一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法

文档序号:474757阅读:442来源:国知局
专利名称:一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法
技术领域
本发明涉及一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法。属生物工程技术应用领域。
背景技术
腈类化合物是一类主要的污染物,腈基水解细胞将氰基变成羧基不但能减少环境污染,而且得到的羧酸类物质还是一类十分有用的化合物。将一种腈水解酶产生菌固定化, 加入适量底物甘氨腈,通过最适酶反应条件的选择,得到产物甘氨酸。这种固定化细胞可以反复多次利用,提高底物转化率。

发明内容
本发明的目的是提供一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法。本发明的技术方案为将腈水解酶产生菌包埋在海藻酸钠/PEG400小珠中,加入 Tris-Hcl缓冲液(含CaCl2),加入底物甘氨腈,在一定温度,pH值条件下反应一定时间得到产物甘氨酸溶液,将溶液加热至70°C -80°C浓缩,使多余的底物挥发,浓缩至原体积一半后冷却至室温,加3-4倍乙醇或甲醇重结晶,得到甘氨酸。上述过程中,Tris-Hcl缓冲液的量为10mL,其中含0. 5g/LCaCl2,底物甘氨腈浓度为75mM,温度为30°C,pH值为7.0,反应时间120min。
具体实施例方式下面的实例将具体说明本发明的操作方法,但不能作为对本发明的限定。实例一1.腈水解酶产生菌固定化将菌体悬浮于pH7. 0的Tris-Hcl缓冲液,并加入经高压蒸汽灭菌的质量分数分别为2. 5%和5%海藻酸钠与PEG400的共混物,混勻后用注射器平稳注入浓度为0. IMCaCl2溶液中,4°C固化池,得到的小珠经纱布过滤后用Tris-Hcl缓冲液洗去表面的未固定的细胞和CaCl2溶液,晾干后制得。2.甘氨酸的生产方法在上述制得的海藻酸钠/PEG400小珠中,加入IOmL Tris-Hcl缓冲液(含0. 5g/ LCaCl2),加入浓度为75mM的底物甘氨腈,30°C,pH 7. 0,反应120min得到产物甘氨酸。实例二在海藻酸钠/PEG400小珠中,加入IOmL Tris-Hcl缓冲液(含0. 5g/LCaCl2),加入浓度为75mM的底物甘氨腈,pH 7. 0,反应120min,对不同温度下固定化细胞的比酶活进行测定(见表1),结果表明在30°C时,固定化细胞的比酶活最高,因此反应体系的最适温度为 30 "C。表1不同温度下固定化细胞的比酶活
权利要求
1.一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法,其特征在于将腈水解酶产生菌包埋在海藻酸钠/PEG400小珠中,加入TriS-Hcl缓冲液(含CaCl2),加入底物甘氨腈,在一定温度,PH值条件下反应一定时间得到产物甘氨酸溶液,将溶液加热浓缩,使多余的底物挥发, 浓缩至原体积一半后冷却至室温,加乙醇或甲醇重结晶,得到甘氨酸。
2.如权利要求1所述的一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法,其特征在于所述的Tris-Hcl缓冲液的量为10mL,其中含0. 5g/LCaCl2。
3.如权利要求1所述的一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法,其特征在于所述的底物甘氨腈浓度为75mM。
4.如权利要求1所述的一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法,其特征在于所述的反应温度为30°C,pH值为7. 0,反应时间120min。
5.如权利要求1所述的一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法,其特征在于所述的加热浓缩温度为70°C -80°C
6.如权利要求1所述的一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法,其特征在于所述的加乙醇或甲醇的量为浓缩后溶液体积的3-4倍。
全文摘要
本发明属生物工程技术应用领域,具体涉及一种固定化腈水解酶产生菌生产甘氨酸的方法。具体是将一种腈水解酶产生菌固定化,加入适量底物甘氨腈,通过最适酶反应条件的选择,得到产物甘氨酸。这种固定化细胞可以反复多次利用,提高底物转化率。
文档编号C12P13/04GK102559793SQ201010578180
公开日2012年7月11日 申请日期2010年12月8日 优先权日2010年12月8日
发明者邓超, 陈敬华, 马莉 申请人:无锡恒宇生物科技有限公司
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