专利名称：用壳聚糖去除乳清浓缩蛋白中β-乳球蛋白及回收β-乳球蛋白的方法
技术领域：
本发明涉及乳品加工领域，特别涉及对牛乳中主要过敏原e -乳球蛋白的去除及回收的 方法。
背景技术：
e-乳球蛋白(e-Lg)为牛乳中的主要过敏原，能引发婴儿的过敏反应。目前应用盐析 、选择性沉淀、色谱技术和膜技术对e-Lg进行提取、纯化以及去除。但是制备色谱柱价格
昂贵， 一般为10000元 50000元，而且这些方法选择性差，在去除e-Lg的同时也去除了大
部分的其他蛋白，采用纯化的方法所得乳清浓縮蛋白中e -14 含量为纯化前的15% 46. 7%， a-乳球蛋白(a-Lg)含量为纯化前的20% 40%，纯化法对P-Lg的去除率低。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了解决现有方法成本较高、选择性差、对e-Lg的去除
率低的问题，提供了一种用壳聚糖去除、回收乳清浓縮蛋白中e-乳球蛋白的方法。 本发明用壳聚糖去除乳清浓縮蛋白中e-乳球蛋白的方法如下 一、将wpc so溶于超纯
水中，得到浓度为0.01g/mL的WPC 80超纯水溶液，然后将浓度为IO. Omg mL—^勺壳聚糖溶液 与WPC 80超纯水溶液混合，得到壳聚糖浓度为2.0mg *mL—^勺混合溶液；二、用浓度为lmol L—^勺NaOH溶液调节混合溶液的pH值为6. 7，然后静置10min，再以5000转/分钟的转速离心 15 min，得到复合沉淀和上清液；三、将上清液用截留分子量为8kDa 10kDa的透析袋透析 过夜，然后在真空度为0.05Pa的条件下冻干12h，得到低含量e-乳球蛋白的乳清粉，即完成
用壳聚糖去除乳清浓縮蛋白中的e -乳球蛋白。
本发明回收e-乳球蛋白的方法如下 一、将浓縮型乳清蛋白wpc 8o溶于超纯水中，得
到浓度为0.01g/mL的WPC 80超纯水溶液，然后将浓度为IO. Omg mL—^勺壳聚糖溶液与WPC80 超纯水溶液混合，得到壳聚糖浓度为2.0mg *mL—^勺混合溶液；二、用浓度为lmol L—1的 NaOH溶液调节混合溶液的pH值为6. 7，然后静置10min，再以5000转/分钟的转速离心15min， 得到复合沉淀和上清液；三、将步骤二所得复合沉淀与浓度为O. 1 mol *L—^勺乙酸溶液按照 1 : 15的体积比混合，然后用浓度为lmol L—^勺NaOH溶液调节pH值为9. 0，再磁力搅拌l分 钟，得到混合液；四、在2(TC的条件下以10000转/分钟的转速离心混合液20 min，然后将离心后的上清液用截留分子量为8kDa 10kDa的透析袋透析过夜，再在真空度为O. 05Pa的条件
下冻干i2 h，即得含有e-乳球蛋白的乳清粉。
本发明方法对|3-乳球蛋白的去除率为94.23%，同时a-La的保留率为78.68。/。，牛血清白 蛋白(BSA)的保留率为35.41%，本发明方法操作简单，所用壳聚糖价格为8元/g，成本较低 ，适合大规模生产；采用本发明方法对e-Lg的回收率为87.23。/。，壳聚糖的回收率可96. 50%
具体实施例方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间的任意组合。
具体实施方式
一本实施方式中用壳聚糖去除乳清浓縮蛋白中e-乳球蛋白的方法如下
: 一、将WPC 80溶于超纯水中，得到浓度为0.01g/mL的WPC 80超纯水溶液，然后将浓度为 10. Omg mL—^勺壳聚糖溶液与WPC 80超纯水溶液混合，得到壳聚糖浓度为2. Omg mL—^勺混合 溶液；二、用浓度为lmol *L—^勺NaOH溶液调节混合溶液的pH值为6. 7，然后静置IO min，再 以5000转/分钟的转速离心15min，得到复合沉淀和上清液；三、将上清液用截留分子量为 8kDa 10kDa的透析袋透析过夜，然后在真空度为O. 05Pa的条件下冻干12h，得到低含量P-
乳球蛋白的乳清粉，即完成用壳聚糖去除乳清浓縮蛋白中的e -乳球蛋白。
本实施方式中对6-乳球蛋白的去除率为94.23%，同时a-La的保留率为78.68。/。，牛血清 白蛋白(BSA)的保留率为35.41%。
具体实施方式
二本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤三中所述透析袋的截留分 子量为8. 5kDa 9. 5kDa。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤三中所述透析袋的截留分 子量为9kDa。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四本实施方式中回收e-乳球蛋白的方法如下 一、将浓縮型乳清蛋白 WPC 80溶于超纯水中，得到浓度为0.01g/mL的WPC 80超纯水溶液，然后将浓度为IO. Omg mL—^勺壳聚糖溶液与WPC 80超纯水溶液混合，得到壳聚糖浓度为2.0mg *mL—^勺混合溶液；二 、用浓度为lmol *L—^勺NaOH溶液调节混合溶液的pH值为6. 7，然后静置10min，再以5000转 /分钟的转速离心15min，得到复合沉淀和上清液；三、将步骤二所得复合沉淀与浓度为 0. lmol L—^勺乙酸溶液按照1 : 15的体积比混合，然后用浓度为lmol L—1的NaOH溶液调节 pH值为9.0，再磁力搅拌l分钟，得到混合液；四、在2(TC的条件下以10000转/分钟的转速离 心混合液20min，然后将离心后的上清液用截留分子量为8kDa 10kDa的透析袋透析过夜，再在真空度为0.05Pa的条件下冻干12 h，即得含有e-乳球蛋白的乳清粉。
本实施方式中将步骤四中离心后的沉淀在真空度为0.05Pa的条件下冻干12 h，得到回收 的壳聚糖。
本实施方式中对6-乳球蛋白的回收率为87.23%，壳聚糖的回收率可达96. 50%。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
四不同的是步骤四中所述透析袋的截留分
子量为8. 5kDa 9. 5kDa。其它与具体实施方式
四相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
四不同的是步骤四中所述透析袋的截留分
子量为9kDa。其它与具体实施方式
四相同。
权利要求
1.用壳聚糖去除乳清浓缩蛋白中β-乳球蛋白的方法，其特征在于用壳聚糖去除乳清浓缩蛋白中β-乳球蛋白的方法如下一、将浓缩型乳清蛋白WPC 80溶于超纯水中，得到浓度为0.01g/mL的WPC 80超纯水溶液，然后将浓度为10.0mg·mL-1的壳聚糖溶液与WPC 80超纯水溶液混合，得到壳聚糖浓度为2.0mg·mL-1的混合溶液；二、用浓度为1mol·L-1的NaOH溶液调节混合溶液的pH值为6.7，然后静置10min，再以5000转/分钟的转速离心15min，得到复合沉淀和上清液；三、将上清液用截留分子量为8kDa～10kDa的透析袋透析过夜，然后在真空度为0.05Pa的条件下冻干12h，得到低含量β-乳球蛋白的乳清粉，即完成用壳聚糖去除乳清浓缩蛋白中的β-乳球蛋白。
2.根据权利要求i所述的用壳聚糖去除乳清浓縮蛋白中e-乳球蛋白的方法，其特征在于步骤三中所述透析袋的截留分子量为8. 5kDa 9. 5kDa。
3.根据权利要求i所述的用壳聚糖去除乳清浓縮蛋白中e-乳球蛋白的方法，其特征在于步骤三中所述透析袋的截留分子量为9kDa。
4.回收e-乳球蛋白的方法，其特征在于回收e-乳球蛋白的方法如下 一、将浓縮型乳清蛋白WPC 80溶于超纯水中，得到浓度为0.01g/mL的WPC 80超纯水溶液 ，然后将浓度为10.0mg'mL-l的壳聚糖溶液与WPC 80超纯水溶液混合，得到壳聚糖浓度为 2.0mg .mL-l的混合溶液；二、用浓度为lmol L-l的NaOH溶液调节混合溶液的pH值为6. 7， 然后静置IO min，再以5000转/分钟的转速离心15min，得到复合沉淀和上清液；三、将步骤 二所得复合沉淀与浓度为O. lmol 'L-1的乙酸溶液按照1 : 15的体积比混合，然后用浓度为l mol'L-l的NaOH溶液调节pH值为9.0，再磁力搅拌l分钟，得到混合液；四、在20。C的条件 下以10000转/分钟的转速离心混合液20 min，然后将离心后的上清液用截留分子量为8kDa lOkDa的透析袋透析过夜，再在真空度为0.05Pa的条件下冻干12 h，即得含有!3-乳球蛋白的 乳清粉。
5.根据权利要求4所述的回收e-乳球蛋白的方法，其特征在于步骤四中所述透析袋的截留分子量为8. 5kDa 9. 5kDa。
6.根据权利要求4所述的回收e-乳球蛋白的方法，其特征在于步骤四中所述透析袋的截留分子量为9kDa。
全文摘要
用壳聚糖去除乳清浓缩蛋白中β-乳球蛋白及回收β-乳球蛋白的方法，它涉及乳品加工领域，特别涉及对β-乳球蛋白的去除及回收的方法。本发明解决了现有方法成本较高、选择性差、对β-Lg的去除率低的问题。本发明方法如下用NaOH溶液调节壳聚糖浓度为2.0mg·mL<sup>-1</sup>混合溶液的pH6.7，然后静置、离心，再将上清液透析过夜后冻干，即去除乳清浓缩蛋白中的β-乳球蛋白；将离心所得的复合沉淀与乙酸溶液混合后用NaOH溶液调节pH，磁力搅拌、离心，将离心后的上清液透析过夜、冻干，即得含有β-乳球蛋白的乳清粉。本发明方法对β-乳球蛋白的去除率为94.23％，对β-Lg的回收率为87.23％。
文档编号A23J3/08GK101637217SQ20091030585
公开日2010年2月3日 申请日期2009年8月20日 优先权日2009年8月20日
发明者宁 刘, 鹏 刘, 微 张, 李丹丹 申请人:黑龙江省乳品工业技术开发中心