专利名称：一种能同时富集沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种能同时富集培养沙门菌(Salmonella spp.)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的培养基。
背景技术：
食品中污染的病原细菌是引起食源性疾病的主要因素之一。来自国家食源性疾病监测网的统计资料显示近十年来，由微生物引起的食品中毒事件的数量与涉及的人数最多，其中副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)、沙门菌(Salmonella spp.)和大肠杆菌(Escherichia coli)是最常见的病原菌[1]，因此，快速检测与鉴定食源性病原细菌，对及时有效地控制疾病传播，预防食物中毒事件的发生非常重要，一些快速检测技术也迅速发展。但是，无论是传统的培养方法，还是以现代免疫学或分子生物学技术为基础的快速检测方法，常常都需要对病原细菌进行富集增菌[2]。例如，在国家标准中，检测食品中的沙门菌时，需要使用蛋白缓冲水培养基、氯化镁孔雀绿增菌液、四硫磺酸钠煌绿增菌液、亚硒酸盐胱氨酸增菌液等进行富集与增菌；检测病原性大肠杆菌时，使用营养肉汤、肠道菌增菌肉汤进行增菌；检测葡萄球菌时，使用7.5％氯化钠肉汤增菌[3]。然而，通常一种培养基，甚至多种培养基才能富集一种病原细菌。这样，象多重PCR、基因芯片等能同时检测多种病原菌的快速检测技术，常常需要使用多种培养同时进行富集增菌，操作繁琐，检测成本高，从而限制了这些技术的推广和应用。因此，研究开发能同时富集，特别是能选择性富集多种病原细菌的培养基具有十分重要的意义和应用价值。目前常用的能同时非选择性地富集多种病原细菌的培养基主要有蛋白缓冲水、胰酶大豆肉汤(trypticase soy broth)和营养肉汤，而能同时富集多种病原细菌的选择性培养基很少，例如，通用预增菌肉汤(universal pre-enrichment broth)就是其中的一种，它能同时富集沙门菌、大肠杆菌和单核增生李斯特菌[4-6]。关于能够同时富集培养食品中常见的沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的培养基目前还未见报道。
主要参考文献[1]刘秀梅，陈艳，王晓英，等.1992～2001年食源性疾病暴发资料分析——国家食源性疾病监测网，卫生研究，2004(6)725-727. 陈福生，高志贤，王建华.食品安全检测与现代生物技术.北京化学工业出版社，2004. GB4789-94.食品卫生微生物学检验.北京中国标准出版社，1994. Jiang J，Larkin C，Steele M，et al. Evaluation of universal pre-enrichment broth for the recovery of foodbornepathogens from milk and cheese.Journal of Dairy Science，1998，812798-2803. Zhao T，Doyle M P.Evaluation of universal pre-enrichment broth for growth of heat-injured pathogens.Journal of Food Protect，2001，64(11)1751-1755. Nam H M，Murinda S E，Nguyen L T，et al.Evaluation of universal pre-enrichment broth for isolation ofSalmonella spp.，Escherichia coli O157H7，and Listeria monocytogenes from dairy farm environmentalsamples.Foodborne Pathogenic Disease，2004，1(1)37-44.
发明内容
本发明的目的是提供一种能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养基。
为达到上述目的，本发明采取的技术方案是本发明是一种能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养基，其主要组分和含量为氯化钠25～75g，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)5～15g，磷酸二氢钾0.5～3.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.5。
本发明是一种能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养基，其组分和含量为蛋白胨5～20g，牛肉膏1～5g，氯化钠25～75g，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)5～15g，磷酸二氢钾0.5～3.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.5。
本发明是一种能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养基，其组分和含量为蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠50g，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)9g，磷酸二氢钾1.5g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
采用上述方案后，由于本发明在培养基中含有磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)和磷酸二氢钾的缓冲体系，所以针对食品样品复杂的酸碱性环境，可防止增菌过程中pH值的剧烈变化，有利于沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌快速的增殖，大大减少假阴性，提高检测结果的准确性。同时，考虑到沙门菌和大肠杆菌的竞争力强而耐盐性低，金黄色葡萄球菌的竞争力弱而耐盐性高，本发明优化了培养基中氯化钠的含量，从而使三种细菌能够保持相对一致的增殖速度。
本发明能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，弥补了国内外同类培养基的空白。该培养基同时富集培养三种菌，可以提高检测效率，节约检测成本。
具体实施例方式
实施例1一种能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养基，其组分和含量为蛋白胨5g、牛肉膏1g、氯化钠25g、磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)5g、磷酸二氢钾0.5g，蒸馏水1000mL，pH7.0。
实施例2一种能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养基，其组分和含量为蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠50g、磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)9g、磷酸二氢钾1.5g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
实施例3一种能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养基，其组分和含量为蛋白胨15g、牛肉膏5g、氯化钠75g、磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)15g、磷酸二氢钾3.0g，蒸馏水1000mL，pH7.5。
本发明培养基配制过程准确称取上述各组分，加热溶解于1000mL蒸馏水中，用1mol/LNaOH调pH值至7.2，121℃高压灭菌15min备用。
鉴定方法将10cfu的沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，同时接种于10mL牛奶样品中，加入90mL本发明培养基，经37℃培养16h后，采用WS平板和Baird-Parker平板进行计数。WS平板上出现蓝绿色菌落的为沙门菌，桔黄(红)色菌落为大肠杆菌，Baird-Parker平板上的黑色菌落为金黄色葡萄球菌。同时运用多重PCR进行检测，出现目的扩增条带的为阳性，否则为阴性。
权利要求
1.一种能同时富集培养沙门菌(Salmonella spp.)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的培养基，其配方如下蛋白胨5～20g，牛肉膏1～5g，氯化钠25～75g，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)5～15g，磷酸二氢钾0.5～3.0g，蒸馏水1000mL。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于所述氯化钠为50g，所述磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)为9g，所述磷酸二氢钾为1.5g。
3.根据权利要求1和2所述的培养基，其特征在于将配方各成分加热溶解后，用1mol/LNaOH调节pH到7.2，121℃高压灭菌15min备用。
全文摘要
本发明涉及一种能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养基。食源性病源细菌是引起食物中毒的主要原因之一，快速检测与鉴定它们，有利于有效地预防食物中毒，控制疾病传播和蔓延，因此，相应的快速检测技术发展迅速。但是，在同时富集多种病原细菌的培养基研究方面相对滞后。目前仅有通用预增菌肉汤被报道为可以同时选择性地富集沙门菌、大肠杆菌和单核增生李斯特菌。本发明提供的能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养基，其组分和含量为蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠50g，磷酸氢二钠(Na
文档编号C12R1/19GK101045909SQ20061001864
公开日2007年10月3日 申请日期2006年3月27日 优先权日2006年3月27日
发明者陈福生, 许一平 申请人:陈福生, 许一平