专利名称：捕光叶绿素a/b结合蛋白基因及其在提高植物产量和种子含油量中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于植物基因工程领域，具体地说，本发明涉及到一种植物捕光叶绿素a/b 蛋白复合体(chlorophyllaAbindingprotein，CAB)基因BnCAB及其在提高植物产量和种子含油量中的应用。
背景技术：
油料作物是以榨取油脂为主要用途的一类作物，食用植物油是人们的生活必需品，除了对人类具有重要的营养价值外，植物油脂还是重要的化工原料，广泛用于食品、纺织、机械、冶炼、油漆、橡胶、塑料及医药等行业，特别是全球能源日趋紧张，利用植物油生产可再生能源已成为世界各国应对能源危机的重要战略选择，植物油脂在国民经济中占有越来越重要的地位。单位面积油脂产出量是决定油料作物生产效益的重要因素，因而提高单位面积油脂产出量的两个组成要素——含油量与单产，是油料作物育种始终追求的目标， (李云昌等，中国油料作物学报。28 :92-96,2006).光合作用是指绿色植物通过叶绿体，利用光能，将二氧化碳和水转化为碳水化合物并放出氧气的过程，是作物产量形成的基础。提高作物的光合效率一直以来都是作物研究关注的热点。种子是多数植物得以繁衍的起始材料，也是作物产量构成的重要器官；种子的发育过程也正是作物产量形成的关键时期。拟南芥、油菜、大豆等是含脂肪和蛋白质较高的作物，其生育期间须获得较多的能量，植物对光的利用效率会对作物产量产生很大影响可被认为是公知知识。然而，光照对作物产量的贡献以前主要着重于叶片等光合器官，近年来有关拟南芥、油菜、大豆等“绿色种子”对光能的吸收利用及其影响油脂等贮藏物质积累的作用机制研究的报道才逐步增加。已有的研究表明，虽然有荚壳包被，到达种子的较低水平的光照仍能实质性地提高光合作用相关酶的活性、增加脂肪酸合成量(WillmsJRetal.， PlantPhysiology, 120 :1117-1127,1999 ；Ruuska, SA.etal.PlantPhysiology, 136 2700-2709，2004)ο Goffmant 等(GoffmantFDetal. PlantPhysiology,138 :2269-2279, 2005)发现，光照不仅可促进油菜种子光合产物转化成贮藏物质的合成代谢效率，同时也提高了胚的生长速度。光合作用对胚胎发育的作用，主要在C02固定和能量供应水平(Ruuskaetal.，PlantPhysiol. 136，2700-2709· 2004 ；Schwenderetal.，Nature. 432， 779-782. 2004).这些研究结果都显示，光能利用对油菜、大豆等油料作物种子油脂等贮藏物质积累、产量形成具有重要作用。虽然植物光合作用、油脂合成的研究一直备受关注，但通过特异的提高植物种子光能利用效率来提高种子产量和/或含油量仍未见报道。因此，本领域迫切需要寻找到一些可以有效提高植物种子光合作用效率从而提高产量和含油量的技术方法
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种植物捕光叶绿素a/b结合蛋白；本发明的第二个目的是提供编码上述结合蛋白的基因；本发明的第三个目的是提供编码上述结合蛋白的基因的制备方法；本发明的第四个目的是提供上述的基因在提高植物产量和种子含油量中的应用；本发明的第五个目的是提供含有上述基因的表达载体、细胞系、宿主菌以及扩增该基因中任一片段的引物。本发明的第六个目的是提供含有上述基因的表达载体的一种构建方法。为了实现上述的第一个目的，本发明采用了以下的技术方案一种植物捕光叶绿素a/b结合蛋白，来源于芸薹属甘蓝型油菜(Brassicanapus)， 该结合蛋白是下述多肽之一(1)具有SEQIDN0 2所示的氨基酸序列的多肽；(2)将SEQIDN0 2所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有(1)所述多肽的功能的多肽或由其他物种的同源序列生成的氨基酸序列或衍生物。为了实现上述的第二个目的，本发明采用了以下的技术方案编码上述的结合蛋白的基因，该基因的cDNA和基因组基因是下述核苷酸序列之(1)序列表中SEQIDN0 1所示的核苷酸序列；(2)编码序列表中SEQIDN0 2的核苷酸序列；(3)与序列表中SEQIDN0 1限定的核苷酸序列具有90%以上同源性的核苷酸序列；(4)在高严谨条件下可与序列表中SEQIDN0 1限定的DNA序列杂交的核苷酸序列，所述高严谨条件为在0. IXSSPE或0. 1XSSC、0. 1% SDS的溶液中，65°C条件下杂交并洗膜。为了实现上述的第三个目的，本发明采用了以下的技术方案编码上述的结合蛋白的基因的制备方法，该方法包括以下的步骤①用Trizol试剂提取甘蓝型油菜未成熟种子的总RNA，以oligo-d(T) 18为引物， 用M-MLV反转录酶将获得的RNA反转录为cDNA，以所合成的cDNA为模板，用LA-Taq进行 PCR 扩增，所用弓丨物对为 5，-ATGGCCGCCTCAACAATGGC-3，、5，-TCACTTTCCGGGAACGAAGT-3，，获得了约SOObp的扩增片段；②PCR扩增产物连接到载体pMDIS-T，得到含有扩增片段的重组质粒，命名为 pMD-CAB，经测序，获得的PCR产物序列如SEQIDN0 1所示。或者，上述的方法包括以下的步骤①取甘蓝型油菜(Brassicanapus)叶片，加入700μ 1的2% CTAB，将叶片磨碎， 60-65°C加热lhr，加入等体积M 1氯仿-异戊醇，混合均勻；②12000rpm，4°C离心10分钟；取上清，加等体积异丙醇或二倍体积乙醇，入加 1/10 体积 3MNaAc ；③12000rpm，4°C离心10分钟，吸去上清，沉淀用70% -75%乙醇洗2次，室温干燥，加入50 μ 1超纯水中；④以此油菜基因组DNA为模板，用引物对进行PCR扩增，所用引物对为5，-ATGGCCGCCTCAACAATGGC-3，、5，-TCACTTTCCGGGAACGAAGT-3，，经测序证明扩增产物为 BnCAB基因组DNA，其序列与SEQIDN0 1所示序列相同。为了实现上述的第四个目的，本发明采用了以下的技术方案上述的基因在提高植物产量和种子含油量中的应用为了实现上述的第五个目的，本发明采用了以下的技术方案含有所述基因的表达载体。作为优选，该种子特异表达启动子可为napin启动子、大豆β-伴球蛋白α -亚基基因启动子、oleosin基因启动子或FAEl基因启动子。为了便于对转基因植物细胞或植株进行鉴定及筛选，可对所使用的植物表达载体进行加工，如加入植物可选择性标记或对抗生素、除草剂的抗性标记。被转化的植物宿主可以是双子叶植物，也可以是单子叶植物。含有本发明基因的表达载体、细胞系、宿主菌均属于本发明的保护范围。扩增本发明基因中任一片段的引物对也在本发明的保护范围之内。为了实现上述的第六个目的，本发明采用了以下的技术方案一种含有上述基因的表达载体的构建方法，该方法包括以下的步骤①首先以油菜基因组DNA为模板，用引物对5，-AAGCTTTCTTCATCGGTGATTGA-3，和 5’ -TCGTGTATGTTTTTAATCTTGTTTG-3’进行PCR扩增，获得油菜napin启动子，用该启动子片段置换植物表达载体PTOC5941中酶切位点Ec0RI-BamHI间的35S启动子片段，获得中间载体 pFGC-NAPIN ；②采用引物5，-CACATCTAGACCCATCTCTTGGCTCAT-3，和 5，-CACATCTAGATACACTCGCA CAAGAAGCAA-3，用PufTaq从pMD18_T/BnCAB扩增后PCR产物用)(bal酶切后与经)(bal酶切的preC-NAPIN载体连接；③连接产物用CaC12法转化大肠杆菌DH5 α感受态细胞，用含50mg/ L卡那霉素的LB抗性平板筛选，阳性克隆用引物对5 ’ -GATCGCCATGCAAATCTC-3 ’和 5，-TCACTTTCCGGGAACGAAGT-3，进行 PCR 扩增；④挑取PCR阳性的克隆，用碱裂解法提取质粒DNA进行酶切鉴定，选取酶切正确的克隆进行测序验证，构建成种子特异表达载体NAPINPr: :BnCAB。本发明由于采用了上述的技术方案，提供一种提高植物产量和种子含油量的基因工程方法，即在种子特异表达启动子的驱动下，利用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的载体，将绿色植物光合系统中的重要基因捕光叶绿素a/b结合蛋白基因&1CAB的正义顺序导入植物组织、细胞或器官，再将转化的植物组织、细胞或器官培育成植株，建立转基因植物株系，植物就表现为单粒种子重量和单株种子重量增加，种子含油量提高。另一方面，通过将转化有本发明编码捕光叶绿素a/b结合蛋白基因&1CAB或与 &1CAB具有90%以上同源性且编码相同蛋白的DNA序列的转基因植株与其他品种的植物进行杂交、并对获得的杂交后代植株进行培养和检测，可从中进一步筛选出单粒种子重量和单株种子重量增加，种子含油量提高的植株。本发明所提供的基因和方法，可广泛应用于植物产量和品质性状的改良。所述的植物选自(但不限于)十字花科、豆科、禾本科。所述的植物包括(但不限于)油菜、拟南芥、大豆、向日葵、棕榈树、橄榄树、花生、棉花、油桐、蓖麻、烟草、水稻、玉米，小麦、大麦、小油桐、油茶等。
图1 :BnCAB编码的蛋白质结构域包括典型的捕光叶绿素a/b结合蛋白功能域。图2 =BnCAB种子特异超表达载体NAPINPr: BnCAB结构示意。图3 拟南芥NAPINPr: :BnCABT3代转基因株系和ColO野生型未成熟种子foiCAB基因表达水平比较。C-4、C-33、C-80、C-1M、C-149为拟南芥独立转化株系.NAPIN Pr: BnCAB 拟南芥转化植株和Col O野生型对照在相同条件下培养。在进行基因表达水平的RT-PCR 分析时，以Actin2基因为内参。由于油菜&1CAB基因与拟南芥CAB具有高度同源性，用于扩增油菜&1CAB的引物也能扩增拟南芥CAB基因。图4 拟南芥NAPINPr: :BnCABT3代转基因株系和ColO野生型种子粒重比较。图5油菜NAPINPr: :BnCABT2代转化株系和非转化受体材料平均单株产量比较。图中所示为各株系3个小区单株产量的平均值及标准差，每小区12个单株。BnC-0Xl-BnC-0X5 为NAPIN Pr: BnCAB油菜转化株系。Control为未转化的受体品种。图6油菜NAPINPr BnCABT2代转化株系和非转化受体材料种子含油量比较。图中所示为各株系3个小区成熟种子含油量的平均值及标准差，每小区12个单株。 BnC-OXl-BnC-0X5为NAPIN Pr: BnCAB油菜转化株系。Control为未转化的受体品种。
具体实施例方式以下结合附图，对本发明的具体实施方式
进行详细说明。需要指出的是，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限定本发明的范围。下述实施例中如无特别说明均按常规条件或按照制造厂商所建议的条件。实施例1.植物捕光叶绿素a/b结合蛋白&1CAB基因的克隆1. 1用Trizol试剂(购自Invitrogen公司)提取甘蓝型油菜(Brassicanapus) 未成熟种子的总RNA，以0lig0-d(I%8为引物，用M-MLV反转录酶(Promega公司)将获得的 RNA反转录为cDNA，以所合成的cDNA为模板，用LA-Taq (大连TaKaRa公司)进行PCR扩增， 所用弓丨物对为 toCABF (5，-ATGGCCGCCTCAACAATGGC-3，)、BnCABR (5，-TCACTTTCCGGGAACGAAGT -3，)。获得了约SOObp的扩增片段。PCR扩增产物连接到载体pMDIS-T (大连TaKaRa公司)， 得到含有扩增片段的重组质粒，命名为pMD-CAB，经测序，获得的PCR产物序列如SEQIDN0 1 所示，由804个碱基组成，利用0RFFINDER对该序列进行分析，该cDNA片段从Ibp到804bp 含有一个开放阅读框(openreadingfram^ORF)和一个终止密码子，编码267个氨基酸(图 4)，我们将其命名为foiCAB。经过SMART和BLAST软件分析，BnCAB编码的氨基酸中第65-234 位包括典型的捕光叶绿素a/b结合蛋白功能域(chlorophllaAbindingdomain)(如图1所示)°1.2取甘蓝型油菜(Brassicanapus)叶片(指甲大)，加入700 μ 1的2% CTAB，将叶片磨碎，60-65°C加热lhr，加入等体积M 1氯仿-异戊醇，混合均勻。12000rpm，4°C离心10分钟；取上清，加等体积异丙醇(或二倍体积乙醇)，加入1/10体积3MNaAc。12000rpm， 4°C离心10分钟，吸去上清，沉淀用70% -75%乙醇洗2次，室温干燥，加入50 μ 1超纯水中。 以此油菜基因组DNA为模板，用引物对foiCABF+BnCABR进行PCR扩增，经测序证明扩增产物为foiCAB基因组DNA，其序列与SEQIDN0 1所示序列相同。实施例2. BnCAB种子特异表达载体NAPINPr BnCAB的构建2. 1首先以油菜基因组DNA为模板，用引物对napin5(5，-AAGCTTTCTTCATCGGTGAT TGA-3，)和 napin3(5，-TCGTGTATGTTTTTAATCTTGTTTG-3，)进行 PCR 扩增，获得油菜 napin 启动子(AF420598)，用该启动子片段置换植物表达载体PTOC5941中酶切位点Ec0RI-BamHI 间的35S启动子片段，获得中间载体preC-NAPIN。采用弓丨物BnCAB52 (5，-CACATCTAGACCCATCTCTTGGCTCAT-3，) +BnCAB32 (5，-CACATCT AGATACACTCGCACAAGAAGCAA-3，)用 PufTaq 从 pMD18_T/BnCAB 扩增后 PCR 产物用 Xbal 酶切后与经Xbal酶切的preC-NAPIN载体连接。2. 2连接产物用CaCl2法转化大肠杆菌(E. coli)DH5 α感受态细胞，用含50mg/L 卡那霉素的LB抗性平板筛选，阳性克隆用引物对napin52(5’ -GATCGCCATGCAAATCTC-3’ ) 和&iCABR(5，-TCACTTTCCGGGAACGAAGT-3，)进行PCR扩增。挑取PCR阳性的克隆，用碱裂解法(参见《分子克隆》)提取质粒DNA进行酶切鉴定，选取酶切正确的克隆进行测序验证， 构建成&1CAB种子特异表达载体NAPINPr: :BnCAB，载体结构如图2所示。实施例3. BnCAB种子特异超表达转基因拟南芥的获得3. 1将实施例2构建的种子特异表达载体NAPINPr: BnCAB用热激法转化农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens) EHA105，在含 50mg/L 卡那霉素和 25mg/L 利福平的 LB 抗性平板上进行培养。挑取单克隆用引物对napin52和foiCABR进行PCR验证后用于植物转化。挑取含质粒NAPINPr: BnCAB的农杆菌单菌落接种于5ml含50mg/L卡那霉素和 25mg/L利福平的YEP培养液，150rpm振荡培养2d。按1 50的比例在新鲜的YEP液体培养基中扩大培养至对数生长期(菌液0D600 1.幻。3000rmp离心lOmin，弃上清。将沉淀重新悬浮于渗透培养液，(组成为含5%蔗糖，44mM6-苄氨基嘌呤和0. 05% SilwetL-77 的 V2MS 液体培养基)，调 OD6tltl = 0. 8。用 Floraldip 法(CloimhSJetal，1998. Plant J16 735-43)进行转化，即将拟南芥(ArabidopsisthalianaCol-O)的花序全部在转化液中浸泡 l-2min,并轻轻摇晃，转化后的拟南芥植株保鲜膜覆盖保湿1 2天。隔4_5天后按上述方法重复转化，共转化3-4次。收获成熟种子(Tl代)。3. 2拟南芥抗性植株筛选。将实施例3. 1中收获的拟南芥Tl代种子播种于盆钵中，播种后7-10天，喷1 3000体积比稀释的有效浓度18. 5%的除草剂Bastar，每周2次， 喷3-4次。筛选出的抗性植株用引物对用引物对napin52+BnCABR进行PCR检测，分单株收获成熟种子(T2代)。上述独立转化单株继续按上述方法种植、PCR检测、收获成熟种子，形成NAPINPr: BnCAB转基因株系(T3代)。实施例4、RT-PCR检测NAPINPr BnCAB转基因拟南芥种子BnCAB表达水平4. 1将实施例3所获得的拟南芥T3代转化植株和哥伦比亚野生型(Col-O)的种子悬浮于0. 的琼脂溶液中，4°C春化2天后播种于土壤(蛭石、草炭和珍珠岩按体积比 6:2: 1混合)，在温度22°C、16小时光照/8小时黑暗光周期条件下培养。播种后7_10 天，喷1 3000体积比稀释的有效浓度18. 5%的除草剂Bastar进行抗性筛选。抗性植株用napin52+BnCABR进行PCR检测，PCR阳性植株用于基因表达分析。对主花序开花时期进行标记，取开花后7-12天的拟南芥荚果，按Cernac方法取禾中 (CernacAandBenningC. WRINKLEDlencodesanAP2/EREBdomainproteinin volvedinthecontrolofstoragecompoundbiosynthesisinArabidopsis. ThePlantJournal, 2004,40 =575-585.)，在液氮中研磨，按说明书所述方法用Trizol试剂(Invitrogen公司) 提取总RNA，经1. 0%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。以oligo-d(T) w为引物，用M-MLV 逆转录酶(Promega公司)合成cDNA第一链。4.2以实施例4.1中获得的cDNA为模板，用拟南芥Actin2基因为内参进行 RT-PCR，调整各cDNA样品浓度，Actin2基因扩增引物对为ACTF(5，-AGAGATTCAGATGCCCAGA AGTCTTGTTCC-3，) +ACTR (5，-AACGATTCCTCCACCTGCCTCATCATACTC-3，)。用 RT-PCR 方法比较拟南芥NAPINPr: BnCAB转化株系和野生型对照在种子贮藏物质快速积累时期拟南芥foiCAB 基因表达水平，所用引物对为foiCABF+BnCABR，结果如图3所示，NAPINPr: BnCAB转化植株未成熟种子的&1CAB基因表达水平较ColO野生型明显增强。实施例5、BnCAB种子特异超表达拟南芥转基因植株荚果叶绿素含量增加捕光叶绿素a/b结合蛋白是一类捕获光能，并把能量迅速传至反应中心引起光化学反应的色素蛋白复合体。叶绿素含量是光合作用强度的重要生理指标。分开花后1-6天和7-12天两个时期取拟南芥foiCAB转基因植株及Col-O野生型对照荚果。按每一样品约0. 2克取样后准确称重，分别放入研钵，加入少量石英砂及95% 乙醇2-;3ml，研成勻浆，转移至IOml容量瓶，用少量乙醇冲洗研钵、研棒数次，连同残渣一起倒入容量瓶中，最后用乙醇定容至10ml。样品4°C黑暗放置1小时，期间将容量瓶中倒转混合数次。提取液6000g、4°C离心2分钟，吸取上清即为各样品叶绿素提取液。以95%乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定叶绿素提取液吸光度。按下列公式计算叶绿素a和叶绿素b的浓度(Ca、Cb :mg/L)，二者之和为总叶绿素的浓度=Ca = 13. 95Α665_6· 88Α649，Cb = 24. 96Α649-7. 32Α6650最后根据下式求出各植物组织中叶绿素的含量叶绿素的含量(mg/g) =[叶绿素的浓度X提取液体积X稀释倍数]/样品鲜重。每一处理设3个重复，每一样品重复测定2次。从表2可以看出，拟南芥NAPINPr ::BnCAB转基因植株荚果叶绿素含量增加，显示光能吸收能力增强。表2拟南芥BnCAB种子特异超表达转基因植株与ColO野生型荚果叶绿素含量比较
权利要求
1.一种植物捕光叶绿素a/b结合蛋白，来源于芸薹属甘蓝型油菜(Brassicanapus)，其特征在于该结合蛋白是下述多肽之一(1)具有SEQIDN02所示的氨基酸序列的多肽；(2)将SEQIDN02所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有(1)所述多肽的功能的多肽或由其他物种的同源序列生成的氨基酸序列或衍生物。
2.编码权利要求1所述的结合蛋白的基因，其特征在于该基因的cDNA和基因组基因是下述核苷酸序列之一(1)序列表中SEQIDN01所示的核苷酸序列；(2)编码序列表中SEQIDN02的核苷酸序列；(3)与序列表中SEQIDN01限定的核苷酸序列具有90%以上同源性的核苷酸序列；(4)在高严谨条件下可与序列表中SEQIDN01限定的DNA序列杂交的核苷酸序列，所述高严谨条件为在0. IXSSPE或0. 1XSSC、0. 1% SDS的溶液中，65°C条件下杂交并洗膜。
3.编码权利要求1所述的结合蛋白的基因的制备方法，其特征在于该方法包括以下的步骤①用Trizol试剂提取甘蓝型油菜未成熟种子的总RNA，以oligo-d(T)18为引物，用 M-MLV反转录酶将获得的RNA反转录为cDNA，以所合成的cDNA为模板，用LA-Taq进行PCR 扩增，所用弓丨物对为 5，-ATGGCCGCCTCAACAATGGC-3，、5，-TCACTTTCCGGGAACGAAGT-3，，获得了 约SOObp的扩增片段；②PCR扩增产物连接到载体pMDIS-T，得到含有扩增片段的重组质粒，命名为pMD-CAB， 经测序，获得的PCR产物序列如SEQIDN0 1所示；或者，该方法包括以下的步骤①取甘蓝型油菜(Brassicanapus)叶片，加入700μ 1的2 % CTAB,将叶片磨碎， 60-65°C加热lhr，加入等体积M 1氯仿-异戊醇，混合均勻；②12000rpm，4°C离心10分钟；取上清，加等体积异丙醇或二倍体积乙醇，入加1/10体积 3MNaAc ；③12000rpm，4°C离心10分钟，吸去上清，沉淀用70%-75%乙醇洗2次，室温干燥，加入50 μ 1超纯水中；④以此油菜基因组DNA为模板，用引物对进行PCR扩增，所用引物对为 5，-ATGGCCGCCTCAACAATGGC-3，、5，-TCACTTTCCGGGAACGAAGT-3，，经测序证明扩增产物为 BnCAB基因组DNA，其序列与SEQIDN0 1所示序列相同。
4.权利要求2所述的基因在提高植物产量和种子含油量中的应用。
5.含有权利要求2所述基因的表达载体。
6.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于种子特异表达启动子可为napin启动子、大豆β-伴球蛋白α-亚基基因启动子、oleosin基因启动子或FAEl基因启动子。
7.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于表达载体中加入植物可选择性标记或对抗生素、除草剂的抗性标记；被转化的植物宿主是双子叶植物或单子叶植物。
8.一种含有权利要求2所述基因的表达载体的构建方法，其特征在于该方法包括以下的步骤①首先以油菜基因组DNA为模板，用引物对5’-AAGCTTTCTTCATCGGTGATTGA-3，和 5’ -TCGTGTATGTTTTTAATCTTGTTTG-3’进行PCR扩增，获得油菜napin启动子，用该启动子片段置换植物表达载体PTOC5941中酶切位点Ec0RI-BamHI间的35S启动子片段，获得中间载体 pFGC-NAPIN ；②采用引物5，-CACATCTAGACCCATCTCTTGGCTCAT-3，和 5，-CACATCTAGATACACTCGCACAA GAAGCAA-3，用PufTaq从pMD18_T/BnCAB扩增后PCR产物用)(bal酶切后与经)(bal酶切的 pFGC-NAPIN载体连接；③连接产物用CaCl2法转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，用含50mg/L卡那霉素的LB抗性平板筛选，阳性克隆用引物对5’ -GATCGCCATGCAAATCTC-3’和 5，-TCACTTTCCGGGAACGAAGT-3，进行 PCR 扩增；④挑取PCR阳性的克隆，用碱裂解法提取质粒DNA进行酶切鉴定，选取酶切正确的克隆进行测序验证，构建成种子特异表达载体NAPINPr: :BnCAB。
9.含有权利要求2所述基因的细胞系或宿主菌。
10.扩增权利要求2所述基因中任一片段的引物。
全文摘要
本发明属于植物基因工程领域，具体地说，本发明涉及到一种植物捕光叶绿素a/b蛋白复合体基因BnCAB及其在提高植物产量和种子含油量中的应用。所述捕光叶绿素a/b结合蛋白基因是下列核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID No1的DNA序列；2)编码序列表中SEQ ID No2蛋白质序列的多核苷酸。本发明还公开了利用所述的基因提高植物产量和种子含油量的方法，即在种子特异启动子的驱动下，利用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的载体，将本发明所提供的BnCAB基因的正义顺序导入植物中，建立转基因植物株系，本发明建立的转基因植株的单粒种子重量和单株种子量增加，种子含油量提高。
文档编号C12N1/15GK102408476SQ20101028916
公开日2012年4月11日 申请日期2010年9月21日 优先权日2010年9月21日
发明者刘智宏, 吴学龙, 胡张华, 袁思玮, 黄锐之 申请人:浙江省农业科学院