专利名称：大豆肽-钙复合物的制备方法
技术领域：
本发明属于保健食品或食品添加剂制备技术领域，特别涉及大豆深加工技术 的一种大豆肽一钙复合物的制备方法。
技术背景钙是人体必需的营养元素，为保证人体健康和增强体质，通过食物成分科学 合理地补钙，并促进人体对钙的吸收是十分重要的。目前市场上的补钙产品有无 机钙、有机酸钙、氨基酸螯合钙、酪蛋白磷酸肽钙等。无机钙、有机酸钙的牵丐吸收率不足40%，氨基酸螯合钙和来源于牛奶的酪蛋白磷酸肽钙吸收率高，但生产 成本也高，大大限制了其应用。大豆含有丰富的蛋白质，研究发现大豆蛋白中含 有大量谷氨酸和天冬氨酸(含量〉20%)的羧酸基团能够与钙结合，使摄入的钙 离子在小肠内处于可溶性状态或携带钙离子直接进入小肠细胞而促进钙的吸收。在目前的研究中，日本曾采用离子交换的方法去除植酸，得到能与钙结合并 促进钙吸收的大豆分离蛋白，但该方法会增加生产成本，同时钙的加入也会导致 大豆蛋白形成不可溶性沉淀。国内相关研究得到的大豆肽未脱酰胺，与本发明的 大豆肽-钙复合物相比钙含量明显降低。本发明利用外源酶体外酶解大豆分离蛋 白得到低分子量的脱酰胺大豆肽，与同组成的氨基酸和蛋白质相比具有吸收快速 的特点，同时在酶解后加入过量的钙直接去除植酸，与离子交换的方法相比大大 降低了生产成本，得到的大豆肽-钙复合物具有溶解性好、分子量低、钙结合量 高、易吸收的特点。发明内容本发明的目的在于提供一种大豆肽一钙复合物的制备方法，其特征在于，以 低温脱脂豆粕或大豆分离蛋白为原料，采用蛋白酶脱酰胺酶酶解、酶灭活、大豆 肽与钙螯合、干燥制粉而得到大豆肽一钙复合物。该方法是一种生产成本低，植 酸含量低且钙结合量高，对酸碱处理、热处理稳定，生物利用率高的可溶性大豆 肽-钙复合物的制备方法。
所述大豆肽-钙复合物的制备工艺步骤如下1) 蛋白酶酶解将大豆蛋白分散在水中充分搅拌10 15min，将pH调至2 4， 在温度为45-55"条件下，加入蛋白酶保温水解40-60min，在4， OOOrpm转速下 离心20min，收集上清液获得大豆肽溶液；2) 脱酰胺将大豆肽溶液pH调到6 8，在温度为45-55。C条件下，加入脱 酰胺酶进行脱酰胺120-180min，获得脱酰胺的大豆肽溶液； '3) 调制可溶性大豆肽-钙复合物将脱酰胺的大豆肽溶液，在25 45"C温度 下，加入钙离子溶液，反应充分后，在6，000卬m转速下离心15min，收集上清， 干燥制粉获得可溶性大豆肽-钙复合物。所述大豆蛋白为脱脂豆粕调制、或用商业用大豆分离蛋白，蛋白含量在85 %以上。所述大豆蛋白浓度为1% 5%。 (w/v)所述的蛋白酶为蛋白酶M (protease M，天野制药)，加入量为底物的0. 5wt % 1. 5wt%。所述脱酰胺酶为谷氨酰胺酶或天冬酰胺酶或它们的混合物。(glutaminase， 天野制药)，加入量为底物的l wt% 3 wt%。所述加入脱酰胺大豆肽溶液中的CaCl2溶液浓度为lmol/L，比例为30: 1 (v/v)，反应温度为25 37°C、反应时间为10 40min，离心(4， OOOrpm， 20min)， 取上清干燥，得大豆肽一钙复合物。本发明的有益效果是根据以上可溶性大豆肽-钙复合物制造方法生产的可溶 性大豆肽钙复合物，由甲均分子量为24000Da、 14400Da和9330Da的三个组分组 成-,肽含量(以蛋白计)达到80%;钙结合量达到110mg/g以卜.；植酸含量小于0.55%;在pH 3—10内性质稳定；固态为淡黄色粉末；易溶于水。可以直接作为高效补钙产品，或作为基料添加于保健品或普通食品。该方法生产的可溶性大豆肽-钙复合物生产成本低、工艺简单、生物利用率 高。该方法为大豆蛋白深加工领域开辟了新的方向。
具体实施例方式
本发明提供一种大豆肽一钙复合物的制备方法。该方法以低温脱脂豆粕或大 豆分离蛋白为原料，采用蛋白酶脱酰胺酶酶解、酶灭活、大豆肽与钙螯合、干燥 制粉而得到大豆肽一钙复合物。该方法是一种生产成本低，植酸含量低且钙结合 量高，对酸碱处理、热处理稳定，生物利用率高的可溶性大豆肽-l丐'复合物的制 备方法。下面列举实施例对本发明予以进一步说明。实施例1、以脱脂豆粕为原料生产可溶性大豆肽-钙复合物的方法脱脂豆粕与水以l: 10 (w/v)的比例在pH为7. 0 8. 0条件下提取90min， 离心(4，000rpm ， 20min)除去豆渣得到蛋白质凝乳，加5倍体积水后搅拌分散， 离心(l，OOOrpm， 5min)'弃去上层的乳清(重复2次);将得到蛋白质凝乳按5 % (m/v)比例加水，强力搅拌使凝乳均匀分散，调pH至3.0， 5(TC保温，加入 蛋白酶M (酶与底物比为1/100)水解60min，水解结束后加热到85°C， 10min 灭酶，冷却，离心(4000rpm ， 20min)，收集上清液，将大豆肽溶液pH调到7. 0， 温度在5(TC条件下，加入谷酰胺酶(酶与底物比为1/50)进行脱酰胺180min， 酶解结束后加热到85t:， 10min灭酶，获得脱酰胺的大豆肽溶液。按30: 1 (v/v) 的比例加入lmol/L CaCL溶液，在37"C条件下反应30分钟，离心(4， OOOrpm， 20min)、取上清，冷冻干燥，即得大豆肽一钙复合物。实施例2、以脱脂豆粕为原料生产可溶性大豆肽一钙复合物的方法 脱脂豆粕与水以1: 10 (w/v)的比例在pH为7. 0 8. 0条件下提取90min， 离心(4， OOOrpm ， 20min)除去豆渣得到蛋白质凝乳，加5倍体积水后搅拌分散， 离心(l，OOOrpm， 5min)，弃去上层的乳清(重复2次)，得到蛋白质凝乳按5% (m,/v)比例加水，用均质机搅拌至均匀分散液，pH调至3.0， 45°〇保温，加入 蛋白酶M (酶与底物比为1/100)在45i:保温水解60min，水解结束后加热到85 。C， 10min灭酶，冷却，离心(4000rpm ， 20min)，收集上清液，将大豆肽溶液 pH调到7.0，温度在55。C条件下，加入天冬酰胺酶(酶与底物比为1/50)进行 脱酰胺180min，酶解结束后加热到85'C， 10min灭酶，获得脱酰胺的大豆肽溶液。 按30: 1 (v/v)的比例加入lmol/LCaCl,溶液，在25"条件下反应30分钟，离 心(4，000rpm， 20min)、取上清，冷冻干燥，即得大豆肽一鈣复合物。
实施例3、以商用大豆分离蛋白为原料生产可溶性大豆肽一钙复合物的方法将大豆分离蛋白加10倍体积水用均质机搅拌至均匀分散液，pH调至3. 0， 55。C保温，加A蛋白酶M (酶与底物比为1/100)， 55。C保温水解60min，水解结 束后加热到85。C， 10min灭酶，冷却，离心(4， OOOrpm ， 20min)，收集上清液， 将大豆肽溶液pH调到7.0，温度在5(TC条件下，加入谷氨酰胺酶(酶与底物比 为1/50)进行脱酰胺180min，获得脱酰胺的大豆肽溶液。按30: 1 (v/v)的比 例加入lmol/L CaCl2溶液，在30。C条件下反应30分钟，离心(4， OOOrpm， 20min)、 取上清，冷冻干燥，即得大豆肽一钙复合物。实施例4、以商用大豆分离蛋白为原料生产可溶性大豆肽一钙复合物的方法 将大豆分离蛋白加10倍体积水用均质机搅拌至均匀分散液，pH调至3. 0， 45。C保温，加入蛋白酶M (酶与底物比为1/100)， 45。C保温水解60min，水解结 束后加热到85"C， 10min灭酶，冷却，离心(4， OOOrpm ， 20min)，收集上清液， 将大豆肽溶液pH调到7.0，温度在45'C条件下，加入天冬酰胺酶(酶与底物比 为1/50)进行脱酰胺180min，获得脱酰胺的大豆肽溶液。按30: 1 (v/v)的比 例加入lmol/L CaCl2溶液，在28。C条件下反应30分钟，离心(4， OOO卬m， 20min)、 取上清，冷冻干燥，即得大豆肽一钙复合物。实施例5、以商用大豆分离蛋白为原料生产可溶性大豆肽一钙复合物的方法 将大豆分离蛋白加10倍体积水用均质机搅拌至均匀分散液，pH调至3. 0， 55t:保温，加入蛋白酶M (酶与底物比为1/100)， 55°〇保温水解60min，水解结 束后加热到85。C， 10min灭酶，冷却，离心(4， OOOrpm ， 20min)，收集上清液， 将大豆肽溶液pH调到7. 0，温度在45。C条件下，加入谷氨酰胺酶和天冬酰胺酶(1:1)(酶与底物比为1/50)进行脱酰胺180min，获得脱酰胺的大豆肽溶液。 按30: 1的比例加入lmol/L CaCl2溶液，在25。C条件下反应30分钟，离心 (4，000rpm， 20min)、取上清，冷冻干燥，即得大豆肽一韩复合物。
权利要求
1.一种大豆肽-钙复合物的制备方法，其特征在于，以低温脱脂豆粕或大豆分离蛋白为原料，采用蛋白酶脱酰胺酶酶解、酶灭活、大豆肽与钙螯合、干燥制粉而得到大豆肽-钙复合物。
2. 根据权利要求1所述大豆肽一钙复合物的制备方法，其特征在于，所述制备大豆肽-钙复合物的生产工艺，包括以下步骤(1)将低温脱脂豆粕与水按1: 10的比例溶解60分钟，pH 7.0—8.0、离 心，取上清液调pH 4.5酸沉，除去上清后用水分散，并进一步调pH 3.0-4.0， 使其溶解，分离，制得大豆蛋白，其纯度在85%-90%;2) 蛋白酶酶解将大豆蛋白分散在水中充分搅拌10 15min，将pH调至2 4，在温度为45-55T:条件下，加入蛋白酶保温水解40-60min，在4， OOOrpm转速 下离心20min，收集上清液获得大豆肽溶液；3) 脱酰胺将大豆肽溶液pH调到6 8，在温度为45-55。C条件下，加入脱 酰胺酶进行脱酰胺120-180min，获得脱酰胺的大豆肽溶液；4) 调制可溶性大豆肽-钙复合物将脱酰胺的大豆肽溶液，在25 45。C温度 下，加入钙离子溶液，反应充分后，在6000rpm转速下离心15min，收集上清， 干燥制粉获得可溶性大豆肽-钙复合物。
3. 根据权利2要求所述人豆肽一转复合物的制备方法，其特征在于，所述蛋白 酶为蛋白酶M (protease M，从天野制药可得)，加入量为底物的0. 5wt% 1. 5wt %。
4. 根据权利2要求所述大豆肽一钙复合物的制备方法，其特征在于所述脱 酰胺酶为谷氨酰胺酶或天冬酰胺酶或它们的混合物(glutaminase，从天野制药 可得)，加入量为底物的l wt% 3 wt%。
5. 根据权利2要求所述大豆肽一钙复合物的制备方法，其特征在于上述步 骤(2)的酶解是在大豆蛋白溶液的w/v浓度为2-5%，酶解时加入蛋白酶的重量 均为溶液中大豆蛋白重量的1-3%。
6. 根据权利2要求所述大豆肽一钙复合物的制备方法，其特征在于上述步骤(3)的酶解是在在大豆蛋白溶液的w/v浓度为2-5%，酶解时，加入脱酰胺酶 的重量均为溶液中大豆蛋白重量的0. 5-2%。
7. 根据权利要求1-6任意一项所述大豆肽一钙复合物的制备方法，其特征在 于得到的大豆肽的水解度为20-30%。
8. 根据权利1要求所述大豆肽一钙复合物的制备方法，其特征在于上述步 骤(4)在脱酰胺的大豆肽溶液中加入钙离子溶液，是以体积比30 : 1的比例加 入lmol/L CaCL溶液，在25—37T条件下反应10 40min分钟，离心(4， 000rpm， 20min)，取上清干燥，得大豆肽一钙复合物。
9. 根据权利l一7要求所述大豆肽一钙复合物的制备方法，其特征在于，所 得到的大豆肽一钙复合物的植酸含量小于0. 55%，钙结合量为1 1 0 m g / g以 上。
全文摘要
本发明公开了属于保健食品或食品添加剂制备技术领域，特别涉及大豆深加工技术的一种大豆肽—钙复合物的制备方法。本发明以低温脱脂豆粕或大豆分离蛋白为原料，采用蛋白酶和脱酰胺酶酶解、酶灭活、大豆肽与钙螯合、干燥制粉等工艺，提供一种钙结合量高的大豆肽—钙复合物产品。大豆肽—钙复合物是一种淡黄色粉末，性质稳定、钙结合量为110mg/g。本发明的大豆肽—钙复合物生产成本低、工艺简单、促进钙吸收的效果明显，可以直接作为补钙产品，或作为基料添加于保健品或普通食品，应用广泛。
文档编号A23L1/29GK101161114SQ20071017675
公开日2008年4月16日 申请日期2007年11月2日 优先权日2007年11月2日
发明者包小兰, 莹 吕, 郭顺堂 申请人:中国农业大学