检测人泌尿生殖道病原体的引物、探针及方法

专利名称：：检测人泌尿生殖道病原体的引物、探针及方法
技术领域：
：本发明涉及人泌尿生殖道分泌物中病原体的检验，尤其涉及一种检测人泌尿生殖道病原体的引物、探针及方法。技术背景随着我国对外开放程度的逐步加深，加上社会上有些人受到"性自由"思想的影响和对性传播疾病的无知，在一些开放城市和经济发达地区陆续出现了新的性病患者，加之当今各地之间的人员流动非常频繁，性病的发生及传播呈愈演愈烈之势。如2004年全国31个省(直辖市、自治区)共累计报告性病(HIV/AIDS除外)809，550例，较上一年就上升了10%。2004年全国性病疫情分析报告显示，淋病奈瑟氏球菌(简称淋球菌，NG)、解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)已成为三种主要的导致性病的病原体。对本市部分就诊者的检测显示，合并2种或3种病原体感染的患者正在逐年增加。性传播疾病对人类健康的危害性很大。特别是对青年人，后果更为严重，有的会导致终身的健康问题，包括不孕、不育、慢性疼痛以及增加感染艾滋病的危险，对人们的身心健康和家庭社会构成了严重的威胁。对性传播疾病实行早期监测和诊断，是性病防治工作中的一个重要组成部分，对于提高性病治愈率，縮短病程和传染期，控制和消灭传染源，阻止性疾病的蔓延有着重要的作用。目前对淋病奈瑟氏球菌、解脲支原体和沙眼衣原体的检验方法主要有涂片检査，细菌和细胞培养、血清学试验和PCR法。涂片检查是检测淋球菌的主要方法，但尿道分泌物的状态会影响检测的敏感度；细菌和细胞培养是将标本接种于合适的培养基或细胞，使其扩增，并进一步作出鉴定。培养法特异性高，能检出病人分泌物内活的病原体，结合药敏试验能作为药物疗效的判断，过去常作为检测的金标准。但由于受专业化技术、试剂、设备、周期长等因素的影响，目前临床一般不采用，仅在科研单位进行科研活动，或作为新诊断试剂方法学评价的金标准；血清学试验可以提供快速诊断，曾被认为是一种理想的诊断方法，但因为敏感性和特异性不够高，进口抗体的昂贵价格而不能用于过筛实验；PCR法用于感染早期的病原体诊断，己逐渐成为病原体检测的新宠。PCR法操作简单、耗时较少、灵敏度高，理论上只要有一个拷贝便可被检出。但是作为高度敏感的扩增实验，操作不当极易造成污染而出现假阳性的结果。近年来出现的实时荧光定量PCR(real-timequantitativePCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它基本解决了过去实验过程因污染出现的假阳性。实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR技术中，特异性荧光探针的选择和设计是至关重要的。它是把荧光化合物标记到特异性的寡核苷酸上形成荧光标记的DNA探针，通过探针与PCR产物特异性的结合，在PCR过程中可对产物实现均相、实时、定量检测。根据荧光基团标记和实现能量共振转移方式的不同，荧光PCR所用的探针可以分为五大类，分别是Taqman探针，分子信标，光标记引物，杂交探针，DNA-RNA-DNA嵌合探针。在实时荧光定量PCR技术中，定量PCR仪的发展是另一决定因素。多色多通道检测是当今的主流趋势，多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光，使得在单管内可同时检测多模板。目前，在大部分医院都具有多通道的荧光PCR仪。此外，为满足多色多通道检测的需求，目前已开发了包括FAM，TET，VIC，HEX等近十种的荧光基团。但是，目前几乎所有临床上使用的都是单检PCR产品，一次只能检测出一种病原体，不利于对混合感染的检测，而且操作过程相对费时，成本高。
发明内容本发明要解决的技术问题之一是提供一种检测人泌尿生殖道病原体的引物。本发明要解决的技术问题之二是提供一种检测人泌尿生殖道病原体的探针。本发明要解决的技术问题之三是提供一种检测人泌尿生殖道病原体的方法。本发明要解决的技术问题之四是提供一种检测人泌尿生殖道病原体的试剂盒。为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现在本发明的一个方面，提供了一种检测人泌尿生殖道病原体的引物，包括以下引物对中的至少一对(1)用于扩增淋病奈瑟氏球菌靶核酸序列的引物对，其第一引物序列含有SEQIDNO:1的至少15个连续核苷酸，其第二引物序列含有SEQIDNO:2的至少15个连续核苷酸；(2)用于扩增解脲支原体靶核酸序列的引物对，其第一引物序列含有SEQIDNO:3的至少15个连续核苷酸，其第二引物序列含有SEQIDNO:4的至少15个连续核苷酸；(3)用于扩增沙眼衣原体靶核酸序列的引物对，其第一引物序列含有SEQIDNO:5的至少15个连续核苷酸，其第二引物序列含有SEQIDNO:6的至少15个连续核苷酸。较佳地，所述引物对至少包括SEQIDNO:1、SEQIDNO:2;禾口/或SEQIDNO:3、SEQIDNO:4;禾口/或SEQIDNO:5、SEQIDNO:6。在本发明的另一方面，提供了一种检测人泌尿生殖道病原体的探针，包括至少以下的一种寡核苷酸序列(1)与上述引物对扩增的淋病奈瑟氏球菌的靶核酸序列进行杂交的寡核苷酸序列，该序列包含SEQIDNO:7或其互补序列的至少15个连续核苷酸；(2)与上述引物对扩增的解脲支原体的靶核酸序列进行杂交的寡核苷酸序列，该序列包含SEQIDNO:8或其互补序列的至少15个连续核苷酸；(3)与上述引物对扩增的沙眼衣原体的靶核酸序列进行杂交的寡核苷酸序列，该序列包含SEQIDNO:9或其互补序列的至少15个连续核苷酸。较佳地，所述探针至少包括SEQIDNO:7、SEQIDNO:8和SEQIDNO:9中的一种寡核苷酸序列。在本发明的另一方面，提供了一种检测人泌尿生殖道病原体的方法，包括以下步骤-(1)提取核酸样本；(2)用至少一对上述的引物序列，以步骤(l)提取的核酸为模板，扩增病原体的耙核酸序列；(3)检测扩增产物，并分析结果。较佳地，所述步骤(2)中还包括加入能与步骤(2)所用引物对扩增的靶核酸序列进行杂交的探针序列。在本发明的另一方面，还提供了一种检测人泌尿生殖道病原体的试剂盒，包括至少一对本发明所述的引物序列。较佳地，所述试剂盒还包括至少一种本发明所述的探针序列，该探针序列与所含引物序列扩增的耙核酸序列进行杂交。更佳地，所述试剂盒包含以下引物和探针组合中的至少一种组合(1)SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:7;(2)SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:8;(3)SEQIDNO:5、SEQIDNO:6和SEQIDNO:9。在本发明中，术语"引物"是指一种寡核苷酸，可以是天然的也可以是合成的，它可以作为在一定条件下诱发DNA合成的起始点，在上述条件下可以诱发合成与核酸链互补的引物扩增产物，即在四种不同的三磷酸脱氧核糖核苷及一种聚合试剂(即DNA聚合酶或逆转录酶)存在下，在一种合适的缓冲液中并在合适的温度下进行上述合成。优选的引物是单股寡脱氧核糖核苷酸。引物的合适长度取决于该引物的设计用途，但一般在1525个核苷酸之间，较短的引物分子通常需要较低的温度，从而与模板形成充分稳定的杂交复合物。引物不必反应模板的准确序列，但必须充分互补，以与模板杂交并引发DNA合成。在本发明中，术语"探针"是指能识别特异核苷酸序列的带标记的一段单链DNA或RNA分子，它只与被检测的特定核苷酸序列结合。探针位置尽可能地靠近上游引物。为保证结合特异性，探针的合适长度一般在1545个核苷酸之间。由于采用上述技术方案，本发明的检测人泌尿生殖道病原体的引物、探针及方法，可以在一个反应管内同时检测淋病奈瑟氏球菌(NG)、解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)三种不同的病原体，不仅提高性传播疾病的早期检出率，而且减少医务人员的操作时间，降低成本，并减轻病人经济负担。图1是本发明检测的淋病奈瑟氏球菌、解脲支原体和沙眼衣原体三种病原体的电泳图；图2是本发明单独检测淋病奈瑟氏球菌的荧光定量PCR图；图3是本发明单独检测解脲支原体的荧光定量PCR图；图4是本发明单独检测沙眼衣原体的荧光定量PCR图；图5是本发明同时检测淋病奈瑟氏球菌、解脲支原体和沙眼衣原体三种病原体的荧光定量PCR图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1检测淋病奈瑟氏球菌(NG)、解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)的引物、探针序列及方法1.淋病奈瑟氏球菌的引物和探针根据淋病奈瑟氏球菌的靶核酸序列(GenbankAcession:M10316)，选择合适的区域设计引物与探针，共设计了两组引物和探针，经过实验比较，选择了其中的一组，具体的序列如下NG-Fl:5'-GCTACGCATACCCGCGTTGC-3'(SEQIDNO:1，位于靶序列3141-3160bp)NG-Rl:5'-CGAAGACCTTCGAGCAGACA-3'(SEQIDNO:2，位于靶序列3531-3512bp)NG-Fl，NG-Rl的扩增产物长391bp(见图1),对应于靶序列的隐蔽质粒区。杂交探针NG-PI:FAM-5'-CTGTTTMGTCGTCCAGCTCGTTC-3'-BHQ1(SEQIDNO:7，位于耙序列3251-3275bp)经检测，NG-F1、NG-R1、NG-PI检测的灵敏度能达到E3水平(见图2)。2.解脲支原体的引物和探针根据解脲支原体的靶核酸序列(GenbankAcession:X51315),选择合适的区域设计引物与探针，共设计了两组引物和探针，经过实验比较，选择了其中的一组，具体的序列如下UU-Fl:5'-CAGGTAAATTAGTACCAG-3'(SEQIDNO:3，位于靶序列543-560bp)UU-R1:5'-ACGACGTCCATAAGCAACT-3'(SEQIDNO:4，位于靶序列757-739bp)UU-F1，UU-R1的扩增产物长215bp(见图l)，位于尿酶基因区。UU-Pl:HEX-_CCGTCCTATCCAAGTTGGATCACA-B即(SEQIDNO:8，位于耙序列643-666bp)经检测，UU-F1、UU-R1、UU-P1检测的灵敏度能达到E3水平(见图3)。3.沙眼衣原体的引物和探针根据沙眼衣原体的靶核酸序列(GenbankAcession:CP000052)，选择合适的区域设计引物与探针，共设计了两组引物和探针，经过实验比较，选择了其中的一组，具体的序列如下CT-Fl:5'-CTAGGCGTTTGTACTCCGTCA-3'(SEQIDNO:5，位于靶序列604-624bp)CT-Rl:5'-TCCTCAGAAGTTTATGCACT-3'(SEQIDNO:6，位于耙序列803-784bp)CT-F1，CT-R1的扩增产物长200bp(见图1)，对应于耙序列的隐蔽质粒区。CT-PI:ROX-5'-GAGAGAACGTGCGGGCGATTTGC-3'-BHQ2(SEQIDNO:9，位于耙序列688-711bp)经检测，CT-F1，CT-R1，CT-P1检测的灵敏度能达到E3水平(见图4)。4.引物合成及纯化方法合成方法是固相亚磷酸三酯法进行化学DNA合成，纯化方法为聚丙烯酰胺凝胶电泳，引物在使用前经稀释后，使用紫外分光光度计进行检测、重定量，确保其A260/A280〉1.7。5.探针合成及纯化方法探针合成采用两步法，第一步用亚磷酸三酯法将R印orter连接于DNA的5'端。第二步是采用Postlink方法将NHS活化酯化的Quencher连接上去(R印orter可用FAM，HEX，TET等；Quencher采用TAMRA，BHQ1,BHQ2等，可修饰于3'端或DNA中间)。因考虑到荧光染料在碱性环境中不稳定，采用的合成单体为Fastamidite，以保证荧光的稳定性。探针纯化方法采用的是PAGE凝胶电泳法基础上的HPLC纯化，第一步是在Postlink连接Quencher之前，用PAGE将大部分的杂质去掉，特别是将可能会与Quencher连接形成副产物的杂质去掉，这有助于Quencher连接效率的提高和后面的纯化工作；第二步是在连接了Quencher之后再用PAGE电泳在一定条件下将其它杂质除去，以获得比较高纯度的产品；第三步即过dHPLC进行纯化，对于纯化后产品将检验其出峰位置及纯度，再用紫外分光光度计在260nm波长下定量。探针在使用前经稀释后，使用紫外分光光度计进行检测、重定量，确保其A260/A280〉1.7。6.其他材料纯化水符合《中国生物制品主要原辅材料质控标准》要求，Hot-Start酶由超生生物公司提供、dNTP(dATP:dCTP:dGTP:dUTP=25mM:25mM:25mM:25mM)、UNG酶由普洛麦格公司提供。所有化学试剂为分析纯或分析纯以上级别，所有试剂均检验合格。7.对照品(1)阴性对照品纯化水。替代试验检验合格。(2)阳性对照品已知浓度的NG、UU、CT病原微生物菌液，已知浓度的NG、UU、CT病原微生物质粒DNA溶液。8.检测方法本发明应用多重PCR荧光原理，在同一反应管内同时检测淋球菌、解脲支原体、沙眼衣原体，在同一反应管内加入各自的引物与探针，由于三种探针的5'端分别标记不同波长的报告荧光，PCR反应进行时，不同的报告荧光基团释放荧光，荧光测定仪器分别读取三种波长的荧光信号进行分析，使三种病原体的检测在一次实验中完成。对反应的条件进行优化，最终确定的反应体系及反应条件如下(1)多重荧光PCR反应体系(选用40pL反应体系)40|nL反应体系中含有2.5pL10XPCRreactionbuffer(Mg2+free),3mmol/LMg2+，0.125mmol/LdNTP，0.25nmol/LNG_F，0.25网ol/LNG-R，0.125|iimol/LNG-P，0.25pmol/LUU-F，0.25pmol/LUU-R，0.156|mnol/LUU-P，0.25|umol/LCT_F，0.25)nmol/LCT-R，0.3125pmol/LCT-P，Hot-Start聚合酶2U，UNG酶0.2U，，模板量为3pL，补充水至40pL。(2)多重荧光PCR扩增条件PCR扩增条件确定为42°C5分钟、95。C15分钟预变性；95°C15秒、60°C60秒；37°C恒温。采用的PCR仪为ABIPRISM7000PCR荧光检测仪，选定检测荧光为FAM，HEX,ROX通道，并在PCR循环第二步60°C时收集荧光信号。仪器检测通道选择通道l，2，4;其它为默认值。检测结果如图5所示，在图5中，三条上升的曲线中最上面一条曲线代表NG，中间的第二条曲线代表UU，第三条曲线代表CT。根据样品、阳性对照、阴性对照及临界对照的Ct值确定样品中是否存在三种病原体的DNA，从而判定病人的病原体感染情况。实施例2检测淋病奈瑟氏球菌(NG)、解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)的试剂盒的制备1.本发明试剂盒所采用的原材料(1)引物及探针本发明的引物及探针由上海生工生物工程技术服务有限公司负责合成。(2)其他材料纯化水符合《中国生物制品主要原辅材料质控标准》要求，Hot-Start酶由超生生物公司提供、dNTP(dATP:dCTP:dGTP:dUTP=25mM:25mM:25mM:25mM)、UNG酶由普洛麦格公司提供。所有化学试剂为分析纯或分析纯以上级别，所有试剂均检验合格。(3)对照品1)阴性对照品纯化水。替代试验检验合格。2)阳性对照品己知浓度的NG、UU、CT病原微生物菌液，已知浓度的NG、UU、CT病原微生物质粒DNA溶液。2.检测方法(1)标本裂解、从存有分泌物悬浊液的离心管中取样300^1于0.5ml离心管中，15000rpm离心10分钟，弃上清；加入裂解缓冲液50^1。于IO(TC加热IO分钟，15000rpm离心5分钟，取3^1上清进行PCR反应。要注意，裂解后的标本应保存在-2(TC，如结果有疑问，应取出重复检测，直至有了明确的结果后才可丢弃。每次重复实验前，都要将裂解标本离心(13000rpm，5分钟)后取用。(2)PCR反应试剂的制备1)引物及探针的制备引物，探针均为50D/管，将装有引物或探针的1.5ml离心管13000rpm离心数秒，使引物干粉聚集于管底，加入500|til纯化水，振荡混匀后静置10分钟，探针需要避光静置，使之充分溶解，13000rpm离心数秒。2)IOO人份三联检PCR反应液的制备取4ml10Xbuffer，0.2ml25画1/LdNTP，0.2ml50nmol/LNG-F，0.2ml50^imol/LNG-R，0.lml50|umol/LNG-P，0.2ml50pmol/LUU-F，0.2ml50nmol/LUU-R，0.125ml50,ol/LUU-P，0.2ml50^mol/LCT-F，0.2ml50^imol/LCT-R，0.25ml50,ol/LCT-P，用纯化水定容至35ml，充分混匀。3)反应液的质控用待检的反应液检测阴性内控品、阳性内控品，灵敏度内控品，检测结果符合阴性内控品的CT值大于38或无CT值，阳性内控品CT《28，灵敏度内控品CT=2933，则为合格。(3)Hot-start聚合酶和UNG酶混合液(含0.5U/|iilHot-star聚合酶和0.05U/|nlUNG酶)的制备和质控分别取2500UHot-start聚合酶、250UUNG酶混合，配备5ml酶溶液。替代试验合格。(4)裂解缓冲液的制备取1MTris-HC1(pH8.0)溶液10ml，0.5MEDTA(pH8.0)2.0ml，5MNaCl20ml，10%TritionX-100100ml,补加纯化水定容至1000ml，充分混匀后高压灭菌。替代试验合格。(5)对照品的制备1)阳性对照品的制备和质控取含已知浓度的NG、UU、CT病原微生物质粒DNA溶液，用TE稀释，用企业内控品测定阳性对照品CT《28。2)临界对照品的制备取已知浓度的NG、UU、CT病原微生物菌液，用纯化水稀释10倍。用企业内控品测定临界对照品CT<36。(6)半成品检定用企业内控品检定。1)特异性检定取8份临床确诊为NG、UU、CT均为阴性的标本作为阴性(特异性)参考品并进行PCR试验，操作严格按照试剂盒说明书进行——阴性符合率应为100%，为合格。2)准确性检定取临床确诊为NG、UU、CT均为阳性的标本各3份作为准确性参考品，进行PCR试验，操作严格按照试剂盒说明书进行——阳性符合率应100%，3)灵敏度检定用高滴度(107copies/ml浓度用相关的检测标准品标定)的临床标本以10倍的梯度逐级稀释至103copies/ml，取103copies/ml、104copies/ml、105copies/ml、106copies/ml作为企业内控敏感性参考品或已经定量的标准株103copies/ml、104copies/ml、105copies/ml、106copies/ml作为敏感性参考品。取103copies/ml滴度的淋病奈瑟氏球菌，解脲支原体，沙眼衣原体混合，作为三检试剂的临界参考品，检测结果CT符合CT二3236。4)精密度检定用1份临界对照，重复做10次，CT值变异系数不得大于15%。(7)分装、贴签、包装1)分装用微量移液器将准备好的试剂分装入清洁的离心管中，盖紧管盖，装量如表1所示表l成份标识量(pl)实际分装量&1)PCR反应液840900裂解缓冲液12001200Hot-start聚合酶+UNG酶4850阴性对照200200临界对照200200阳性对照20202)贴签'将检验合格的标签，贴在相应的离心管上。3)包装按照试剂盒的组成成份，将相应的离心管插入盒内衬上，装入盒中，放入说明书，封口。试剂盒组装要求如下表2所示表2<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>3.试剂盒成品检定(1)外观检定检定方法目测。检定标准试剂盒包装完整无缺，并附有说明书；各试剂组分齐全、试剂分装量符合组成要求。(2)特异性检定、准确性检定、灵敏度检定、精密度检定同半成品检定。4.保存及有效期在-2(TC保存条件下，自检定合格之日起有效期为6个月。5.试剂盒使用说明本发明的试剂盒采用核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法对NG、UU、CT的DNA进行定性检测。使用方法(1)试剂准备按标本的数量和所需的对照数量配制反应体系，存于4。C。(2)标本裂解从存有分泌物悬浊液的离心管中取样300nl于0.5ml离心管中，15000rpm离心10分钟，弃上清；加入裂解缓冲液50^1。于IO(TC加热10分钟，15000rpm离心5分钟，取3|il上清进行PCR反应。(3)加样在准备好的PCR反应液中分别加入裂解标本上清液或定标品。(4)PCR反应按说明设定程序，在荧光PCR仪上进行扩增。保存于-2(TC保存，在有效期内使用。序歹U表〈110〉上海申友健海生物技术有限责任公司<120>检测人泌尿生殖道病原体的引物、探针及方法〈130〉NP-07-11557<160>9〈170〉Patentlnversion3.3〈210〉1<211〉20<212>腿〈213〉人工序列〈220〉<221〉misc一feature〈223>引物〈400>1gctacgcatacccgcgttgc20〈210〉2〈211〉20<212>腿<213>人工序列〈220>〈221>misc—feature〈223>引物<400〉2cgaagaccttcgagcagaca20〈210〉3<211〉18〈212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉<221〉misc一feature<223〉引物〈400〉3caggtaaattagtaccag18〈210〉4<211〉19〈212〉■〈213〉人工序列〈220〉〈221>misc—feature〈223>引物<400〉4acgacgtccataagcaact19〈210〉5<211〉21〈212〉DNA〈213〉人工序列<220〉<221>misc—feature<223>引物〈400〉5ctaggcgtttgtactccgtca21<210>6<211>20〈212〉DNA〈213>人工序列〈220〉〈221>misc—feature<223>引物〈400〉6tcctcagaagtttatgcact20<210>7<211>24〈212>腿〈213〉人工序列〈400〉7ctgtttaagtcgtccagctcgttc24<210〉8〈211〉24〈212〉DNA〈213〉人工序列〈400〉8ccgtcctatccaagttggatcaca24<210〉9〈211〉23〈212〉DNA〈213〉人工序列〈400〉9gagagaacgtgcgggcgatttgc2权利要求1.一种检测人泌尿生殖道病原体的引物，其特征在于，包括以下引物对中的至少一对(1)用于扩增淋病奈瑟氏球菌靶核酸序列的引物对，其第一引物序列含有SEQIDNO1的至少15个连续核苷酸，其第二引物序列含有SEQIDNO2的至少15个连续核苷酸；(2)用于扩增解脲支原体靶核酸序列的引物对，其第一引物序列含有SEQIDNO3的至少15个连续核苷酸，其第二引物序列含有SEQIDNO4的至少15个连续核苷酸；(3)用于扩增沙眼衣原体靶核酸序列的引物对，其第一引物序列含有SEQIDNO5的至少15个连续核苷酸，其第二引物序列含有SEQIDNO6的至少15个连续核苷酸。2.如权利要求l所述的引物，其特征在于，所述引物对至少包括SEQIDNO:1、SEQIDNO:2;禾口/或SEQIDNO:3、SEQIDNO:4;和/或SEQIDNO:5、SEQIDNO:6。3.—种检测人泌尿生殖道病原体的探针，其特征在于，该探针包括至少以下的一种寡核苷酸序列(1)与权利要求1所述引物对扩增的淋病奈瑟氏球菌的耙核酸序列进行杂交的寡核苷酸序列，该序列包含SEQIDNO:7或其互补序列的至少15个连续核苷酸；(2)与权利要求1所述引物对扩增的解脲支原体的耙核酸序列进行杂交的寡核苷酸序列，该序列包含SEQIDNO:8或其互补序列的至少15个连续核苷酸；(3)与权利要求1所述引物对扩增的沙眼衣原体的靶核酸序列进行杂交的寡核苷酸序列，该序列包含SEQIDNO:9或其互补序列的至少15个连续核苷酸。4.如权利要求3所述的探针，其特征在于，所述探针至少包括SEQIDNO:7、SEQIDNO:8和SEQIDNO:9中的一种寡核苷酸序列。5.—种检测人泌尿生殖道病原体的方法，其特征在于，包括以下步骤(1)提取核酸样本；(2)用至少一对权利要求1所述的引物序列，以步骤(l)提取的核酸为模板，扩增病原体的耙核酸序列；(3)检测扩增产物，并分析结果。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中还包括加入能与步骤(2)所用弓I物对扩增的靶核酸序列进行杂交的探针序列。7.—种检测人泌尿生殖道病原体的试剂盒，其特征在于，包括至少一对权利要求1所述的引物序列。8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括至少一种权利要求3所述的探针序列，该探针序列与所含引物序列扩增的靶核酸序列进行杂交。9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，包含以下引物和探针组合中的至少一种组合(1)SEQIDNO:1、SEQIDNO:2禾QSEQIDNO:7;(2)SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:8;(3)SEQIDNO:5、SEQIDNO:6和SEQIDNO:9。全文摘要本发明公开了检测人泌尿生殖道病原体的引物和探针，以及运用该引物和探针对人泌尿生殖道病原体进行检测的方法。本发明方法可以在一个反应管内同时检测淋病奈瑟氏球菌、解脲支原体和沙眼衣原体三种不同的病原体，不仅提高性传播疾病的早期检出率，而且减少医务人员的操作时间，降低成本，并减轻病人经济负担。文档编号C12Q1/68GK101117646SQ20071009393公开日2008年2月6日申请日期2007年7月6日优先权日2007年7月6日发明者张爱民,慧熊,谢立群,陈嘉铮申请人:上海申友健海生物技术有限责任公司