利用scmv-cp基因培育抗花叶病甘蔗品种的方法

专利名称：利用scmv-cp基因培育抗花叶病甘蔗品种的方法
利用SCMV-CP基因培育抗花叶病甘蔗品种的方法技术领域 本发明涉及一种运用基因工程技术培育甘蔗抗花叶病 种质材料的方法，包括甘蔗花叶病毒外壳蛋白(SCMV-CP)的氨基酸和核 酸序列，利用该序列构建的载体及培育的转基因植株，属于植物基因工程 技术领域。
背景技术：
甘蔗花叶病是一种重要的世界性甘蔗病害，自1892年 Muschenbroek在爪哇首次记述甘蔗花叶病，至今全世界各大蔗区普遍发 生，并成为甘蔗生产的重要病害之一。近年来，我国的闽、台、粤、桂、 滇、浙等省蔗区的果蔗及部分糖蔗品种也普遍发生。大田研究表明，当初 侵染率达75%时，产量降低5% 19%，节间变短，品质变差，严重影响商 品价值，而且蔗汁中还原糖增加，降低蔗糖的结晶率(陈宇航等，1988)。甘蔗花叶病可以经病株汁液摩擦、蚜虫、真菌和蔗种传播，造成的损 火主要是感病植株作为蔗种，萌芽率降低，病株因叶绿体受到破坏而生长 较差，严重影响甘蔗产量。目前除通过培育抗性品种外，主要是茎尖和愈 伤组织培养脱除感染的病毒，恢复品种特性，提高产量和糖分。但是脱毒 苗易退化而重新感病导致花叶病的爆发流行。因此，选育与利用抗病品种 是控制甘蔗花叶病发生的根本措施。由于甘蔗是异源多倍体，遗传背景极其复杂，主要栽培种在正常栽培 条件下难以开花，用常规方法难以培育抗花叶病毒新品种(许莉萍等， 2001)。早期已报道，利用编码病毒外壳蛋白基因的转基因植株可以减少 或抵抗相同病毒的侵染，提高抗病毒性。这种现象称为"外壳蛋白介导的 抗性"(参考Beachyetal, 1990 Annu. Rev. Phytopathol. 28:451-74)。 在有些情况下，转基因植株也可能对相关CP基因来源的病毒产生抗性， 而对无关病毒仍保持敏感。从1986年，美国Powel-Abel最先报道了将 TMV-CP基因转入烟草获得了对TMV具有抗性的转CP基因烟草植株以来， 利用病毒的CP基因获得抗病植株的可行性已在多种病毒、多种植物中得 到证实。植物抗病毒基因工程迅速发展，已经获得许多植物抗病毒转基因
植株，为抗病毒育种提供广阔前景。本发明就是针对以上背景技术，通过分离克隆SCMV的外壳蛋白基因， 并利用其构建高效植物表达载体，建立以抗生素为筛选剂的转基因遗传转 化筛选体系，以及快速、高效的转基因检测技术和抗病评价技术，大幅度 提高甘蔗抗花叶病育种效率，为甘蔗抗花叶病品种的培育奠定良好的技术 基础。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用SCMV-CP基因培育抗花 叶病甘蔗品种的方法。所解决的技术问题是一种利用转基因技术改良甘蔗 抗花叶病的方法。具体地说，从高度感染甘庶花叶病的Badila中分离克 隆SCMV-CP基因，构建植物表达载体，利用基因枪转导将其插入到甘蔗品 种Badila.的基因组中，培育抗花叶病转基因甘蔗品种，以提高其抗病性。 所述的SCMV(Sugarcane Mosaic Virus)指甘蔗花叶病毒；所述的SCMV-CP 基因指编码甘蔗花叶病毒的外壳蛋白基因。本发明利用SCMV-CP基因培育抗花叶病甘蔗品种的方法，包括SCMV-CP 基因的克隆、抗花叶病甘蔗转CP基因植物表达载体的构建、抗甘蔗花叶病 转CP基因材料的培育以及抗病高产高糖转基因甘蔗新材料的筛选鉴定，其 特征在于1 、 SCMV-CP的核苷酸序列为序列表中SEQ. ID. NO. l所示的碱基序列。2、 SCMV-CP的核苷酸序列所推演的氨基酸序列为序列表中SEQ. ID. NO. 2所示的氨基酸序列。3、 构建的植物表达载体为pUbi-SCMV-CP;所述的pUbi-SCMV-CP指以 SCMV-CP为目的基因，libi为启动子，Nos为终止子，Z7/^II为筛选标记基因 的植物表达载体。4、 利用基因枪转导获得转基因甘蔗品种，其外源SCMV-CP基因插入基 因组的拷贝数为2 3个。根据上述培育方法获得的转SCMV-CP基因品种，其抗病性、光合能 力、产量、糖份都优于甘蔗受体品种Badila及其组培后代。已获得的转 SCMV-CP基因品种分别为福果2、福果36、福果38、福果48和福果51。
本发明的序列与己报道的其它病毒CP基因有明显不同，SCMV-CP全长1170bp，包括病毒的完整外壳蛋白(Coat Protein, CP)序列及231bp 3'端非编码区。由于病毒采用翻译后修饰进行蛋白编译，整个病毒核酸 序列只有一个大的0RF，由一个起始密码子ATG决定氨基酸编码的起始位 置，所以所得基因序列的ORF并非始于ATG，在CP序列中存在DAG氨基 酸残基序列，此结构被认为与蚜虫传播相关；在N-末端约100个氨基酸 为高度变异区，分析其5'末端核苷酸序列，发现存在长度为20-30核苷 酸的重复序列，在此区域的氨基酸序列中，3个氨基酸的残基数占总残基 总数的60°/。以上，在SCMV-CP中它们为谷氨酰胺(Q或Gln)、甘氨酸(G 或Gly)和丙氨酸(A或Ala);而在SrMV-CP中为天冬氨酸(D或Asp)、 赖氨酸(K或Lys)和丙氨酸(A或Ala)。本发明的转基因甘蔗品种具有以下优点甘蔗花叶病发病率在0 20%之间，而且不同无性世代间基本保持稳定，而受体品种拔地拉(Badila) 发病率达92% 100%，组培后代发病率也在30%以上(详见表1);光合 能力明显高于受体品种，净光合速率达到36ii mol m—2 s—\为受体品种 的1. 5倍，光合作用关键酶PEPCase的活性达到1309. 2 U，为受体品种 的3倍(详见表3);在大田生长快于受体品种，株高增加23% 32%，有 效茎数增加45% 55%。，每公顷蔗茎产量增加62% 80.6%，甘蔗糖份(绝 对值)提高1. 15% 2. 15% (详见表2)。表l转基因甘蔗花叶病的发病情况(％)试验材料 -T无性繁殖世代 T2 T3T4抗性反应抗病类型福果212. 312. 112. 012. 6MR恢复型6.45.65.48.6R延迟发病型转基因品种 福果3824. 028.916.222. 1MR恢复型福果480. 00. 00.00.0HR免疫型福果5119.718.48. 010.9服恢复型受体原种(CK')91. 792. 1100. 099. 3HS/受体品种的组培后代(cig50. 041. 031. 636. 9S/注甘蔗花叶病的抗性反应类型按照丛(株)感染率小于1.0%为高抗(HR)，丛(株)感染率1.1%~10.0%为抗病(R)，感染率10.1%~33.0%为中度抗病(MR)，丛 (株)感染率33.1%~66.0%为感病(S)，大于66.1%为高度感病(HS)。表2转基因甘蔗的农艺性状表现试验材料甘蔗蔗 糖份(%)株高(cm)茎径(cm)单茎重 (kg/条)有效茎 (万条 /to2)蔗茎产量 (吨/ hm2)福果215.41213±8A3細.1AB1.5肚0.09 AB5.6±0.1 a85.2±2.6 a转 福果36 基14.85206±6 AB2.8士0.1B1.31±0.31 AB5.5士1.4a72.6士23.8a b因 福果3814.53211±3A3.1士0.3AB1.63±0.11 A5.6±0.4 a89.3土2.1a ' 福果4815.50221±3A3.0士0.1AB1.6±0.05 A5.9±0.8 a93.9士16.6a福果5114.50210±12A3.0i0.0AB1.45土0.12AB5.8土1.0a84.2±15.1 a受体原种(GQ14.05193±1B2.8±0.1BU9±0.08 B5.1 ±0.5 a60.9士4.4b受体品种的组 培后代(og13.35167±2C3.2土0.1A1.38±0.05 AB3,8±0.2 b52.0士3.3b汴统计分析采用Duncan新复极差法，小写字母表示p<0.05，大写字母表示P<0.01 。表3基因甘蔗(B48)与非转基因甘蔗(Badila)叶片光合特性比较甘蔗叶片光合特性 非转基因甘蔗(Badila) 转基因甘蔗福果48净光合速率(Pn) (ji mol m—2 s一1 )24. 7±1. 1B36. 0±0. 6A气孔导度 (Cs)(咖ol m—2 s—1 )0.23 ±0.03B0. 36±0. 05A蒸腾速率(Tr) (mmol nf2. s—')3.68 ±0.63B5.79 ±0.63APEPCase活性(U)453.2 ±86.3B1309.2 ±89.4A注统计分析采用Duncan新复极差法，小写字母表示p<0. 05，大写字母表示P<0. 01;具体实施方式
为了进一步更详细地阐明本发明而不是限制本发明， 以下结合实施例加以说明。实施例利用SCMV-CP基因培育抗花叶病甘蔗品种的方法，包括以下 步骤1、 甘蔗花叶病毒外壳蛋白基因(SCMV-CP)的克隆通过GENBANK已经公布的甘蔗花叶病毒亚组基因序列，并对其所编码(2) RCP,第2组(3) FCP-(4) RCP:的多聚蛋白氨基酸序列进行多重序列分析后，根据保守氨基酸序列，设计 合成2组特异引物第1组(1) FCP" 5, -GGAAATAATAGTGGACAAC-3'5' -TCTCACCAAGAGACTCGCAG-3' 5' -CCATA丁ATAGCAGAAACAG-3' 5' -TAAAAGAAGGAGA-3' 利用上述第1组或第2组引物，以Trizol方法提取的感病叶片总RNA 为模板，使用反转录酶合成cDNA第一条链，其反应按照如下进行:取5 y 1 总RNA样品(约2 ug)，加入l u10. 5 ug/ul的Oligo(dT)w于70°C 温育3 min，置冰上2 min后，分别加入下列成分5 P 1的5 X RNA M-MLV 缓冲液，9. 5 ii 1的无RNase的水，2 y 1的dNTPs， 0. 5 u 1的RNase抑制 剂以及2 w 1的M-MLV反转录酶。轻轻混匀，稍离心，于42 r温育60 min。 然后将反应混合物加热至75°C，温育8 min终止反应，冰上冷却并稍离 心，-2(TC保存备用。然后采用上述设计的RT-PCR引物进行PCR扩增，其 反应组成如下.'5nl的IOXPCR缓冲液，36. 5ul的灭菌超纯水，2yl 的dNTPs， 0. 5 u 1的TaKaRa Ex Taq酶以及FCP和RCP引物各1 P 1以及 4y 1的cDNA模板。PCR按如下反应条件进行94"变性2min，然后94°C 变性30sec、 52。C退火45sec、 72。C延长90sec， 30个循环，最后72。C延 长7 min， 4。C过夜。PCR扩增结束后，以新鲜的TAE Buffer为电泳缓冲 液，在1%的琼脂糖凝胶上进行电泳，采用PCR Fragment Recovery Kit 的方法回收RT-PCR产物，然后连接到pMD-18-T载体上进行酶切验证和测 试，以RV-M和M13-47引物，在ABI PRISM 377XL型纖测序仪上对 pMD-18-T-CP质粒进行测序分析，结果见SEQ. ID. NO. 1。采用BLAST、 D敲MAN 4.0、 OMIGA2.0软件进行序列分析，上述这些方法都是常规分子 生物学技术。2、抗甘蔗花叶病转SCMV-CP基因植物表达载体的构建用SscI和fe历〃/双酶切T-CP质粒和pnNPTII表达载体，将切下的目 的基因CP片段和载体片段通过琼脂糖凝胶电泳回收试剂盒回收，连接目 的基因和载体片段，转化DH5 a并进行PCR和酶切鉴定后得到Ubi启动子
驱动的CP基因植物表达载体pUbi-SCMV-CP。采用基因枪的方法转化甘蔗，筛选标记基因为"/^I工。操作过程中有关质粒提取、酶切、回收、连接、细胞转化、重组质粒的酶切鉴定和PCR鉴定为分子生物学的常规方法，参考萨姆布鲁克和拉塞尔(黄培堂，王嘉玺等译)，分子克隆实验指南(第三版)，北京科学出版社，2002。3、抗甘蔗花叶病转SCMV-CP基因材料的培育(1) 受体材料预处理在基因枪轰击前先将受体材料转入JDA培养 基中预培养2 d，然后转入含渗透剂0.2 mol/L甘露醇和0.2 mol/L山 梨醇的JDA培养基中预处理4 6 h。(2) 基因枪轰击将预先准备好的装有愈伤组织的小培养皿放入基 因枪室的托盘上，关闭基因枪门，利用气压1100 psi和射击距离6cm直 接轰击甘蔗胚性愈伤组织。(3) 过渡培养轰击后的愈伤组织仍放回预处理培养基(MS+2, 4-D 2 mg/L+Sorbitol 0.2 mol/L+Mannito1 0.2 mol/L)上继续处理18h，其后 接入MS+2，4-D 2 mg/L的培养基上25。C暗恢复培养5 8 d。(4) 筛选继代培养恢复后的愈伤组织转移至含有30 mg/L G418 的JDA培养基上筛选继代培养，15d继代一次；(5) 筛选分化培养选择继代三次后仍存活的愈伤组织，转接入含 有30 mg/L G418的ffl培养基进行筛选分化。(6) 筛选促根培养抗性苗长到2-4cm后，转入含有20mg/LG418 的SG培养基上筛选和生根培养。(7) 炼苗和移栽当幼苗的根长至2.5 cm长时，移到室外炼苗2d， 然后将小苗取出，用流水洗净附着的培养基，移栽到小花盆中(草木灰 砂子:耕作土=1:1:1，混合后高压灭菌)定时喷浇稀释10倍的MS无机盐(8) 转基因植株的分子检测根据所转导的甘蔗花叶病病毒蛋白基 因序列设计特异引物，分别进行PCR、 Southern和Northern杂交检测， 对于标记基因为，tl工基因的转基因植株还进行基因的分子检测。 经Southern杂交证实，转基因抗花叶病品种的外源CP基因的拷贝数福 果2号、福果38和福果48分别为2个拷贝，福果36和福果51分别为3 个拷贝。Southern杂交采用Clontech公司ExpressHybM Hybridization Solution (产品号636833)的试剂盒，操作过程严格按照试剂盒提供的 指南方法(ExpressHyb Hybridization Solution User Manual, PT1190-1 )。4、抗病高产高糖转基因甘蔗新材料的筛选鉴定根据国家转基因安全管理条例，将获得的转基因植株及相应的对照(空载体轰击获得的植株以及受体原种Badila)分别在人工气候箱、大棚 温室以及大田进行抗病性和生长、产量和糖份的筛选鉴定，结合抗病、增 产的生理生化指标，筛选评价转基因无性系。在转基因中间试验阶段，进 行温室和大田进行人工接种鉴定；在环境释放试验阶段进行自然诱发接种 鉴定，并进行工农艺性状的评价；在生产试验示范阶段进行较大面积的田 间鉴定和工农艺性状的评价，筛选抗花叶病转基因甘蔗新种质材料。(1)抗病性鉴定 *接种鉴定病毒液粗提参照周仲驹等(1987)方法，取严重感染相同花叶病的 病叶加3倍量的(v/w) 0.1 mol/L pH7. 2含NaS0:,的磷酸缓冲液，经高速组 织捣碎机捣碎5 min，双层纱布过滤榨汁或12, 000 g离心10 min，取上清。 汁液用于田间或温室病毒接种。接种方法用上述病毒汁液磨擦接种生长至7-8片叶的转基因甘蔗植 株。接种时，接种叶片大小一致，先用镊子轻轻划伤嫩叶，然后沾取少量 病毒液涂抹伤口处。重复接种2次，每次间隔6 d。 .发病率调查首次接种7 d后开始调查发病率，以后每周调查一次， 直至发病率稳定。 *自然诱发接种鉴定以空载体转化植株、受体原种作为对照，每隔两个转基因甘蔗无性系， 种植一行原种作为诱发行。田间自然发病在甘蔗齐苗后开始调查发病率， 每周调查一次，直到发病率稳定。*结果通过人工接种抗性鉴定和田间自然诱发鉴定，四个世代的转基
因甘蔗与非转基因甘蔗的发病情况见表l。在人工接种条件下，受体品种(原种)Badila的发病达91.7。/。，组培无性系发病率达50. 0%， Badila通过 组培后其发病率虽然也大幅度降低，但是还极易感病，而转基因甘蔗的发 病率都低于25%，说明转入外源SCMV-CP基因后提高了甘蔗抗花叶病的能 力。不同转基因甘蔗无性系抗病性也存在着差异，其中福果48表现高抗， 在四个世代中均未发病，为免疫型；福果36表现抗病，平均发病率低于10%， 为延迟发病型(在田间叶片出现花叶病症状明显迟于非转基因甘蔗)；福 果2、福果38和福果51表现中抗，发病率在12. 3 22. 8%，为恢复型(即当 发病率到达最大后，有些植株逐渐恢复，使得后期发病率降低)；比较不 同世代转基因甘蔗的抗病性，虽然在不同的世代其发病率有一定波动，但 基本保持较稳定，说明其抗病能力可以通过无性繁殖稳定的传给下一代。(2) 生长和工农艺性状筛选 田间甘蔗出苗率达到50%以后，开始调查出苗率，每周调查一次，直至稳定；甘蔗生长速度调查分蘖结束后开始，每30天调査一次直到11月份。 在甘蔗工艺成熟期，测量其锤度、株高、茎径并计算有效径数；糖份分析 在ll月中旬开始，每隔15天采样分析蔗糖份、蔗汁纯度、锤度、纤维分等。 结果见表2。(3) 转基因甘蔗的光合特性*光合参数测定:在甘蔗生长的分蘖末期用LI-6400光合作用测量系统测 定甘蔗+l叶叶片的光合作用能力，以1500Wno1 m—2 s—'的固定光强测 定，每个重复随机测定5株。* PEPCase酶活性测定参照现代植物生理实验指南的方法，0. 3g样品加 入2mL提取液(50聽l L—1 pH7. 5 Tris-HC1缓冲液，内含l咖ol L-1 MgCl2， 2%PVP， 5咖ol.L—'DTT)研磨匀桨，8000 rpm离心10min，上 清液即为粗酶液，在lmL的反应体系(50 mmol L—1 pH8. 0 HEPES—KOH 缓冲液，内含IO mmol L—' NaHCO:,， 2%PVP， 5 mmol L—WgCl" 0.2 mmol.L—1 NADH， 4 mmol L—屮EP)中加入30 W的酶液启动反应，以 每mg蛋白每分钟在340nm处OD值降低0. Ol作为一个酶活性单位。*结果光合特性结果见表3
序列表0625〈110〉 福建农林大学< 120〉利用SCMV-CP基因培育抗花叶病甘庶品种的方法〈130〉"60〉 4、170〉 Patentln version 3.1"10> 1"11〉 1170112〉 DNA<213〉 Sugarcane Mosaic Virus (SCMV)〈400〉 1g('tggaacagtcgatgcaggcgctcaaggaggaggtgg犯acgccggaacccagccgcca60"('C3('t卿gC3gC3gCtC3C犯CC3CC3gcaactggggc3gctgcgcsa120r(:acccgcgactcaaggttcacaaccgcccacagggggagctactggtggaggtggtgca180ctggtgtaactggc'tcagttacaggaggccaaagagacaaggatgtagat240g(' Lggcacgacacagtgccaccatgtcaaagaagatgcgc300caa犯gggaaagatgttttgcatctggactttctgttgacatacaagccg360cacaagagcaaccagagaggagtttgataggtggtacg犯420g('cataaagaaatagatgacacacaaatgacagttgtcatgagtggtcta480("g'gtUggttggUgctcaatggaagttggacaatgatg540cttcccattgaaaccagttattg犯aacgcatctccaaca60011 ccgg'caaataatgcatcattt cagtgatgcagctgaagcatatatcga statagaaac660l (■ "ic叫-agcgatacatgccacgatatggacttxagcgaaatctcaccgactatagctta720catttgscttt tSCg3犯tgC3CC3gCt3g780grccacatgcagatgaaggccgcagcagtccgtggttcaaacac2tcgattgttcagtctg840wicgga朋tgtcggcg，cccaggagaatacagagagacacacagctggcgatgtcagt900actctctgttgggagtgcagcagc己ccactagtctcctggaaaccctgtt960atgtcagtgagg"ttctacctcgtctttact1020atattacgtatgtacttaaagcgtgaaccagtctgcaggac織gggttggacccagtgt1080("ctggtgtagcgtgtactagcgtcgagccacgtgacggacagcactgggtgtggctU1140g(、cattggtgctgcgagtctcUggtg卿1170〈210〉 2 <211〉 313 〈1M2〉 PRT〈213〉 Sugarcane Mosaic Virus (SCMV)、''100〉 2'\la Gly Thr Val Asp Ala Glv Ala Gin Gly Gly G1y Gly Asn Ala Gly 15 10 15Thr Gin Pro Pro Ala Thr Gly Ala Ala Ala Gin Gly Gly Ala Gin Pro 20 25 30Pro Ala Thr Gly Ala Ala Ala Gin Pro Pro Ala Thr Gin Glv Ser Gin 35 40 45
卩io卩]'。Thr Gly Gly Ala Thr Gly Gly Gly Glv Ala Gin Thr Gly Ala 50 55 60(;ly Val Thr Gly Ser Val Thr Gly Gly Gin Arg Asp Lys Asp Val Asp (i「〕 70 75 80Ala Glv Thr Thr Gly Lys lie Thr Val Pro Lvs Leu Lvs Ala Met Ser 85 90 95Lvs Met Arg Leu Pro Lys Ala l>vs Gly Lys Asp Val Leu His Leu 100 lt)5 110Asp Phe Leu Leu Thr Tyr Lys Pro Gin Gin Gin Asp lie Ser Asn Thr 115 120 125Arg Ala Thr Arg Glu Glu Phe Asp Arg Trp Tyr Glu Ala lie Lys Lys 130 135 140(;lu Tyr Glu lie Asp Asp Thr Gin Met Thr Val Val Met Ser Gly Leu 145 150 155 ' 160Mot Val Trp Cys lie Glu Asn Gly Cvs Ser Pro Asn lie Asn Gly Ser 165 ' 170 175IY卩Thr Met Met Asp Gly Asp Glu Gin Arg Val Phe Pro Leu Lys Pro 180 _ 185 190 'Lie Glu Asn Ala Ser Pro Thr Phe Arg Gin lie Met His His Phe 195 200 205Ser Asp Ala Ala Glu Ala Tyr lie Glu Tvr Arg Asn Ser Thr Glu Arg 2L0 215 220Tyr Mel Pro Arg Tyr Gly Leu Gin Arg Asn Leu Thr Asp Tyr Ser Leu 225 230 235 240Ala Arg Tyr Ala Phe Asp Phe Tyr Glu Met Asn Ser Arg Thr Pro Ala 245 250 255Arg /Ua Lys Glu Ala His Met Gin Met Lys Ala Ala Ala Val Arg Gly 260 265 270Ser Asn 丁hr Arg Leu Phe Ser Leu Asp Gly Asn Val Gly Glu Thr Gin 275 280 2&(;lu Asn Thr Glu Arg His Thr Ala Gly Asp Val Ser Arg Asn Met His 290 295 300Ser l.eu Leu Glv Val Gin Gin His His :U)5 310<210〉 3〈211〉 19<212〉 DNA<213〉 Sugarcane Mosaic Virus (SCMV)<formula>formula see original document page 13</formula>
权利要求
1、一种利用SCMV-CP基因培育抗花叶病甘蔗品种的方法，包括SCMV-CP基因的克隆与测序、抗甘蔗花叶病转CP基因植物表达载体的构建、抗甘蔗花叶病转CP基因材料的培育以及抗病高产高糖转基因甘蔗新材料的筛选鉴定，其特征在于(1)SCMV-CP的核苷酸序列为序列表中SEQ.ID.NO.1所示的碱基序列；(2)SCMV-CP的核苷酸序列所推演的氨基酸序列为序列表中SEQ.ID.NO.2所示的氨基酸序列；(3)构建的植物表达载体为pUbi-SCMV-CP；(4)利用基因枪转导获得转基因甘蔗品种，其外源SCMV-CP基因插入基因组的拷贝数为2～3个。
2、 根据权利要求1所述的一种利用SCMV-CP基因培育抗花叶病 甘蔗品种的方法，其特征在于设计合成的特异弓I物为(1) FCPl: 5， -GGAAATAATAGTGGACAAC-3，(2) RCP,: 5， -TCTCACCAAGAGACTCGCAG-3，。
3、 根据权利要求1或2的方法培育的转SCMV-CP基因品种，其 抗病性、光合能力、产量、糖份都优于甘蔗受体品种。
全文摘要
利用SCMV-CP基因培育抗花叶病甘蔗品种的方法，包括SCMV-CP基因的克隆、抗花叶病转CP基因甘蔗植物表达载体的构建、抗甘蔗花叶病转CP基因材料的培育以及抗病高产高糖转基因甘蔗新材料的筛选鉴定。获得的转SCMV-CP基因甘蔗品种，其抗病性、光合能力、产量、糖份都优于受体品种Badila及其组培后代。目前，已获得转SCMV-CP基因品种分别为福果2、福果36、福果38、福果48和福果51，发病率由受体品种的92％～100％，降至0～20％；净光合速率达到36μmol·m^-2·s^-1，为受体品种的1.5倍；株高增加23％～32％，有效茎数增加45％～55％。每公顷蔗茎产量增加62％～80.6％，甘蔗糖份(绝对值)提高1.15％～2.15％。
文档编号C12N15/82GK101126090SQ20071000922
公开日2008年2月20日 申请日期2007年7月19日 优先权日2007年7月19日
发明者伟 姚, 张木清, 邓祖湖, 阮妙鸿, 陈如凯 申请人:福建农林大学