专利名称：一种用于生物发酵的发酵液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种发酵液及其制备方法，尤其是涉及一种用于生物发酵的发酵液及其制备方法。
背景技术：
已有的生物发酵工艺，其原理主要是利用微生物培养的方法，选择单一菌种投放到发酵底物中，用以制成营养成分单一的发酵液。但其制备成本高、营养物质单一，为了克服这些问题，现在需要一种工业级驯化型发酵液制备方法，能够通过低成本的发酵来得到多种营养成分、安全性、稳定性均较高的发酵液。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种制作成本相对低廉、质量安全稳定、富含维生素及营养物质的用于生物发酵的发酵液及其制备方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现一种用于生物发酵的发酵液，其特征在于，该发酵液包括以下组分及重量百分比
含量清酒酵母菌液 0. 3 0. 8 ；灰色链霉球菌液 0. 3 0. 8 ；乳酸菌菌液 0. 3 0. 8 ；米酒糟30 50 ；生物质10 3O;纯水余量。所述的清酒酵母菌液的制备方法包括以下步骤(1)准备清酒酵母培养基原料，包括以下组分及重量份含量蛋白胨 4 6、葡萄糖 8 12、酵母膏 2 4、麦芽汁900 1200;(2)液体培养基的制备按清酒酵母培养基配方配制原料，在0. 15MPa，121°C，灭菌30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；(3)摇瓶菌种的制备取斜面保存的清酒酵母菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在30°C，振率100 200次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；(4)生产菌液的制备按3衬％接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在30°C，通风比为1 l(v/v)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X IO7 4X IO12的清酒酵母菌液。所述的灰色链霉球菌液的制备方法包括以下步骤
(1)准备灰色链霉球菌培养基原料，包括以下组分及重量份含量硝酸钾0. 8 1. 2、磷酸二氢钾0. 4 0. 6、硫酸镁0. 4 0. 6、氯化钠0. 4 0. 6、硫酸亚铁0. 007 0. 008、可溶性淀粉8 12、纯水900 1000 ；(2)液体培养基的制备按灰色链霉球菌培养基配方配制原料，在0. 15MPa, 121°C,灭菌30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；(3)摇瓶菌种的制备取斜面保存的灰色链霉球菌菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在35°C，振率100 200次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；(4)生产菌液的制备按3衬％接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在35°C，通风比为1 l(v/v)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X IO7 4X 1012，pH值为7. 2的灰色链霉球菌液。所述的乳酸菌菌液的制备方法包括以下步骤(1)准备乳酸菌培养基原料，包括以下组分及重量份含量乳酪蛋白胨8 12、蛋白胨 8 12、酵母膏 4 6、葡萄糖 4 6、吐温-80 0.8 1.2、磷酸氢二钾1. 8 2. 5、醋酸钠 4 6、柠檬酸二胺1.8 2. 5、硫酸镁0. 1 0. 3、硫酸锰0. 04 0. 06、纯水900 1000 ；(2)液体培养基的制备按乳酸菌培养基配方配制原料，在0. 15MPa，121°C，灭菌 30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；(3)摇瓶菌种的制备取斜面保存的乳酸菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在30°C，振率100 200次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；(4)生产菌液的制备按3衬％接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在30°C，通风比为1 l(v/v)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X IO7 4X IO12的乳酸菌菌液。所述的生物质为水果、大米或黄豆中的一种或几种。一种用于生物发酵的发酵液的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)按照以下组分及重量百分比含量备料
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清酒酵母菌液 0. 3 0. 8、灰色链霉球菌液0. 3 0. 8、乳酸菌菌液 0. 3 0. 8、米酒糟30 50、生物质10 30、纯水余量；(2)将上述原料混拌均勻，置于陶器中静态发酵21 30天，然后将得到的产物取出过滤，收集滤液并控制温度为100 Iicrc进行高温灭菌，最后冷却至室温，即得到用于生物发酵的发酵液。与现有技术相比，本发明制造成本低，营养物得率高、成分极丰富，且稳定性强，制得的发酵液含有18种氨基酸和多种生物活性物质以及硒、锌等微量元素和人体所需的维他命元素等，不仅可作为生物发酵食品，也可添加至护肤品中替代化学营养元素，该发酵液可以完全取代传统化妆品中的化学合成营养添加剂，杜绝此类化学物质对人体的伤害；将这种可食用的营养物质添加至护肤品中，不仅制作成本相对低廉、质量安全稳定，还从根本上解决了护肤品营养物质低、成分较单一或混合，稳定性差的问题。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。实施例1一种用于生物发酵的发酵液的制备方法，该方法包括以下步骤1、原、辅料成分及用量(按成份百分比)清酒酵母菌液0. 5% (含菌量4X10，、灰色链霉球菌液0. 5% (含菌量 4X IO10)、乳酸菌菌液0. 5% (含菌量4X IOltl)、米酒糟30%、水果、大米、黄豆混合物20%、 纯水48. 5%02、培养基组成(1)清酒酵母培养基(pH自然)蛋白胨5g、葡萄糖10g、酵母膏3g、麦芽汁 IOOOml ；(2)灰色链霉球菌培养基(pH7. 2)硝酸钾lg、磷酸二氢钾0. 5g、硫酸镁0. 5g、氯化钠0. 5g、硫酸亚铁0. 0075g、可溶性淀粉10g、纯水IOOOml ；(3)乳酸菌培养基(pH自然)乳酪蛋白胨10g、蛋白胨10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、 吐温-80为表面活性剂lg、磷酸氢二钾2g、醋酸钠5g、柠檬酸二胺2g、硫酸镁0. 2g、硫酸锰 0. 05g、纯水 IOOOml03、发酵液的制备3. 1、清酒酵母菌液的制备液体培养基的制备按清酒酵母培养基配方配制而成，在0. 15MPa，121°C，灭菌 30min，备用；摇瓶菌种的制备取斜面保存的清酒酵母菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在30°C，振率100 200次/min，进行摇瓶培养48h ；生产菌液的制备按3%接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在30°C，通风比为1 ι (ν/ν)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，备用；3. 2、灰色链霉球菌液的制备液体培养基的制备按灰色链霉球菌培养基配方配制而成，在0. 15MPa, 121°C，灭菌30min，备用；摇瓶菌种的制备取斜面保存的灰色链霉球菌菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在35°C，振率100 200次/min，进行摇瓶培养48h ；生产菌液的制备按3%接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在35°C，通风比为 1 1(V/V)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，备用；3. 3、乳酸菌菌液的制备液体培养基的制备按乳酸菌培养基配方配制而成，在0. 15MPa，121°C，灭菌 30min，备用；摇瓶菌种的制备取斜面保存的乳酸菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在30°C，振率100 200次/min，进行摇瓶培养48h ；生产菌液的制备按3%接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在30°C，通风比为 1 1(V/V)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，备用；3. 4发酵液的制备按前述菌种制备工艺要求，将已制好的清酒酵母、灰色链霉球菌和乳酸菌的生产菌液分别各取0. 5kg，并取30kg米酒糟、8kg水果、6kg大米、6kg黄豆、纯水48. 5kg，置于 150L陶器中均勻混拌，覆盖静止发酵25天，然后取出过滤，收集滤液并高温灭菌，冷却后灌装备用，即为发酵液成品。按本方法制备的发酵液成品，包含了 18种氨基酸、维生素A、B、C、E，HA等生物活性物质以及锌、硒、钙、铁等多种营养物。实施例2一种用于生物发酵的发酵液的制备方法，该方法包括以下步骤(1)准备原料清酒酵母菌液0. 3kg、灰色链霉球菌液0. 3kg、乳酸菌菌液0. 3kg、米酒糟30kg、大米10kg、纯水59. Ikg,其中，清酒酵母菌液的制备方法包括以下步骤a、准备清酒酵母培养基原料，包括以下组分及重量份含量蛋白胨4g、葡萄糖Sg、 酵母膏2g、麦芽汁900g;b、液体培养基的制备按清酒酵母培养基配方配制原料，在0. 15MPa，121°C，灭菌 30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；C、摇瓶菌种的制备取斜面保存的清酒酵母菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在30°C，振率100次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；d、生产菌液的制备按3衬％接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在30°C，通风比为 1 1(V/V)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X IO7的清酒酵母菌液。
灰色链霉球菌液的制备方法包括以下步骤a、准备灰色链霉球菌培养基原料，包括以下组分及重量份含量硝酸钾0. Sg、磷酸二氢钾0. 4g、硫酸镁0. 4g、氯化钠0. 4g、硫酸亚铁0. 007g、可溶性淀粉8g、纯水900g ；b、液体培养基的制备按灰色链霉球菌培养基配方配制原料，在0. 15MPa, 121°C, 灭菌30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；C、摇瓶菌种的制备取斜面保存的灰色链霉球菌菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在35°C，振率100次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；d、生产菌液的制备按3衬％接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在35°C，通风比为 1 1(V/V)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X 107，pH值为7. 2的灰色链霉球菌液。乳酸菌菌液的制备方法包括以下步骤a、准备乳酸菌培养基原料，包括以下组分及重量份含量乳酪蛋白胨Sg、蛋白胨 Sg、酵母膏4g、葡萄糖4g、0. 8g吐温-80、磷酸氢二钾1. Sg、醋酸钠4g、柠檬酸二胺1. Sg、硫酸镁0. lg、硫酸锰0. 04g、纯水900g ；b、液体培养基的制备按乳酸菌培养基配方配制原料，在0. 15MPa，121°C，灭菌 30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；C、摇瓶菌种的制备取斜面保存的乳酸菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在30°C，振率100次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；d、生产菌液的制备按3衬％接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在30°C，通风比为 1 1(V/V)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X IO7的乳酸菌菌液。(2)将上述原料混拌均勻，置于陶器中静态发酵21天，然后将得到的产物取出过滤，收集滤液并控制温度为100°c进行高温灭菌，最后冷却至室温，即得到用于生物发酵的发酵液。实施例3一种用于生物发酵的发酵液的制备方法，该方法包括以下步骤(1)准备原料清酒酵母菌液0. 8kg、灰色链霉球菌液0. 8kg、乳酸菌菌液0. 8kg、米酒糟50kg、大米10kg、黄豆20kg、纯水17. 6kg，其中，清酒酵母菌液的制备方法包括以下步骤a、准备清酒酵母培养基原料，包括以下组分及重量份含量蛋白胨6g、葡萄糖 12g、酵母膏4g、麦芽汁1200g ；b、液体培养基的制备按清酒酵母培养基配方配制原料，在0. 15MPa，121°C，灭菌 30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；C、摇瓶菌种的制备取斜面保存的清酒酵母菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在30°C，振率200次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；d、生产菌液的制备按3wt%接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在30°C，通风比为 1 1(V/V)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X IO12的清酒酵母菌液。灰色链霉球菌液的制备方法包括以下步骤
a、准备灰色链霉球菌培养基原料，包括以下组分及重量份含量硝酸钾1. 2g、磷酸二氢钾0. 6g、硫酸镁0. 6g、氯化钠0. 6g、硫酸亚铁0. 008g、可溶性淀粉12g、纯水IOOOg ；b、液体培养基的制备按灰色链霉球菌培养基配方配制原料，在0. 15ΜΡβ,12ΓΟ, 灭菌30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；C、摇瓶菌种的制备取斜面保存的灰色链霉球菌菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在35°C，振率200次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；d、生产菌液的制备按3wt %接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在35°C，通风比为 1 l(v/v)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X 1012，pH值为7. 2的灰色链霉球菌液。乳酸菌菌液的制备方法包括以下步骤a、准备乳酸菌培养基原料，包括以下组分及重量份含量乳酪蛋白胨12g、蛋白胨 12g、酵母膏6g、葡萄糖6g、l. 2g吐温-80、磷酸氢二钾2. 5g、醋酸钠6g、柠檬酸二胺2. 5g、硫酸镁0. 3g、硫酸锰0. 06g、纯水IOOOg ；b、液体培养基的制备按乳酸菌培养基配方配制原料，在0. 15MPa，121°C，灭菌 30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；C、摇瓶菌种的制备取斜面保存的乳酸菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在30°C，振率200次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；d、生产菌液的制备按3衬％接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在30°C，通风比为 1 1(V/V)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X1012的乳酸菌菌液。(2)将上述原料混拌均勻，置于陶器中静态发酵30天，然后将得到的产物取出过滤，收集滤液并控制温度为110°C进行高温灭菌，最后冷却至室温，即得到用于生物发酵的发酵液。
权利要求
1.一种用于生物发酵的发酵液，其特征在于，该发酵液包括以下组分及重量百分比含量清酒酵母菌液 0. 3 0. 8 ； 灰色链霉球菌液0. 3 0. 8 ； 乳酸菌菌液 0. 3 0. 8 ； 米酒糟30 50 ；生物质10 30 ；纯水余量。
2.根据权利要求1所述的一种用于生物发酵的发酵液，其特征在于，所述的清酒酵母菌液的制备方法包括以下步骤(1)准备清酒酵母培养基原料，包括以下组分及重量份含量 蛋白胨 4 6、葡萄糖 8 12、 酵母膏 2 4、 麦芽汁 900 1200 ；(2)液体培养基的制备按清酒酵母培养基配方配制原料，在0.15MPa, 121 V，灭菌 30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；(3)摇瓶菌种的制备取斜面保存的清酒酵母菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在30°C，振率100 200次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；(4)生产菌液的制备按3衬％接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在30°C，通风比为 1 l(v/v)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X IO7 4X IO12的清酒酵母菌液。
3.根据权利要求1所述的一种用于生物发酵的发酵液，其特征在于，所述的灰色链霉球菌液的制备方法包括以下步骤(1)准备灰色链霉球菌培养基原料，包括以下组分及重量份含量 硝酸钾 0. 8 1. 2、磷酸二氢钾0. 4 0. 6、 硫酸镁 0. 4 0. 6、 氯化钠 0. 4 0. 6、 硫酸亚铁 0. 007 0. 008、 可溶性淀粉8 12、 纯水 900 1000 ；(2)液体培养基的制备按灰色链霉球菌培养基配方配制原料，在0.15MPa，121°C，灭菌30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；(3)摇瓶菌种的制备取斜面保存的灰色链霉球菌菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在35°C，振率100 200次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；(4)生产菌液的制备按3衬％接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在35°C，通风比为 1 l(v/v)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X IO7 4X 1012，pH值为7. 2的灰色链霉球菌液。
4.根据权利要求1所述的一种用于生物发酵的发酵液，其特征在于，所述的乳酸菌菌液的制备方法包括以下步骤(1)准备乳酸菌培养基原料，包括以下组分及重量份含量 乳酪蛋白胨8 12、蛋白胨 8 12、 酵母膏 4 6、 葡萄糖 4 6、 吐温-80 0.8 1.2、 磷酸氢二钾1. 8 2. 5、 醋酸钠 4 6、 柠檬酸二胺1.8 2. 5、 硫酸镁 0. 1 0. 3、 硫酸锰 0. 04 0. 06、 纯水 900 1000 ；(2)液体培养基的制备按乳酸菌培养基配方配制原料，在0.15MPa，121°C，灭菌 30min，得到灭菌的液体培养基，置于发酵罐中；(3)摇瓶菌种的制备取斜面保存的乳酸菌种在无菌环境中接入已灭菌的液体培养基中，在30°C，振率100 200次/min，进行摇瓶培养48h，得到摇瓶菌液；(4)生产菌液的制备按3衬％接种量将摇瓶菌液接入发酵罐中，在30°C，通风比为 1 l(v/v)装液量为1/3的条件下进行发酵，48h后再按上述条件补加1/3体积的培养基继续发酵，96h后终止发酵，即得到含菌量为4X IO7 4X IO12的乳酸菌菌液。
5.根据权利要求1所述的一种用于生物发酵的发酵液，其特征在于，所述的生物质为水果、大米或黄豆中的一种或几种。
6.一种如权利要求1所述的用于生物发酵的发酵液的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)按照以下组分及重量百分比含量备料 清酒酵母菌液 0. 3 0. 8、灰色链霉球菌液0.3 0.8、 乳酸菌菌液 0. 3 0. 8、 米酒糟30 50、生物质10 30、纯水余量；(2)将上述原料混拌均勻，置于陶器中静态发酵21 30天，然后将得到的产物取出过滤，收集滤液并控制温度为100 IlCTC进行高温灭菌，最后冷却至室温，即得到用于生物发酵的发酵液。
全文摘要
本发明涉及一种用于生物发酵的发酵液及其制备方法，原料包括以下组分及重量百分比含量清酒酵母菌液0.3～0.8、灰色链霉球菌液0.3～0.8、乳酸菌菌液0.3～0.8、米酒糟30～50、生物质10～30、纯水余量，将上述组分进行静态生物液体发酵，即可以得到产品。与现有技术相比，本发明制造成本低，营养物得率高、成分极丰富，且稳定性强，不仅可作为生物发酵食品，也可添加至护肤品中完全取代传统化妆品中的化学合成营养添加剂，不仅制作成本相对低廉、质量安全稳定，还从根本上解决了护肤品营养物质低、成分较单一或混合，稳定性差的问题。
文档编号C12R1/545GK102453679SQ20101052091
公开日2012年5月16日 申请日期2010年10月26日 优先权日2010年10月26日
发明者冯坤范 申请人:冯坤范