改善含虾青素提取物的气味的方法

专利名称：：改善含虾青素提取物的气味的方法
技术领域：
：本发明涉及改善含虾青素提取物的气味的方法以及利用该方法得到的改善了气味的含奸青素提取物。
背景技术：
：已知虾青素是红色的类胡萝卜素的一种，具有强有力的抗氧化作用。因此，被用作食用色素、化妆品、保健食品、医药品等。除了化学合成的虾青素以外，也有来自于天然产物的虾青素。来自天然产物的虾青素从磷虾、红虾等虾类、红发夫酵母、藻类等中提取。但是，由于磷虾等虾类或酵母中的虾青素含量低，因此，不能从其中高效地提取虾青素。另外，藻类会随外界环境变化而发生孢囊化，在藻体内蓄积虾青素。因此，正在进行利用藻类生产虾青素的研究。由于虾青素分子中含有2个羟基，因此其常以羟基上结合了脂肪酸而形成的单酯或二酯的形式存在。尤其是单酯体居多，而不与脂肪酸结合的游离体是极微量的。这种酯体与游离体相比，通常对光和氧气等的稳定性高，在制造上容易操作，另外，根据情况，在动物体内的吸收也优良。但是，奸青素等叶黄素的脂肪酸酯的各种化学行为，与作为具有与脂肪酸形成的酯键的中性脂质的甘油三酯和甘油二酯类似。而且，产生叶黄素的藻类中，同时也产生大量上述中性脂质。因此，如果用通常的有机溶剂抽提叶黄素，则会有比叶黄素含量更多的中性脂质被同时抽提出来。即，回收到的是含有低浓度(10质量％以下)叶黄素的中性脂质。因此，为了得到高浓度的虾青素，需要将化学行为彼此类似的中性脂质与虾青素的脂肪酸酯分离。另外，含有低浓度(10质量％以下)叶黄素的中性脂质，伴有来自于原料的臭气，去除这种臭气在扩大用途方面也是重要的。作为从大量油脂(中性脂质)中回收叶黄素的方法，有利用结晶来回收的方法。例如，专利文献1公开了使虾青素从含有虾青素的氯仿溶液中结晶来进行精制的方法。另外，专利文献2公开了从万寿菊的花瓣中提取的含油成分中使叶黄素二酯水解而转变为游离体的叶黄素，然后利用结晶法进行精制的方法。但是，使用氯仿的结晶法由于氯仿的毒性等问题，不适于在食品的制造工序中使用。此外，结晶法还存在要结晶的物质需要达到规定浓度以上的浓度、所希望的物质以外的物质可能会结晶、目标物质难以形成结晶构造时结晶物的纯度降低等问题。另外，以上任意一种方法，都是使叶黄素游离体结晶的方法，因而不能得到叶黄素脂肪酸酯的混合物。已经公开了将作为类胡萝卜素的一种的叶黄素脂肪酸酯直接以酯混合物的形式作为沉淀而回收的方法(参照专利文献3~5)。专利文献3中，使来源于植物的叶黄素脂肪酸酯溶解于温丙酮中并除去沉淀物后，蒸馏除去丙酮，将得到的残留部分溶解于温丙醇和/或温丁醇，冷却后使其沉淀而进行精制。专利文献4中，将万寿菊提取物溶解于温乙醇，通过过滤除去不溶物后，将滤液冷却，作为沉淀得到叶黄素脂肪酸酯。专利文献5中，将利用烃溶剂提取的叶黄素脂肪酸酯与乙醇混合，使杂质溶解而除去后，得到反式叶黄素脂肪酸酯。如此，有各种用于精制叶黄素脂肪酸酯的方法，但是否能充分去除来自于原料的臭气尚不明确。正在研究从类胡萝卜素色素中去除来自于原料的臭气的方法。例如，专利文献6中，将含有类胡萝卜素色素的物质用水溶性有机溶剂、再用脂溶性有机溶剂混合处理，得到固体物质。但是，考虑到在食品等中使用，不优选使用脂溶性有机溶剂。此外，专利文献79中，将含有类胡萝卜素色素的物质水解后，添加类胡萝卜素难溶性有机溶剂(例如，乙醇、超临界二氧化碳)进行洗涤。这些是回收游离体类胡萝卜素的方法，而不是回收以酯混合物状态存在的类胡萝卜素的方法。专利文专利专利专利专利文专利文专利文专利专利献1文献2文献3文献4献5t献6献7文献8文献9日本特开平7-118226号公报曰本特表平11-508603号公报日本特开2002-30068号公报美国专利第4048203号说明书国际公开第99/54408号小册子日本特开平9-48927号公报日本特开平7-304977号公报曰本特开平7-304978号公报日本特开平7-304979号公报
发明内容本发明的目的在于提供改善含虾青素提取物的气味的方法，并提供改善了气味的含虾青素提取物。本发明提供改善含虾青素提取物的气味的方法，该方法包括相对于1质量份含虾青素提取物、加入0.5质量份1000质量份乙醇并进行混合的工序；从该乙醇混合液中回收固体成分的工序；以及对该回收的固体成分进行干燥的工序。在一个实施方式中，上述含虾青素提取物为绿藻提取物。更具体而言，上述实施方式中的上述绿藻为属于红球藻属的单细胞藻类。在一个实施方式中，上述混合工序中添加的乙醇优选为1质量份100质量份，更优选为2质量份~50质量份，进一步优选为4质量份~30质量份。在某一实施方式中，上述混合工序中添加的乙醇具有99。/。(v/v)以上的纯度。在一个实施方式中，上述回收工序中的上述乙醇混合液的温度在l(TC以下。在某一实施方式中，上述混合工序在60。C以下的温度下、更优选在5'C5(TC之间的温度下进行。本发明还提供利用上述任一方法得到的改善了气味的含虾青素提取物。发明效果根据本发明，能够通过非常简单的工序而得到改善了来自于含有虾青素的原料的独特气味的含虾青素提取物。因此，本发明的改善了气味的含虾青素提取物优选用作对气味有限制的食品或医药品的材料。图1是表示乙醇量与得到的干燥物中的虾青素浓度之间的关系的曲线图。图2是参考例l中得到的红球藻提取物(未处理品)的气味的气相色谱图。图3是实施例6中得到的经98。/。(v/v)乙醇处理后的气味改善品的气味的气相色谱图。图4是实施例6中得到的经99%0)乙醇处理后的气味改善品的气味的气相色谱图。具体实施方式(含虾青素提取物)本发明中，仅称作虾青素的情况下，是指选自虾青素的游离体、虾青素的脂肪酸单酯以及虾青素的脂肪酸二酯组成的组中的至少一种化合物。作为能够构成虾青素脂肪酸酯的脂肪酸，可以列举月桂酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、棕榈油酸、十七垸酸、反油酸、蓖麻油酸、岩芹酸、异油酸、桐酸、石榴酸、里卡利酸、帕里拉油酸、鳕油酸、5-二十碳烯酸、5-二十二碳烯酸、鲸蜡烯酸、芥酸、5，13-二十二碳二烯酸、鲨鱼酸、癸烯酸、十二碳烯酸、油酸、硬脂酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、亚油酸、ot-亚麻酸、花生四烯酸等。本发明中，含虾青素提取物是指从天然产物中提取的含有虾青素的油性物质。可以是只进行了抽提操作(g卩，除抽提操作以外，不再进行虾青素的浓縮、精制)的油性物质，或者也可以是已经进行了浓縮、精制的油性物质。作为天然产物，可以列举含有虾青素的红色酵母；日本虎斑猛水蚤(redwaterflea)、磷虾等甲壳类的壳；绿藻类等微藻类等。本发明中，优选使用来源于绿藻的提取物。对于绿藻而言，只要是具有产生虾青素能力的绿藻即可，没有特别的限制。例如，优选使用红球藻(Haematococcus)属的单细胞藻类。作为优选的绿藻，可以列举雨生红球藻(H.pluvialis)、湖生红球藻(H.lacustris)、Haematococcuscapensis(H.capensis)、Haematococcusdroebakensi(H.droebakensi)、禾卩Haematococcuszimbabwiensis(H.zimbabwiensis)等。例如，如下所述从绿藻中制备含虾青素提取物。将孢囊化的绿藻，在营养培养基中、二氧化碳供给下，在以例如8000pmol-photon/m"秒以上的光合成有效光量子束给与量进行光照射的同时进行培养，然后提取含有虾青素的油性物质。对于含有虾青素的油性物质的提取方法，没有特别的限制，可以使用本领域技术人员常用的方法。例如，从培养的绿藻中，利用溶剂抽提、机械破碎(例如，珠磨式组织研磨机等)或压榨、以及将以上方法组合进行抽提。作为溶剂，可以使用氯仿、己垸、丙酮、甲醇、乙醇等有机溶剂。或者，也可以采用超临界抽提法来抽提。利用溶剂抽提的情况下，抽提后，可以通过本领域技术人员常用的方法去除溶剂。红球藻等藻类中，作为叶黄素的一种的虾青素在藻体内蓄积，但同时也产生中性脂质等油性物质。因此，在通常用于提取虾青素的抽提法中，虾青素与中性油脂等一同被抽提出来。来自于藻类的油性物质中的虾青素浓度根据抽提溶剂、抽提方法等有所差异，一般为约1质量％~约10质量％。另外，藻类的虫下青素根据培养条件的不同而不同，但以虾青素脂肪酸单酯为主成分，占所有叶黄素类的至少50质量％以上，更优选为60质量％以上，进一步优选为70质量％以上。虾青素脂肪酸二酯的含量为约15质量％~约30质量％，游离体(游离)的虾青素多在1质量％以下。本发明中，作为含虾青素提取物，优选使用绿藻类中属于红球藻属的藻类、优选雨生红球藻来源的含有虾青素的油性物质。(含虾青素提取物的气味改善方法)本发明的含虾青素提取物的气味改善方法包括相对于1质量份含虾青素提取物、加入0.5质量份1000质量份乙醇并进行混合的工序；从该乙醇混合液中回收固体成分的工序；以及对该回收的固体成分进行干燥的工序。本发明中，利用虾青素较难溶于乙醇的性质，去除可溶于乙醇的独特的气味成分，并回收不溶于乙醇的物质。本发明的气味改善方法中，首先，将含虾青素提取物与乙醇混合。使用的含虾青素提取物是如上所述的从天然产物中提取的含有虾青素的油性物质。混合中使用的乙醇量越大，虾青素的纯度越高，含虾青素提取物中特有的气味越小，气味的改善效果越好。而另一方面，乙醇的用量越多，虾青素的回收效率越低。因此，乙醇的用量相对于1质量份含虾青素提取物为0.5质量份1000质量份，优选为i质量份100质量份，更优选为2质量份50质量份，进一步优选为4质量份30质量份，还更优选为6质量份20质量份。另外，混合中使用的乙醇的纯度越高，回收的虾青素纯度则越高，含虾青素提取物中特有的气味越小，气味的改善效果越好。因此，本发明中使用的乙醇具有优选为98。/。(v/v)以上、更优选为99。/。(v/v)以上、进一步优选为99.5。/。(v/v)以上的纯度。混合方法没有特别的限定。可以采用例如搅拌、振动等方法迸行混合。该混合工序的目的在于，使含虾青素提取物中的易溶于乙醇的物质溶解在乙醇中，因此，无需进行特别剧烈的混合、搅拌，例如，温和的搅拌即可。可以采用本领域技术人员常规使用的混合，例如，利用搅拌翼搅拌、利用磁力搅拌器搅拌、利用超声波照射混合、利用振荡器振动等。在混合工序中，为了降低含虾青素提取物的粘度，以易于与乙醇混合，混合优选在6(TC以下的温度下、更优选在5。C5(TC之间的温度下进行。温度过高时，可能使含虾青素提取物中的油脂等产生劣化，气味变差，得到的提取物中的虾青素的浓度及回收率降低。如果温度过低，则含奸青素提取物难以与乙醇混合。然后，从乙醇混合液中回收固体成分。回收时的乙醇混合液的温度优选为常温或常温以下的温度，更优选为l(TC以下，进一步优选为5X:以下。为了易于回收固体成分，也可以静置。静置时间没有特定的限制。例如，在5'C下静置时，固体成分在约1小时约48小时内沉淀下来。产生的固定成分，采用例如过滤、离心分离、倾析等方法回收。然后，将回收的固体成分在减压下、或通过通入氮气等惰性气体等除10去乙醇，并使其干燥。(改善了气味的含虾青素提取物)如上所述得到的改善了气味的含虾青素提取物中，虾青素含量根据作为起始物质的含虾青素提取物中的虾青素浓度的不同而有所差异，以游离体记，通常为至少10质量％，优选为至少15质量％，更优选为至少20质量％以上，进一步优选为至少25质量％以上。该改善了气味的提取物中的虾青素，取决于含虾青素提取物的原料中的虾青素，为虾青素游离体、虾青素脂肪酸单酯、虾青素脂肪酸二酯、以及它们的混合物。例如，在红球藻为原料的情况下，虾青素的一半以上可以为脂肪酸单酯。另外，改善了气味的含虾青素提取物中，来自于原料的独特的气味可改善至仅残留少许或者几乎或完全没有的程度。下面，列举使用雨生红球藻K0084株的实施例来说明本发明，但本发明不限于此实施例。另外，本实施例中，虾青素的浓度和气味的感官评价采用以下方法进行测定。(虫下青素浓度的测定方法)提取物中的虫下青素浓度(将虾青素脂肪酸酯类换算为游离的虾青素的浓度)，在用DMSO适当稀释后，由以下计算公式求得。虾青素浓度(质量。/。)气AH0(PF)/(W42085)在此，A为试样在478nm处的吸光度(光程长度lcm)，F为试样的稀释倍数，W为试样的质量(g)。(感官评价方法)对得到的试样，采用下述基准评价红球藻特有的气味。另外，此评价是由味觉试验(五味辨别试验)和嗅觉试验(T&T嗅觉仪法)均合格的能够进行正常感官评价的评价者来进行的。气味评价的标准1…完全没有特有的气味2…几乎没有特有的气味3…稍有些许特有的气味4…有强烈的特有的气味5…有非常强烈的特有的气味(参考实施例l:红球藻提取物的制备)将雨生红球藻K0084株接种于具有下述表1所示组成的培养基(低营养培养基)中。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>具体而言，在1.5L的扁平培养瓶中加入1L低营养培养基，并接种孢囊化的K0084株。如下进行培养使用白色荧光灯，以25000pmol-p/mV秒的光合成有效光量子束给与量进行光照，并以0.5L/分钟的速度通入含有3容积％(302的空气(即，通气速度为0.5vvm)，在25"C下培养7天。7天后，收集孢囊化的K0084株，用低营养培养基将其调整至1.5X10S个/ml的浓度。在以与培养槽的内壁间隔3cm的方式相对设置了丙烯酸透明板的扁平培养槽中，加入9L低营养培养基，并以1.5Xl()S个/ml的浓度接种1L上述孢囊化K0084株，开始培养。培养在下述条件下进行在扁平培养槽的两侧各设置6管白色荧光灯，以25000pmol-p/mV秒的光合成有效光量子束给与量进行照射，并以0.5L/分钟的速度通入含有3容积％(302的空气(即，通气速度为0.5vvm)，在25'C下培养21天。取出培养液，用水洗涤藻体，收集于珠磨式组织研磨机专用的管中。向该管中加入二氧化锆珠后，再加入50mL乙醇，用珠磨式组织研磨机进行破碎。将破碎物用离心分离机分离为上清和沉淀物，并回收上清。再次向沉淀物中加入50mL乙醇，重复与上述同样的操作，直至沉淀物的颜色几乎完全变白。将回收的各部分乙醇合并，减压除去乙醇，得到绿藻提取物。该提取物中的虾青素浓度，以游离体含量记，为13.1质量％。(实施例l:改善了气味的含虾青素提取物的制备-l)将30g上述参考例1中得到的红球藻提取物(虾青素游离体含量为13.1质量％)加热到50°C，向其中加入240g乙醇(纯度在99.5。/。(v/v)以上)，使用磁力搅拌器充分搅拌、混合。将该溶液在5i:下静置过夜后，用滤纸过滤而回收析出的固体成分。减压浓縮得到的固体成分，除去乙醇。得到奸青素游离体含量为31.5质量％的干燥物6.8g(回收率54%)。(实施例2:改善了气味的含虾青素提取物的制备-2)13将实施例1中的红球藻提取物的乙醇溶液的静置温度设为常温，除此以外，全部与实施例1同样进行处理，得到虾青素游离体含量为34.8质量％的干燥物5.0g(回收率44%)。(实施例3:改善了气味的含虾青素提取物的气味评价)对上述参考例1中得到的红球藻提取物以及实施例1和2中得到的改善了气味的含虾青素提取物的各试样，进行红球藻特有气味的感官评价。结果显示于表2。试样气味的评价红球藻提取物实施例1的干燥物2实施例2的干燥物3红球藻提取物具有非常强烈的特有气味，经乙醇处理后，可改善到仅残留少许气味或几乎没有气味的程度。(实施例4:使用的乙醇量的研究)在常温下，向上述参考例1中得到的红球藻提取物1质量份中加入2~50质量份的各种量的乙醇(纯度在99.5。/。(v/v)以上)，使用搅拌翼充分搅拌、混合。将该溶液在51(TC下静置过夜后，用滤纸过滤而回收析出的固体成分。减压浓縮回收的固体成分，以除去乙醇而得到干燥物。对得到的干燥物，测定其虾青素浓度，并进行红球藻特有气味的感官评价。使用的乙醇量与得到的干燥物中的虾青素浓度的关系显示于图1。另外，图1中还同时显示了上述实施例1和2中得到的干燥物的结果。此外，本实施例4中得到的干燥物的气味的感官评价结果，与虾青素浓度及回收率一同显示于表3。[表3]<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>可以看出下述倾向使用的乙醇量越多，干燥物中的虾青素浓度越高，同时，气味改善也越明显。另一方面，可知虾青素的回收率有降低的倾向。(实施例5:混合工序的温度的研究)在常温下，向上述参考例1中得到的红球藻提取物1质量份中，加入10质量份的乙醇(纯度在99.5。/。(v/v)以上)，并在不同温度(1060。C)下用搅拌翼充分搅拌、混合。将该溶液在l(TC下静置过夜后，用滤纸过滤而回收析出的固体成分。减压浓縮回收的固体成分，以除去乙醇而得到干燥物。对得到的干燥物，测定其虾青素浓度，并进行红球藻特有气味的感官评价。结果显示于表4。另外，在6(TC下混合并静置过夜时，由于目测到固体成分少，因此静置两晚。[表4]<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>可以看出，混合温度如果在6(TC以下，得到的干燥物的气味及虾青素浓度无明显差别。(实施例6:乙醇纯度的研究)在常温下，向上述参考例1中得到的红球藻提取物1质量份中加入IO质量份各种纯度的乙醇，用搅拌翼充分搅拌、混合。将该溶液在l(TC下静置过夜后，用滤纸过滤而回收析出的固体成分。减压浓縮回收的固体成分，以除去乙醇和水而得到干燥物。对得到的干燥物，测定其虾青素浓度，并进行红球藻特有气味的感官评价。结果显示于表5。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>可以看出，使用的乙醇的纯度越高，干燥物中的虾青素浓度则越高，同时，气味改善也越明显。(实施例7:乙醇以外的溶剂的研究)在常温下，向上述参考例1中得到的红球藻提取物1质量份中加入10质量份的乙醇(纯度在99.5。/。(v/v)以上)或2-丙醇，用搅拌翼充分搅拌、混合。将该溶液在5t:下静置3小时后，再次充分搅拌。让该溶液流过装有滤纸(定量滤纸())90mmNo.5C:7卜">f'7夕株式会社)的布氏(Buchner)漏斗一次，通过减压过滤回收析出的固体成分。此时，计测过滤需要的时间。接着，减压浓縮回收的固体成分，以除去乙醇或2-丙醇而得到干燥物。对得到的干燥物，测定其虾青素浓度，并进行红球藻特有气味的感官评价。结果显示于表6。表6]<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>在使用2-丙醇的情况下，也能够得到虾青素浓度高、且气味改善了的干燥物。但是，滤纸发生堵塞，过滤需要的时间非常长。因此可知，乙醇以外的溶剂不适于实际的工业用途。(实施例8:臭气物质2，4-庚二烯醛的测定)含有虾青素的原料发出的独特的气味，来源于多种臭气物质，作为其原因物质之一，可以列举2,4-庚二烯醛。2,4-庚二烯醛被认为是自来水腥臭味的原因物质之一(参照片岗念之，第47届全国自来水研究发表会概要集，1996年，472-473页)。因此，对上述参考例1得到的红球藻提取物(未处理品)、以及上述实施例6中得到的经98。/。(v/v)和99%0/力乙醇处理后的干燥物(气味改善品)，进行2，4-庚二烯醛的测定。将0.5g各试样保温于6(TC下的同时向其中通入氮气，并回收气体。使1L该气体通过吸附剂(NeedlEx:信和加工株式会社)，使气味成分吸附于吸附剂上。采用具备氢焰离子化检测器(FID)的气相色谱仪(GC)对该吸附的气味成分进行分析。分析条件如下。(GC)柱ZB-l(60mX0.32mmI.D.df=1.0—柱温40°C(2分钟)一(1(TC/分钟)一300°C(5分钟)注入口温度250°C载气(He)压力121.4kPa(FID)检测器温度300°C尾吹气(He)流量30.0ml/分钟各试样的气相色谱图显示于图2~4。由这些图可知，气味改善品与未处理品相比，2,4-庚二烯醛大幅度减少。该结果与感官评价的结果非常一致。产业上的利用可能性根据本发明的方法，能够改善含虾青素提取物具有的来源于原料的特有气味。因此，得到的改善了气味的含虾青素提取物能够适用于食品、医药品、化妆品等领域。权利要求1.一种改善含虾青素提取物的气味的方法，其包括相对于1质量份含虾青素提取物、加入0.5质量份～1000质量份乙醇并进行混合的工序；从该乙醇混合液中回收固体成分的工序；以及对该回收的固体成分进行干燥的工序。2.如权利要求l所述的方法，其中，所述含虾青素提取物为绿藻提取物。3.如权利要求2所述的方法，其中，所述绿藻为属于红球藻属的单细胞藻类。4.如权利要求l所述的方法，其中，所述混合工序中加入的乙醇为1质量份100质量份。5.如权利要求4所述的方法，其中，所述混合工序中加入的乙醇为2质量份50质量份。6.如权利要求5所述的方法，其中，所述混合工序中加入的乙醇为4质量份30质量份。7.如权利要求l所述的方法，其中，所述混合工序中加入的乙醇具有99%(v/v)以上的纯度。8.如权利要求6所述的方法，其中，所述混合工序中加入的乙醇具有99y。(v/v)以上的纯度。9.如权利要求l所述的方法，其中，所述回收工序中，所述乙醇混合液的温度在l(TC以下。10.如权利要求1所述的方法，其中，所述混合工序在6(TC以下的温度下进行。11.如权利要求10所述的方法，其中，所述混合工序在5°C50'C之间的温度下进行。12.如权利要求11所述的方法，其中，所述混合工序中加入的乙醇为4质量份30质量份。13.如权利要求11所述的方法，其中，所述混合工序中加入的乙醇具有99。/。(v/v)以上的纯度。14.一种改善了气味的含虾青素提取物，其通过权利要求1所述的方法得到。15.如权利要求14所述的改善了气味的含虾青素提取物，其中，所述混合工序中加入的乙醇为4质量份~30质量份。16.如权利要求14所述的改善了气味的含虾青素提取物，其中，所述混合工序中加入的乙醇具有99%(v/v)以上的纯度。17.如权利要求14所述的改善了气味的含虾青素提取物，其中，所述混合工序在5"C5(TC之间的温度下进行。全文摘要本发明提供改善含虾青素提取物的气味的方法，并提供改善了气味的含虾青素提取物。本发明的改善含虾青素提取物的气味的方法包括相对于1质量份含虾青素提取物、加入0.5质量份～1000质量份乙醇并进行混合的工序；从该乙醇混合液中回收固体成分的工序；以及对该回收的固体成分进行干燥的工序。特别说明的是，作为起始物质的含虾青素提取物是来自于绿藻的提取物。文档编号A23L1/302GK101496561SQ20091000376公开日2009年8月5日申请日期2009年2月1日优先权日2008年1月31日发明者斋木朝子,杉山裕之,铃木里英申请人:雅马哈发动机株式会社