竹叶菜组织培养的方法

文档序号:557419阅读:471来源:国知局
专利名称:竹叶菜组织培养的方法
技术领域
本发明涉及一种野生竹叶菜的组织培养方法,属于生物技术领域,具体地说是属于植物组织培养范畴。
背景技术
植物体要繁衍后代,在适合的条件下延续生长,自然方法多用种子(包括果实),孢子等方式,要传播又借各种媒体,常见的传播媒体有;流水、鸟、风、动物等,还有部份植物利用地下各种形态的茎完成自身繁衍。
科学技术不断发展,由于人们在生活上的需要,科学研究的深入,植物体的繁殖方式、方法多种多样。充分利用植物的种子,植物的果实、营养器官、繁殖孢子。组织培养技术产生后,开扩人们繁殖体的思路。用芽、叶、根、花粉、花药等都已繁殖成植株。
竹叶菜为百合科鹿药属(Maianthemum)可食种的别名,该属为多年生草本,根状茎短或伸长,直立或匐匍。茎单生,直立,基部有膜质鞘(鳞叶);叶互生,2-4枚或多数,长圆形或椭圆形,具柄或无柄。总状花序或圆锥花序顶生;花小,两性或单性,如为单性则雌雄异株;花被片6,4,离生或作不同程度的合生,有的合生成高脚碟状;雄蕊6,4,花丝常不同程度地贴生于花被片上,分离部份长或极短;花药球形或椭圆形,基着,内向纵裂;子房3室或2室,每室有胚珠1-3颗,着生于中轴胎座上;花柱长或短,柱头3-2浅裂或深裂。浆果近球形,具1至数颗种子。
竹叶菜营养丰富,新鲜竹叶菜含有90.0%的水分,4.1%的蛋白质,以及人体必须的17种氨基酸,且富含人体不能合成的赖氨酸等,其碳水化合物和脂肪含量较低,是理想的减肥保健食品。
竹叶菜是稀有的野生资源,又可做蔬菜食用,又可做药用。营养成份极其丰富,蛋白质含量高于其它蔬菜72%左右,矿物元素Fe的含量为其它蔬菜的200多倍。氨基酸和维生素C的含量也很丰富,但碳水化合物含量很低,是当今最理想的保健食品。
经研究发现竹叶菜含有丰富的核苷类成份,其中核甘和脱氧核甘具有抗肿瘤,抗病毒等作用,另一种腺嘌吟核甘是治疗室上性心动过速的新药,能在1秒钟内使心跳恢复正常,并抑制血小板凝集防止血栓形成。
竹叶菜是高寒山区居民的一大宗蔬菜,仅靠野生资源无法满足蔬菜市场的需求,更无法为医药业等相关行业所利用。同时,长期以来人们盲目的采集竹叶菜,也造成某些鹿药属种面临灭绝。
野生竹叶菜植株是靠自身根茎上产生不定芽,在适合的环境条件下生长繁衍,而根茎的生长又限制在特殊的环境条件下,而且还要有较长的休眠期。一般在采集地上茎以后,很难有不定芽再萌发生长成另一地上茎,继续维持地下茎的生长。所以在被采摘地上茎以后,若本株根茎再不能萌发新的芽即会自行枯竭,长期被采摘以后此类物种逐渐被灭绝。
就目前而言,竹叶菜主要采自野外,尚未栽培成功,因此野生竹叶菜的开发和利用,必须在保护自然资源的前提下进行。

发明内容
本发明克服了竹叶菜现今无人工繁育的方法,提供了一种快速、可行、成本低、成活率高的人工繁育的方法。
本发明的技术方案,其步骤为1、竹叶菜组培材料选择无病虫害、生长健壮的外植体休眠芽,并带有部份根茎。
2、外植体灭菌处理首先采用常规法,用洗衣粉溶液洗净,再用70%酒精浸泡30-60s,再用0.2%升汞浸泡16-20min,然后用无菌水冲洗5-6次,在无菌的条件下切下茎、芽等外植体接种。
3、愈伤组织及芽的诱导切取的外植体接种在诱导培养基上,培养基选用的MS培养基,补充IBA1.5-3mg/L,PH值为6-7,3周后芽开始萌动,8-10周后芽即长成一个新梢,3-5芽丛生。控制温度20-26℃,光照2000-4000Lux。
4、增殖培养将丛生芽在无菌操作的条件下转入继代增殖培养。增殖培养基采用MS培养基,补充6BA 1-2.5mg/L,NAA1-1.5mg/L,PH值为6-7,控制温度20-26℃、光照2000-4000Lux。
5、生根培养在无菌操作的条件下,将丛生芽从增殖培养基上转接到生根培养基上。生根培养基采用MS培养基,补充NAA 0.6-1.2mg/L,6BA0.2-1.5mg/L,IAA0.3-0.8mg/L,PH值为6-7,温度25℃;光照2000-4000Lux,培养二周即生根。
本发明的有益效果是利用组培技术快速繁殖竹叶菜,人们再不受自然条件限制,能在任何地区,利用保护设施,大量栽培竹叶菜。既保护自然资源,维持自然生态平衡,又为人类所利用,为此进行该项目的研究。第一,用组培的方式繁殖竹叶菜,是当前人工繁殖竹叶菜的唯一方法。大量繁殖以后再进行人工栽培,可避免人为乱采野生资源而带来该种灭绝的后果。第二,扩大了种植地区,生长在海拨3300M以上的竹叶菜,移栽在低海拨地区栽培尚未成功。采用组培繁殖以后,该竹叶菜可以在海拨800-3500米地区种植。第三,缩短了竹叶菜生长的时间,野生竹叶菜可食部份每株繁殖生长的时间约为365天,而本发明(实用新型)所需要的时间约为100天,比野生竹叶菜繁殖生长缩短了265天。第四,按每株增殖率计算,组培苗增殖比野生增殖提高三倍以上。
第五,利用组培苗可进行集约化栽培,不但可以节约大量的物力、财力,还能充分有效的开发利用竹叶菜野生资源。
具体实施例方式
实例一取生长健壮、无病虫害竹叶菜的休眠芽,并带有部份根茎,先用清水洗净再用洗衣粉洗,洗后用自来水冲洗15min,在无菌的条件下切取休眠芽,用70%的酒精浸泡35s,再用0.2%升汞浸泡16min,浸泡后随即用无菌水冲洗5次,然后接种到备好的培养基上,进行诱导芽。
芽的诱导培养基为MS培养基,配制方法采用常规配制法,琼脂用优质琼脂。MS培养基中补充6BA0.5mg/l,PH值为6,温度20℃,光照2000lux。21天后芽开始萌动,56天长成新梢,丛生芽3个。在无菌的条件下切取芽转接到增殖培养基上进行增殖培养。
增殖培养基为MS培养基,其中补充6BA1mg/l,NAA1mg/l,配制采用常规配制法,优质琼脂适量,PH值6,温度20℃,光照2000lux,约6周后芽开始分化,分化芽2个。7周后在无菌的条件下接种到生根培养基上。
生根培养基为MS培养基,其中补充6BA0.1mg/l,NAA0.6mg/l,IAA0.3mg/l,PH值为6,温度25℃,光照2000lux。21天后开始生根,速度较快。生根后30天揭开瓶盖,2天后取出瓶苗开始过渡栽培。
从瓶中取出幼苗浸泡在0.5%kMnO4溶液中20s,取出后栽到高温灭菌的珍珠岩中10天成活以后,再栽到配制营养土袋中,营养土的配制,沙壤土与珍珠岩的比例为4∶1。3天后正常生长成活率87%左右。
实例二选用生长健壮、无病虫害的竹叶菜休眠芽,并带有部份根茎,先用清水洗净再用洗衣粉洗,洗后用自来水冲洗20min,在无菌的条件下切取休眠芽,用70%酒精浸泡65s,用0.2%升汞浸泡20min,再用无菌水冲洗6次,然后接种到备好的培养基上进行诱导芽。
芽的诱导培养基为MS培养基,配制方法采用常规配制法。选用优质琼脂,MS培养基中补充6BA3mg/l,PH值为7,温度26℃,光照4000lux。25天后芽开始萌动,70天后长成新梢,丛生芽有5个。在无菌的条件下切取芽转接到增殖培养基上进行增殖培养。
增殖培养基为MS培养基,其中补充6BA2.5mg/l,NAA1.5mg/l,配制采用常规配制法,优质琼脂适量,PH值为7,温度26℃,光照4000lux,约6周后芽开始分化,分化芽有3个,7周以后在无菌的条件下接种到生根培养基上。
生根培养基为MS培养基,其中补充6BA1.5mg/l,NAA1.2mg/l,IAA1.0mg/l,PH值为7,温度25℃,光照4000lux,30天开始生根,生根40天后揭开瓶盖,2天后取出瓶苗开始过渡栽培。
从瓶中取出幼苗浸泡在0.5%kMnO4溶液中20s,取出后栽到高温灭菌的珍珠岩中11天,成活以后,再栽到配制的营养土袋中,培养土的配制,沙壤土与珍珠岩的比例为4∶1。4天后正常生长成活率97%左右。
实例三选用生长健壮、无病虫害的竹叶菜的休眠芽,带有部份地下根茎,先用清水洗净再用洗衣粉洗,洗后用自来水冲洗16min,在无菌的条件下切取休眠芽,用70%的酒精浸泡40s,用0.2%升汞浸泡17min,再用无菌水冲洗6次,随后接种到备好的培养基上进行诱导芽。
芽的诱导培养基为MS培养基,其中补充6BA1.5mg/l,选用优质琼脂,配制方法采用常规配制法。PH值为6.5,温度22℃,光照3000lux。22天以后芽开始萌动,60天后长成新梢,丛生芽有4个。在无菌的条件下切取芽转接到增殖培养基上进行增殖培养。
增殖培养基为MS培养基,其中补充6BA1.5mg/l,NAA1.2mg/l,选用优质琼脂,采用常规方法配制。PH值为6.5,温度24℃,光照3000lux,约6周后芽开始分化,分化芽有2个。7周以后在无菌的条件下接种到生根培养基上。
生根培养基为MS培养基,其中补充6BA0.5mg/l,NAA0.7mg/l,IAA0.4mg/l,PH值为6.3,温度25℃,光照3000lux。25天后开始生根,根系较多,植株较壮,生根后32天揭开瓶盖,2天后取出瓶苗开始过渡栽培。
从瓶中取出幼苗浸泡在0.5%kMnO4溶液中20s,取出后栽到高温灭菌的珍贵岩中12天成活以后,再栽到配制的营养土袋中,营养土的配制,沙壤土与珍珠岩的比例为4∶1。5天后正常生长成活率95%左右。
实例四选用生长健壮、无病虫害的竹叶菜的休眠芽,先用清水洗净再用洗衣粉洗,洗后用自来水冲洗17min,在无菌的条件下切取休眠芽,用70%的酒精浸泡45s,用0.2%升汞浸泡18min,再用无菌水冲洗6次,随后接种到备好的培养基上进行诱导芽。
芽的诱导培养基为MS培养基,其中补充6BA2mg/l,选用优质琼脂,配制方法采用常规配制法。PH值为6.7,温度22℃,光照3500lux。23天以后芽开始萌动,64天后长成新梢,丛生芽有4个。在无菌的条件下切取芽转接到增殖培养基上进行增殖培养。
增殖培养基为MS培养基,其中补充6BA1.7mg/l,NAA1.3mg/l,选用优质琼脂,采用常规方法配制。PH值为6.7,温度24℃,光照3500lux,约6周后芽开始分化,分化芽有2个。7周以后在无菌的条件下接种到生根培养基上。
生根培养基为MS培养基,其中补充6BA0.8mg/l,NAA0.8mg/l+IAA0.5mg/l,PH值为6.5,温度25℃,光照3500lux。23天后开始生根,根系较多,植株较壮,生根后33天揭开瓶盖,2天后取出瓶苗开始过渡栽培。
从瓶中取出幼苗浸泡在0.5%kMnO4溶液中20s,取出后栽到高温灭菌的珍贵岩中12天成活以后,再栽到配制的营养土袋中,营养土的配制,沙壤土与珍珠岩的比例为4∶1。5天后正常生长成活率94%。
实例五选用生长健壮、无病虫害的竹叶菜休眠芽,并带有部份根茎,先用清水洗净再用洗衣粉洗,洗后用自来水冲洗18min,在无菌的条件下切取休眠芽,用70%酒精浸泡60s,用0.2%升汞浸泡19min,再用无菌水冲洗6次,然后接种到备好的培养基上进行诱导芽。
芽的诱导培养基为MS培养基,配制方法采用常规配制法。选用优质琼脂,MS培养基中补充6BA2.8mg/l,PH值为6.9,温度25℃,光照2500lux。24天后芽开始萌动,68天后长成新梢,丛生芽有3个。在无菌的条件下切取芽转接到增殖培养基上进行增殖培养。
增殖培养基为MS培养基,其中补充6BA2.3mg/l,NAA1.4mg/l,配制采用常规配制法,优质琼脂适量,PH值为6.9,温度25℃,光照2500lux,约6周后芽开始分化,分化芽有2个,7周以后在无菌的条件下接种到生根培养基上。
生根培养基为MS培养基,其中补充6BA1.3mg/l,NAA1.1mg/l,IAA0.8mg/l,PH值为6.2,温度25℃,光照2800lux,24天开始生根,生根36天后揭开瓶盖,2天后取出瓶苗开始过渡栽培。
从瓶中取出幼苗浸泡在0.5%kMnO4溶液中20s,取出后栽到高温灭菌的珍珠岩中15天,成活以后,再栽到配制的营养土袋中,培养土的配制,沙壤土与珍珠岩的比例为4∶1。5天后正常生长成活率93%左右。
权利要求
1.一种竹叶菜组织培养的方法,其步骤为(1)竹叶菜组培材料的选择选择无病虫害、生长健壮的外植体休眠芽,并带部份根茎;(2)外植体灭菌处理首先采用常规法,用洗衣粉溶液洗净,再用70%酒精浸泡35-65s,再用0.2%升汞浸泡16-20min,然后用无菌水冲洗5-6次,在无菌的条件下切下茎、芽等外植体接种;(3)愈伤组织及芽的诱导切取的外植体接种在诱导培养基上,培养基选用的MS培养基,补充6BA0.5-3mg/L,PH值为6-7,3周后芽开始萌动,8-10周后芽即长成一个新梢,3-5芽丛生;控制温度20-26℃,光照2000-4000Lux;(4)增殖培养将丛生芽在无菌操作的条件下转入继代增殖培养,增殖培养基采用MS培养基,补充6BA 1-2.5mg/L、NAA1-1.5mg/L,PH值为6-7,控制温度20-26℃、光照2000-4000Lux;(5)生根培养在无菌操作的条件下,将丛生芽从增殖培养基上转接到生根培养基上,生根培养基采用MS培养基,补充NAA 0.6-1.2mg/L,6BA0.1-1.5mg/L,IAA0.3-1.0mg/L,PH值为6-7,温度25℃,光照2000-4000Lux,培养二周即生根。
全文摘要
本发明是一种野生竹叶菜的组织培养方法,属于植物组织培养领域。本发明的技术方案,其步骤为(1)选择适合的外植体;(2)外植体的消毒处理;(3)愈伤组织及芽的诱导;(4)增殖培养;(5)生根培养;(6)瓶苗过渡。本发明用组织培养的方式繁殖竹叶菜,是当今人工繁殖竹叶菜的唯一途径;其扩大了种植地区,从原海拨3300米的生长区域扩大到海拨800-3500米地区的种植;比野生竹叶菜生长发育(从休眠到形成商品菜)时间缩短了265天;比野生竹叶菜每株的繁殖率提高三倍以上;可发展集约化栽培,避免人为乱采野生资源而带来该种灭绝的后果;充分有效的开发利用竹叶菜野生资源,保护自然资源,维持自然生态平衡。
文档编号C12N5/04GK1973618SQ20061016382
公开日2007年6月6日 申请日期2006年12月21日 优先权日2006年12月21日
发明者桂明英, 郭永红, 朱萍 申请人:中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所
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