番石榴焦腐病菌产孢培养基的制作方法

文档序号:583895阅读:340来源:国知局
专利名称:番石榴焦腐病菌产孢培养基的制作方法
技术领域
本发明涉及一种植物病菌真菌产孢培养基,特别是番石槽焦腐病菌(^Z^o^riisMH) 的产孢培养基。
背景技术
番石榴焦腐病菌(彻)属于半知菌亚门腔孢纲真菌,番石榴 果实病害(特别是真菌性病害)是影响番石榴生长及果实货架期的主要原因,而且焦腐病是 番石榴生长及果实货架期最主要病害之 一。焦腐病菌以田间枝条等病残组织为初侵染源, 以菌丝体和分生孢子的形式越冬。翌年春产生子囊孢子和分生孢子借风雨溅到果实上在萼 片与果皮之间潜伏;或在托盘的坏死组织上腐生。因此研究番石榴焦腐病菌的分生孢子对 明确番石榴焦腐病菌的生活史或发病规律具有重大的作用,为科学制定控制番石榴焦腐病 菌采前潜伏侵染和采后病害的技术措施提供理论依据。但是目前国内外尚无关于番石榴 焦腐病菌产孢培养基研究的报道,真菌通用的培养基不能很好的满足该菌生长发育产生孢 子,这极大地限制了对番石榴焦腐病菌以及病害发生规律的进一步深入研究。技术内容
本发明目的在于提供一种番石榴焦腐病菌产孢培养基,综合利用碳源、氮源和维生素 配制成适合于番石榴焦腐病菌产孢的培养基。本发明的番石榴焦腐病菌产孢培养基,由燕麦、葡萄糖、酸水解酪蛋白和番石榴果 汁组成,各原料及其含量的关系如下
原料原料重量比(%)
燕麦2. 0 5. 0
葡萄糖2. 0 4. 0
酸水解酪蛋白1.0 2.0
琼脂1. 5 1. 8
番石榴果汁93. 5 87. 2,
以上各原料组成的重量百分比之和为100%。上述原料中除番石榴果汁外各原料均为干燥化合物,纯度为分析纯。 按上述培养基配方混合溶解后121°C高压灭菌20分钟即可使用。本发明的显著优点
本发明各物质性能稳定,分别以葡萄糖为碳源,以酸水解酪蛋白为氮源,提供了该菌产 孢所需要的碳元素和氮元素;加入的生长因子一燕麦中的维生素则是调节微生物正常代谢 所必需的;满足了该菌的营养需要。本发明的番石榴焦腐病菌产孢培养基,培养7天产孢量 4X103个孢子/25毫升培养基。


图1为在番石榴焦腐病菌产孢培养基上的产孢; 图2为番石榴焦腐病菌分生孢子器(X 200);
图3为番石榴焦腐病菌分生孢子(X 500); 图4为龙眼焦腐病菌分生孢子形态(X 500);图5为在肉桂枝枯病菌产孢培养基上的产孢; 图6为在香蕉黑腐病菌产孢培养基上的产孢。
具体实施例番石榴采后贮藏期真菌性病害主要是由于番石榴焦腐病菌 \Bo tryosphaeriarhodina (Cke. ) Arx]等少数病原真菌的潜伏侵染造成的。该病原菌还 可在红毛丹(Sivakumaretal,2002)、芒果(罗远婵等,2004)、香蕉(刘秀娟等,1998)、荔枝 (Deirdreetal, 1996)、番木瓜(刘秀娟等,1994)、柑桔(罗永兰等,1997)等多种热带和亚热 带水果上侵染造成采后损失。也危害凤梨(曾莉等,2004)、龙舌兰(习平根等,2005)、肉桂 (岑炳沾等,1994)、瓜栗(习平根等,2000)、香龙血树(习平根等,2002)和楹树(叶新峰等, 2004)等一些热带和亚热带经济作物。为了更充分地公开本发明的一种番石榴焦腐病菌培 养基,下面结合实例加以说明。以下为本发明的优选实施例,进一步描述本发明,但是本发 明不仅限于此。实施例1 一种番石榴焦腐病菌产孢培养基,各原料及其含量的关系如下
原料原料重量比百分率(%)
燕麦5.0
葡萄糖2. 5
酸水解酪蛋白1.0
琼脂1.6
番石榴果汁89. 9,
按上述培养基配方混合溶解后121°C高压灭菌20分钟即可使用。具体培养方法如下
将储存在4°c冰箱的番石榴焦腐病菌(2008 - 2009年从福建番石榴产区福清、琅歧等 地采收的番石榴果实中分离病原菌,经纯化后观察其形态特征,并用马铃薯琼脂(PDA)培养 所得的分生孢子接种在采收后的无病虫害番石榴果实上,观察发病症状。镜检分离的病原 菌。经柯氏法则验证,同时将我们测得的召Wfxs^aeriarAoi/iaaDNA-II^序列(GenBank登 录号为⑶323603. 1)进行比对,同源性为99%,从柯氏法则和分子验证方法,将番石榴焦腐 病的病原菌鉴定为Botiyospheierieirhodinam银,转接CM固体培养基(CM培养基配制酵 母粉6g ;酸水解酪蛋白6g ;蔗糖IOg ;琼脂18g)中进行活化。再将活化好的番石榴焦腐病菌 用直径为5mm打孔器打成菌饼,将菌饼接到产孢培养基中,处理3个重复,置28°C下光照培 养7d后,观察产孢培养基上番石榴焦腐病菌的子座数目,水洗研磨子座计算产孢量,培养7天产孢量4X IO3个孢子/25毫升培养基。如图1、2、3所示。实施例2 —种肉桂枝枯病菌产孢培养基,各原料及其含量的关系如下
原料原料重量比百分率(%)
燕麦2.0
葡萄糖2. 5
酸水解酪蛋白1.0
琼脂1.6
番石榴果汁92. 9
按上述培养基配方混合溶解后121°C高压灭菌20分钟即可使用。具体培养方法如下
将储存在4°C冰箱的肉桂枝枯病菌(薛振南等,2003)取出,转接CM固体培养基(CM培 养基配制酵母粉6g ;酸水解酪蛋白6g ;蔗糖IOg ;琼脂18g)中进行活化。再将活化好的 肉桂枝枯病菌用直径为5mm打孔器打成菌饼,将菌饼接到产孢培养基中,处理3个重复,置 28°C下光照培养7d后,观察产孢培养基上肉桂枝枯病菌的子座数目,水洗研磨子座计算产 孢量,培养7天产孢量3. 25 X IO3个孢子/25毫升培养基,如图5所示。实施例3 —种龙眼焦腐病菌产孢培养基,各原料及其含量的关系如下
原料原料重量比百分率(%)
燕麦3.0
葡萄糖2. 5
酸水解酪蛋白1.0
琼脂1.6
番石榴果汁91. 9
按上述培养基配方混合溶解后121°C高压灭菌20分钟即可使用。具体培养方法如下
将储存在4°C冰箱的龙眼焦腐病菌(张居念等,2005)取出,转接CM固体培养基(CM培 养基配制酵母粉6g ;酸水解酪蛋白6g ;蔗糖IOg ;琼脂18g)中进行活化。再将活化好的 龙眼焦腐病菌用直径为5mm打孔器打成菌饼,将菌饼接到产孢培养基中,处理3个重复,置 28°C下光照培养7d后,观察产孢培养基上龙眼焦腐病菌的子座数目,水洗研磨子座计算产 孢量,培养7天产孢量3. 40 X IO3个孢子/25毫升培养基,如图4所示。实施例4 一种香蕉黑腐病菌产孢培养基,各原料及其含量的关系如下
原料原料重量比百分率(%)
燕麦5.0
葡萄糖2. 5
酸水解酪蛋白1.5
琼脂1.6
番石榴果汁89. 4
按上述培养基配方混合溶解后121°C高压灭菌20分钟即可使用。具体培养方法如下
将储存在4°C冰箱的香蕉黑腐病菌(郭立佳等,2007)取出,转接CM固体培养基(CM培养基配制酵母粉6g ;酸水解酪蛋白6g ;蔗糖IOg ;琼脂18g)中进行活化。再将活化好的香蕉黑腐病菌用直径为5mm打孔器打成菌饼,将菌饼接到产孢培养基中,处理3个重复,置 28°C下光照培养7d后,观察产孢培养基上香蕉黑腐病菌的子座数目,水洗研磨子座计算产 孢量,培养7天产孢量3. 65 X IO3个孢子/25毫升培养基,如图6所示。
权利要求
一种番石榴焦腐病菌产孢培养基,其特征在于由燕麦、葡萄糖、酸水解酪蛋白和番石榴果汁组成,各种原料及其含量的关系如下原料 原料重量比(%) 燕麦 2.0~5.0 葡萄糖 2.0~4.0酸水解酪蛋白 1.0~2.0 琼脂 1.5~1.8 番石榴果汁 93.5~87.2,以上各原料组成的重量百分比之和为100%。
2.根据权利要求1所述的一种番石榴焦腐病菌产孢培养基,其特征在于由燕麦、葡萄 糖、酸水解酪蛋白和番石榴果汁组成,各原料及其含量的关系如下原料原料重量比(%)燕麦5.0葡萄糖2. 5酸水解酪蛋白1.0琼脂1.6番石榴果汁89.9。
全文摘要
一种番石榴焦腐病菌产孢培养基,由燕麦、葡萄糖、酸水解酪蛋白和番石榴果汁组成。分别以葡萄糖为碳源,以酸水解酪蛋白为氮源,提供了该菌产孢所需要的碳元素和氮元素;加入的生长因子—燕麦中的维生素则是调节微生物正常代谢所必需的;满足了该菌的营养需要。本发明的番石榴焦腐病菌产孢培养基,培养7天产孢量4×103个孢子/25毫升培养基。
文档编号C12N1/14GK101818120SQ201010190788
公开日2010年9月1日 申请日期2010年6月3日 优先权日2010年6月3日
发明者兰成忠, 李本金, 翁启勇, 陈庆河, 高新明 申请人:福建省农业科学院植物保护研究所
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