专利名称：一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法
技术领域：
本发明涉及一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法。属生物工程技术应用领域。
背景技术：
腈类化合物是一类主要的污染物，腈基水解细胞将氰基变成羧基不但能减少环境 污染，而且得到的羧酸类物质还是一类十分有用的化合物。因此选择合适的材料得到活性 高、稳定性好、能多次重复使用的固定化细胞前景是十分诱人的。固定化细胞与游离细胞 比较起来，其活性较低，这是由于随着固定细胞所用材料的不同，存在着或大或小的传质阻 力，克服这些传质阻力是提高固定化细胞活性的关键点。因此要采用各种方法来提高所用 材料的通透性，如增加材料的孔径以及提高孔隙率等。目前未见过有这方面的专利。
发明内容
本发明的目的是提供一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法。本发明的技术方案为腈水解酶产生菌经过液体培养得到菌液，离心分离所得菌 体，悬浮于Tris-Hcl缓冲液，并加入经灭菌的海藻酸钠与PEG400的共混物，混勻后用注射 器平稳注入CaCl2溶液中，固化，得到的小珠过滤后洗去表面的未固定的细胞和CaCl2溶液， 晾干后制得。上述过程中，腈水解酶产生菌液体培养的培养基为磷酸二氢钾lg，硫酸镁0. Ig, 氯化铵0. 5g，硫酸亚铁0. 015g，氯化锰0. Olg，氯化钴0. Olg，氯化钠0. 5g，己内酰胺1. 5g， 酵母膏5g，蛋白胨5g，甘油5g，加水至500mL，pH7. 0，培养条件为，500mL三角瓶装培养 基150mL于30°C，200r/min，振荡培养2d。离心分离所得菌体干重0. 02g, Tris-Hcl缓冲 液PH7. 0，海藻酸钠与PEG400的质量分数分别为2. 5%和5%，灭菌方法为高压蒸汽灭菌， CaCl2溶液浓度为0. 1M，固化温度4°C，固化时间2h，形成的小珠用纱布过滤，用Tris-Hcl缓 冲液洗涤。
具体实施例方式下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。实例一1.腈水解酶产生菌菌液的制备液体培养基磷酸二氢钾lg，硫酸镁0. Ig,氯化铵0. 5g，硫酸亚铁0. 015g,氯化锰 0. Olg,氯化钴0. Olg,氯化钠0. 5g，己内酰胺1. 5g，酵母膏5g，蛋白胨5g，甘油5g，加水至 500mL,pH7.0 ；培养方法从斜面菌种中用接种环挑取细菌，接种于摇瓶种子培养基中，500mL三 角瓶装培养基150mL于30°C，200r/min,振荡培养2d ；2.细胞固定化将制备的菌液离心分离得到菌体，用蒸馏水洗涤后再离心，取干重0.02g菌体悬浮于PH7. 0的Tris-Hcl缓冲液，并加入经高压蒸汽灭菌的质量分数分别为2. 5%和5%海 藻酸钠与PEG400的共混物，混勻后用注射器平稳注入浓度为0. IMCaCl2溶液中，4°C固化 池，得到的小珠经纱布过滤后用Tris-Hcl缓冲液洗去表面的未固定的细胞和CaCl2溶液， 晾干后制得。海藻酸钠/PEG400小珠白色，直径l_2mm。
权利要求
1.一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于腈水解酶产生菌经过液体培 养得到菌液，离心分离所得菌体，悬浮于Tris-Hcl缓冲液，并加入经灭菌的海藻酸钠与 PEG400的共混物，混勻后用注射器平稳注入CaCl2溶液中，固化，得到的小珠过滤后洗去表 面的未固定的细胞和CaCl2溶液，晾干后制得；海藻酸钠/PEG400小珠白色，直径l_2mm。
2.如权利要求1所述的一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于所述的 腈水解酶产生菌液体培养的培养基为磷酸二氢钾lg，硫酸镁0. lg，氯化铵0. 5g，硫酸亚铁 0. 015g，氯化锰0. Olg,氯化钴0. Olg,氯化钠0. 5g，己内酰胺1. 5g，酵母膏5g，蛋白胨5g，甘 油5g，加水至500mL，pH7. 0，培养条件为，500mL三角瓶装培养基150mL于30°C，200r/min， 振荡培养2d。
3.如权利要求1所述的一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于所述的 Tris-Hcl 缓冲液 pH7. 0。
4.如权利要求1所述的一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于所述的海 藻酸钠与PEG400的质量分数分别为2. 5%和5%。
5.如权利要求1所述的一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于所述的 CaCl2溶液浓度为0. 1M。
6.如权利要求1所述的一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于所述的固 化温度4°C，固化时间池。
全文摘要
本发明属生物工程技术应用领域，具体涉及一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法。该海藻酸钠/PEG400小珠为白色，直径1-2mm。是腈水解酶产生菌经过液体培养得到菌液，离心分离后所得菌体，悬浮于Tris-Hcl缓冲液，并加入经灭菌的海藻酸钠与PEG400的共混物，混匀后用注射器平稳注入CaCl2溶液中，固化，得到的。本发明为细胞固定化研究提供了一种新思路，具有一定的应用价值。
文档编号C12N11/04GK102120994SQ20101057816
公开日2011年7月13日 申请日期2010年12月8日 优先权日2010年12月8日
发明者邓超, 陈敬华, 马莉 申请人:无锡恒宇生物科技有限公司