善，采食量提高10％-15％。产奶量提高5％-8％，羊、犊牛日增重提高8％-12％。
5、青贮饲料柔软多汁、气味酸甜芳香，适口性好，能促进消化腺的分泌，对于提高饲料的消化率有良好作用。
6、青贮饲料的制作方法简便、成本小，不受气候和季节限制，饲草的营养价值可长期保存，能满足家畜冬春季乃至全年饲喂青绿饲料的需要。
图1为青贮微生物菌种的选育研究流程2为中试生产工艺流程3为利用微生物青贮复合菌剂生产青贮饲料流程图
具体实施例方式青贮微生物菌种的选育可参见图1。微生物菌剂中试生产工艺可参见图2，利用微生物青贮复合菌剂生产青贮饲料可参见图3。
实施例一青贮菌种中乳酸链球菌及其功能乳酸链球菌，Streptococcus lactis，兼性厌氧产乳酸菌。在青贮刚开始的阶段，能迅速繁殖，产生大量乳酸，迅速降低PH，有效控制青贮过程。
1.1 菌种培养平板培养基玉米浆3％，可溶性淀粉2.3％，CaCO32％，琼脂2％，pH6.8-7.0，1.6％溴甲酚酚紫乙醇溶液1.6ml，121℃，30分钟灭菌；斜面培养基不加溴甲酚酚紫乙醇溶液，其余成分同上，制成斜面(先分装后灭菌，或先灭菌后分装)。
菌种活化从斜面菌种或发酵液在平板上分区划线，37℃培养24小时-48小时，得单菌落(周围培养基因产酸变黄)。若菌种保藏时间长，可多活化一次斜面接种挑选平板上生长好的单菌落，斜面划线。
斜面培养37℃，24小时。
1.2种子培养摇瓶培养基可溶性淀粉2％，玉米浆3％，酵母粉0.3％，CaCO30.1％，Tween80 0.1％，pH6.8-7.0。500ml三角瓶，每瓶装培养基100ml，121℃，0.1MPa灭菌30分钟。
接种新鲜斜面(培养好保存不超过2天)1只，取无菌水试管1只(3毫升/只)，倒入无菌水，涮下菌苔，将菌悬液倒入摇瓶(注意无菌操作)。
培养37℃，100rpm，13小时。
种子检查(1)测30倍稀释液的OD540值(以后测量的OD540值均为30倍稀释液)将种子摇瓶中的发酵液无菌操作倒入接种瓶后，取剩余液0.5毫升，加1毫升2M HCl和13.5毫升的纯净水，摇匀后，测量其OD540值，应为0.28-0.35。
(2)测种子摇瓶剩余液的PH，应为5左右。
(3)剩余液涂片镜检，100倍油镜下观察，应为大量球菌，大小均匀，链状排列，少量成对。
1.3 7L发酵配料可溶性淀粉1％，50克；玉米浆5％，250毫升；进口酵母粉0.2％10克；CaCO30.1％，5克，Tween800.1％，5毫升；用自来水定容体积5L，调节PH6.8-7.0，121℃，0.1MPa灭菌30分钟，接种前取空白样，测OD540值，应为0.11-0.13，测PH，镜检，允许有少量菌体(上一罐残留)。
补料玉米浆50％，淀粉10％，200毫升，PH6.8-7.0，121℃，0.1MPa灭菌30分钟。
接种上述种子瓶，100毫升接种量。
条件37℃，100rpm，0.02MPa，1.5L/min，氨水控制PH为6.8-7.0。
培养5小时，OD540值应0.24-0.27，补料100毫升；7小时，OD540值达到0.36左右时，补料100毫升；9小时，OD540值达到0.38-0.40左右时，可下罐。
活菌数取下罐发酵液1毫升，10倍梯度稀释，取10-11、10-12、10-13、10-14稀释液各0.1毫升涂布平板(1.1)，37℃，培养48小时，计数平板上周围培养基变黄的单菌落，计算活菌数，应为1014个/毫升1.4 25L发酵培养基及培养条件培养基可溶性淀粉1％玉米浆5％进口酵母粉0.20％CaCO30.10％Tween80 0.10％PH6.8-7121℃，0.1MPa灭菌30分钟培养条件温度 37℃搅拌速度 100rpm罐压 0.05MPa-0.1MPa通气量 1∶0.31.5 250L发酵培养基及培养条件培养基可溶性淀粉1％玉米浆5％酵母粉0.20％CaCO30.10％Tween80 0.10％PH6.8-7121℃，0.1MPa灭菌30分钟培养条件温度 37℃搅拌速度 100rpm罐压 0.05MPa-0.1MPa通气量 1∶0.3实施例二微生物青贮复合菌是由2克产朊假丝酵母菌(Candida utilis)、1克乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、1克植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、1克枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的混合组成。
用上述的微生物青贮复合菌发酵青贮秸秆生产家畜饲料的方法如下1、原料准备(1)2.5吨整株玉米(蜡熟期刈割)，切碎至2厘米-3厘米；(2)水150千克，加食盐1.2千克配制成0.8％盐水溶液；(3)食盐15千克。
2、菌种复活用青贮菌剂5克。将青贮菌放入500毫升清水中，加白砂糖4克-5，在常温下约经0.5小时复活，再把菌剂倒入预先食盐水中溶解。经复活的菌液应随配随用，最好当日用完。
3、装窖和封窖原料应分层入窖，装填至30厘米-40厘米厚时，撒一遍食盐(按总量每层均匀分配)，喷洒一遍菌液，搅拌均匀后，踩压结实，尽量排尽原料中的空气。装一层，喷洒一遍菌液和食盐，并压实。待原料装填压实到高于窖面40厘米-60厘米时，压实一次，在上面撒一层食盐(每平方米200克-300克)，覆上一层聚乙烯塑料膜，再掩盖一层20厘米-30厘米厚的黄土，将窖密封严实。原料入窖必须在1天-2天内完成。
4、装窖密封30天可开窖检查，具酸香味，无腐烂、变质说明青贮成功。
5、饲喂方法取料时，从窖的一边开始取料，从上层至下层垂直取用，依据当天用量随取随用，取后立即封口。每天每头家畜的饲喂量是犊牛6公斤，成年育肥牛15公斤。
实施例三微生物青贮复合菌由2克产朊假丝酵母菌(Candida utilis)、1.5的乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、1克植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、0.5克枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)混合组成。
用上述微生物青贮复合菌剂生产家畜饲料的方法与实施例二相同。
实施例四微生物青贮复合菌由2克乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、1克植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、2克枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)混合组成。
用上述微生物青贮复合菌剂生产家畜饲料的方法与实施例二相同。
实施例五微生物青贮复合菌由1克产朊假丝酵母菌(Candida utilis)、2克乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、2克枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)混合组成。
用上述的微生物青贮复合菌剂生产家畜饲料的方法与实施例二相同。
实施例六微生物青贮复合菌由3克乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、2克枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)混合组成。
用上述的微生物青贮复合菌剂生产家畜饲料的方法与实施例二相同。
实施例七青贮原料的选择和处理1.原料品种一般是豆科牧草含蛋白质量高，比较难以贮存，而禾本科牧草和作物秸杆碳水化合物含量高，易于成功。成功地制作青贮必须要有一个最低的含糖量标准，如果原料中实际含糖量高于青贮最低含糖要求，原料就属于易贮藏类型，如玉米全株、高粱、甘蓝、胡萝卜、甘薯藤、南瓜等。
低于最低含糖要求的就属于难贮藏类型，如苜蓿、草木樨、毛莒子、马铃薯茎叶等，还有不能单独青贮的原料，如南瓜蔓、西瓜蔓等。这类植物含糖量极低，单独青贮不易成功。但是，不易于青贮的原料如苜蓿、毛莒子和不能单独青贮的原料之间，以2∶1或1∶1配合，可以提高成功率。
2.追肥对青贮作物的影响追施肥料而肥效未发挥完以前就割来当青贮原料，这种作物的含糖量较低，青贮制作结果不理想。为了使青贮有良好的发酵过程，施肥后应间隔一定时间才能割青入窖。
3.生长期和刈割时间牧草抽穗后结籽前是收割青贮的好时刻。玉米是最好的青贮原料，玉米植株入窖的最好时机是乳熟至糊熟期。目前我国有专用的青贮玉米品种，茎杆高、含糖多，在生产上有良好的效果。但目前广大农区较多的是用去穗后的玉米秸杆，这种秸杆应该贮藏的越早越好，如果玉米秸全部枯黄，也能贮存，称作黄贮，营养成分就很低了。牧草在下午收割可以有较高的含糖量。玉米含糖量较高，青贮时只要掌握好生长期，可以在全天任何时间刈割。
4.切铡长短和碾压青贮原料无论是牧草还是秸杆作物，经过碾压，最好是撕碎，原料变软压实，可以保证青贮质量。其作用是增加原汁渗出机会，使糖分分布均匀，同时易于装填紧密，有利于排尽空气，家畜容易采食。对牛、羊来说，细茎植物如禾本科牧草，豆科牧草，甘薯藤等，切成2～3厘米长即可。
5、青贮窖本发明主要采用以下两种青贮窖
(1)青贮地窖可建成土窖和水泥窖两种，是一种地壕样的结构，土窖建造成本低，在雨水较少和排水良好的山区较为适用；水泥窖壁用砖或石块砌成，高出地面40-60厘米，内壁用水泥抹面，成本较高。地窖的四壁要光滑平直，窖的上端必须比底部宽，以免四周塌土；窖底须形成斜坡，以利排除饲草中过多的汁液。把塑料薄膜铺在挖好的地窖内，使所贮的饲草全部用塑料薄膜包裹起来。
(2)地面青贮窖在雨水较多和地下水位较高的地区较为适用，其他有条件的地区，也可建地面永久窖。青贮窖底部在地面以上或稍低于地面，整个窖壁和窖底都用石块或砖彻成，内壁用水泥抹面，使之平直光滑。窖底部不能渗水，除有一定坡度外，窖的四周应有较好的排水道，特别要防止地面水从一端的入口处灌入。本发明主要采用这类型窖。
6、填装青贮原料入窖前，要清洁青贮设施。装填青贮原料要快捷迅速，避兔空气分解而导致腐败变质。一般要求在1-2天完成，填装时间越短，青贮品质越好。青贮窖的窖底须铺一层30-40厘米厚的切断的秸秆软草，以便吸收青贮汁液。窖壁四周须衬一层塑料薄膜，以加强密封性能和防止漏渗水。原料装入圆形青贮设备时，要一层一层均匀铺平。
7、贮料压实青贮窖装填原料，须用履带式拖拉机或用人力层层压实，尤其要注意周边部位。越紧实越易造成厌氧环境，有利于乳酸菌的活动和繁殖。在压实过程中要注意清洁，不要带进泥土、油垢、铁钉。铁丝等，以兔污染青贮原料，并可避免牛羊食后造成瘤胃穿孔。有条件的地区可以采用真空青贮技术，即在密封条件下，将原料中的空气用真空泵抽出，为乳酸菌繁殖创造厌氧条件。
8、密封与管理原料装填完毕后，立即密封覆盖，以防止空气与原料接触和雨水进人。在原料上面盖一层切断的秸秆，覆盖薄膜，再覆上20-30厘米的细土，踩踏成馒头形。密封后须经常检查，发现漏气要及时修补从杜绝透气并防止渗入。
9、青贮菌剂对于青贮饲料的质量判定。
(1)取样方法开窑后，深入青贮窑70厘米-100厘米深处，按三点取样法，各抓一把进行检查。
(2)判定标准①合格其颜色青绿色或黄绿色，近于原色，有光泽。其气味芳香、酒酸味给人舒适感。其质地结构湿润、紧密，但容易分离，茎、花、叶保持原状。
②不合格其颜色黑色或褐色。其气味有刺鼻腐败味或霉味。其质地结构腐烂、发粘、结块或过干、不成结构。造成不合格饲料是由于以下原因造成的。
一种是酸败青贮饲料。这种青贮饲料的酸味不足，具有明显的腐败臭味，有刺鼻感，多呈深绿色，含水量高，用手触摸时感觉粘滑。这种酸败青贮饲料适口性差，营养价值很低，肉牛若采食过多会引起拉稀。造成这种劣质饲料的主要原因是青贮原料没有在适期内收割，含水量过高，又未进行晾晒，或是在青贮过程中和青贮以后有雨水进入所造成的。
另一种劣质青贮饲料是焦化青贮饲料，具有焦味或霉味，呈褐色或深褐色。其水分含量少，适口性差，营养价值低。造成的原因是青贮原料过于成熟，收割过晚。原料切的过长，不易压实或者装窑不及时，延误时间过长，封顶过晚，致使青贮原料因氧化受热过多。
10、青贮饲料的饲喂方式青贮饲料封窖后，一般经过20-30天可开窖取用。取用时，应从一头开始垂直挖取，分段取料时，要把窖周围发白长毛或腐烂的仔细拣出来，每次取料后，青贮窖要用塑料布及时盖严密并压实，防止第二次发酵。
饲喂方法初次用青贮饲料喂牛，应经过3-7天适应阶段，使牛逐渐习惯采食青贮饲料，喂量要由少到多，逐渐增多，可以与其他饲料掺和着喂，待牛适应后再单喂青贮料。
饲喂量一般每头每天犊牛5至8千克，成年育肥牛15至18千克，羊2至3千克。
青贮原料的选择和处理实施例八复合菌剂青贮效果将复合菌剂用于制作整株玉米(乳熟期至蜡熟期刈割)、苜蓿(现蕾期至初花期)或其它各类秸秆、牧草青贮饲料，7天PH可降至4.0，青贮30天后PH稳定于3.8，具酸香味、呈黄绿色，纤维素、半纤维素降低20％，体外消化率提高10％。适口性明显改善，采食量提高10％。产奶量提高8％，羊、犊牛日增重提高10％。
权利要求
1.一种微生物青贮菌株，及能在青贮过程中有效控制乳酸的乳酸链球菌(Streptococcus lactis CGMCC.No.0878)。
2.如权利要求1所述的微生物青贮菌株，其特征在于菌种的培养基配方，包括A、平板培养基玉米浆2％-5％，可溶性淀粉2％-2.5％，CaCO32-3％，琼脂1-3％，PH6.8-7.0，1.0-1.6％溴甲酚酚紫乙醇溶液1.5-2.0毫升，121℃，灭菌25-40分钟；B、摇瓶培养基可溶性淀粉2％，玉米浆2％-4％，酵母粉0.2％-0.5％，CaCO30.05-0.15％，土温80(Tween80)0.05-0.15％，PH 6.8-7.0。
3.如权利要求1所述的微生物青贮菌株，其特征在于该乳酸链球菌能在青贮过程中产生大量乳酸，迅速降低PH，有效控制青贮饲料的二次发酵，抑制有害微生物的生长，并具有防腐作用，增加家畜的可口性。
4.一种微生物青贮复合菌，其特征在于它是由一份产朊假丝酵母菌(Candida utilis)与一至四份乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)混合组成，每份以重量比计。
5.如权利要求4所述的一种微生物青贮复合菌，其特征在于以乳酸链球菌为主体菌混合植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌组成，其用量为比是1∶(0.5-1)∶(0.5-1)∶(0.2-0.5)。
6.如权利要求4所述的一种微生物青贮复合菌，其特征在于由乳酸链球菌、枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌组成，其用量为比是1∶(0.5-1)∶(0.2-0.5)。
7.如权利要求4所述的一种微生物青贮复合菌，其特征在于由乳酸链球菌、植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌组成，其用量为比是1∶(0.5-1)∶(0.5-1)。
8.如权利要求4所述的一种微生物青贮复合菌，其特征在于由乳酸链球菌和枯草芽孢杆菌组成，其用量为比是1∶(0.5-1)。
9.如权利要求4所述的一种微生物青贮复合菌用于生产青贮饲料的方法，其特征在于将高活性的微生物青贮复合菌接种在铡短的整株或去穗玉米(乳熟期至蜡熟期刈割)、苜蓿(现蕾期至初花期)或其它各类秸秆、牧草上，在厌氧条件下发酵数天。
10.如权利要求9所述的一种微生物青贮复合菌用于生产青贮饲料的方法，其特征在于A、青贮原料预处理，将适时刈割的青贮原料铡短至2厘米-3厘米。B、微生物青贮复合菌剂活化每2克菌剂克处理青贮原料1吨。将青贮菌剂倒入100倍清水中，每100毫升水中可加白砂糖0.8克-1克，在常温下经0.5小时-1小时可复活；制作青贮饲料时，根据需处理原料的含水量来判断加水量，确定加水量后，在适当的容器中将水配制成0.8％-1.2％食盐水溶液，然后，把预先活化好的菌剂倒入其中拌匀，备用。C、青贮原料入窖将铡短的青贮原料逐层、逐段装填入窖。D、喷洒菌剂当青贮料每装填30厘米-40厘米厚时，喷洒一遍配置好的菌剂，注意要边装填边压实，菌剂应喷洒均匀。E、封窖考虑到在青贮过程中原料往往有一定程度的下沉，装填原料时应高出地面40厘米-60厘米，上面铺一层聚乙烯塑料膜密封，再盖一层20厘米-30厘米厚的黄土，确保将青贮窖密封严实，不能漏气、漏水。F、开窖青贮20天-30天后，即可取出饲喂家畜；开窖时，应从一边开启，分段取用，用多少，取多少，取好料后，要及时封好窖口。窖内发酵温度在25℃-38℃左右，3天-7天PH可降至3.8-4.2，20天-30天后PH稳定于3.7-4.2。
11.如权利要求10所述的微生物青贮复合菌用于生产青贮饲料的方法，其特征在于经过微生物青贮菌剂发酵所获得的青贮饲料具有酸香味、呈黄绿色；纤维素、半纤维素较青贮前降低10％-20％，体外消化率提高10％-20％。适口性明显改善，采食量提高10％-15％。产奶量提高5％-8％，羊、犊牛日增重提高8％-12％。
全文摘要
本发明公开了一种主要由乳酸链球菌(Streptococcus lactis)与其它三种菌株组成的高活性微生物青贮复合菌剂，及其将该复合菌剂用于制作整株玉米、苜蓿或其它各类秸秆、牧草青贮饲料的方法。通过在青贮原料中添加乳酸链球菌与其它三种菌株组成的高活性微生物青贮复合菌剂，在厌氧条件下，乳酸链球菌生长旺盛，大量产酸，迅速降低贮料pH值，同时产酶菌大量产生纤维分解酶，分解纤维素、半纤维素，生产出优质的家畜青贮饲料。该方法解决了目前秸秆青贮中不易控制的技术难题，同时解决了液氨氨化和尿素氨化的缺点，在使用该青贮菌剂制作青贮饲料过程中，无需添加成本高和易污染环境的化学物质，并能够有效保存各种营养成分。
文档编号C12N1/20GK1530437SQ0311914
公开日2004年9月22日 申请日期2003年3月14日 优先权日2003年3月14日
发明者王炜, 崔卫东, 魏东, 马彩霞, 张慧涛, 侯新强, 龙涛, 常玮, 阎论, 王 炜 申请人:新疆威仕达生物工程股份有限公司