专利名称：一株好氧除磷菌——恶臭假单胞菌wsh1002及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株新的好氧除磷菌一恶臭假单胞菌WSH1002及其应用。
背景技术：
目前污水处 理厂除磷技术主要有生物除磷、化学沉淀除磷，但成本高且很难达到排放标准。也有传统人工湿地除磷工艺填料吸附，但其填料吸附能力有限，且易饱和。目前，国内生产的洗衣粉仍广泛使用三聚磷酸钠为主要助剂，这就是我们通常所说的含磷洗衣粉。三聚磷酸钠作为洗衣粉的助剂已为人类服务了半个世纪，对提高洗衣粉的去污效果起到了很大的作用；它通过络合Ca2+、Mg2+等金属离子起到软化水的作用；它对蛋白质有膨润、增溶作用，对脂肪起促进乳化的作用，对尘土等固体污垢有分散作用；它还有碱缓冲作用，即使有酸性污垢存在也能使洗涤液保持一定的碱度，有利于酸性污垢的去除；它还具有吸收水分防止洗衣粉块的作用。但是，含磷洗衣粉也有严重的缺点，就是在使用后随着污水被排放在水体中造成水体的富营养化，引起浮游生物大量繁殖疯长，形成 “赤潮”。赤潮的危害是使水中溶氧量减少，水质恶化，水中生物不能正常生存，严重破坏水产资源。在生物除磷工艺中，目前的相关技术处理成本过高，且处理的效果相对要差。Phostrip法先使污泥微生物处于厌氧或兼氧状态下，使积磷细菌体内的磷充分排出，在进入好氧条件下吸磷并贮藏于体内，然后使这种含磷污泥立即在二沉池内沉降，澄清的出水可获得良好的脱磷效果，池底的含磷污泥一部分剩余污泥的形式排出作为肥料使用，另一部分回流至厌氧池或兼氧池。Phostrip法实际上是生物脱磷与化学除磷相相结合的工艺，是对A/0工艺的改进。该工艺是使部分回流的含磷污泥进入一个专门设置的厌氧或兼氧放磷池，是含磷微生物在厌氧条件下释放可溶性的磷酸与水体中，然后将含有高浓度磷的少量上清液导出放磷池，进行化学除磷，将已经释放磷的污泥重新进入到好氧池中进行吸磷和积磷。该工艺可以进一步提高除磷的效率。但该法的处理过程中，菌种的筛选就是一个很重要的问题，需要有一种优秀的菌种予以配合生物处理。
发明内容
本发明目的是提供一株能够有效降解无机磷的好氧除磷新菌株及其应用。本发明采用的技术方案是一株好氧除磷菌——恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)WSH1002，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号CCTCC No =M 2010276，保藏日期2010年10月24日。所述恶臭假单胞菌WSH1002的16S rDNA序列如下(已提交NCBI，编号为 HM218829)gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccaggccttgacatg cagagaactt tccagagatg gattggtgcc ttcgggaact ctgacacagg
tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gtaacgagcgcaacccttgt ccttagttac cagcacgtta tggtgggcac tctaaggaga ctgccggtgacaaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacggc ctgggctacacacgtgctac aatgg tcggt acagagggtt gccaagccgc gaggtggagc taatctcacaaaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagtcg gaatcgctagtaatcgcgaa tcagaatgtc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtcacaccatggg agtgggttgc acacagaagt agctagtcta accttcggga ggacggtaccacggttggat tccg。本发明的菌株采用多种筛选方法相结合方式筛选获得，首先通过添加磷源，富集好氧除磷菌，然后再通过在培养基中添加χ-Pi来快速有效地筛选好氧除磷菌。具体如下 从驯化好的活性污泥中筛选出单菌落，然后根据不同的菌种在富磷和限磷的葡萄糖-MOPS 培养基中生长时表达碱性磷酸激酶对x-Pi (5-bromo-4-chloro-3-indoly-phosphate)分解情况不同而产生不同色斑，除磷菌在富磷和限磷的培养基中都产生蓝斑的性能，通过在培养基中添加x-Pi的方法，来有效地筛选好氧除磷菌。其步骤依次是取样，富集培养，初筛，复筛，最后得到一株在好氧条件下，能降解模拟污水中的磷能力较高的菌株。本发明还涉及所述的恶臭假单胞菌在微生物降解处理含磷废水中的应用。处理对象主要包括人们日常生产生活中排放的含磷废水以及工业生产中排放的含磷废水，相对而言，后者的含磷量更高，涉及范围小，治理更为重要。其中的磷主要以化合物的形态存在，例如磷酸及磷酸盐类。优选的，所述微生物降解在28 32°C下进行。本发明的有益效果主要体现在提供了一株性能较好氧除磷菌，该菌株可以有效的去除污水中的磷，在一定程度上为污水处理和治理方面提供基础。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此实施例1 菌株的筛选(1)菌株来源a、江南大学环境工程实验室性能稳定的实验室规模A/0反应器沉淀池中剩余污泥；b、江南大学环境工程实验室性能稳定的实验室规模MBR反应器曝气池中活性污泥；C、梅村污水处理厂训话好的活性污泥；(2)培养基富集培养基牛肉膏3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，KH2PO4 0. 02g，水 lOOOmL，pH 7· 2 7. 4。初筛培养基:100ml的 10XM0PS 混合物(5. 372g M0PS+0. 717gTricine+30ml 离子水，IOmol/L的KOH调节pH至7. 4，总体积到44ml，加入0.01% 1 mL新制的FeSO4溶液， 按下列顺序加溶液5ml 1. 9mol/LNH4Cl, 1 mL 0. 276mol/L K2SO4,0. 025mol 0. 02mol/L,CaCl2 · 2Η20，0· 2ImL 2. 5mol/L MgCl2 · 6Η20, IOmL 5mol/L NaCl，0. 02mL 微量元素混合液， 38. 7mL 去离子水)，葡萄糖 0. Ig, 0. 0087g/0. 1732g K2HPO4, χ-Pi (50 μ g/mL)。菌体扩大培养基牛肉膏3g，蛋白胨10g, NaCl 5g，KH2PO4 0. 02g,水IOOOmL, ρΗ7· 2 7· 4。检测培养基乙酸钠925mg，蛋白胨O.lg，酵母膏O.Olg，NaCl 0. 05g, KH2PO4 65. 5mg, MgCl2 · 7H20 153. 7mg, CaCl2 25mg。(3)富集培养将从污水处理厂取得的活性污泥接入富集培养基，每天更换新鲜培养基。装液量100/250ml，摇床培养24h，30°C，150rpm，转接10次。(4)初筛将富集好的菌液进行稀释，在固体扩大培养基上进行涂布，然后置于 30°C培养箱中培养，培养2 3天。挑选形态不同的菌同时在富磷和限磷的初筛培养基上划线分离，将在两种培养基上都出 现的蓝色单菌落的菌再次在扩大培养基上划线分离，对划线分离得到的单菌落保存到斜面上，供复筛用。(5)复筛将初筛保存的菌株接入菌体扩大培养基，30°C，150rpm，培养24h，然后按5%的比例分别接入IOOmL检测培养基，培养12h，30°C，150rpm，测定接种前后磷的变化。 磷的测定采用钼锑抗分光光度法。经筛选获得一株性能较好的菌株，经16S rDNA分子鉴定为Pseudomonas putida， 保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC No =M 2010276。实施例2 好氧除磷菌的应用(1)培养基扩大培养基牛肉膏3g，蛋白胨 10g, NaCl 5g，KH2PO4 0. 02g，水 lOOOmL，ρΗ7· 2 7. 4。检测培养基乙酸钠925mg，蛋白胨O.lg，酵母膏O.Olg，NaCl 0. 05g, KH2PO4 65. 5mg, MgCl2 · 7H20 153. 7mg, CaCl2 25mg。(2)工艺条件温度30°C ；摇床转速150rpm ；装液量100/250mL无流加；菌体干重的测定菌体在IOOOOrpm条件下离心5min，弃去上清夜在105°C条件下
烘至恒重，称重。(3)好氧除磷菌的应用将斜面上的除磷菌(CCTCC No =M 2010276)挑取一环接入扩大培养基，在30°C， 150rpm的条件下培养24h，然后按1 %体积比分别接入富含磷元素的牛肉膏蛋白胨培养基 (牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g,KH2PO4 0. 02g，水 lOOOmL，pH7. 2 7. 4)中，30°C，150rpm， 培养7h后，取一定量的发酵液在SOOOrpm的条件下离心5min，检测上清液中的磷含量，结果见表1。表1 菌株的除磷能力测试
IS DCW 初始磷含量~7h后磷含量
mg P/h/g号 (g/L )(mg/L )(mg/L )
10 1.3152.5121
结论本发明菌株 去除磷的能力可达0. 02g P/h/g菌体干重以上，当初始磷浓度为15mg/L时，7h去除率达到80%以上。
权利要求
1.一株好氧除磷菌——恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)WSH1002，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号CCTCC NO :M 2010276， 保藏日期2010年10月24日。
2.如权利要求1所述的恶臭假单胞菌WSH1002，其特征在于所述恶臭假单胞菌WSH1002的16S rDNA序列如下gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg ccttgacatg cagagaactt tccagagatg gattggtgcc ttcgggaact ctgacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gtaacgagcg caacccttgt ccttagttac cagcacgtta tggtgggcac tctaaggaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacggc ctgggctaca cacgtgctac aatggtcggt acagagggtt gccaagccgc gaggtggagc taatctcaca aaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagtcg gaatcgctag taatcgcgaa tcagaatgtc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg agtgggttgc acacagaagt agctagtcta accttcggga ggacggtacc acggttggat tccgo
3 如权利要求1所述的恶臭假单胞菌WSH1002在微生物降解处理含磷废水中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述微生物降解在28 32°C下进行。
全文摘要
本发明提供了新的好氧除磷菌——恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)及其应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号CCTCC NoM 2010276，保藏日期2010年10月24日。该菌株去除磷的能力可达0.02g P/h/g菌体干重以上，当初始磷浓度为15mg/L时，7h去除率达到80％以上。本发明的有益效果主要体现在提供了一株性能较好氧除磷菌，该菌株可以有效的去除污水中的磷，在一定程度上为污水处理和治理方面提供基础。
文档编号C12R1/40GK102181375SQ20101058054
公开日2011年9月14日 申请日期2010年12月9日 优先权日2010年12月9日
发明者丁青松, 仲小敏, 刘斌, 堵国成, 徐甦, 王天文, 郑展望, 陈坚 申请人:江苏商达水务有限公司