专利名称：酵母水解专用复合酶及其制备方法
技术领域：
本发明属于酶制剂技术领域，涉及一种酵母水解专用复合酶及其制备方法。
背景技术：
酵母含有丰富的蛋白质，葡聚糖、甘露聚糖、维生素、矿物质和大量的谷胱甘肽等， 另外还含有4 15%的可降解的核糖核酸(RNA)，通过酶解技术，分解酵母细胞壁，溶出蛋 白质，蛋白酶进一步将蛋白质分解成小肽、氨基酸等，磷酸二酯酶再分解核糖核酸生成呈味 核苷酸(I+G)等物质，制得酵母抽提物产品，它不但具有良好的营养作用，而且还具有很好 的保健作用，是一种具有调味、营养和保健等三大功能的新型调味品，可以替代现有味精等 产品，市场前景非常巨大。在天然调味品中，酵母抽提物占有重要地位，在欧美日等国家已 普遍用酵母抽提物来取代肉类水解物或代替味精作日常调味品，也可替代牛肉膏等作为生 物发酵营养剂。我国的啤酒和甘蔗产量都居世界前列，其生产后的副产品啤酒酵母泥和甘蔗糖蜜 酵母为酵母的深加工酵母抽提物产品提供了丰富的酵母原料资源。2009年我国甘蔗糖蜜产 量达到280 340万吨，啤酒酵母泥的产量为50 60万吨，作废弃物处理造成严重的资源 浪费与环境污染，长期以来废酵母的经济价值没有得到充分利用。开发和综合利用我国巨 大的酵母资源具有十分显著的社会、经济和环保效益。酵母抽提物的生产工艺通常是自溶法，酸碱水解法和生物酶法等三种方法。自溶 法的生产时间长、受杂菌污染易发臭、水解度低、蛋白利用率低；化学酸碱法存在含盐量高、 风味差、营养损失大、安全性低等问题；而生物酶法具有反应条件温和，无污染物排放，水解 速度快、酶解彻底、水解氨基态氮含量高、苦味小、鲜风味佳等特点。据文献检索，自1993年 以来，国内西北轻工学院、无锡轻工大学、华南理工大学、广东微生物工业研究所等单位都 对酵母水解、酵母抽提物生产等做研究，采用的都是木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶 等单一或两种合用的生物酶水解，其水解度与氨基态氮含量都较低，生产原料消耗与成本 高，鲜味与风味一般。国外日本与丹麦等国家对酵母水解也做很多研究，例如丹麦诺唯信公 司应用碱性蛋白酶或复合蛋白酶与风味酶于酵母水解效果较好，但价格高。综上所述，现市 场非常急需能全面满足水解度高、氨基态氮高、鲜风味佳、成本低等要求的酵母水解专用复 合酶。
发明内容
本发明的目的是针对酵母水解存在的水解原料受限、破壁率低、蛋白质利用率低、 水解度低、得率低、水解物质切点不佳等的技术问题，提供一种酵母水解专用复合酶及其制 备方法。本发明的技术方案是本发明人在深入研究传统自溶法与现代生物酶水解机理基础上，结合酵母的物质 分子结构特点，对能水解酵母的多种酶进行研究，发现了新的方法及工艺，也开拓了另一种思路。酵母属真菌，它的细胞包含多种多样的生物活性物质，蛋白质含量高达35 50%，较 其他动物蛋白原料如牛肉、猪肉等都高，含有大量的人体必需氨基酸，且氨基酸组成合理。 同时还含有丰富的维生素、矿物质和大量的谷胱甘肽、葡聚糖和甘露聚糖等，另外含有4 15%的核糖核酸(RNA)，但这些营养物质大多存在于酵母细胞内，且绝大部分蛋白质是不溶 性的，不能从细胞壁及细胞膜中渗出。所以必需借助科学的方法破坏细胞壁及细胞膜，使营 养物质裸露与释放出来，并使这些物质转化成具有鲜美味道与营养的有效成分。综观已有 的酵母分解法，由于他们采用的酶是单一的，或者是内切酶，或者是外切酶或者是风味酶， 对酵母物质分子结构没有针对性，对多种物质成分复合性没有有效与全面作用，因而分解 蛋白的效果较差，大部分不能完全将大分子的酵母蛋白变成目标的多肽和氨基酸，营养成 分不完全，更没有好的口感和风味。而本发明在所设定的温度、PH值和时间的条件下，通过 酵母水解专用复合酶中的β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶等耦合作用打开了酵母细胞 壁的复杂结构，切断其中稳定的物理化学键，使蛋白分子结构变得松散，非极性蛋白基团暴 露出来，有利于蛋白内切酶作用加快酵母蛋白水解；另外，在酵母水解专用复合酶中的内切 酶作用下，切断酵母蛋白大分子肽链内部的肽键，生成分子量较小的蛋白胨和多肽等中间 产物，然后由酵母水解专用复合酶中的外切酶把多肽中游离羧基末端和氨基末端逐一切断 肽键水解生成低分子小肽和生物活性氨基酸等物质，辅以风味酶辅助修饰作用，以获得营 养丰富、水解度高、功能性优及风味好的酵母水解产品。核糖核酸(RNA)在酵母水解专用复 合酶中的磷酸二酯酶的作用下主要生成5' —核苷酸呈味物质调控酵母水解液的香鲜味， 减少苦味使酵母蛋白水解产品的味道更好，香气更浓郁。以下是具体反应的酶解机理的化学反应式
H2N-CH-CChiNH-CH-CO-NH-CH-CO 厂 NH-CH-CO- ■ · NH-CH-COOH — ~-
I T I I 丁 I 丁 I
R1R2R.<R4Rn
外切酶内切酶外切酶
H2N-CH-C00H+H2N—CH-CO—NH-CH-C00H+H2N—CH-C00H+· · +H2N-CH-COOH
R1R2R3R4R
氨基酸肽氨基酸氨基酸本发明是这样实现的一种酵母水解专用复合酶，包括β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、内切酶、外切 酶、风味酶和磷酸二酯酶，按配方设计比例混合均勻得到酵母水解专用复合酶，其成份及其 重量份数为β -葡聚糖酶为1 30份，甘露聚糖酶为1 30份，糖化酶为1 30份，内 切酶为15 65份，外切酶为1 10份，风味酶为1 10份，磷酸二酯酶为1 10份。酵母水解专用复合酶的制备方法，是先将β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、内 切酶、外切酶、风味酶和磷酸二酯酶分别经过发酵、提取、冻干、粉碎，然后按配方设计比例 混合均勻得到酵母水解专用复合酶，其工艺操作过程为
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(1) β-葡聚糖酶的制备以大豆或豆粕或麦麸为原料，采用绿色木霉 (Trichoderma viride)菌种或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种按常规方法制备得到，保 存备用；(2)甘露聚糖酶的制备以大豆或豆粕或麦麸为原料，采用绿色木霉 (Trichoderma viride)菌种或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种按常规方法制备得到，保 存备用；(3)糖化酶的制备以大豆或豆粕或麦麸为原料，采用绿色木霉(Trichoderma viride)菌种或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种按常规方法制备得到，保存备用；(4)内切酶的制备以木瓜蛋白酶制备为例，从木瓜树或果实取下新鲜木瓜浆，先 用自来水或蒸馏水或去离子水冲稀或溶解木瓜乳胶，然后通过冻融提取，再经微滤、超滤浓 缩、真空冷冻干燥、粉碎得到木瓜蛋白酶，保存备用；中性蛋白酶、碱性蛋白酶的制备，按常 规方法经发酵提取得到；(5)外切酶的制备，以大豆或豆粕或麦麸为原料，粉碎，灭菌，加入米曲霉 (Aspergillus oryzae)或米根霉(Rhizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)菌禾中， 在30 50°C、70 90%的湿度条件下发酵1 5天，然后提取、微滤、超滤、冻干、粉碎得 到，保存备用；(6)风味酶的制备，以大豆或豆粕或麦麸为原料，粉碎，灭菌，加入毛霉 (Actinomucor elegans)、米曲霉(Aspergillus oryzae)等菌种，在 25 45°C、70 90% 的湿度条件下发酵1 4天，然后提取、微滤、超滤、冻干、粉碎得到，保存备用；(7)磷酸二酯酶的制备，以大豆或豆粕或麦麸为原料，粉碎，灭菌，加入桔青霉 (Penicillium citrinum)菌种，在25 45°C、70 90%的湿度条件下发酵1 4天，然后 提取、微滤、超滤、冻干、粉碎得到，保存备用；(8)将上述制备好的β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、内切酶、外切酶、风味酶 和磷酸二酯酶，按优化配方设计成份及其重量份数混合均勻得到酵母水解专用复合酶。以上所述的β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶，是通过绿色木霉(Trichoderma viride)菌种或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种发酵提取制备得到，其中β _葡聚糖酶 酶活力为1000 100000u/g，甘露聚糖酶酶活力为5000 200000u/g，糖化酶酶活力为 5000 200000u/g。以上所述的内切酶，包括木瓜酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物，混合比例为 0 5 0 5 0 5，其总酶活力为10000 800000u/g。以上所述的外切酶，包括米曲霉(Aspergillus orvzae)或米根霉(Rhizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)中的一种或多种菌种发酵提取制备得到的生物酶， 其酶活力为1000 50000u/g。以上所述的风味酶，包括毛霉(Actinomucor elegans)、米曲霉(Aspergillus oryzae)中的一种或两种菌种发酵提取制备得到的生物酶，其酶活力为1000 50000u/g。以上所述的磷酸二酯酶，是从桔青霉(Penicillium citrinum)菌种发酵提取得到 的磷酸二酯酶，其酶活力为1000 70000u/g。以上所述的酵母水解专用复合酶，其应用于酵母水解条件为将糖蜜酵母、啤酒酵 母、面包酵母或其他加工废酵母加水调到8 20%浓度，在4. 5 7. 0的PH值及45 70°C的温度下，按底物重量的0. 1 0. 6%添加本发明产品酵母水解专用复合酶，酶解10 25 小时，然后升温到85°C以上持续15分钟 1小时对水解液灭酶，再分离、浓缩、干燥，最后得 到酵母抽提物产品。以上所述的酵母水解专用复合酶，用于糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他生产 加工废酵母等酵母深加工，按水解条件水解，得到酵母水解液，检测水解液氨基酸含量大于 0. 83g/100ml，折干氨基态氮大于6. 73%，折干总氮大于12. 0 %，且具有很强的鲜味和浓郁 酱香味、很好的营养性及食品安全性，不需要外部添加核苷酸(I+G)等物质，不含对人体有 害物质。以上所述的酵母水解专用复合酶，适用于糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他生 产加工废酵母等酵母深加工的应用。以上所述的酵母水解专用复合酶，其酵母水解产品可用于生物发酵、调味品、肉类 食品加工、水产品加工、方便面调料、膨化食品及营养滋补品等方面。本发明的优点和积极效果1、本发明在传统自溶法与现代生物酶水解机理的基础上，结合酵母蛋白质的细胞 结构特点，用绿色木霉(Trichoderma viride)菌种或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种发 酵提取出适合酵母细胞破壁的β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶，以便有效地溶解酵母细 胞壁结构，使蛋白质有效释放出来。2、本发明从酵母物质结构特点及酶解机理角度筛选出适合酵母水解的内切蛋白 酶混合物，更有效地把经破壁后溶出的酵母蛋白质水解成肽类与氨基酸等物质。3、本发明从中国传统酱油生产的微生物中选用米曲霉(Aspergillus oryzae)或 米根霉(lihizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)等菌种诱变、发酵、提取、分离得 到蛋白质水解外切酶，外切酶分解小分子蛋白质及多肽等物质成短肽及氨基酸获得高的水 解度与氨基态氮。4、本发明从中国传统腐乳生产的微生物中选用毛霉(Actinomucor elegans)、米 曲霉(Aspergillus oryzae)等菌种诱变、发酵、提取、分离得到蛋白质水解风味酶，使酵母 水解在外切酶分解小分子蛋白质及多肽等物质成短肽及氨基酸获得高的水解度与氨基态 氮的同时，再辅以风味酶辅助修饰作用，以获得营养丰富、水解度高、功能性优及风味好的 酵母水解产品。5、本发明从酵母物质分子结构特点及酶解机理角度，从桔青霉(Penicillium citrinum)菌种诱变、发酵、提取、分离得到磷酸二酯酶，可分解酵母蛋白里的核糖核酸 (RNA)生成5'-核苷酸(I+G)呈味物质，使酵母水解产品鲜味更佳。6、本发明的酵母水解专用复合酶用于酵母水解，工艺由原来的细胞破壁工艺+蛋 白质水解工艺两步酶解法改进为一步酶解法，水解时间由原来两步时间总合达32小时缩 短至10 25小时，提高水解效率。7、本发明的酵母水解专用复合酶用于酵母水解，使酵母蛋白质利用率大于90 %， 氨基酸生成率75%以上。8、本发明的酵母水解专用复合酶用于酵母水解，各种生物酶共同耦合作用，使酵 母水解液氨基酸含量大于0. 83g/100ml，折干氨基态氮大于6. 73%，折干总氮大于12. 0%。9、本发明的酵母水解专用复合酶用于酵母水解，使酵母水解液核苷酸(I+G)含量高，具有很强的鲜味和浓郁酱香味、很好的营养性及食品安全性，不需要外部添加核苷酸 (I+G)等物质，不含对人体有害物质。10、本发明的酵母水解专用复合酶用于酵母水解，使酵母水解物质切点合理，营养 丰富，总氮含量高，具有很高的生物培养生长性，可替代牛肉膏作为生物发酵营养剂。11、本发明的酵母水解专用复合酶，适用于糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他 生产加工废酵母等酵母深加工，其酵母水解液可用于生物发酵、调味品、肉类食品加工、水 产品加工、方便面调料、膨化食品及营养滋补品等方面。
图1是本发明工艺流程示意图。
具体实施例方式为便于理解本发明，结合附图和具体实施例进行详细说明，但不应将各实施例看 做是对本发明的任何限制。酵母水解专用复合酶的制备，是将β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、内切酶、外 切酶、风味酶和磷酸二酯酶分别经过发酵、提取、冻干、粉碎，然后按优化配方设计比例混合 均勻得到酵母水解专用复合酶。具体方法是实施例1β-葡聚糖酶的制备以大豆为原料，粉碎，灭菌，加入绿色木霉(Trichoderma viride)菌种或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种，按常规方法发酵3天，然后提取、分离、 超滤、冻干，粉碎得到β-葡聚糖酶，保存备用。甘露聚糖酶的制备以大豆为原料，粉碎，灭菌，加入绿色木霉菌种(Trichoderma viride)或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种，按常规方法发酵3天，然后提取、分离、超滤、 冻干，粉碎得到甘露聚糖酶，保存备用。糖化酶的制备以大豆为原料，粉碎，灭菌，加入绿色木霉(Trichoderma viride) 菌种或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种，按常规方法发酵3天，然后提取、分离、超滤、冻 干，粉碎得到糖化酶，保存备用。内切酶的制备以木瓜蛋白酶制备为例，从木瓜树或果实取下新鲜木瓜浆，先用自 来水或蒸馏水或去离子水冲稀或溶解木瓜乳胶，然后通过冻融提取，再经微滤、超滤浓缩、 真空冷冻干燥、粉碎得到木瓜蛋白酶，密封保存备用。外切酶的制备以大豆为原料，粉碎，灭菌，加入米曲霉(Aspergillus oryzae)或 米根霉(Rhizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)菌种，在 30°C、90%的湿度条件 下发酵1天，然后提取、微滤、超滤、冻干、粉碎得到外切酶，保存备用。风味酶的制备以大豆为原料，粉碎，灭菌，加入毛霉(Actinomucor elegans)、米 曲霉(Aspergillus oryzae)等菌种，在25°C、70%的湿度条件下发酵1天，然后提取、微滤、 超滤、冻干、粉碎得到风味酶，保存备用。磷酸二酯酶的制备以大豆为原料，粉碎，灭菌，加入桔青霉(Penicillium citrinum)菌种，在25°C、70%的湿度条件下发酵1天，然后提取、微滤、超滤、冻干、粉碎得
到磷酸二酯酶酶，保存备用。
将上述的β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、内切酶、外切酶、风味酶和磷酸二酯 酶按重量份数5 10 17 38 10 10 10的比例，混合，得到酵母水解专用复合酶。本例产品采取紫外法进行酶活测定，其中β-葡聚糖酶酶活为17500u/g，甘露聚 糖酶酶活为70000u/g，糖化酶的酶活为115000u/g，内切酶的酶活为470000u/g，外切酶的 酶活为50000u/g，风味酶的酶活为50000u/g，磷酸二酯酶的酶活70000u/g，置于10°C保存， 十二个月保质。本实施例产品应用结果(1)水解糖蜜酵母先将糖蜜酵母加水调到8 20%的浓度，在4. 5 7. 0的PH 值及45 70°C的温度下，按底物重量的0. 1 0. 6%添加本实施例得到的产品酵母水解专 用复合酶，酶解10 25小时，结果见表1。表1 水解糖蜜酵母结果表
权利要求
1.一种酵母水解专用复合酶，其特征在于包括β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、内 切酶、外切酶、风味酶和磷酸二酯酶，其成份及其重量份数为β -葡聚糖酶为1 30份，甘 露聚糖酶为1 30份，糖化酶为1 30份，内切酶为15 65份，外切酶为1 10份，风 味酶为1 10份，磷酸二酯酶为1 10份。
2.根据权利要求1所述的酵母水解专用复合酶的制备方法，其特征在于先将β-葡 聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、内切酶、外切酶、风味酶和磷酸二酯酶分别经过发酵、提取、冻 干、粉碎，然后按配方设计比例混合均勻得到酵母水解专用复合酶，其工艺过程为(1)β-葡聚糖酶的制备以大豆或豆粕或麦麸为原料，采用绿色木霉(Trichoderma viride)菌种或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种按常规方法制备得到，保存备用；(2)甘露聚糖酶的制备以大豆或豆粕或麦麸为原料，采用绿色木霉(Trichoderma viride)菌种或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种按常规方法制备得到，保存备用；(3)糖化酶的制备以大豆或豆粕或麦麸为原料，采用绿色木霉(Trichoderma viride)菌种或黑曲霉(Aspergillus niger)菌种按常规方法制备得到，保存备用；(4)内切酶的制备，内切酶的制备，以木瓜蛋白酶制备为例，从木瓜树或果实取下新鲜 木瓜浆，先用自来水或蒸馏水或去离子水冲稀或溶解木瓜乳胶，然后通过冻融提取，再经微 滤、超滤浓缩、真空冷冻干燥、粉碎得到木瓜蛋白酶，保存备用；中性蛋白酶、碱性蛋白酶的 制备，按常规方法经发酵提取得到；(5)外切酶的制备，以大豆或豆粕或麦麸为原料，粉碎，灭菌，加入米曲霉(Aspergillus oryzae)或米根霉(Rhizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)菌种，在 30 50°C、 70 90%的湿度条件下发酵1 5天，然后提取、微滤、超滤、冻干、粉碎得到，保存备用；(6)风味酶的制备，以大豆或豆粕或麦麸为原料，粉碎，灭菌，加入毛霉(Actinomucor elegans)、米曲霉(Aspergillus oryzae)等菌种，在25 45°C、70 90%的湿度条件下发 酵1 4天，然后提取、微滤、超滤、冻干、粉碎得到，保存备用；(7)磷酸二酯酶的制备，以大豆或豆粕或麦麸为原料，粉碎，灭菌，加入桔青霉 (Penicillium citrinum)菌种，在25 45°C、70 90%的湿度条件下发酵1 4天，然后 提取、微滤、超滤、冻干、粉碎得到，保存备用；(8)将上述制备好的β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、内切酶、外切酶、风味酶和磷 酸二酯酶，按配方设计成份及其重量份数混合均勻得到酵母水解专用复合酶。
3.根据权利要求1所述的酵母水解专用复合酶，其特征在于所述的葡聚糖酶、甘 露聚糖酶、糖化酶，是通过绿色木霉菌种或黑曲霉菌种发酵制备提取得到，其中β -葡聚糖 酶酶活力为1000 100000u/g，甘露聚糖酶酶活力为5000 200000u/g，糖化酶酶活力为 5000 200000u/g。
4.根据权利要求1所述的酵母水解专用复合酶，其特征在于所述的内切酶，包括木瓜 酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物，混合比例为0 5 0 5 0 5，其总酶活力为 10000 800000u/g。
5.根据权利要求1所述的酵母水解专用复合酶，其特征在于所述的外切酶，包括米 曲霉或米根霉、黑曲霉中的一种或多种菌种发酵制备得到的生物酶，其酶活力为1000 50000u/g。
6.根据权利要求1所述的酵母水解专用复合酶，其特征在于所述的风味酶，包括毛霉、米曲霉菌中的一种或两种菌种发酵制备得到的生物酶，其酶活力为1000 50000u/g。
7.根据权利要求1所述的酵母水解专用复合酶，其特征在于所述的磷酸二酯酶，是从 桔青霉发酵物提取得到的磷酸二酯酶，其酶活力为1000 70000u/g。
8.根据权利要求1所述的酵母水解专用复合酶，其特征在于所述的酵母水解专用复 合酶，其应用于酵母水解条件为将糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他加工废酵母加水 调到8 20%浓度，在4. 5 7. 0的PH值及45 70°C的温度下，按底物重量的0. 1 0. 6% 添加上述酵母水解专用复合酶，酶解10 25小时，然后升温到85°C以上持续15分钟 1 小时对水解液灭酶，再分离、浓缩、干燥，最后得到酵母抽提物产品。
9.根据权利要求1所述的酵母水解专用复合酶，其特征在于所述的酵母水解专用 复合酶用于糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他生产加工废酵母等酵母深加工，按水解 条件水解，得到酵母水解液，检测水解液氨基酸含量大于0. 83g/100ml，折干氨基态氮大于 6. 73%，折干总氮大于12. 0%o
10.如权利要求1所述的酵母水解专用复合酶在糖蜜酵母、啤酒酵母、面包酵母或其他 生产加工废酵母等酵母深加工方面的应用。
11.如权利要求1所述的酵母水解专用复合酶的酵母水解产品在生物发酵、调味品、肉 类食品加工、水产品加工、方便面调料、膨化食品及营养滋补品方面的应用。
全文摘要
本发明公开了一种用于酵母水解专用复合酶及其制备方法，本复合酶包括的酶成份及其重量份数为β-葡聚糖酶为1～30份，甘露聚糖酶为1～30份，糖化酶为1～30份，内切酶为15～65份，外切酶为1～10份，风味酶为1～10份，磷酸二酯酶为1～10份。其制备方法是先将β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、糖化酶、内切酶、外切酶、风味酶和磷酸二酯酶分别经过发酵、提取、冻干、粉碎，然后按配方设计比例混合均匀得到酵母水解专用复合酶。由于在多种生物酶共同耦合水解作用，使酵母水解时间由传统的20～32小时缩短至10～25小时，蛋白质利用率大于90％，氨基酸生成率75％以上，氨基酸含量大于0.83g/100ml，折干总氮大于12.0％。
文档编号A23L1/221GK102115734SQ201010584810
公开日2011年7月6日 申请日期2010年12月13日 优先权日2010年12月13日
发明者刘汉灵, 黄月桂 申请人:南宁庞博生物工程有限公司