专利名称：一种微生物复合菌剂和微生物复合菌剂的制备及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及用途。
背景技术：
微污染水源水是指受到有机物污染，部分项目的指标超过卫生标准，其中 主要表现为氨氮含量超标，氨氮含量过高会导致氯化过程中生成大量的氯胺， 引起嗅和味的问题，还会影响水处理时的消毒效果，氨在水管中，在亚硝化菌 的作用下，生成亚硝酸盐，对人体健康带来危害。生物脱氮技术由于具有处理 效果好、处理过程可靠、处理成本低、操作管理方便等优点而得到广泛运用， 采用固定化包埋硝化菌去除微污染水源水中氨氮的研究对微污染水源水中氨
氮去除取得了良好的效果，但是，在水处理过程中需要限定温度在20 3(TC， 也有在富氧曝气条件下采用生物硝化方法去除微污染水源水中的氨氮，但这种 方法需控制温度在17 26。C;而对于北方地区，尤其是黑龙江省，年平均气温 最高只有4.9。C。大部分时间处于低温期，以松花江为例，每年6个月左右的 时间，水温处于1(TC以下，微生物活性下降，难以达到理想的氨氮去除效果； 《中国环境科学》，2003; 23 (6): 644 647在研究低温下生物陶粒反应器去 除微污染水源水中氨氮时虽然在低温条件下有较好的氨氮去除效果，但在处理 过程中硝酸盐、亚硝酸盐的大量积累，影响了出水水质，对人体健康带来了危 害。
发明内容
本发明为了解决现有的生物法对于水温低于l(TC的微污染水源水中氨氮 处理效果差以及现有的生物法处理水温低于l(TC的微污染水源水中氨氮时容 易出现硝酸盐、亚硝酸盐积累影响出水水质的问题，而提供了一种微生物复合 菌剂和微生物复合菌剂的制备及用途。
本发明微生物复合菌剂是由j^ev/tocten^m wc6 W/恥n' SRA13、恶臭假单 胞菌(i^ewcfowo"as _pw//(i")WXZ-4、穿孑L假单胞菌(/^ewciomowas1 peWwc/wogewa) DX3和液体培养基制成；每毫升微生物复合菌剂中万mv/^"m'ww wc^e〃"m'SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4与穿孔假单胞菌DX3的细菌总数比为2~6: 0.5~2.5: 0.5~2.5;其中，5rev/kzc^n'Mw附cZ^e〃"en' SRA13属于短杆菌属 (wC&e//"eW)，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保 藏编号为CGMCC No, 2890，保藏日期为2009年1月19日。
本发明微生物复合菌剂的制备方法按照以下步骤进行一、^譜力"c^/謂 wc6w〃"en'SRA13、恶臭假单胞菌(i^^^w70"ospw"^) WXZ-4和穿孔假单 胞菌(尸化m^ wo"w; em/c/"ogewa) DX3分别接种于固体培养基中，在28~32°C 活化8 16h; 二、活化后的S"Wkzcfen^w mc&e〃weW SRA13、恶臭假单胞菌 WXZ-4和穿孔假单胞菌DX3分别接种于液体培养基中进行发酵培养，温度为 28~32°C，培养至每毫升发酵液中BwW^cter/wmmc6/^/"eWSRA13、恶臭假单 胞菌WXZ-4和穿孔假单胞菌DX3的菌数分别为2 6xl(T个、0.5 2.5xl(^个、 0.5 2.5xlO'o个；三、将5wv/Z^"en'ww wc&e〃朋W SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4
和穿孔假单胞菌DX3的发酵液按照体积比为1: 1: l的比例均匀混合，即制
成微生物复合菌剂。
本发明微生物复合菌剂用于水温低于l(TC的微污染水源水的处理。
本发明微生物复合菌剂具有以下优点
1、 本发明的微生物复合菌剂对水温低于l(TC的微污染水源水中的氨氮有
较强的降解能力，能有效去除微污染水源水中的氨氮，本发明微污染水源水处 理后的氨氮含量检测方法参照的是由中国环境科学出版社出版的《水和废水监 测分析方法(第四版)》中的纳氏试剂光度法，本发明的微生物复合菌剂对微
污染水源水中氨氮的去除率可达到90%以上，水处理效果好；
2、 本发明的微生物复合菌剂对水温低于l(TC微污染水源水的处理过程中
不存在硝酸盐、亚硝酸盐积累的问题，使用本发明的微生物复合菌剂处理水温
低于l(TC微污染水源水不会影响出水的水质，本发明对于硝酸盐和亚硝酸盐 含量的测定方法参照的是由中国环境科学出版社出版的《水和废水监测分析方
法(第四版)》中的酚二磺酸光度法和N— (l一萘基) 一乙二胺光度法；
3、 本发明的微生物复合菌剂在l(TC以下的环境中仍然保持活性不变，不 会因为温度过低，而使菌剂中的菌数减少。
本发明复合菌齐[J中的""v/6(3c/en.wm wc6re〃"eW SRA13为5rev/6acten.ww2mc6 //weW (迈克布瑞德短杆菌)，属于短杆菌属(>^^//"^/)，已在中国微生
物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No. 28卯， 保藏日期为2009年1月19日。
具体实施例方式
具体实施方式
一本实施方式微生物复合菌剂是由^^W6acfeWwm wc^e〃"en. SRA13、恶臭假单胞菌(尸化Mcfowo"as /w^ia) WXZ画4、穿孔假单 胞菌(尸化M^ww"os; em^"oge"a) DX3和液体培养基制成；每毫升微生物复 合菌剂中5wWkcteWi/m wcZ^〃"en' SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4与穿孔假 单胞菌DX3的菌落数比为2 6: 0.5 2.5: 0.5 2.5;其中，S固力她r/謂 mcZ^〃wen' SRA13属于短杆菌属OcZ^〃weW)，己在中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.2890，保藏日期为2009 年1月19曰。
本实施方式中的恶臭假单胞菌(尸"Mt/wwwas; w^^) WXZ-4属于假单胞 菌属(户化^/omo"w义该菌记载于《环境科学研究》2008年3期121~125《一 株异养硝化-好氧反硝化菌的脱氮性能研究》 一文中，该菌株可由《一株异养 硝化-好氧反硝化菌的脱氮性能研究》作者处购得。
本实施方式中的穿孔假单胞菌(i^e^/omfwospem/c/woge"") DX3属于假 单胞菌属(P"w^w7o"m A该菌记载于《安徽农业科学》2008年22期9361-9362 《高效氨氮降解菌的筛选'鉴定及降解能力测定》 一文中，该菌株可由《高效 氨氮降解菌的筛选'鉴定及降解能力测定》作者处购得。
具体实施方式
二本实施方式与具体实施方式
一不同的是Swv/^cfen'ww mc6m〃"m' SRA13为革兰氏阴性好氧菌，为短杆状，宽为0.4um 0.9um， 长为0.7um 1.0um，常成对或成簇存在，无芽孢和鞭毛，进行抽搐运动； 在牛肉膏蛋白胨培养基上形成黄色菌落，菌落圆形，菌落表面隆起，光滑。其 它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同的是液体培养基按照 重量份数比由1 4份Na2HP04、 1 4份的KH2P04、 0.5~1.5份的MgS04'7H20、 0.005 0.015份的CaCl2'2H20、 4 6份的NH4Cl和950 1000份水组成，其中液 体培养基的pH值为6.5~7.2。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四本实施方式微生物复合菌剂的制备方法按照以下步骤进
《亍^"、 5reW6"cfen'w淤wc6re〃"en' SRA13、恶臭4段单胞菌(i^ew^fomowos1 / M"da) WXZ-4和穿孔假单胞菌(PsewdomoMas peWwcf朋gena) DX3分别接种于固体 培养基中，在28 32。C活化8~16; 二、活化后的Bwv沾""en'ww mcZ^〃"en' SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4和穿孔假单胞菌DX3分别接种于液体培养基中 进行发酵培养，温度为28 32°C，培养至每毫升发酵液中SwW&cfeWwm mc^e/Z朋n' SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4和穿孔假单胞菌DX3的菌数分别为 2~6xl010yh、 0.5~2.5><1010个、0.5 2.5乂1010个；三、将5rev/Z^"en.wm mc6 〃"eW SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4和穿孔假单胞菌DX3的发酵液按照体积比为1: h l的比例均匀混合，即制成微生物复合菌剂。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
四不同的是步骤一中固体培 养基按照重量份数比10 30份的琼脂、1 4份的Na2HP04、 1~4份的KH2P04、 0.005 0.015份的MgS04'7H20、 0.005~0.015份的CaCl2'2H20、 4 6份的NH4C1 和950 1000份水组成，其中固体培养基的pH值为6.5 7.2。其它步骤及参数 与具体实施方式
四相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
四或五不同的是步骤二中液 体培养基按照重量份数比1 4份Na2HP04、 1 4份的KH2P04、 0.005~0.015份 的MgS(V7H20、 0.005~0.015份的CaCl2.2H20、 4~6份的NH4C1和950~1000 份水组成，其中液体培养基的pH值为6.5 7.2。其它步骤及参数与具体实施方 式四或五相同。
具体实施方式
七本实施方式微生物复合菌剂用于水温低于l(TC的微污 染水的处理。
本实施方式微生物复合菌剂对微污染水中氨氮的去除率可达到90%以上。
具体实施方式
八本实施方式微生物复合菌剂是由S"v沾ac^/wm mc6w//"eW SRA13、恶臭假单胞菌(i^e^fomo"os pw^/a) WXZ-4、穿孔假单 胞菌(i^ew^wo"os;^WMc/"o取"a) DX3和液体培养基制成；每毫升微生物复 合菌剂中5^v/6ac^7'wm附c6 〃"en' SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4与穿孔假 单胞菌DX3的细菌总数比为3: 1: 1;其中，5^W6"cfen'ww mc6 〃恥W SRA13 属于短杆菌属—^^//"^/)，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.2890，保藏日期为2009年1月19日。
本实施方式液体培养基按照重量份数比由2份Na2HP04、 2份的KH2P04、 l份的MgS(V7H20、 0.01份的CaCl2'2H20、 5份的NH4C1和980份水组成， 其中液体培养基的pH值为6.5 7.2。
本实施方式微生物复合菌剂用于水温低于l(TC的微污染水的处理，对微 污染水中氨氮的去除率为95%。
具体实施方式
九实施方式微生物复合菌剂的制备方法按照以下步骤进 斗亍■ 、 5rev/6acfen.M附wc6re〃"en' SRA13、恶臭假单胞菌(i^ewc/cw20"os1 /7W/z'd") WXZ-4和穿孔假单胞菌(Ae^oww7m peWwc/"oge"a) DX3分别接种于固体 培养基中，在30。C活化12h; 二、活化后的^^W6acfen'M柳mc6w〃"en'SRA13、 恶臭假单胞菌WXZ-4和穿孔假单胞菌DX3分别接种于液体培养基中进行发酵 培养，温度为31°C，培养至每毫升发酵液中^eWk cfeWww mc6m〃"en' SRA13、 恶臭假单胞菌WXZ-4和穿孔假单胞菌DX3的菌数分别为5xl(T个、2xlOIG 个、2xl0"个；三、将5wW&cten'wm mcZ^〃"en' SRA13、恶臭假单胞菌WXZ陽4
和穿孔假单胞菌DX3的发酵液按照体积比为1: 1: l的比例均匀混合，即制 成微生物复合菌剂。
本实施方式固体培养基按照重量份数比由20份的琼脂、2份的Na2HP04、 2份的KH2P04、 0.01份的MgS04'7H20、 0.01份的CaCl2'2H20、 5份的NH4Cl 和980份水组成，其中固体培养基的pH值为6.5~7.2。
本实施方式液体培养基按照重量份数比由2份Na2HP04、 2份的KH2P04、 0.01份的MgSO(7H20、 0.01份的CaCl2'2H20、 5份的NH4C1和980份水组成， 其中液体培养基的pH值为6.5~7.2。
本实施方式微生物复合菌剂用于水温低于IO'C的微污染水的处理，对微 污染水中氨氮的去除率为98%。
具体实施方式
十本实施方式微生物复合菌剂是由5^v/^c^/i/m mc^e〃wen' SRA13、恶臭假单胞菌(i^ewdowo"os p^Wa) WXZ-4、穿孔假单 胞菌(/^i^omowaspem/c&ogera) DX3和液体培养基制成；每毫升微生物复 合菌剂中^ev/kzcfen'wm mc^e〃"m' SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4与穿孔假 单胞菌DX3的细菌总数比为3.2: 1.5: 1.5;其中，5wW^cten'ww wc6m〃"en'SRA13属于短杆菌属(附^^//"^/)，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.2890，保藏日期为2009年1月19 曰。
本实施方式微生物复合菌剂的制备方法按照以下步骤进行微生物复合菌 剂的制备方法按照以下步骤进行 一、份ev/k^m'M附mcZ^/Z"m' SRA13、恶 臭假单胞菌(Aew^wtwas pWzV/a) WXZ-4和穿孔假单胞菌(Aewcfomomw ; w似d朋取m) DX3分别接种于固体培养基中，在3(TC活化12h; 二、活化后 的Bwv/^c^7^w wc6w//"e〃' SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4和穿孔假单胞菌 DX3分别接种于液体培养基中进行发酵培养，温度为3(TC，培养至每毫升发 酵液中丑reW&cte〃'M附wcZ^Z/"en' SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4和穿孔假单 胞菌DX3的菌数分别为3.2xl(T个、1.5><101()个、1.5><1010个;三、将 份evAacfehMm mcZ^〃wm' SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4和穿孔假单胞菌DX3 的发酵液按照体积比为l: 1: l的比例均匀混合，即制成微生物复合菌剂。
本实施方式微生物复合菌剂用于水温低于l(TC的微污染水的处理，对微 污染水中氨氮的去除率为96%。
权利要求
1、一种微生物复合菌剂，其特征在于微生物复合菌剂是由Brevibacteriummcbrellneri SRA13、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)WXZ-4、穿孔假单胞菌(Pseudomonas pertucinogena)DX3和液体培养基制成；每毫升微生物复合菌剂中Brevibacterium mcbrellneri SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4与穿孔假单胞菌DX3的细菌总数比为2～6∶0.5～2.5∶0.5～2.5；其中，Brevibacteriummcbrellneri SRA13属于短杆菌属(mcbrellneri)，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.2890，保藏日期为2009年1月19日。
2、 根据权利要求1所述的一种微生物复合菌剂，其特征在于Bm^"c/m'謹 wcZ^^m' SRA13为革兰氏阴性好氧菌，为短杆状，宽为0.4 u m 0.9 y m， 长为0.7um 1.0um，常成对或成簇存在，无芽孢和鞭毛，进行抽搐运动； 在牛肉膏蛋白胨培养基上形成黄色菌落，菌落圆形，菌落表面隆起，光滑。
3、 根据权利要求1所述的一种微生物复合菌剂，其特征在于液体培养基 按照重量份数比由1 4份Na2HP04、 1~4份的KH2P04、 0.005~0.015份的 MgS04'7H20、 0,005~0.015份的CaCl2-2H20、 4 6份的NH4Ci和950 1000份 水组成，其中液体培养基的pH值为6.5~7.2。
4、 如权利要求1所述的一种微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于微 生物复合菌剂的制备方法按照以下步骤进行一、B v/6"cfeWwm wc&e〃wen' SRA13、恶臭假单胞菌(Ae^fomomw WXZ-4和穿孔假单胞菌(尸"w^ wo"oypeWwc/w ge"a) DX3分别接种于固体培养基中，在28 32。C活 化8~16h; 二、活化后的Bwvz'kzcfeWwm mcZ^〃wen' SRA13、恶臭假单胞菌 WXZ-4和穿孔假单胞菌DX3分别接种于液体培养基中进行发酵培养，温度为 28~32°C，培养至每毫升发酵液中5rev/^cfen'Mwmc^^/恥WSRA13、恶臭假单 胞菌WXZ-4和穿孔假单胞菌DX3的菌数分别为2~6><101()个、0.5~2.5><101()个、 0.5 2.5xl(T个；三、将BrcWZ^cfen'wm附c^e〃"^v' SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4 和穿孔假单胞菌DX3的发酵液按照体积比为1: 1: l的比例均匀混合，即制 成微生物复合菌剂。
5、 根据权利要求4所述的一种微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于步骤一中固体培养基按照重量份数比由10 30份的琼脂、1 4份的Na2HP04、 1~4份的KH2P04、 0.005 0.015份的MgS04.7H20 、 0.005~0.015份的 CaCl2*2H20、 4~6份的NH4C1和950~1000份水组成，其中固体培养基的pH 值为6.5~7.2。
6、 根据权利要求4或5所述的一种微生物复合菌剂的制备方法，其特征 在于步骤二中液体培养基按照重量份数比由1 4份Na2HP04、 1~4份的 KH2P04、 0.005~0.015份的MgS04'7H20、 0.005 0.015份的CaCl2'2H20、 4~6 份的NH4C1和950 1000份水组成，其中液体培养基的pH值为6.5 7.2。
7、 权利要求1所述的微生物复合菌剂的用途，其特征在于微生物复合菌 剂用于水温低于10 °C的微污染水源水中氨氮的处理。
全文摘要
一种微生物复合菌剂和微生物复合菌剂的制备及用途，本发明涉及一种微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及用途。本发明解决了现有的生物法对于水温低于10℃的微污染水源水中氨氮的处理效果差以及现有的生物法处理水温低于10℃的微污染水源水中氨氮时容易出现硝酸盐、亚硝酸盐积累影响出水水质的问题。复合菌剂是由Brevibacterium mcbrellneri SRA13、恶臭假单胞菌WXZ-4、穿孔假单胞菌DX3和液体培养基制成；制作SRA13、恶臭假单胞菌和穿孔假单胞菌均经过活化、发酵，再将三种发酵液等比例混合。本发明的菌剂对水温低于10℃的微污染水氨氮处理效果好，无硝酸盐和亚硝酸盐积累而影响出水的水质。
文档编号C12N1/20GK101538544SQ20091007159
公开日2009年9月23日 申请日期2009年3月20日 优先权日2009年3月20日
发明者水 刘, 张多英, 李伟光, 王广智, 郜玉楠 申请人:哈尔滨工业大学