用dna分子构造复杂纳米形状的方法

文档序号:434039阅读:476来源:国知局
专利名称:用dna分子构造复杂纳米形状的方法
技术领域
本发明涉及一种用DNA分子构造复杂纳米形状(二维对称纳米结构、二维非对称纳米结构)的方法,以及将溶液中的DNA复杂纳米形状进一步转化为金属等其他材质并转移至空气中从而实现该方法在电子器件制造等方面的用途。属于纳米技术的图形化加工领域。
背景技术
相比于传统的自上而下的形状构造方法,自下而上的自组装方法无疑是重要的新型结构(特别是纳米级结构)制造方法。DNA的知识和技术积累以及DNA自身的编码能力使基于DNA的自组装构造方法成为最有潜力的自组装方法。
用DNA自组装来构造纳米级图形的研究成果一直层出不穷。1989年,Seeman首次提出了一种十字形结构作为DNA自组装的基本单元(Seeman NC.Nanoscaleassembly and manipulation of branched DNAA biological starting pointfor nanotechnology.Lewis J,Quel JL,eds.Nanocon Proceedings,NANOCON,P.O.Box 40176,Bellevue,WA 98004,1989.101-107)。之后,Yan等人将这种十字形结构进一步完善,自组装成网格,并用AFM观测到清晰的网格结构(Yan H,Reif JH,LaBean TH.DNA-templated self-assembly of protein arraysand highly conductive nanowires.Science,2003,3011882-1884)。1998年,Winfree等人构造出DNA链缠绕成两排的自组装单元,称为DX模块,每个DX模块都有4个黏性末端,可以自组装成二维阵列(Winfree E,Liu F,SeemanNC.et al.Design and self-assembly of two-dimensional DNA crystals.Nature,1998,394539-544)。DX模块通过设计可以自组装成三角形(Rothemund PW,Papadakis N,Winfree E.Algorithmic self-assembly of DNASierpinski triangles.PLoS Biol,2004,22041-2053)以及管状结构(Rothemund PW,Ekani-Nkodo A,Winfree E,et al.Design andcharacterization of programmable DNA nanotubes.J Am Chem Soc,2004,12616344-16352)。2000年,LaBean等人又构造出DNA链缠绕成三排的自组装单元,称为TX模块,每个TX模块都有6个黏性末端,可以形成更为稳定的二维阵列(LaBean TH,Reif JH,Seeman NC,et al.Construction,analysis,ligation,and self-assembly of DNA triple crossover complexes.J Am ChemSoc,2000,1221848-1860)。这些DNA自组装的共同思路是由小的基本单元通过黏性末端的Watson-Click互补性拼接成大的图形,基于这样的特点,它们也形成了共同的局限性,即很难构造出不规则复杂图形。2006年,Rothemund首次提出的一种全新的DNA自组装的思路,即DNA“折纸术”成功地突破了这一局限,构造出了各种相对复杂的纳米级形状和图案,取得了DNA自组装领域的重大突破。目前,已有通过DNA“折纸术”折叠多种二维纳米形状的报道,如方形、矩形、五角星、笑脸等(Rothemund PW.Folding DNA to create nanoscaleshapes and patterns.Nature,2006,440297-302)。但是,这些纳米形状都是对称的图形,而且,这些纳米形状在由DNA自组装成之后并没有转化成金属等其他材质,同时也没有从溶液中转移至空气中,从而极大的限制了复杂纳米形状在诸如电子器件制造等方面的用途。
经对现有技术的国内外文献检索,至今未见有构造更加复杂的非对称纳米形状的研究报道,且没有将溶液中的DNA复杂纳米形状转移至空气中的研究报道,也没有将DNA复杂纳米形状金属化并应用于电子器件制造方面的报道。

发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足,提供一种用DNA分子构造复杂纳米形状的方法,能用DNA分子构造复杂二维对称及非对称纳米结构,并能将溶液中的DNA复杂纳米形状金属化且转移至空气中,从而实现该方法在电子器件制造等方面的用途。
为实现上述目的,本发明根据实际应用中所需要的目标形状(如电子器件等复杂纳米形状),选择一根DNA单链作为脚手架链,通过在水平方向反复折叠该脚手架链来填满目标形状的轮廓,并编程得到若干根短的DNA单链即订书钉链的序列使得它们根据碱基互补的原则来固定脚手架链的走向,然后通过脚手架链DNA分子和订书钉链DNA分子在溶液中的自组装得到所需要的目标形状。本发明还进一步以电子器件的形状作为目标形状,将得到的溶液中的电子器件形状的DNA纳米结构金属化并转移至空气中,得到纳米尺度的电子器件。
本发明包括以下步骤(1)选择一根DNA单链作为脚手架链,针对所需要的目标形状,将脚手架链通过水平方向的反复折叠来填满该目标形状轮廓,得到脚手架链的折线图,折线图上各水平线段的长度分别与折叠后的各段脚手架链上的碱基数目相对应。
(2)根据脚手架链的序列和所得到的折线图,编程得到若干根短的DNA单链即订书钉链的序列,编程时使订书钉链通过碱基之间的互补来固定脚手架链的走向,所述订书钉链分为两种类型,其中一种类型的订书钉链用来对折线图上水平的行间进行固定;另一种类型的订书钉链用来对折线图上竖直的缝隙间进行固定。
(3)根据订书钉链的序列合成对应的DNA分子,将脚手架链DNA分子和订书钉链DNA分子在溶液中混合并退火,通过两者之间的自组装将DNA分子折叠成所需要的目标形状,该DNA纳米形状可在缓冲液中用原子力显微镜成像;或者再用含镁离子的溶液置换缓冲液并吹干后,将DNA纳米形状在空气中用原子力显微镜成像。
本发明所得到的得到的溶液中或空气中的DNA纳米形状具有实际应用价值,可以用于制造纳米尺度的电子器件。这时,所述目标形状为电子器件的形状,只要将得到的溶液中或空气中的DNA纳米形状用金属硝酸盐溶液处理,并用还原剂将金属离子还原为0价,然后用纯水清洗、氮气吹干,即可得到纳米尺度的电子器件。
利用本发明所提供的方法来构造DNA复杂纳米结构,具有操作简单可行的特性,且可以构造出对称或非对称的高复杂度的DNA纳米结构。同时,本发明将DNA复杂纳米结构金属化并转移至空气中,得到纳米尺度的电子器件,有望突破目前集成电路的产业化技术最小加工特征线宽,在集成电子电路产业的纳米图形化加工方面的具有广阔的发展前景。


图1为根据中国地图的轮廓设计脚手架链的折线图。
图1中,a为中国地图示意图,b为根据中国地图的轮廓设计的脚手架链折线图。
图2为用订书钉链来固定脚手架链的走向。
图2中,a为8种订书钉链,b为订书钉链对水平行间的固定,c为订书钉链对竖直缝隙间的固定。
图3为原子力显微镜成像图。
图3中,a为一个符合原先设计的图形,b为一群可分辨的形成图。
图4为根据电感形状设计的脚手架链折线图。
具体实施例方式
以下结合附图和实施例对本发明的技术方案作进一步描述。应理解,以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1本实施例中用DNA分子构造出纳米尺度的仿中国地图形状。基本设计思路是用一根长的DNA单链(称为脚手架链)折叠成中国地图的形状,然后用若干根短的DNA单链(称为订书钉链)通过和脚手架链的互补来固定该形状。
步骤1根据中国地图的轮廓画出表示脚手架链的折线图。
选择M13mp18 DNA作为脚手架链,针对中国地图形状,将脚手架链通过水平方向的反复折叠来填满中国地图形状的轮廓。如图1所示,将中国地图的主体部分以海南岛的中心为准垂直划分为东西两个区域,东北部分和西北部分也分别垂直划分为两个区域,折线以海南岛最南端的中点为起点,由南向北水平折叠,完成西侧的区域,到达西北部的最北端时转而由北向南折叠,以同样的方式完成东北部的折叠,进一步完成主体部分东侧的区域,最后回到海南岛最南端的中点。连接台湾和大陆之间的线段不计入水平排列,即这两段DNA链在构图上只起到牵引台湾的作用。由此,得到脚手架链的折线图。
折线图上各水平线段的长度分别与折叠后的各段脚手架链上的碱基数目相对应。双链DNA的一个螺距约等于10.67个碱基,而每一段双链DNA的长度必须是半螺距的整数倍(例如10.67×0.5×3≈16个碱基),这样才能保证DNA链在折叠处的扭力最小。一个螺距的长度约等于3.6纳米,宽度约等于2纳米,水平排列的两段DNA双链之间的距离取决于和脚手架链互补的短的订书钉链之间的距离,将订书钉链的间距设定为1.5个螺距,则水平排列的DNA双链的间距约为1纳米。所以,在画折线图时,水平线段之间的距离也要满足这个比例。同时还要考虑到选择长度为七千多个碱基的单链M13mp18 DNA作为脚手架链,折线图上对应的碱基总数不能超过但应尽可能接近这个数目。
因此,图1所示的折线图可以表示为如下的一组数据,每个数依次表示折线图上自起点到终点的每个水平线段的长度之间的比例,也表示脚手架链上从5′端到3′端的每一段水平排列的DNA的碱基数,而这组数据也就是下一步程序的输入(16 16 6 6 32 32 112 112 107 107 112 112 208 208 230 230 256 256267 267 272 112 112 112 80 80 48 48 32 48 16 16 16 48 48 64 64 256 8080 64 64 32 32 48 48 32 32 16 32 16 48 48 80 80 64 64 64 64 32 32 16 11264 64 80 80 96 96 112 112 112 112 96 96 128 16 16 128 48 48 6 6 16 16)。这组数据是在手工测量中国地图的基础上得到的。在使它们尽可能的满足测量所得线段长度之间比例的情况下,将数据调整为16的整数倍,或者除以16的余数是6或11。这样可以使订书钉链的间距为1.5个螺距时,所有DNA链在折叠处的扭力最小。
步骤2编程得到订书钉链的序列。
可以想像,当一根长的直线被折叠成如图1所示的仿中国地图的形状之后,就需要在水平的行间以及竖直的缝隙间进行固定。这是通过DNA的互补碱基间的作用力来实现的。根据Watson-Crick原则,DNA链上的A与T互补,C与G互补,因此可以根据脚手架链的序列和所得到的折线图,编程得到若干根短的DNA单链即订书钉链的序列,编程时使订书钉链通过碱基之间的互补来固定脚手架链的走向。订书钉链可以分为a-h八种,如图2(a)所示,粗黑线表示脚手架链,粗蓝线表示订书钉链(箭头所指方向为5′→3′),细黑线表示碱基之间的互补。这八种订书钉链又可以分为两种类型,其中a-d四种订书钉链用来对折线图上水平的行间进行固定,如图2(b)所示,它们的重复组合可以完成各种水平行间的固定。其中缺少若干碱基的某类型的订书钉链仍然算作该类型,例如在图形的上边缘会出现缺少3′端8个碱基的a或b类订书钉链,在图形的左右边缘也会出现缺少更多碱基的的情况。另外e-h四种的订书钉链用来对折线图上竖直的缝隙间进行固定,如图2(c)所示,它们的重复组合可以完成竖直缝隙间的固定。除了出现在图形边缘处的某些订书钉链之外,绝大部分订书钉链的长度为32个碱基。所有订书钉链的间距为1.5个螺距(16个碱基)。
根据以上的设计思路,用PERL进行编程。程序输入的脚手架链序列为环状病毒M13mp18的基因组DNA序列,全长为7249个碱基。找出其中的一个茎长为20个碱基的发夹结构,并模拟BsrBI酶切将脚手架链DNA变为线状,不考虑发夹结构附近的73个碱基,只留下长度为7176个碱基的DNA序列作为脚手架序列。进而该序列得到构成中国地图的219条订书钉链序列,与剩余脚手架链互补的8条长度为23个碱基的DNA链序列,以及与连接台湾的脚手架链互补的2条长度为32个碱基的DNA链序列。
步骤3根据订书钉链的序列合成对应的DNA分子,将脚手架链DNA分子和订书钉链DNA分子在溶液中混合并退火,通过两者之间的自组装将DNA分子折叠成仿中国地图形状。
用BsrBI酶切单链M13mp18 DNA(NEB公司)。先将M13mp18 DNA和一段包含BsrBI酶切位点的互补序列混合,并加入缓冲液37℃孵育15分钟,然后加BsrBI酶切2小时。酶切产物用酚氯仿抽提,酒精沉淀。
将合成的229条短DNA链(Invitrogen公司)与酒精沉淀后得到的M13mp18DNA混合。每条订书钉链浓度为160nM,M13mp18 DNA浓度为1.6nM,总体积为100μl。
将混合后的溶液在PCR仪上从94℃度退火至4℃,每秒钟降低0.01℃。
自组装好的DNA仿中国地图纳米形状可在缓冲液中用原子力显微镜成像。
将自组装好的样品用原子力显微镜成像。一滴5μl自组装好的样品滴加于新解理的云母上,将云母用双面胶粘在铁片上后置于原子力显微镜(NanoscopeIIIa Multimode AFM,Veeco公司)样品台上。将装有针尖(NP-S,共振频率~9.4KHz,力常数~0.38N/m,Veeco公司)的液体槽置于样品上方,向槽中注入30μl的1×TAE/Mg2+缓冲液后即可开始成像。为使成像清晰并避免样品受到针尖和样品间相互作用力的损伤,应尽量减小施加在针尖上的力。为减少成像过程中缓冲液中气泡带来的干扰,可以在注入前先对缓冲液进行抽气处理。
原子力显微镜成像结果显示所得到的仿中国地图最长处约150纳米,最宽处约120纳米,高度为2纳米,如图3(a)所示,符合原先的设计。我们将符合原设计的结构(如图3(b)中的a和b)与所有可分辨的结构(如图3(b)中的c)之比定义为自组装的产率,用它来粗略地衡量一个设计合成的成功与否。在我们的设计中,产率为59%(样本数为125个),影响产率的主要原因有自组装图形较严重的形变(如图3(b)中c)以及订书钉链在自组装图形上的堆积(如图3(b)中的d的亮点)。同时,有一些图形出现了聚集的情况(如图3(b)中的b和d),另外一些图形并没有和其他图形相连(如图3(b)中的a和c)。
或者再用含镁离子的溶液置换缓冲液并吹干后,将DNA仿中国地图纳米形状在空气中用原子力显微镜成像。
观察到仿中国地图形状DNA纳米结构后,停止成像。反复在液体槽中注入Mg(AC)2溶液置换1×TAE/Mg2+缓冲液。取出液体槽,从样品台上取下粘云母片的铁片后用Mg(AC)2溶液轻轻冲洗几遍,再用吸耳球吹干后重新置于样品台上。换上空气中的针尖块进行成像。
实施例2本实施例中用DNA分子构造出纳米尺度的电感形状,且将DNA纳米结构在溶液中银金属化并转移至空气中,构造出纳米尺度的银电感。
步骤1根据电感的轮廓画出表示脚手架链的折线图。
用和实施例1中的步骤1完全类似的方法,选择M13mp18 DNA作为脚手架链,针对电感形状,将脚手架链通过水平方向的反复折叠来填满电感形状的轮廓,得到如图4所示的脚手架链的折线图,折线图上各水平线段的长度分别与折叠后的各段脚手架链上的碱基数目相对应。
步骤2编程得到订书钉链的序列。
用和实施例1中的步骤2完全类似的方法,根据脚手架链的序列和所得到的折线图,编程得到若干根短的DNA单链即订书钉链的序列,编程时使订书钉链通过碱基之间的互补来固定脚手架链的走向,所述订书钉链分为两种类型,其中一种类型的订书钉链用来对折线图上水平的行间进行固定;另一种类型的订书钉链用来对折线图上竖直的缝隙间进行固定。
步骤3根据订书钉链的序列合成对应的DNA分子,将脚手架链DNA分子和订书钉链DNA分子在溶液中混合并退火,通过两者之间的自组装将DNA分子折叠成电感形状。
用和实施例1中的步骤3完全类似的方法,得到电感形状的DNA纳米结构,该DNA纳米形状可在缓冲液中用原子力显微镜成像。
步骤4将溶液中的电感形状的DNA纳米结构银金属化。
将溶液中的电感形状的DNA纳米结构在氨水(浓度10%-15%)和AgNO3(浓度为0.5mM至1mM)的混合溶液中处理30分钟;加入甲醛(浓度10%-15%)溶液中处理5分钟,将银离子还原为0价;吸取得到的溶液约10μl于新解理的云母上,然后用纯水清洗3次,氮气吹干,即得到纳米尺度的银电感。
实施例3本实施例中用DNA分子构造出纳米尺度的电感形状,且将DNA纳米结构在溶液中铜金属化并转移至空气中,构造出纳米尺度的铜电感。
步骤1根据电感的轮廓画出表示脚手架链的折线图。
用和实施例1中的步骤1完全类似的方法,选择M13mp18 DNA作为脚手架链,针对电感形状,将脚手架链通过水平方向的反复折叠来填满电感形状的轮廓,得到如图4所示的脚手架链的折线图,折线图上各水平线段的长度分别与折叠后的各段脚手架链上的碱基数目相对应。
步骤2编程得到订书钉链的序列。
用和实施例1中的步骤2完全类似的方法,根据脚手架链的序列和所得到的折线图,编程得到若干根短的DNA单链即订书钉链的序列,编程时使订书钉链通过碱基之间的互补来固定脚手架链的走向,所述订书钉链分为两种类型,其中一种类型的订书钉链用来对折线图上水平的行间进行固定;另一种类型的订书钉链用来对折线图上竖直的缝隙间进行固定。
步骤3根据订书钉链的序列合成对应的DNA分子,将脚手架链DNA分子和订书钉链DNA分子在溶液中混合并退火,通过两者之间的自组装将DNA分子折叠成电感形状。
用和实施例1中的步骤3完全类似的方法,得到电感形状的DNA纳米结构,该DNA纳米形状可在缓冲液中用原子力显微镜成像。
步骤4将溶液中的电感形状的DNA纳米结构铜金属化。
将溶液中的电感形状的纳米结构与Cu(NO3)2(浓度为0.1M)水溶液混合后在暗室中处理5分钟;在上述混合溶液中加入0.1M的抗坏血酸维生素C溶液,将铜离子还原为0价;吸取得到的溶液约10μl溶液于新解理的云母上,处理5分钟,然后用纯水清洗3次,再氮气吹干,即得到纳米尺度的铜电感。
实施例4本实施例中用DNA分子构造出纳米尺度的电感形状,且将DNA纳米结构在空气中银金属化,构造出纳米尺度的银电感。
步骤1根据电感的轮廓画出表示脚手架链的折线图。
用和实施例1中的步骤1完全类似的方法,选择M13mp18 DNA作为脚手架链,针对电感形状,将脚手架链通过水平方向的反复折叠来填满电感形状的轮廓,得到如图4所示的脚手架链的折线图,折线图上各水平线段的长度分别与折叠后的各段脚手架链上的碱基数目相对应。
步骤2编程得到订书钉链的序列。
用和实施例1中的步骤2完全类似的方法,根据脚手架链的序列和所得到的折线图,编程得到若干根短的DNA单链即订书钉链的序列,编程时使订书钉链通过碱基之间的互补来固定脚手架链的走向,所述订书钉链分为两种类型,其中一种类型的订书钉链用来对折线图上水平的行间进行固定;另一种类型的订书钉链用来对折线图上竖直的缝隙间进行固定。
步骤3根据订书钉链的序列合成对应的DNA分子,将脚手架链DNA分子和订书钉链DNA分子在溶液中混合并退火,通过两者之间的自组装将DNA分子折叠成电感形状。
用和实施例1中的步骤3完全类似的方法,得到电感形状的DNA纳米结构,该DNA纳米形状可在缓冲液中用原子力显微镜成像,再用含镁离子的溶液置换缓冲液并吹干后,将DNA纳米形状在空气中用原子力显微镜成像。
步骤4将空气中的电感形状的DNA纳米结构银金属化。
吸取氨水(浓度10%-15%)和AgNO3(浓度为0.5mM至1mM)的混合溶液约20μl滴于电感形状的DNA纳米结构表面,处理30分钟;加入甲醛溶液(浓度10%-15%)中处理5分钟,将银离子还原为0价;然后用纯水清洗3次,再氮气吹干,即得到纳米尺度的银电感。
实施例5本实施例中用DNA分子构造出纳米尺度的电感形状,且将DNA纳米结构在空气中铜金属化,构造出纳米尺度的铜电感。
步骤1根据电感的轮廓画出表示脚手架链的折线图。
用和实施例1中的步骤1完全类似的方法,选择M13mp18 DNA作为脚手架链,针对电感形状,将脚手架链通过水平方向的反复折叠来填满电感形状的轮廓,得到如图4所示的脚手架链的折线图,折线图上各水平线段的长度分别与折叠后的各段脚手架链上的碱基数目相对应。
步骤2编程得到订书钉链的序列。
用和实施例1中的步骤2完全类似的方法,根据脚手架链的序列和所得到的折线图,编程得到若干根短的DNA单链即订书钉链的序列,编程时使订书钉链通过碱基之间的互补来固定脚手架链的走向,所述订书钉链分为两种类型,其中一种类型的订书钉链用来对折线图上水平的行间进行固定;另一种类型的订书钉链用来对折线图上竖直的缝隙间进行固定。
步骤3根据订书钉链的序列合成对应的DNA分子,将脚手架链DNA分子和订书钉链DNA分子在溶液中混合并退火,通过两者之间的自组装将DNA分子折叠成电感形状。
用和实施例1中的步骤3完全类似的方法,得到电感形状的DNA纳米结构,该DNA纳米形状可在缓冲液中用原子力显微镜成像,再用含镁离子的溶液置换缓冲液并吹干后,将DNA纳米形状在空气中用原子力显微镜成像。
步骤4将空气中的电感形状的DNA纳米结构铜金属化。
吸取Cu(NO3)2(浓度为0.1M)水溶液约40μl滴于电感形状的DNA纳米结构表面,在暗室中处理4-6分钟;加入40μl抗坏血酸维生素C溶液(浓度0.1M),将铜离子还原为0价;5-8分钟后,用纯水清洗,氮气吹干,即得到纳米尺度的铜电感。
权利要求
1.一种用DNA分子构造复杂纳米形状的方法,其特征在于包括以下步骤(1)选择一根DNA单链作为脚手架链,针对所需要的目标形状,将脚手架链通过水平方向的反复折叠来填满该目标形状轮廓,得到脚手架链的折线图,折线图上各水平线段的长度分别与折叠后的各段脚手架链上的碱基数目相对应;(2)根据脚手架链的序列和所得到的折线图,编程得到若干根短的DNA单链即订书钉链的序列,编程时使订书钉链通过碱基之间的互补来固定脚手架链的走向,所述订书钉链分为两种类型,其中一种类型的订书钉链用来对折线图上水平的行间进行固定,另一种类型的订书钉链用来对折线图上竖直的缝隙间进行固定;(3)根据订书钉链的序列合成对应的DNA分子,将脚手架链DNA分子和订书钉链DNA分子在溶液中混合并退火,通过两者之间的自组装将DNA分子折叠成所需要的目标形状,该DNA纳米形状可在缓冲液中用原子力显微镜成像;或者再用含镁离子的溶液置换缓冲液并吹干后,将DNA纳米形状在空气中用原子力显微镜成像。
2.根据权利要求1的用DNA分子构造复杂纳米形状的方法,其特征在于所述目标形状为电子器件的形状,将得到的溶液中或空气中的DNA纳米形状用金属硝酸盐溶液处理,并用还原剂将金属离子还原为0价,然后用纯水清洗、氮气吹干,得到纳米尺度的电子器件。
全文摘要
本发明涉及一种用DNA分子构造复杂纳米形状的方法,根据实际应用中所需要的目标形状,选择一根DNA单链作为脚手架链,通过在水平方向反复折叠该脚手架链来填满目标形状的轮廓,并编程得到若干根短的DNA单链即订书钉链的序列使得它们根据碱基互补的原则来固定脚手架链的走向,然后通过脚手架链和订书钉链DNA分子在溶液中的自组装得到所需要的目标形状。本发明还进一步以电子器件的形状作为目标形状,将得到的溶液中的电子器件形状的DNA纳米结构金属化并转移至空气中,得到纳米尺度的电子器件。本发明所提供的方法操作简单可行,可以构造出对称或非对称的高复杂度的DNA纳米结构,且有望在集成电子电路产业获得广阔的发展前景。
文档编号C12N15/11GK101050228SQ20071003829
公开日2007年10月10日 申请日期2007年3月22日 优先权日2007年3月22日
发明者贺林, 钱璐璐, 樊春海, 张亚非, 胡钧, 汪颖, 王英, 赵健 申请人:上海交通大学
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