专利名称：用动物骨骼制备骨胶原多肽的方法
技术领域：
本发明涉及一种多肽的制备方法，尤其涉及一种骨胶原多肽的制备方法。
背景技术：
近年来的科学研究认为，人体吸收蛋白质主要是以肽的形式吸收，而肽是由氨基酸组成的分子，有多肽、寡肽、微肽、小肽等多种分类。多肽存在于生物体内，所有的细胞都能合成多肽，但又都受多肽调节，多肽具有极强的活性和多样性，能用肽营养的生理功能和生物活性，调节人体内各系统和细胞的生理功能，激活体内有关酶素。因此，多肽成为人体健康的重要物质。
目前，以生物酶催化、合成生物活性肽的技术已在广泛开展，其基本方法是将动物鲜骨在高温、高压下进行蒸煮，用碱或酸调节pH值后，加入蛋白酶将蛋白质酶解，酶解后可得到小分子的胶原多肽。然而，现有工艺中尚未有文献记载利用Protamex复合蛋白酶酶解动物骨骼制备骨胶原多肽的制备方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种工艺简单、原料来源广泛、成本低廉、产品性能优越的用动物骨骼制备骨胶原多肽的方法。
为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为一种用动物骨骼(优选鲜猪骨)制备骨胶原多肽的方法，包括以下步骤取动物骨骼洗净，初碎后用沸水蒸煮，去除蒸煮液表层油脂后将骨块沥干并干燥；再将骨块进行粗粉碎、超微粉碎制成骨粉，加水将骨粉配制成骨泥液，高温灭菌后冷却并添加Protamex复合蛋白酶进行酶解，灭酶；过滤后取过滤液真空浓縮并冷冻干燥，得到骨胶原多肽。
上述技术方案中，沸水蒸煮时骨块与水的质量比为1 : 1~1 :2,蒸煮时的温度控制在11(M2(TC，蒸煮时的压强控制在143-198 kPa。沸水蒸煮的时间一般控制在30~60 min。
上述技术方案中，对骨块进行千燥时的温度控制在80 85X:,且干燥至含水量小于5%。
上述技术方案中，在对骨块进行粗碎、超微粉碎时，所述骨块粉碎成骨粉的粒度小于160目。
上述技术方案中，所述骨泥液中骨粉的质量浓度为10~15%。
上述技术方案中，所述高温灭菌过程是指在85'C温度下灭菌15min，高温灭菌后的冷却是指自然冷却至5(TC以下。上述技术方案中，所述Protamex复合蛋白酶的添加量为酶解底物骨粉质量的2~2.5%。。Protamex复合蛋白酶酶解时的pH值为7.5，温度控制在55°C，酶解时间为10~15 h。
与现有技术相比，本发明的优点在于本发明的工艺简单，原材料来源广泛且价格低廉，制备过程中反应条件易于控制，制备出的骨胶原多肽作为一种营养物质对血管紧张素转换酶(ACE)具有抑制作用，具有降血压的功能，同时具有抗氧化活性和促进益生菌增殖等功效，能够大大提高肉类副产物——骨的附加值。
具体实施例方式
实施例l:
取鲜猪骨洗净后初步破碎，将破碎后的骨块放入蒸煮容器中，往容器中添加与骨块等质量的水，在ll(TC温度、143kPa压强下蒸煮50min，然后去除上层油脂，沥干，斩碎得到3~4cm的骨块，85"C温度下干燥7h,干燥后将骨块经粉碎机粗粉碎，再经超微粉碎机进行超微粉碎，将超微粉碎后的骨粉过160目筛；将过筛后的骨粉加水配制成10%质量浓度的骨泥液装入容器内，在85'C水浴中灭菌15min，再冷却至40'C以下，调节pH值至7.5，然后加入酶解底物骨粉质量296。的Protamex复合蛋白酶(丹麦诺维信公司生产，标注活力为1.5 AU/g (安森单位/克))，在温度为55°C、 pH值7.5的条件下酶解10h，然后在85'C水浴中灭酶15min，过滤收集酶解液。使用旋转蒸发浓縮仪将收集的酶解液浓縮至原体积的1/4,然后将浓縮液置于-30匸冰箱中冻结，再经冷冻干燥24h，收集多肽粉保存于-24'C冰箱中。
按以上工艺制得的骨胶原多肽粉，经取样、分析测试(依据多肽含量检测分析通则)后，该骨胶原多肽粉中的骨胶原多肽含量为720mg/g。
实施例2:
取鲜猪骨洗净后初步破碎，将破碎后的骨块放入蒸煮容器中，往容器中添加与骨块等质量的7K，在115'C温度、169kPa压强下蒸煮40min，然后去除上层油脂，沥干，斩碎得到3~4cm的骨块，85t:温度下干燥7h，干燥后将骨块经粉碎机粗粉碎，再经超微粉碎机进行超微粉碎，将超微粉碎后的骨粉过160目筛；将过筛后的骨粉配制成12%质量浓度的骨泥液装入一容器内，在85'C水浴中处理15min杀菌，冷却至40'C以下，调节至pH值至7.5，然后加入酶解底物骨粉质量2.2%。的Protamex复合蛋白酶，在温度为55°C、 pH值为7.5的条件下酶解12h，酶解完成后在85t)水浴中灭酶15min，过滤收集酶解液。使用旋转蒸发浓缩仪将收集的酶解液浓縮至原体积的1/4左右，然后将浓缩液置于-3(TC冰箱中冻结，再经冷冻干燥24h，收集多肽粉保存于-24'C冰箱中。
按以上工艺制得的骨胶原多肽粉，经取样、分析测试(依据多肽含量检测分析通则)后，该骨胶原多肽粉中的骨胶原多肽含量为760mg/g。 实施例3:
取鲜猪骨洗净后初步破碎，将破碎后的骨块放入蒸煮容器中，往容器中添加与骨块等质 量的ZK，在120。C温度、198kPa压强下蒸煮30min,然后去除上层油脂，沥干，斩碎得到3~4 cm的骨块，85'C温度下干燥7h，干燥后将骨块经粉碎机粗粉碎，再经超微粉碎机进行超微 粉碎，将超微粉碎后的骨粉过160目筛；将过筛后的骨粉配制成15%质量浓度的骨泥液装入 一容器内，在85'C水浴中灭菌15min，冷却至50'C以下，调节至pH值为7.5，然后加入酶解 底物骨粉质量2.4%。的Protamex复合蛋白酶，在温度为55°C、 pH值为7.5的条件下酶解14h， 酶解完成后通过85'C水浴15min将酶灭活，过滤收集酶解液。使用旋转蒸发浓縮仪将收集的 多肽酶解液浓縮至原体积的1/4，然后将浓縮液置于-3(TC冰箱中冻结，再经冷冻干燥24h，收 集多肽粉保存于-24'C冰箱。
按以上工艺制得的骨胶原多肽粉，经取样、分析测试(依据多肽含量检测分析通则)后， 该骨胶原多肽粉中的骨胶原多肽含量为810mg/g。
以上产品依据GB/T 5009.11、 GB/T 5009.12、 GB/T 5009.17、 GB 4789.2-15中规定的方法 进行食品卫生检验，结果显示无机砷(以AS计，mg/kg) 0.22，铅(以Pb计，mg/kg) 0.39， 汞(以Hg计，mg/kg) 3，菌落总数(cfu/g) 1.2x103，大肠菌群(MPN/100g) S40，霉 菌(cfU/g) 510，酵母(cfu/g) ￡10,致病菌未检出。符合GB16740-1997保健(功能)食品 通用标准。
权利要求
1、一种用动物骨骼制备骨胶原多肽的方法，包括以下步骤取动物骨骼洗净，初碎后用沸水蒸煮，去除蒸煮液表层油脂后将骨块沥干并干燥；再将骨块进行粗粉碎、超微粉碎制成骨粉，加水将骨粉配制成骨泥液，高温灭菌后冷却并添加Protamex复合蛋白酶进行酶解，灭酶；过滤后取过滤液真空浓缩并冷冻干燥，得到骨胶原多肽。
2、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述动物骨骼为鲜猪骨。
3、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述沸水蒸煮时的温度控制在110~120°C， 沸水蒸煮时的压强控制在143 198kPa。
4、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述沸水蒸煮时，骨块与水的质量比为 1:1 1:2。
5、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述沸水蒸煮的时间控制在30 60min。
6、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于对骨块进行干燥时的温度控制在80~85°C， 且干燥至含水量小于5%。
7、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述骨泥液中骨粉的质量浓度为10~15%。
8、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述高温灭菌过程是指在85'C温度下灭 菌15min，高温灭菌后的冷却是指自然冷却至5(TC以下。
9、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述Protamex复合蛋白酶的添加量为酶 解底物骨粉质量的2~2.5%o。
10、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述Protamex复合蛋白酶酶解时的pH 值为7.5，温度控制在55'C，酶解时间为10 15h。
全文摘要
本发明公开了一种用动物骨骼制备骨胶原多肽的方法，包括以下步骤取动物骨骼洗净，初碎后用沸水蒸煮，去除蒸煮液表层油脂后将骨块沥干并干燥；再将骨块进行粗粉碎、超微粉碎制成骨粉，加水将骨粉配制成骨泥液，高温灭菌后冷却并添加Protamex复合蛋白酶进行酶解，灭酶；过滤后取过滤液真空浓缩并冷冻干燥，得到骨胶原多肽。本发明的工艺简单，原材料来源广泛且价格低廉，制备过程中反应条件易于控制，大大提高了动物骨骼的附加利用价值。
文档编号A23J3/04GK101473886SQ200910042549
公开日2009年7月8日 申请日期2009年1月19日 优先权日2009年1月19日
发明者珂 李, 李宗军, 王远亮, 荣 肖, 静 谢 申请人:湖南农业大学