耐受除草剂的植物的制作方法

专利名称：耐受除草剂的植物的制作方法
耐受除草剂的植物
背景技术：
水稻是世界上(特别是亚洲)最重要的粮食作物之一。稻米是由稻属(Oryza)的植物产生的谷粒。两种最常栽培的物种是稻(Oryza sativa)和光稃稻(Oryzaglaberrima)，其中稻是最常栽培的驯化水稻。除了这两种驯化物种外，稻属还包括超过20种野生物种。这些野生物种之一，普通野生稻(Oryza rufipogon)( “红稻”,其也称为稻红芒亚种(Oryza sativa subsp. rufipogon)),在商业栽培中具有一个主要问题。红稻产生红色的被覆种子。在收获后，碾磨水稻种子以除去其谷壳。在碾磨后，驯化水稻是白色的，而野生红稻看起来脱了色。脱色的种子的存在降低了水稻作物的价值。由于红稻属于与栽培 水稻(稻(Oryza sativa))相同的物种，因此它们的遗传组成是非常相似的。该遗传相似性使红稻的除草剂控制变得困难。已经开发了耐受咪唑啉酮类除草剂的驯化水稻，并且目前以商品名CLEARFIELD 进行销售。咪唑啉酮类除草剂抑制植物的乙酰羟酸合酶(AHAS)。当栽培CLEARFIELD 水稻时，可以通过施用咪唑啉酮类除草剂来控制红稻和其他杂草。不幸的是，已经产生了耐受咪唑啉酮类除草剂的红稻。乙酰辅酶A羧化酶(ACCase ；EC 6. 4. I. 2)合成丙二酸单酰CoA作为植物叶绿体中脂肪酸从头合成途径的起始。禾草叶绿体中的ACCase是多功能的、由核基因组编码的、非常大的单多肽，其经由N-末端转运肽而被运输到质体中。禾草叶绿体中的活性形式为同聚体蛋白质，可能是同源二聚体。禾草中的ACCase被三种类别的除草活性成分所抑制。两种最普遍的类别是芳氧苯氧丙酸酯类(“F0P类(FOPs) ”)和环己烯酮类(“DM类(DIMs)”)。除了这两种类别夕卜，还已经描述了第三种类别，苯基吡唑啉类(“DEN类(DENs) ”)。在展示出对于一种或多种DM或FOP除草剂的耐受性的单子叶杂草物种中已经发现了众多的ACCase抑制剂耐受性(AIT)突变。而且，已经由BASF销售了 AIT玉米。所有此类突变均在ACCase的羧基转移酶结构域中被发现，并且这些突变看起来位于底物结合口袋中，从而改变了对催化位点的接近。DIMs和FOPs是重要的除草剂，并且如果能够提供展现出对这些类别的除草剂的耐受性的水稻，那将是有利的。目前，这些类别的除草剂在稻作农业中具有有限的价值。在一些情况下，诱导除草剂耐受性的突变在耐受性植物中产生严重的适合度惩罚(fitnesspenalty)。因此,在本领域中仍然存在有对于还不展示出适合度惩罚的AIT水稻的需要。这一需要和其他需要通过本发明而得到满足。发明简述本发明涉及耐受除草剂的植物，以及产生和处理耐受除草剂的植物的方法。在一个实施方案中，本发明提供了水稻植物，所述水稻植物耐受处于通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平的至少一种抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂。一般地，本发明的耐受除草剂的水稻植物表达这样的乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)，所述乙酰辅酶A羧化酶中的氨基酸序列不同于野生型水稻植物的乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列。按照惯例，单子叶植物ACCase氨基酸残基中的突变通常根据其在大穗看麦娘(Alopecurus myosuroides)(黑草)质体的单体ACCase序列(Genbank CAC84161. I)中的位置来称呼，并用(Am)标示。在其之处本发明的耐受除草剂的植物的乙酰辅酶A羧化酶不同于相应野生型植物的乙酰辅酶A羧化酶的这样的氨基酸位置的实例包括但不限于下列位置中的一个或多个1781(Am)、1785(Am)、1786(Am)、1811(Am)、1824(Am)、1864(Am)、1999(Am),2027(Am)、2039 (Am)、2041 (Am)、2049(Am)、2059(Am)、2074(Am)、2075 (Am)、2078 (Am)、2079 (Am)、2080 (Am) ,2081 (Am) ,2088 (Am) ,2095 (Am) ,2096 (Am)或 2O98 (Am)。在这些氨基酸位置处的差异的实例包括但不限于下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1824 (Am)处的氨基酸为除了谷氨酰胺之外的其他氨基酸；在位置1864(Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为除 了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为除了谷氨酸之外的其他氨基酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2049 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置2074(Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为除了天冬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为除了丝氨酸之外的其他氨基酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为除了赖氨酸之外的其他氨基酸；在位置2081 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2088 (Am)处的氨基酸为除了半胱氨酸之外的其他氨基酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为除了赖氨酸之外的其他氨基酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为除了甘氨酸之外的其他氨基酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸。在一些实施方案中，本发明提供了水稻植物，所述水稻植物表达包含这样的氨基酸序列的乙酰辅酶A羧化酶，所述氨基酸序列包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置1824(Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1864(Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置2049 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为缬氨酸；在位置2074 (Am)处的氨基酸为亮氨酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为甘氨酸或苏氨酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)处的氨基酸为精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为丙氨酸或丝氨酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸或丝氨酸。本发明还提供了产生耐受除草剂的植物的方法，和通过此类方法产生的植物。通过本发明的方法产生的植物的实例为耐受除草剂的水稻植物，其耐受处于通常会抑制所述植物生长的除草剂水平的至少一种抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂，其中所述耐受除草剂的植物通过下述方式来产生a)从不耐受所述除草剂的植物获得细胞；b)使所述细胞与包含一种或多种乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的培养基相接触；和c)从所述细胞产生耐受除草剂的植物。通过本发明的方法产生的耐受除草剂的植物包括但不限于，通过施行上述a)、b)和c)而产生的耐受除草剂的植物，和通过施行上述a)、b)和c)而产生的植物的后代。在一个实施方案中，用于实施该类型的方法的细胞将以愈伤组织的形式存在。本发明提供了植物，所述植物表达包含确定的氨基酸序列的乙酰辅酶A羧化酶。例如，本发明提供了水稻植物，其中所述水稻植物的基因组中的一个或多个编码这样的蛋白质，所述蛋白质包含SEQ ID NO :2和3之一或两者的经修饰形式，其中所述序列经修饰，从而所编码的蛋白质包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置1786 (Am)处的 氨基酸为脯氨酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置1824(Am)处的氨基酸 为脯氨酸；在位置1864 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置2049 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为缬氨酸；在位置2074 (Am)处的氨基酸为亮氨酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为甘氨酸或苏氨酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)处的氨基酸为精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为丙氨酸或丝氨酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸或丝氨酸。下面的

图19提供了大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶序列(SEQID NO:”、籼稻(印度稻)(Oryza sativa Indica)乙酰辅酶A羧化酶序列(SEQ ID NO 2)和粳稻(日本稻)(Oryza sativa Japonica)乙酰辅酶A羧化酶序列(SEQ ID NO 3)的比对，其中显示了这样的位置的实例，在所述位置处野生型序列可不同于所示的本发明序列。在另一个实施方案中，本发明包括根据布达佩斯条约保藏在可接受的保藏单位的种子，源自此类种子的细胞，从此类种子和源自此类种子的细胞生长出的植物，从此类种子生长出的植物的后代，以及源自此类后代的细胞。一般地，从所保藏的种子产生的植物和此类植物的后代的生长将会耐受处于通常会抑制相应野生型植物生长的除草剂水平的抑制乙酰辅酶A羧化酶的除草剂。在一个实施方案中，本发明提供了从由下述植物产生的种子生长出的水稻植物品系0sHPHI2、OsARffIU OsARff 13, OsARffI8或OsHPHNI中任一个品系的植物，每个品系的代表性种子样品已经分别以专利保藏指定编号PTA-10267、PTA-10568、PTA-10569、PTA-10570或PTA-10571保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110-2209,美国)，其中 PTA-IO267的保藏日期为 2009 年 8 月 11 H ;PTA-10568、PTA-10569、PTA-10570 和 PTA-10571 的保藏 日期为2010年I月7日。本发明还包括从品系0sHPHI2、OsARffIU OsARff 13, OsARffI8或OsHPHNI中任一个品系的植物制备的突变体、重组体和/或基因工程衍生物，每个品系的代表性种子样品已经分别以专利保藏指定编号PTA-10267、PTA-10568、PTA-10569、PTA-10570或 PTA-10571 保藏于 ATCC ;以及从品系 0sHPHI2、0sARWIl、0sARWI3、0sARWI8 或 OsHPHNI 中任一个品系的植物生长或繁育出的植物的任何后代，每个品系的代表性种子样品已经分别以专利保藏指定编号 PTA-10267、PTA-10568、PTA-10569、PTA-10570 或 PTA-10571 保藏于ATCC，只要此类植物或后代具有从品系OsHPHI2、OsARWII、OsARWI3、OsARWI8或OsHPHNI中任一个品系的植物生长出的植物的除草剂耐受性特征，每个品系的代表性种子样品已经分别以专利保藏指定编号 PTA-10267、PTA-10568、PTA-10569、PTA-10570 或 PTA-10571 保藏于ATCC。本发明还包括从此类种子培养出的细胞，和从所述培养的细胞产生的植物及其后代。本发明的耐受除草剂的植物可以是稻这一物种的成员。一般地，本发明的耐受除草剂的植物耐受处于通常会抑制相应野生型植物(例如，水稻植物)生长的除草剂水平的芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合。在一些实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物不是GMO植物。本发明还提供了经诱变的耐受除草剂的植物，例如经诱变的水稻植物。本发明还包括源自上面所描述的耐受除草剂的植物的植株和种子的细胞。·
本发明提供了用于控制杂草生长的方法。在一个实施方案中，本发明提供了在水稻植物附近控制杂草生长的方法。此类方法可以包括向杂草和水稻植物施用一定量的抑制乙酰辅酶A羧化酶的除草剂(其抑制天然出现的乙酰辅酶A羧化酶活性)，其中所述水稻植物包含经改变的乙酰辅酶A羧化酶活性，从而所述水稻植物耐受所施用的量的除草剂。本发明的方法可以用任何干扰乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂来实施，所述除草剂包括但不限于芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合。本发明提供了用于在水稻植物附近控制杂草生长的方法。此类方法的一个实例可以包括以通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平向所述杂草和向所述水稻植物施用一种或多种除草剂，其中至少一种除草剂抑制乙酰辅酶A羧化酶活性。此类方法可以用任何抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂来实施。可以在控制杂草的方法的实施中使用的除草剂的合适实例包括但不限于，芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合。本发明包括用于控制杂草生长的方法。此类方法的一个实例可以包括(a)使耐受除草剂的水稻植物与其他水稻种质杂交，并且收获所得到的杂种水稻种子；(b)种植所述杂种水稻种子；和(C)以通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平，向所述杂种水稻和向处于所述杂种水稻附近的杂草施用一种或多种抑制乙酰辅酶A羧化酶的除草剂。此类方法可以用任何抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂来实施。可以在控制杂草的方法的实施中使用的除草剂的合适实例包括但不限于，芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合。在另一个实施方案中，本发明包括用于选择耐受除草剂的水稻植物的方法。此类方法的一个实例可以包括(a)使耐受除草剂的水稻植物与其他水稻种质杂交，并且收获所得到的杂种水稻种子；(b)种植所述杂种水稻种子；和(C)以通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平，向所述杂种水稻施用一种或多种除草剂，其中所述除草剂中的至少一种抑制乙酰辅酶A羧化酶；和(d)从向其已施用了除草剂的水稻植物收获种子。此类方法可以用任何抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂来实施。可以在控制杂草的方法的实施中使用的除草剂的合适实例包括但不限于，芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合。本发明还包括用于使耐受除草剂的水稻植物生长的方法。此类方法的一个实例包括(a)种植水稻种子；(b)让所述水稻种子发芽；(C)以通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平，向所述水稻籽苗施用一种或多种除草剂，其中所述除草剂中的至少一种抑制乙酰辅酶A羧化酶。此类方法可以用任何抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂来实施。可以在控制杂草的方法的实施中使用的除草剂的合适实例包括但不限于，芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合。在一个实施方案中，本发明提供了耐受除草剂的水稻植物的种子。此类种子可以用于生长出耐受除草剂的水稻植物，其中从所述种子生长出的植物耐受处于通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平的至少一种抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂。从本发明的种子生长出的植物所将会耐受的除草剂的实例包括但不限于，芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环 己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合。在另一个实施方案中，本发明提供了水稻植物的种子，其中从所述种子生长出的植物表达这样的乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)，所述乙酰辅酶A羧化酶中的氨基酸序列在下列位置中的一个或多个位置处不同于野生型水稻植物的乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列1781 (Am)、1785(Am)、1786(Am)、1811(Am)、1824(Am)、1864(Am)、1999(Am),2027(Am)、2039(Am),2041(Am),2049(Am),2059(Am),2074(Am),2075(Am),2078(Am),2079(Am)、
2080(Am) ,2081 (Am) ,2088 (Am) ,2095 (Am) ,2096 (Am)或 2O98 (Am)。在这些氨基酸位置处的差异的实例包括但不限于下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1824 (Am)处的氨基酸为除了谷氨酰胺之外的其他氨基酸；在位置1864(Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为除了谷氨酸之外的其他氨基酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2049 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置2074(Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为除了天冬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为除了丝氨酸之外的其他氨基酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为除了赖氨酸之外的其他氨基酸；在位置2081 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2088 (Am)处的氨基酸为除了半胱氨酸之外的其他氨基酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为除了赖氨酸之外的其他氨基酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为除了甘氨酸之外的其他氨基酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸。在一些实施方案中，从所述种子生长出的植物表达包含这样的氨基酸序列的乙酰辅酶A羧化酶，所述氨基酸序列包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置1824(Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1864(Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置2049 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为缬氨酸；在位置
2074(Am)处的氨基酸为亮氨酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为甘氨酸或苏氨酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)处的氨基酸为精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为丙氨酸或丝氨酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸或丝氨酸。本发明包括特别的耐受除草剂的栽培种的种子。此类种子的一个实例是水稻栽培种Indical的种子，其中所述栽品种的代表性种子样品以ATCC登录号PTA-10267、PTA-10568,PTA-10569或PTA-10570进行了保藏。此类种子的另一个实例是耐受除草剂的Nipponbare栽品种的种子，其中所述栽品种的代表性种子样品以ATCC登录号PTA-10571进 行了保藏。本发明还包括通过使所述种子生长而产生的水稻植物或其部分，以及从所述种子产生的细胞的组织培养物。细胞的组织培养物可以从种子直接产生，或者从由种子生长出的植物的部分产生，例如从叶、花粉、胚、子叶、下胚轴、分生细胞、根、根尖、雌蕊、花药、花和/或茎产生。本发明还包括从细胞的组织培养物产生的植物及其后代。一般地，此类植物将会具有栽品种Indical的所有形态学和生理学特征。本发明还提供了用于产生水稻种子的方法。此类方法可以包括使耐受除草剂的水稻植物与其他水稻种质杂交；并且收获所得到的杂种水稻种子，其中所述耐受除草剂的水稻植物耐受处于通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平的芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合。本方法还包括产生Fl杂种水稻种子的方法。此类方法可以包括使耐受除草剂的水稻植物与不同的水稻植物杂交；并且收获所得到的Fl杂种水稻种子，其中所述耐受除草剂的水稻植物耐受处于通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平的芳氧苯氧丙酸酯类除草齐U、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合。本方法还包括产生Fl杂种植物的方法。此类方法可以包括使耐受除草剂的植物与不同的植物杂交；并且收获所得到的Fl杂种种子并使所得到的Fl杂种植物生长，其中所述耐受除草剂的植物耐受处于通常会抑制植物生长的除草剂水平的芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合。本发明还提供了产生可以还包含转基因的耐受除草剂的水稻植物的方法。此类方法的一个实例可以包括用转基因转化水稻植物的细胞，其中所述转基因编码乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶赋予对至少一种选自芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合的除草剂的耐受性。在本发明的方法的实施中可以使用任何合适的细胞，例如，所述细胞可以以愈伤组织的形式存在。在一些实施方案中，所述转基因可以包含这样的核酸序列，所述核酸序列编码包含SEQ ID NO :2和3之一或两者的经修饰形式的氨基酸序列，其中所述序列经修饰，从而所编码的蛋白质包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸；在位置
1785(Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置1824(Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1864(Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置2049 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为缬氨酸；在位置2074 (Am)处的氨基酸为亮氨酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为甘氨酸或苏氨酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2080 (Am)处 的氨基酸为谷氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)处的氨基酸为精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为丙氨酸或丝氨酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸或丝氨酸。本发明还包括通过此类方法产生的植物。产生包含转基因的耐受除草剂的植物的方法的另一个实例可以包括用编码赋予除草剂耐受性的酶的转基因转化水稻植物的细胞，其中所述细胞产生自表达乙酰辅酶A羧化酶的水稻植物或其种子，所述乙酰辅酶A羧化酶赋予对至少一种选自芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合的除草剂的耐受性。在本发明的方法的实施中可以使用任何合适的细胞，例如，所述细胞可以以愈伤组织的形式存在。本发明还包括通过此类方法产生的耐受除草剂的植物。在一个实施方案中，本发明包括产生重组体植物的方法。用于产生重组体水稻植物的方法的一个实例可以包括用转基因转化水稻植物的细胞，其中所述细胞产生自表达乙酰辅酶A羧化酶的水稻植物,所述乙酰辅酶A羧化酶赋予对至少一种选自芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合的除草剂的耐受性。在本发明的方法的实施中可以使用任何合适的细胞，例如，所述细胞可以以愈伤组织的形式存在。用于在本发明的方法中使用的转基因可以包含任何所希望的核酸序列，例如，所述转基因可以编码蛋白质。在一个实例中，所述转基因可以编码酶，例如，改变脂肪酸代谢和/或碳水化合物代谢的酶。合适的酶的实例包括但不限于，果糖基转移酶、果聚糖蔗糖酶、α-淀粉酶、转化酶和淀粉分支酶，或编码硬脂酰-ACP去饱和酶的反义的酶。本发明还包括通过本发明的方法产生的重组体植物。本发明的方法可以用于产生具有任何所希望的性状的植物，例如水稻植物。此类方法的一个实例包括(a)使耐受处于通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平的芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合的水稻植物与包含所希望的性状的另一水稻栽品种的植物杂交，以产生后代植物；(b)选择一个或多个具有所希望的性状的后代植物，以产生经选择的后代植物；(C)使所选择的后代植物与耐受除草剂的植物杂交，以产生回交后代植物；(d)选择具有所希望的性状和除草剂耐受性的回交后代植物；和(e)相继地重复步骤(C)和(d)三次或更多次，以产生经选择的包含所希望的性状和除草剂耐受性的第四代或更高代的回交后代植物。使用本发明的方法，可以引入任何所希望的性状。可以希望的性状的实例包括但不限于，雄性不育，除草剂耐受性，干旱耐受性，昆虫抗性，改变的脂肪酸代谢，改变的碳水化合物代谢，和对于细菌性疾病、真菌性疾病或病毒性疾病的抗性。用于产生雄性不育水稻植物的方法的一个实例可以包括用赋予雄性不育的核酸分子转化水稻植物，所述水稻植物耐受处于通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平的至少一种抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂。本发明还包括通过此类方法产生的雄性不育植物。本发明提供了包含植物细胞(例如来自水稻植物的细胞)的组合物。此类组合物的一个实例包含水稻植物的一个或多个细胞；和水性培养基，其中所述培养基包含抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的化合物。在一些实施方案中，所述细胞可以源自耐受处于通常会抑制水稻植物生长的除草剂水平的芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂或其组合的水稻植物。在本发明的组合物中可以使用任何抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的化合物，例如芳氧苯氧丙酸酯类除草剂、环己烯酮类除草剂、苯基吡唑啉类除草剂和其组合中的一种或多种。
本发明包括编码乙酰辅酶A羧化酶的全部或部分的核酸分子。在一些实施方案中，本发明包括编码水稻乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)的重组的、经诱变的、合成的和/或分离的核酸分子，在所述水稻乙酰辅酶A羧化酶中的氨基酸序列在下列位置中的一个或多个位置处不同于野生型水稻植物的乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列1781 (Am) ,1785 (Am)、1786(Am)、1811(Am)、1824(Am)、1864(Am)、1999(Am),2027 (Am),2039(Am),2041 (Am)、2049 (Am)、2059(Am)、2074 (Am)、2075 (Am)、2078(Am)、2079(Am)、2080(Am)、2081 (Am)、2088 (Am) ,2095 (Am) ,2096 (Am)或2098 (Am)。在这些氨基酸位置处的差异的实例包括但不限于下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1824 (Am)处的氨基酸为除了谷氨酰胺之外的其他氨基酸；在位置1864 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为除了谷氨酸之外的其他氨基酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2049 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置
2074(Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为除了天冬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为除了丝氨酸之外的其他氨基酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为除了赖氨酸之外的其他氨基酸；在位置2081 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2088 (Am)处的氨基酸为除了半胱氨酸之外的其他氨基酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为除了赖氨酸之外的其他氨基酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为除了甘氨酸之外的其他氨基酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸。在一些实施方案中，本发明的核酸分子可以编码包含这样的氨基酸序列的乙酰辅酶A羧化酶，所述氨基酸序列包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置1824(Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1864 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置2049 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为缬氨酸；在位置2074 (Am)处的氨基酸为亮氨酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为甘氨酸或苏氨酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)处的氨基酸为精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为丙氨酸或丝氨酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸或丝氨酸。在一些实施方案中，本发明包括重组的、经诱变的、合成的和/或分离的核酸，其编码这样的蛋白质，所述蛋白质包含SEQ ID NO :2和3之一或两者的经修饰形式的全部或部分，其中所述序列经修饰，从而所编码的蛋白质包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置1824(Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1864(Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置2049 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为 缬氨酸；在位置2074 (Am)处的氨基酸为亮氨酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为甘氨酸或苏氨酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)处的氨基酸为精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为丙氨酸或丝氨酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明提供了耐受除草剂的BEP进化枝(clade)植物。一般地，此类植物是具有相比于该植物的野生型品种而言增加的对ACCase抑制剂(ACCI)的耐受性的植物。此类植物可以通过包含下列步骤的过程来产生(I)要么，下述步骤(a)提供具有第一的、零或非零的ACCI耐受性水平的BEP进化枝植物细胞；(b)在与培养基接触下使所述细胞生长以形成细胞培养物；(c)使所述培养物的细胞与ACCI相接触；(d)使来自步骤(C)的与ACCI接触的细胞生长以形成这样的培养物，所述培养物包含具有大于步骤(a)的第一水平的ACCI耐受性水平的细胞；和(e)从步骤(d)的耐受ACCI的细胞产生具有大于该植物的野生型品种的ACCI耐受性水平的植物；(II)要么，下述步骤(f)提供第一的耐受除草剂的BEP进化枝植物(具有相比于该植物的野生型品种而言增加的对ACCase抑制剂(ACCI)的耐受性)，所述耐受除草剂的植物已经通过包括步骤(a)-(e)的过程而产生；和(g)从第一植物产生第二的耐受除草剂的BEP进化枝植物，其保留了第一植物的增加的除草剂耐受性特征；由此获得耐受除草剂的BEP进化枝植物。在一个实施方案中，本发明的耐受除草剂的BEP进化枝植物是BET亚进化枝(subclade)植物。
在一个实施方案中，本发明的耐受除草剂的BET亚进化枝植物是BET作物植物。在一个实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物可以是竹亚科(Bambusoideae)-稻亚科(Ehrhartoideae)亚进化枝的成员。在本发明的实施中可以使用任何合适的用于使植物细胞生长的培养基。在一些实施方案中，所述培养基可以包含诱变齐U，而在其他实施方案中，所述培养基不包含诱变剂。在一些实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物可以是稻亚科的成员。在本发明的实施中可以使用任何合适的细胞，例如，所述细胞可以以愈伤组织的形式存在。在一些实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物可以是稻属的成员，例如可以是稻这一物种的成员。本发明包括通过上述方法产生的耐受除草剂的BEP进化枝植物。此类耐受除草剂的植物可以表达这样的乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)，所述乙酰辅酶A羧化酶中的氨基酸序列在下列位置中的一个或多个位置处不同于相应野生型BEP进化枝植物的乙酰辅酶A 羧化酶的氨基酸序列1781 (Am)、1785 (Am)、1786 (Am) ,1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、1999 (Am),2027 (Am),2039(Am),2041 (Am),2049(Am),2059(Am),2074(Am),2075 (Am)、2078(Am)、2079(Am)、2080(Am)、2081(Am)、2088(Am)、2095(Am)、2096(Am)或 2098(Am)。在这些氨基酸位置处的差异的实例包括但不限于下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1824(Am)处的氨基酸为除了谷氨酰胺之外的其他氨基酸；在位置1864 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为除了谷氨酸之外的其他氨基酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2049 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置2074(Am)处的氨基酸为除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为除了天冬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为除了丝氨·酸之外的其他氨基酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为除了赖氨酸之外的其他氨基酸；在位置2081(Am)处的氨基酸为除了异亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2088 (Am)处的氨基酸为除了半胱氨酸之外的其他氨基酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为除了赖氨酸之外的其他氨基酸；在位置2096(Am)处的氨基酸为除了甘氨酸之外的其他氨基酸；或者在位置2098(Am)处的氨基酸为除了缬氨酸之外的其他氨基酸。在一些实施方案中，本发明的耐受除草剂的BEP进化枝植物可以表达包含这样的氨基酸序列的乙酰辅酶A羧化酶，所述氨基酸序列包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置1824(Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1864 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置2049 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为缬氨酸；在位置2074 (Am)处的氨基酸为亮氨酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为甘氨酸或苏氨酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)处的氨基酸为精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为丙氨酸或丝氨酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明还包括由于相比于相应野生型ACCase而言在其质体ACCase中具有仅一个置换而耐受ACCase抑制剂的水稻植物。在另外一个实施方案中，本发明包括由于相比于相应野生型ACCase而言在其质体ACCase中具有两个或更多个置换而耐受ACCase抑制剂的水稻植物。在一个实施方案中，本发明提供了由于相比于相应野生型ACCase而言在其质体ACCase中具有两个或更多个置换而耐受ACCase抑制剂的水稻植物，其中所述置换处于选 自下列的氨基酸位置处1781 (Am)、1785 (Am)、1786 (Am) ,1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、1999(Am)、2027 (Am)、2039(Am)、2041 (Am)、2049(Am)、2059(Am)、2074(Am)、2075(Am)、2078(Am),2079(Am),2080(Am),2081(Am),2088(Am),2095(Am),2096 (Am)或 2098(Am)。在一个实施方案中，本发明提供了水稻植物，其中所述水稻植物包含不是转基因的质体ACCase。在一个实施方案中，本发明提供了植物，其中所述植物包含是转基因的水稻质体 ACCase。在一个实施方案中，本发明提供了用于在本文所描述的水稻植物附近控制杂草生长的方法，其包括向所述杂草和水稻植物施用一定量的抑制乙酰辅酶A羧化酶的除草剂(其抑制天然出现的乙酰辅酶A羧化酶活性)，其中所述水稻植物包含经改变的乙酰辅酶A羧化酶活性，从而所述水稻植物耐受所施用的量的除草剂。在一个实施方案中，本发明提供了用于产生种子的方法,其包括(i)种植从本发明的植物产生的种子，(ii)使来自所述种子的植物生长，和(iii)从所述植物收获种子。本发明还包括通过下述过程而产生的耐受除草剂的BEP进化枝植物(a)使从如上面所描述那样产生的耐受除草剂的BEP进化枝植物的种子生长出的植物与其他种质杂交或回交；(b)在至少一种通常抑制乙酰辅酶A羧化酶的除草剂以通常会抑制植物生长的除草剂水平存在下，使由所述杂交或回交而得到的植物生长；和(c)选择进一步的由所述杂交或回交而得到的繁殖植物，其中所选择的植物是在所述除草剂存在下生长而没有显著损伤的植物。本发明还包括重组的、经诱变的、合成的和/或分离的核酸分子，其包含编码在禾本科(Poaceae) BEP进化枝中的植物的经诱变的乙酰辅酶A羧化酶的核苷酸序列，其中所述经诱变的乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列在下列位置中的一个或多个位置处不同于相应野生型植物的乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列1781 (Am)、1785 (Am)、1786 (Am)、1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、1999 (Am)、2027 (Am)、2039(Am)、2041 (Am)、2049(Am)、2059(Am)、
2074(Am)、2075(Am)、2078(Am)、2079(Am)、2080(Am)、2081 (Am)、2088(Am)、2095(Am)、2096(Am)或2098 (Am)。此类核酸分子可以通过包含下列步骤的过程来产生(I)要么，下述步骤(a)提供具有第一的、零或非零的ACCase抑制剂(ACCI)耐受性水平的BEP进化枝植物细胞；(b)在与培养基接触下使所述细胞生长以形成细胞培养物；(c)使所述培养物的细胞与ACCI相接触；(d)使来自步骤(C)的与ACCI接触的细胞生长以形成这样的培养物，所述培养物包含具有大于步骤(a)的第一水平的ACCI耐受性水平的细胞；和(e)从步骤(d)的耐受ACCI的细胞产生具有大于该植物的野生型品种的ACCI耐受性水平的植物；(II)要么，下述步骤(f)提供第一的耐受除草剂的BEP进化枝植物(具有相比于该植物的野生型品种 而言增加的对ACCase抑制剂(ACCI)的耐受性)，所述耐受除草剂的植物已经通过包括步骤(a)-(e)的过程而产生；和(g)从第一植物产生第二的耐受除草剂的BEP进化枝植物，其保留了第一植物的增加的除草剂耐受性特征；由此获得耐受除草剂的BEP进化枝植物；并且从所述耐受除草剂的BEP进化枝植物中分离核酸。在一个实施方案中，本发明包括筛选、分离、鉴定和/或表征单子叶植物质体ACCase中的耐受除草剂的突变的方法。在一个实施方案中，本发明包括愈伤组织或植物细胞系的用途。在其他实施方案中，本发明包括在组织培养环境中进行植物材料或细胞的培养。在另外其他实施方案中，本发明包括在组织培养环境中尼龙膜的存在。在其他实施方案中，所述组织培养环境包括液相培养基，而在其他实施方案中，所述环境包括半固体培养基。在另外其他实施方案中，本发明包括在液体培养基中在除草剂(例如，噻草酮)存在下培养植物材料，随后为在具有除草剂的半固体培养基中进行培养。在另外其他实施方案中，本发明包括在半固体培养基中在除草剂存在下培养植物材料，随后为在具有除草剂的液体培养基中进行培养。在一些实施方案中，本发明包括直接施用致死剂量的除草剂(例如，噻草酮)。在其他实施方案中，本发明包括从亚致死剂量开始，逐步增加除草剂剂量。在其他实施方案中，本发明在一个步骤中或者同时地包括至少一种，至少两种，至少三种，至少四种，至少五种，至少六种，至少七种，至少八种或更多种除草剂。在其他实施方案中，通过将突变型耐受除草剂的克隆的数目除以在实验中所使用的独个愈伤组织的数目来决定突变频率。在一些实施方案中，本发明包括至少O. 03%或更高的突变频率。在一些实施方案中，本发明包括至少O. 03%，至少O. 05%，至少O. 10%，至少O. 15%，至少O. 20%，至少O. 25%，至少O. 30%，至少O. 35%，至少O. 40%或更高的突变频率。在其他实施方案中，本发明包括这样的突变频率，其为其他的筛选、分离、鉴定和/或表征单子叶植物质体ACCase中的耐受除草剂的突变的方法的至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少6倍，至少7倍，至少8倍，至少9倍，至少10倍或更高。在一些实施方案中，本发明的方法包括鉴定ACCase中的耐受除草剂的突变。在进一步的实施方案中，本发明包括在单子叶植物细胞中重演所述耐受除草剂的突变。在一些实施方案中，本发明包括分离的细胞或组织，所述具有植物来源的细胞或组织具有a)源自宿主ACCase (B卩，内源的)基因的ACCase活性的缺陷；和b)来自源于单子叶植物的质体ACCase基因的ACCase活性。
ACCase的单子叶植物来源在其他实施方案中，本发明包括来自本文所描述的单子叶植物科植物的质体ACCase或其部分。在其他实施方案中，本发明包括在宿主植物细胞中筛选单子叶植物质体ACCase的耐受除草剂的突变体。在其他实施方案中，本发明包括使用所制备的宿主细胞来筛选单子叶植物质体ACCase的耐受除草剂的突变体。在一些实施方案中，本发明提供了没有质体ACCase活性的宿主细胞。在其他实施方案中，本发明的宿主细胞表达对除草剂敏感的单子叶植物质体ACCase0在其他实施方案中，本发明的方法包括由于基因组质体ACCase基因的突变而在ACCase活性方面缺陷的宿主细胞，所述突变包括单点突变、多点突变、部分缺失、部分敲除、完全缺失和完全敲除。在另一个实施方案中，使用其他分子生物学技术(例如RNAi、siRNA·或反义RNA)来降低或消除基因组质体ACCase活性。此类分子生物学技术是本领域众所周知的。在另外其他实施方案中，可以通过ACCase的代谢抑制剂来降低或消除源于基因组ACCase的活性。在一些实施方案中，所述宿主细胞是单子叶植物宿主细胞。在另外其他实施方案中，本发明包括制备转基因植物细胞的方法，其包括a)分离具有单子叶植物来源的细胞；b)使至少一个拷贝的基因组ACCase基因失活；c)给所述细胞提供源于单子叶植物的质体ACCase基因；d)分离包含所述源于单子叶植物的质体ACCase基因的细胞；和任选地，e)使至少另外拷贝的基因组ACCase基因失活，其中所述细胞在由基因组ACCase基因所提供的ACCase活性方面是缺陷的。在一个实施方案中，耐受噻草酮的突变频率大于O. 03%。在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选的方法，其中耐受噻草酮的植物细胞或组织还耐受其他ACCase抑制剂。在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选的方法，其中耐受噻草酮的植物细胞或组织包含仅一个在除草剂存在下进行培养之前在该单子叶植物质体ACCase中不存在的突变。在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选的方法，其中耐受噻草酮的植物细胞或组织包含两个或更多个在除草剂存在下进行培养之前在该单子叶植物质体ACCase中不存在的突变。在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选的方法，其中噻草酮以亚致死剂量存在。在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选的方法，其中在噻草酮存在下进行的培养在逐步或逐渐增加噻草酮浓度的情况下施行。在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选的方法,其中所述方法包括在膜上培养细胞。在优选的实施方案中，本发明提供了用于筛选的方法，其包括在尼龙膜上培养细胞。在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选耐受噻草酮的植物细胞的方法，其中细胞的培养在液体培养基或半固体培养基中进行。
在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选的方法，其中所述方法还包括鉴定至少一个在噻草酮存在下进行培养之前在外源单子叶植物质体ACCase中不存在的突变。在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选的方法，其中所述单子叶植物是水稻。在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选的方法，其中所述外源单子叶植物ACCase来自水稻。附图简述图I为柱状图，其显示了在不同的除草剂选择水平存在下生长的源自籼稻的水稻愈伤组织的相对生长。图IA显示了用吡喃草酮获得的结果，图IB显示了用烯禾定获得的结果，和图IC显示了用噻草酮获得的结果。图2为用于产生耐受除草剂的水稻植物的选择过程的图解。
图3显示了在用除草剂处理后一周获取的植物的照片。图4显示了在用除草剂处理后两周获取的植物的照片。图5提供了来自大穗看麦娘的乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列(GenBank登录号CAC84161)。图6提供了编码来自大穗看麦娘的乙酰辅酶A羧化酶的mRNA (GenBank登录号AJ310767 区域157. · 7119) (SEQ ID NO 4)。图7A提供了籼稻和粳稻乙酰辅酶A羧化酶基因的基因组核苷酸序列(SEQ ID NO 5)。图7B提供了编码籼稻和粳稻乙酰辅酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 6)。图7C提供了籼稻乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO :3)。图8A提供了编码玉蜀黍(Zea mays)乙酰辅酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 11)。图8B提供了玉蜀黍乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID N0:12)。图9A提供了编码玉蜀黍乙酰辅酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 13)。图9B提供了玉蜀黍乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID N0:14)。图IOA提供了编码普通小麦(Triticum aestivum)乙酰辅酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 15)。图IOB提供了普通小麦乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 16)。图IlA提供了编码小米(Setaria italica)乙酰辅酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQID NO 17)。图IlB提供了小米乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 18)。图12A提供了编码小米乙酰辅酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 19)。图12B提供了小米乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 20)。图13A提供了编码小米乙酰辅酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 21)。图13B提供了小米乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 22)。图14A提供了编码大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 23)。图14B提供了大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 24)。图15A提供了编码节节麦(Aegilops tauschii)乙酰辅酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 25)。
图15B提供了节节麦乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 26)。图16提供了单突变体和双突变体的比较。图17提供了图，其显示了突变型水稻对于各种ACCase抑制剂的结果。图18提供了大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶氨基酸序列(GenBank登录号CAC84161)。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中可以改变的氨基酸以粗体双下划线标示出。图19提供了与大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶相比对的野生型稻乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列，其中标明了一些关键残基。发明详述定义 如本文中所使用的，“耐受…的”或“耐受除草剂的”是指在通常在非耐受性(例如，野生型)植物或其部分中引起生长抑制的除草剂量存在下能够生长的植物或其部分。通常抑制非耐受性植物生长的除草剂水平是已知的，并且可由本领域技术人员容易地确定。实例包括由制造商推荐用于施用的量。最大比率是通常会抑制非耐受性植物生长的除草剂量的实例。如本文中所使用的，“重组体”是指具有来自不同来源的遗传物质的生物。如本文中所使用的，“经诱变的”是指具有相比于相应野生型生物而言经改变的遗传物质的生物，其中所述遗传物质的改变通过人工作用来进行诱导和/或选择。可以用于产生经诱变的生物的人工作用的实例包括但不限于在亚致死浓度的除草剂(例如，乙酰辅酶A羧化酶抑制剂例如噻草酮或烯禾定)中进行植物细胞(例如，愈伤组织)的组织培养；用化学诱变剂处理植物细胞，并随后用除草剂(例如，乙酰辅酶A羧化酶抑制剂例如噻草酮或烯禾定)进行选择；或者用X-射线处理植物细胞，并随后用除草剂(例如，乙酰辅酶A羧化酶抑制剂例如噻草酮或烯禾定)进行选择。可以使用本领域中已知的任何方法来诱导突变。诱导突变的方法可以在遗传物质的随机位置处诱导突变，或者可以在遗传物质的特定位置处诱导突变(即，可以为定向诱变技术)。如本文中所使用的，“基因改造生物”(GMO)是其遗传特征已经通过插入来自另一来源生物的遗传物质而被改变的生物，或者保留了所插入的遗传物质的其后代。来源生物可以为不同的生物类型(例如，GMO植物可以包含细菌的遗传物质)，或者来自相同的生物类型(例如，GMO生物可以包含来自另一植物的遗传物质)。如本文中所使用的，“重组体”和“GM0”被认为是同义词，并且表明来自不同来源的遗传物质的存在；然而，“经诱变的”表明经改变的来自相应野生型生物的遗传物质，而不是来自另一来源生物的遗传物质。如本文中所使用的，“野生型”或“相应野生型植物”表示生物或其遗传物质的典型形式，正如它通常出现的那样，其区别于经诱变的和/或重组的形式。对于本发明，术语“耐受除草剂的”和“抗除草剂的”可互换使用，并且意在具有相等的含义和相等的范围。类似地，术语“除草剂耐受性”和“除草剂抗性”可互换使用，并且意在具有相等的含义和相等的范围。类似地，术语“耐受…的”和“抗…的”可互换使用，并且意在具有相等的含义和相等的范围。如本文中关于在其各种实施方案中有用的除草剂而使用的，诸如生长素除草剂(auxinic herbicide)、AHAS抑制剂、乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)抑制剂、PPO抑制剂、EPSPS抑制剂、咪唑啉酮类、磺酰脲类等的术语，是指那些在本领域中认可的在农艺学上可接受的除草剂活性成分(A. I.)。类似地，诸如杀真菌剂、杀线虫剂、杀虫剂等的术语，是指其他在本领域中认可的在农艺学上可接受的活性成分。当关于特定的突变型酶或多肽进行使用时，诸如“耐受除草剂的(HT) ”和“除草剂耐受性”的术语是指此类酶或多肽在通常会使所述酶或多肽的野生型(非突变型)形式的活性失活或抑制所述酶或多肽的野生型(非突变型)形式的活性的除草剂A. I.量存在下执行其生理学活性的能力。例如，当特别地关于AHAS酶或AHASL多肽进行使用时，它特别地是指耐受AHAS抑制剂的能力。AHAS抑制剂的类别包括，磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑并嘧啶类、磺酰基氨基羰基三唑啉酮类和嘧啶基氧基[硫代]苯甲酸酯类。如本文中所使用的，“后裔(descendant) ”是指任何代的植物。如本文中所使用的，“后代(progeny) ”是指第一代的植物。植物 本发明提供了耐受除草剂的禾本科(Poaceae)的单子叶植物。可以将禾本科分为两个主要的进化枝，包括竹亚科(Bambusoideae)、稻亚科(Ehrhartoideae)和早熟禾亚科(Pooideae)的进化枝(BEP进化枝)；和包括黍亚科(Panicoideae)、芦竹亚科(Arundinoideae)、虎尾草亚科(Chloridoideae)、假淡竹叶亚科(Centothecoideae)、Micrairoideae、三芒草亚科(Aristidoideae)和扁芒草亚科(Danthonioideae)的进化枝(PACCMAD进化枝)。竹亚科包括稻族(Oryzeae)。本发明涉及BEP进化枝的植物，特别是竹亚科和稻亚科的植物。一般地，本发明的植物由于表达下面所描述的本发明的乙酰辅酶A羧化酶而耐受至少一种抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂。BET进化枝包括竹亚科，稻亚科，和小麦组(Triticodae)，但不包括其他的早熟禾亚科的组。BET作物植物是作为BET亚进化枝的成员的为了粮食或饲草而培植的植物，例如大麦、玉米等。本发明还提供了商业上重要的耐受除草剂的单子叶植物，包括甘蔗(甘蔗属物种(Saccharum spp.),以及草坪草,例如草地早熟禾(Poa pratensis)(蓝草)、剪股颖属物种(Agrostis spp.)(剪股颖)、黑麦草属物种(Lolium spp.)(黑麦草)、羊茅属物种(Festucaspp.)(羊茅)、结缕草属物种(Zoysia spp.)(结缕草)、狗牙根属物种(Cynodon spp.)(百慕大草)、侧钝叶草(Stenotaphrum secunda turn)(圣奥古斯丁草)、雀稗属物种(Paspalumspp.)(巴哈草)、假俭草(Eremochloa ophiuroides)(百足草)、地經草属物种(Axonopusspp.)(地毪草)、指形垂穗草(Bouteloua dactyloides)(野牛草)和垂穗草属变种物种(Bouteloua var. spp.)(格兰马草)。在一个实施方案中，本发明提供了耐受除草剂的竹亚科植物。一般地，此类植物耐受一种或多种抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂。耐受除草剂的竹亚科植物的实例包括但不限于，青篱竹属(Arundinaria)、箣竹属(Bambusa)、丘斯夸竹属(Chusquea)、瓜多竹属(Guadua)和倭竹属(Shibataea)的那些。在一个实施方案中，本发明提供了耐受除草剂的稻亚科植物。一般地，此类植物耐受一种或多种抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂。耐受除草剂的稻亚科植物的实例包括但不限于，皱稃草属(Ehrharta)、假稻属(Leersia)、Microlaena、稻属(Oryza)和郝属(Zizania)的那些。在一个实施方案中，本发明提供了耐受除草剂的早熟禾亚科植物。一般地，此类植物耐受一种或多种抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂。耐受除草剂的早熟禾亚科植物的实例包括但不限于，小麦族(Triticeae)、燕麦族(Aveneae)、早熟禾族(Poeae)这些属的那些。在一个实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物是水稻植物。两种水稻物种是最常栽培的，稻(Oryza sativa)和光稃稻(Oryza glaberrima)。稻的许多亚种是商业上重要的，包括籼稻(稻印度亚种)(Oryza sativa subsp. indica)、粳稻(稻日本亚种)(Oryzasativa subsp. japonica)、稻爪卩圭亚种(Oryza sativa subsp. javanica)、稻粘性亚种(Oryza sativa subsp. glutinosa)(糯稻)、香稻组(Oryza sativa Aromatica group)(例如，巴斯马蒂(basmati))和稻(浮稻组)。本发明包括耐受除草剂的在所有上面提及的物种和亚种中的植物。在一个实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物是小麦植物。两种小麦物种是最常栽培的，普通小麦(Triticum aestivum)和圆锥小麦(Triticum turgidum)。许多其他物种是商业上重要的，包括但不限于，提莫非维小麦(Triticum timopheevii)、一粒小麦(Triticum monococcum)、苑可夫斯基小麦(Triticum zhukovskyi)和乌拉尔图小麦(Triticum urartu)以及其杂种。本发明包括耐受除草剂的在所有上面提及的 物种和亚种中的植物。在本发明中所包括的普通小麦的亚种的实例为，普通小麦(原亚种)(Triticum aestivum subsp. aestivum)、密穗小麦(Triticum aestivum subsp.compactum)、马卡小麦(Triticum aestivum subsp. macha)、瓦维洛夫小麦(Triticumaestivum subsp. vavilovii)、斯佩尔特小麦(Triticum aestivum subsp. spelta)和球粒小麦(Triticum aestivum subsp. sphaerococcum)。在本发明中所包括的圆维小麦的亚种的实例为，圆锥小麦(原亚种)(Triticum turgidum subsp. turgidum)、波斯小麦(Triticumturgidum subsp. carthlicum)、双粒小麦(Triticum turgidum subsp. dicoccon)、硬粒小麦(Triticum turgidum subsp. durum)、Triticum turgidum subsp. paleocolchicuna、波兰小麦(Triticum turgidum subsp. polonicum)、东方小麦(Triticum turgidum subsp.turanicum)和野生二粒小麦(Triticum turgidum subsp. dicoccoides)。在本发明中所包括的一粒小麦的亚种的实例为，一粒小麦(原亚种)(Triticum monococcum subsp.monococcum)矛口拟山羊草小麦(Triticum monococcum subsp. aegilopoides)。在本发明的一个实施方案中，小麦植物是普通小麦物种的成员，并且更特别地，是CDC Teal栽培种。在一个实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物是大麦植物。两种大麦麦物种是最常栽培的，大麦(Hordeum vulgare)和亚利桑那大麦(Hordeum arizonicum)。许多其他物种是商业上重要的，包括但不限于，布顿大麦草(Hordeum bogdanii)、短药大麦(Hordeumbrachyantherum)、短芒大麦(Hordeum brevisubulatum)、球莖大麦(Hordeum bulbosum)、丛毛大麦(Hordeum comosum)、平展大麦(Hordeum depressum)、短尾大麦(Hordeumintercedens)、芒颖大麦(Hordeum jubatum)、海滨大麦(Hordeum marinum)、海滨大麦(Hordeum marinum)、巾白氏大麦(Hordeum parodii)、小大麦(Hordeum pusillum)、草地大麦(Hordeum secalinum)和纯稃野大麦(Hordeum spontaneum)。本发明包括耐受除草剂的在所有上面提及的物种和亚种中的植物。在一个实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物是黑麦植物。商业上重要的物种包括但不限于，野黑麦(Secale sylvestre)、劲直黑麦(Secale strictum)、黑麦(Secalecereale)、瓦维洛夫黑麦(Secale vavilovii)、非洲黑麦(Secale africanum)、纤毛颖黑麦(Secale ciliatoglume)、古黑麦(Secale ancestrale)和山黑麦(Secale montanum)。本发明包括耐受除草剂的在所有上面提及的物种和亚种中的植物。在一个实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物是草坪植物。草坪草的许多商业上重要的物种包括，结缕草(Zoysia japonica)、匍匍剪股颖(Agrostis palustris)、草地早熟禾(Poa pratensis)、早熟禾(Poa annua)、马唐(Digitaria sanguinalis)、香附子(Cyperus rotundus)、短叶水娱蚁(Kyllinga brevifolia)、阿穆尔莎草(Cyperusamuricus)、力口拿大飞蓬(Erigeron canadensis)、天古月荽(Hydrocotyle sibthorpioides)、鸡眼草(Kummerowia striata)、地锦(Euphorbia humifusa)和耕地堇菜(Violaarvensis)。本发明包括耐受除草剂的在所有上面提及的物种和亚种中的植物。除了能够耐受抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂外，本发明的植物还能够耐受作用于其他生理学过程的除草剂。例如，本发明的植物可以耐受乙酰辅酶A羧化酶抑制剂，并且还耐受其他除草剂，例如酶抑制剂。本发明的植物可以耐受的其他酶抑制剂的实例包括但不限于，5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)的抑制剂例如草甘膦，乙酰羟酸合 酶(AHAS)的抑制剂例如咪唑啉酮类、磺酰脲类和磺酰胺类除草剂，以及谷氨酰胺合酶的抑制剂例如草铵膦。除了酶抑制剂外，本发明的植物还可以耐受具有其他作用方式的除草剂，例如，生长素除草剂例如2，4-D或麦草畏，叶绿素/类胡萝卜素色素抑制剂例如羟基苯基丙酮酸双加氧酶(HPPD)抑制剂或八氢番茄红素去饱和酶(ros)抑制剂，原卟啉原-IX氧化酶抑制剂，细胞膜破坏剂，光合作用抑制剂例如溴苯腈或碘苯腈，细胞分裂抑制剂，根抑制齐U，芽抑制剂，以及其组合。因此，可以使耐受乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的本发明的植物耐受多种类别的除草剂。例如，在一些实施方案中，耐受乙酰辅酶A羧化酶抑制剂例如“dim类”(例如，噻草酮、烯禾定、烯草酮或吡喃草酮)、“fop类”(例如，炔草酸、禾草灵、吡氟禾草灵、吡氟氯禾灵或喹禾灵)和“den类”(例如，唑啉草酯(pinoxaden))的本发明的植物可以耐受生长素除草剂；耐受EPSPS抑制剂，例如草甘膦；耐受PPO抑制剂，例如，嘧啶二酮类，例如苯嘧磺草胺(saflufenacil)，三唑啉酮类，例如甲磺草胺、唑草酯，丙炔氟草胺，二苯醚类，例如三氟羧草醚、氟磺胺草醚、乳氟禾草灵、乙氧氟草醚，N-苯基酞酰亚胺类，例如氟烯草酸，CGA-248757 ;和/或耐受GS抑制剂，例如草铵膦。除了这些类别的抑制剂外，耐受乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的本发明的植物还可以耐受具有其他作用方式的除草剂，例如叶绿素/类胡萝卜素色素抑制剂、细胞膜破裂剂、光合作用抑制剂、细胞分裂抑制剂、根抑制剂、芽抑制剂以及其组合。此类耐受性性状可以例如表现为突变型EPSPS蛋白或突变型谷氨酰胺合成酶蛋白；或者表现为突变型原生的、近交的或转基因的芳氧基链烷酸双加氧酶(AAD或DHT)、卤芳基腈水解酶(BXN)、2，2-二氯丙酸脱卤素酶(DEH)、草甘膦-N-乙酰转移酶(GAT)、草甘膦脱羧酶(GDC)、草甘膦氧化还原酶(GOX)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、膦丝菌素乙酰转移酶(PAT或bar)、或具有除草剂降解活性的细胞色素P450 (CYP450)蛋白。在此的耐受乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的植物还可以叠加有其他性状，包括但不限于杀虫性状，例如BtCry和其他对于鞘翅类、鳞翅类、线虫类或其他害虫具有杀虫活性的蛋白质；营养或营养药用(nutraceutical)性状，例如改变的油含量或油谱性状、高蛋白质或高氨基酸浓度性状，和其他本领域中已知的性状类型。进一步地，还涵盖了这样的植物，所述植物除了能够耐受抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂外，还通过使用重组DNA技术而能够合成一种或多种杀昆虫蛋白，尤其是已知的来自芽孢杆菌属(Bacillus),特别是来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的那些，例如 δ -内毒素，例如 CryIA (b)、CryIA (c)、CrylF、CryIF (a2)、CryIIA (b)、CryIIIA, CryIIIB (bl)或 Cry9c ;植物杀昆虫蛋白(VIP)，例如 VIP1、VIP2、VIP3 或 VIP3A ；在线虫中建群的细菌例如光杆状菌属物种(Photorhabdus spp.)或致病杆菌属物种(Xenorhabdus spp.)的杀昆虫蛋白；由动物产生的毒素，例如蝎毒素、蜘蛛毒素、黄蜂毒素或其他昆虫特异性神经毒素；由真菌产生的毒素，例如链霉菌毒素；植物外源凝集素，例如豌豆或大麦外源凝集素；凝集素；蛋白酶抑制剂，例如胰蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制齐U、patatin、半胱氨酸蛋白酶抑制剂或木瓜蛋白酶抑制剂；核糖体失活蛋白(RIP)，例如蓖麻毒蛋白、玉米-RIP、相思豆毒蛋白、软瓜蛋白、肥皂草毒蛋白或异株泻根毒蛋白；类固醇代谢酶，例如3-羟基-类固醇氧化酶、蜕皮类固醇-IDP-糖基-转移酶、胆固醇氧化酶、蜕皮素抑制剂或HMG-CoA-还原酶；离子通道阻断剂，例如钠或钙通道的阻断剂；保幼激素酯酶；利尿激素受体(helicokinin受体)；芪合酶，联苄合酶，壳多糖酶或葡聚糖酶。在本发明的范围内，这些杀昆虫蛋白或毒素也明确地被理解为前毒素、杂合蛋白、截短的或经其他修饰的蛋白质。杂合蛋白的特征在于蛋白质结构域的重新组合(参见例如WO 02/015701)。此 类毒素或者能够合成此类毒素的基因改造植物的进一步实例公开在例如EP-A 374753、WO93/007278、WO 95/34656、EP-A 427 529、EP-A 451 878、WO 03/18810 和 WO 03/52073 中。用于产生此类基因改造植物的方法通常是本领域技术人员已知的，并且例如描述在上面提及的出版物中。包含在基因改造植物中的这些杀昆虫蛋白赋予产生这些蛋白质的植物以对来自所有节肢动物分类群的有害害虫的耐受性，尤其是对甲虫类(鞘翅目(Coleoptera))、双翅昆虫类(双翅目(Diptera))和蛾类(鳞翅目(Lepidoptera))以及对线虫(线虫动物门(Nematoda))的耐受性。进一步地，在一个实施方案中，还涵盖了这样的植物，所述植物例如通过使用重组DNA技术和/或通过育种和/或以其他方式就此类性状进行选择，而能够合成一种或多种蛋白质以增加那些植物对于细菌性、病毒性或真菌性病原体的抗性或耐受性。用于产生此类基因改造植物的方法通常是本领域技术人员已知的。如本文所描述的那样而产生的植物也可以叠加有其他性状，包括但不限于，抗病性、提高的矿物质谱、提高的维生素谱、提高的油谱(例如，高油酸含量)、氨基酸谱(例如，高赖氨酸玉米)，和其他本领域中已知的性状类型。进一步地，在一个实施方案中，还涵盖了这样的植物，所述植物例如通过使用重组DNA技术和/或通过育种和/或通过其他选择方式，而能够合成一种或多种蛋白质以增加生产力(例如，生物量生产、谷粒产量、淀粉含量、油含量或蛋白质含量)，对于干旱、盐度或其他限制生长的环境因素的耐受性，或者对于那些植物的害虫和真菌性、细菌性或病毒性病原体的耐受性。进一步地，在一个实施方案中，还涵盖了这样的植物，所述植物例如通过使用重组DNA技术和/或通过育种和/或通过其他选择方式，而包含经改变的量的内含物物质或新的内含物物质，特别地用于改善人或动物的营养。进一步地，还涵盖了这样的植物，所述植物通过使用重组DNA技术而包含经改变的量的内含物物质或新的内含物物质，特别地用于改善原材料生产。
进一步地，在一些实施方案中，还涵盖了这样的本发明的植物，所述植物例如通过使用重组DNA技术和/或通过育种和/或以其他方式就此类性状进行选择，而被改变以包含增加的量的维生素和/或矿物质，和/或改善的营养药用化合物谱。在一个实施方案中，耐受乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的本发明的植物相对于野生型植物而言包含增加的量的选自下列的化合物或者改善的选自下列的化合物谱芥子油苷类(例如，萝卜苷(4-甲基亚硫酰基丁基芥子油苷)、萝卜硫烷、3-吲哚基甲基-芥子油苷(芸苔葡糖硫苷)、I-甲氧基-3-吲哚基甲基-芥子油苷(新芸苔葡糖硫苷))；酚类(例如，类黄酮(例如，槲皮素、山奈素)、羟基肉桂酰基衍生物(例如，1，2，2'-三芥子酰基龙胆二糖、1，2_ 二阿魏酰基龙胆二糖、1，2' - 二芥子酰基-2-阿魏酰基龙胆二糖、3-0-咖啡酰基-奎尼酸(新氯原酸)))；以及维生素和矿物质(例如，维生素C、维生素E、胡萝卜素、叶酸、烟酸、核黄素、硫胺素、钙、铁、镁、钾、硒和锌)。在另一个实施方案中，耐受乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的本发明的植物相对于野生型植物而言包含增加的量的选自下列的化合物或者改善的选自下列的化合物谱甲状腺肿素原(piOgoitrin);异硫氰酸盐类；吲哚类(芥子油苷水解的产物)；谷胱甘肽；类胡萝卜·素，例如，胡萝卜素，番茄红素，和叶黄素类胡萝卜素例如叶黄二醇和玉米黄素；酚类，包括类黄酮例如黄酮醇类(例如，槲皮素、芸香苷)，黄烷类/单宁类(例如，原花青素类，包括香豆素，原花色素类，儿茶素类，和花色素苷类)；黄酮类；植物雌激素类，例如，香豆雌素类(coumestans)，木脂素类，白藜芦醇，异黄酮类例如染料木黄酮，大豆黄素，和黄豆黄素；雷琐酸内酯类；有机硫化合物；植物留醇类；类萜，例如鼠尾草酚、迷迭香酸、甘草皂苷和皂苷类；叶绿素；叶绿酸，糖类，花色素苷类和香夹兰。在其他实施方案中，耐受乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的本发明的植物相对于野生型植物而言包含增加的量的选自下列的化合物或者改善的选自下列的化合物谱长春花新碱、长春花碱、紫杉烷类(例如，紫杉醇(红豆杉醇)、浆果赤霉素IIIUO-去乙酰浆果赤霉素III、10-去乙酰紫杉醇、木糖基紫杉醇、7-表紫杉醇、7-表浆果赤霉素III、10-去乙酸二尖杉宁喊、表二尖杉宁喊、泰素帝、二尖杉宁喊、木糖基二尖杉宁喊、紫杉吉吩(taxagifine)、8_苯甲酰氧基紫杉吉吩、9-乙酰氧基紫杉素、9_轻基紫杉素、taiwanxam、紫杉烷la、紫杉烷lb、紫杉烷Ic、紫杉烷IcUGMP紫杉醇、9-二氢-13-乙酰基浆果赤霉素III、10-去乙酰-7-表紫杉醇、四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、染料木黄酮、大豆黄素、可待因、吗啡、奎宁、紫草素、阿马里新、蛇根碱等。本发明还包括本发明的植物的后代，以及源自本发明的耐受除草剂的植物的种子和源自本发明的耐受除草剂的植物的细胞。在各种实施方案中，在此的植物可以用于产生植物产品。因此，用于制备后裔种子的方法包括种植能够产生此处的植物的种子，使所得到的植物生长，并且收获其后裔种子。在一些实施方案中，此类方法可以进一步包括向所得到的植物施用抑制ACCase的除草剂组合物。类似地，用于产生来自此处的植物的衍生产品的方法可以包括加工其植物部分以获得衍生产品。在一些实施方案中，此类方法可以用于获得衍生产品，其是例如草料、饲料、种子磨粉、油或种子处理包衣种子中的任一种。通过此类方法获得的种子、经处理的种子和其他植物产品是可以商业化的有用产品。在各种实施方案中，本发明提供了来自本文所描述的任何植物的食品、消费产品、工业产品和兽医学产品的生产。乙酰辅酶A羧化酶本发明提供了表达乙酰辅酶A羧化酶的植物，所述乙酰辅酶A羧化酶所具有的氨基酸序列不同于在相应野生型植物中发现的乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列。为了易于理解，本文所使用的氨基酸编号系统将是用于来自大穗看麦娘[Huds.](也称为黑草)的乙酰辅酶A羧化酶的编号系统。编码大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶的mRNA序列在GenBank登录号AJ310767处可得到，并且蛋白质序列在GenBank登录号CAC84161处可得到，两者均通过提及而特别地引入本文。所提及的氨基酸的编号将跟随有(Am)，以指明该氨基酸所对应的大穗看麦娘序列中的氨基酸。图18提供了大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶氨基酸序列(GenBank登录号CAC84161)。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中可以改变的氨基酸以粗双下划线标示出，并且图19描绘了与大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶相比对的野生型稻乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列，其中标明了一些关键残基。 在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1781(Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置1781 (Am)处具有异亮氨酸(11781)。本发明的1781 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了异亮氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，亮氨酸(I1781L)、缬氨酸(I1781V)、苏氨酸(I1781T)和丙氨酸(I1781A)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1785(Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置1785 (Am)处具有丙氨酸(A1785)。本发明的1785 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了丙氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，甘氨酸(A1785G)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置
1785(Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1786 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置1786 (Am)处具有丙氨酸(A1786)。本发明的1786 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了丙氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，脯氨酸(A1786P)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置
1786(Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1811 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置ISll(Am)处具有异亮氨酸(11811)。本发明的1811 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了异亮氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，天冬酰胺(I1811N)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1824(Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置1824 (Am)处具有谷氨酰胺(Q1824)。本发明的1824(Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了谷氨酰胺之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，脯氨酸(Q1824P)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1824(Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1864(Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置1864 (Am)处具有缬氨酸(V1864)。本发明的1864 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了缬氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，苯丙氨酸(V1864F)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1864(Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1999(Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置1999 (Am)处具有色氨酸(W1999)。本发明的1999 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了色氨酸之外 的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，半胱氨酸(W1999C)和甘氨酸(W1999G)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2027 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2027 (Am)处具有色氨酸(W2027)。本发明的2027 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了色氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，半胱氨酸(W2027C)和精氨酸(W2027R)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2039 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2039 (Am)处具有谷氨酸(E2039)。本发明的2039 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了谷氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，甘氨酸(E2039G)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2039 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2041 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2041 (Am)处具有异亮氨酸(12041)。本发明的2041 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了异亮氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，天冬酰胺(I2041N)或缬氨酸(I2041V)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2049 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2049 (Am)处具有缬氨酸(V2049)。本发明的2049 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了缬氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，苯丙氨酸(V2049F)、异亮氨酸(V2049I)和亮氨酸(V2049L)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2059 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2059 (Am)处具有丙氨酸(A2059)。本发明的2059 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了丙氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，缬氨酸(A2059V)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2059 (Am)处具有缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2074 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2074(Am)处具有色氨酸(W2074)。本发明的2074 (Am) ACCase突变体将在该位置处具有除了色氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，亮氨酸(W2074L)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。
在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2075 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2075 (Am)处具有缬氨酸(V2075)。本发明的2075 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了缬氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，甲硫氨酸(V2075M)、亮氨酸(V2075L)和异亮氨酸(V2075I)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸。在一些实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将具有在位置2075(Am)处的缬氨酸，和紧在位置2075 (Am)之后且在位置2076 (Am)处的缬氨酸之前的额外的缬氨酸，即可以在野生型酶具有两个缬氨酸之处具有三个连续的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2078 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2078 (Am)处具有天冬氨酸(D2078)。本发明的2078 (Am) ACCase突变体将在该位置处具有除了天冬氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，赖氨酸(D2078K)、甘氨酸(D2078G)或苏氨酸(D2078T)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2079 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2079 (Am)处具有丝氨酸(S2079)。本发明的2079 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了丝氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，苯丙氨酸(S2079F)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2079 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2080 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2080 (Am)处具有赖氨酸(K2080)。本发明的2080 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了赖氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，谷氨酸(K2080E)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2080 (Am)处具有谷氨酸。在另一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶通常将具有该位置的缺失(Λ 2080)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2081 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2081 (Am)处具有异亮氨酸(12081)。本发明的2081 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了异亮氨酸之外的其他氨基酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶通常将具有该位置的缺失(Δ2081)。 在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2088 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2088 (Am)处具有半胱氨酸(C2088)。本发明的2088 (Am) ACCase突变体将在该位置处具有除了半胱氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，精氨酸(C2088R)、色氨酸(C2088W)、苯丙氨酸(C2088F)、甘氨酸(C2088G)、组氨酸(C2088H)、赖氨酸(C2088K)、丝氨酸(C2088S)、苏氨酸(C2088T)、亮氨酸(C2088L)或缬氨酸(C2088V)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2095 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2095 (Am)处具有赖氨酸(Κ2095)。本发明的2095 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了赖氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，谷氨酸(Κ2095Ε)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2095 (Am)处具有谷氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2096 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2096 (Am)处具有甘氨酸(G2096)。本发明的2096 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了甘氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，丙氨酸(G2096A)或丝氨酸(G2096S)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2098 (Am)处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。野生型大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶在位置2098 (Am)处具有缬氨酸(V2098)。本发明的2098 (Am)ACCase突变体将在该位置处具有除了缬氨酸之外的其他氨基酸。在本发明的乙酰辅酶A羧化酶中在该位置处可以发现的氨基酸的合适实例包括但不限于，丙氨酸(V2098A)、甘氨酸(V2098G)、脯氨酸(V2098P)、组氨酸(V2098H)、丝氨酸(V2098S)或半胱氨酸(V2098C)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸。在一个实施方案中，本发明包括本发明的耐受除草剂的植物的乙酰辅酶A羧化酶，其在下列位置中的仅一个位置处不同于相应野生型植物的乙酰辅酶A羧化酶1781(Am)、1785(Am)、1786(Am)、1811(Am)、1824(Am)、1864(Am)、1999(Am),2027(Am)、2039(Am),2041(Am),2049(Am),2059(Am),2074(Am),2075(Am),2078(Am),2079(Am)、2080 (Am)、2081 (Am)、2088 (Am)、2095 (Am)、2096 (Am)或 2098 (Am)。在一个实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物的乙酰辅酶A羧化酶将在下列位置中的仅一个位置处不同2078 (Am) ,2088 (Am)或2075 (Am)。在优选的实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物的乙酰辅酶A羧化酶将在下列位置中的仅一个位置处不同2039 (Am)、2059 (Am)、2080 (Am)或2095(Am)。在更优选的实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物的乙酰辅酶A羧化酶将在下列位置中的仅一个位置处不同1785 (Am)、1786 (Am)、1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、2041 (Am) ,2049 (Am) ,2074 (Am) ,2079 (Am) ,2081 (Am) ,2096 (Am)或 2098 (Am)。在最优选的实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物的乙酰辅酶A羧化酶将在下列位置中的仅一个位置处不同1781 (Am), 1999 (Am) ,2027 (Am) ,2041 (Am)或 2096 (Am)。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将具有下列置换中的仅一个置换在位置2075 (Am)处的异亮氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸，或在位置2088 (Am)处的精氨酸。在优选的实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将具有下列置换中的仅一个置换在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2075 (Am)处的甲硫氨酸，位置2075 (Am)的重复(即，在位置2074 (Am)和2075 (Am)之间插入缬氨酸，或在位置 2075(Am)和2076 (Am)之间插入缬氨酸)，氨基酸位置2080 (Am)的缺失，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，位置2081 (Am)的缺失，或在位置2095 (Am)处的谷氨酸。在更优选的实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将具有下列置换中的仅一个置换在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置2075 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的甲硫氨酸，在位置2078 (Am)处的苏氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2096 (Am)处的丝氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸，在位置2098 (Am)处的丙氨酸，在位置2098 (Am)处的甘氨酸，在位置2098 (Am)处的组氨酸，在位置2098 (Am)处的脯氨酸，或在位置2098 (Am)处的丝氨酸。在最优选的实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将具有下列置换中的仅一个置换在位置1781(Am)处的亮氨酸，在位置1781 (Am)处的苏氨酸，在位置1781 (Am)处的缬氨酸，在位置1781 (Am)处的丙氨酸，在位置1999 (Am)处的甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2027 (Am)处的精氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2041 (Am)处的缬氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸，和在位置2096 (Am)处的丝氨酸。在一个实施方案中，以转基因方式使用编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽具有下列置换中的仅一个置换在位置2075 (Am)处的异亮氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸，或在位置2088 (Am)处的精氨酸。在另一个实施方案中，用包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的表达载体构建体转化单子叶植物细胞，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽具有下列置换中的仅一个置换在位置2075 (Am)处的异亮氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸，或在位置2088 (Am)处的精氨酸。在一个实施方案中，本发明提供了包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的水稻植物，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽在仅一个上面所描述的氨基酸位置处具有置换。在一个实施方案中，本发明提供了包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的BEP进化枝植物，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽在仅一个上面所描述的氨基酸位置处具有置换。在一个实施方案中，本发明提供了包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的BET亚进化枝植物，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽在仅一个上面所描述的氨基酸位置处具有置换。在一个实施方案中，本发明提供了包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的BET作物植物，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽在仅一个上面所描述的氨基酸位置处具有置换。在一个实施方案中，本发明提供了包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的单子叶植物，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽在仅一个上面所描述的氨基酸位置处具有置换。在一个实施方案中，本发明提供了包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的单子叶植物，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽在氨基酸位置1781 (Am)处具有置换，其中在位置1781 (Am)处的氨基酸不同于野生型的那种并且不是亮氨酸。在一个实施方案中，本发明提供了包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的单子叶植物，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽在氨基酸位置1999 (Am)处具有置换，其中在位置1999 (Am)处的氨基酸不同于野生型的那种并且不是半胱氨酸。··
在一个实施方案中，本发明提供了包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的单子叶植物，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽在氨基酸位置2027 (Am)处具有置换，其中在位置2027 (Am)处的氨基酸不同于野生型的那种并且不是半胱氨酸。在一个实施方案中，本发明提供了包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的单子叶植物，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽在氨基酸位置2041 (Am)处具有置换，其中在位置2041 (Am)处的氨基酸不同于野生型的那种并且不是缬氨酸或天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明提供了包含编码乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸的单子叶植物，所述乙酰辅酶A羧化酶多肽在氨基酸位置2096 (Am)处具有置换，其中在位置2096 (Am)处的氨基酸不同于野生型的那种并且不是丙氨酸。本发明还包括乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶所具有的氨基酸序列在超过一个氨基酸位置处不同于在相应野生型植物中发现的乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列。例如，本发明的乙酰辅酶A羧化酶可以在2个、3个、4个、5个、6个或7个位置处不同于在相应野生型植物中发现的乙酰辅酶A羧化酶的氨基酸序列。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1781 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074(Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置1785(Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置1811(Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置1824(Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置1864 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2039 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸·或丙氨酸，和在位置2059 (Am)处具有缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2074(Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2079 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸或缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2081 (Am)处具有缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2095 (Am)处具有谷氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺,和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸。 在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1785(Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824(Am)处的脯氨酸，在位置1864(Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081(Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处 的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785(Am)处具有甘氨酸，和在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸,和在位置1824 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置1864(Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置
1785(Am)处具有甘氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2039 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸,和在位置2059 (Am)处具有纟颜氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785(Am)处具有甘氨酸，和在位置2075(Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2079 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸或缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785(Am)处具有甘氨酸，和在位置
2081(Am)处具有缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸,和在位置2095 (Am)处具有谷氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1785 (Am)处具有甘氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。
在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1786(Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸或缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置1785 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置1824 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置1864 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786(Am)处具有脯氨酸，和在位置2039 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置
1786(Am)处具有脯氨酸，和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2059 (Am)处具有缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2079(Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置
1786(Am)处具有脯氨酸，和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸或缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2081 (Am)处具有缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786(Am)处具有脯氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2095 (Am)处具有谷氨酸。在一个实施方案中,本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1786 (Am)处具有脯氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1811 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙 酰辅酶A羧化酶将在位置ISll(Am)处具有天冬酰胺。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074(Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置ISll(Am)处具有天冬酰胺，和在位置1785 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置1824 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811(Am)处具有天冬酰胺，和在位置1864 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置ISll(Am)处具有天冬酰胺，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811(Am)处具有天冬酰胺，和在位置2039 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置ISll(Am)处具有天冬酰胺，和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置ISll(Am)处具有天冬酰胺，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811(Am)处具有天冬酰胺，和在位置2059 (Am)处具有缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置ISll(Am)处具有天冬酰胺，和在位置2074(Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2075(Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811(Am)处具有天冬酰胺，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2079 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置ISll(Am)处具有天冬酰胺，和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸或缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2081 (Am)处具有缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置ISll(Am)处具有天冬酰胺，和在位置2095(Am)处具有谷氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置·1811 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1824(Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1824(Am)处具有脯氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1864 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1864 (Am)处具有苯丙氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824(Am)处的脯氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074(Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。 在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置1999(Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074(Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨·酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1785 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1824 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1864 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2039 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2059 (Am)处具有半胱氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999(Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2079(Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999(Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸或缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2081 (Am) 处具有缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2095 (Am)处具有谷氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2027 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075(Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1785 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1824 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1864(Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2039 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2049(Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置 2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2059 (Am)处具有缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2079(Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸或缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2081 (Am)处具有缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2095 (Am)处具有谷氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2039 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2039 (Am)处具有甘氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置
2074(Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2041 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置1785 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在 位置1786(Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置1824 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置1864(Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2039 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2059 (Am)处具有缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2079 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸或缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺，和在位置2081 (Am)处具有缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有异亮氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有异亮氨酸，和在位置2095(Am)处具有谷氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有异亮氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2041 (Am)处具有异亮氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2049 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位·置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置1785 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置1824 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸,和在位置1864 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2039 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2059 (Am)处具有缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049(Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置
2078(Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2079 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸或缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2081 (Am)处具有缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2095 (Am)处具有谷氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，和在位置 2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2059 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2059 (Am)处具有缬氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2074(Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸或色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2074 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824(Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸，和在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸，和在位置1785(Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸，和在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸，和在位置1811(Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸，和在位置1824(Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸，和在位置1864(Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸，和在位置2039 (Am)处具有甘氨·酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸，和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸，和在位置2059(Am)处具有缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸,和在位置2075(Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸，和在位置2079 (Am)处具有苯丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸，和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸或缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸，和在位置2081 (Am)处具有缺失。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸,和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸，和在位置2095 (Am)处具有谷氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074 (Am)处具有亮氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2074(Am)处具有亮氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。 在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2075 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075(Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置
2095(Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅 酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置1785(Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075(Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置2041 (Am)处具有异亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075(Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸或色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置
2096(Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。 在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2078 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078(Am)处具有甘
氨酸或苏氨酸，和在位置1785 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置ISll(Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078(Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置2041 (Am)处具有异亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078(Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078(Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2078(Am)处具有甘氨酸或苏氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。 在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2079 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2079 (Am)处具有苯丙氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078(Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2080 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2080 (Am)处具有谷氨酸或缺失。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2081(Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2081 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2081 (Am)处具有缺失。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的·甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824(Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置
2080(Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2088 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074(Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置1785 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有 精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置1786(Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸或色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置2041 (Am)处具有异亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置2074(Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。
在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2095 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2095 (Am)处具有谷氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824(Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078(Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸或色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。
在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2096 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078(Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置1781 (Am)处具有亮氨酸、苏氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置1785(Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置1786 (Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置ISll(Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096(Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置2041 (Am)处具有异亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置2049(Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置2074 (Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸，和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶在氨基酸位置2098 (Am)处和在一个或多个额外的氨基酸位置处不同于相应野生型乙酰辅酶A羧化酶。一般地，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。此外，该实施方案的酶将还包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨·酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置1824 (Am)处的脯氨酸，在位置1864 (Am)处的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)处的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2074(Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸，在位置2078 (Am)处的甘氨酸或苏氨酸，在位置2079 (Am)处的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸，在位置2095 (Am)处的谷氨酸，和在位置2096 (Am)处的丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置1781(Am)处具有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置1785 (Am)处具有甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置1786(Am)处具有脯氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置1811 (Am)处具有天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置1999 (Am)处具有半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置2041 (Am)处具有异亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置2074(Am)处具有亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置2075(Am)处具有亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098(Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸或苏氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置2088 (Am)处具有精氨酸或色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。在一个实施方案中，本发明的乙酰辅酶A羧化酶将在位置2098 (Am)处具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸或丝氨酸，和在位置2096 (Am)处具有丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，本发明包括在位置2075(Am)处具有异亮氨酸和在位置1999 (Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2075 (Am)处具有甲硫氨酸和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2075 (Am)处具有甲硫氨酸和在位置2095 (Am)处具有谷氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位 置2041 (Am)处具有纟颜氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2039(Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2049 (Am)处具有丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2049 (Am)处具有半胱氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2049 (Am)处具有丝氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2049 (Am)处具有苏氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2059 (Am)处具有纟颜氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2079 (Am)处具有苯丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置
2079(Am)处具有脯氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；和在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶。在优选的实施方案中，本发明包括在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置1824 (Am)处具有脯氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2027 (Am)处具有精氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；和位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置1824 (Am)处具有脯氨酸的乙酰辅酶A羧化酶。在更优选的实施方案中，本发明包括在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2049 (Am)处具有亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2088 (Am)处具有组氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2088 (Am)处具有苯丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2088 (Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2088 (Am)处具有亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2088 (Am)处具有苏氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有组氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有丝氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有苏氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088(Am)处具有缬氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有半胱氨酸和在位置2088 (Am)处具有色氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置2098 (Am)处具有丝氨酸和在位置2088 (Am)处具有色氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；和在位置2080 (Am)处具有缺失和在位置
2081(Am)处具有缺失的乙酰辅酶A羧化酶。在最优选的实施方案中，本发明包括在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺的乙酰辅酶A羧化酶；在位置1781(Am)处具有亮氨酸和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置1864 (Am)处具有苯丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2098 (Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和具有位置
2075(Am)的重复的乙酰辅酶A羧化酶；在位置1999 (Am)处具有甘氨酸和在位置1864 (Am)处具有苯丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置1999 (Am)处具有甘氨酸和在位置2049 (Am)处具有异亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；在位置1999 (Am)处具有甘氨酸和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶；和在位置1999 (Am)处具有甘氨酸和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶。核酸分子本发明还包括编码上面所描述的乙酰辅酶A羧化酶的全部或部分的核酸分子。本发明的核酸分子可以包含这样的核酸序列，其编码包含SEQ ID NO :2和3之一或两者的经修饰形式的氨基酸序列，其中所述序列经修饰，从而所编码的蛋白质包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置1824(Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1864(Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或精氨酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置2049 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为缬氨酸；在位置2074 (Am)处的氨基酸为亮氨酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或额外的缬氨酸；在位置2078(Am)处的氨基酸为甘氨酸或苏氨酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)处的氨基酸为精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为丙氨酸或丝氨酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸或丝氨酸；以及与所述编码序列的全部或部分互补的核酸分子。在一些实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，其具有多个上面所描述的与野生型乙酰辅酶A羧化酶的差异。
在一个实施方案中，本发明包括编码这样的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子，所述乙酰辅酶A羧化酶在下列位置中的仅一个位置处不同于相应野生型植物的乙酰辅酶A羧化酶1781 (Am)、1785 (Am)、1786 (Am)、1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、1999 (Am) ,2027 (Am)、2039(Am),2041(Am),2049(Am),2059(Am),2074(Am),2075(Am),2078(Am),2079(Am)、2080 (Am)、2081 (Am)、2088 (Am)、2095 (Am)、2096 (Am)和 2098 (Am)。在一个实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物的乙酰辅酶A羧化酶将在下列位置中的仅一个位置处不同2078 (Am) ,2088 (Am)或2075 (Am)。在优选的实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物的乙酰辅酶A羧化酶将在下列位置中的仅一个位置处不同2039 (Am)、2059 (Am)、2080 (Am)或2095(Am)。在更优选的实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物的乙酰辅酶A羧化酶将在下列位置中的仅一个位置处不同1785 (Am)、1786 (Am)、1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、2041 (Am) ,2049 (Am) ,2074 (Am) ,2079 (Am) ,2081 (Am)、2096 (Am)或 2098 (Am)。在最优选的实施方案中，本发明的耐受除草剂的植物的乙酰辅酶A羧化酶将在下列位置中的仅一个位置处不同1781 (Am), 1999 (Am) ,2027 (Am) ,2041 (Am)或 2096 (Am)。
在一个实施方案中，本发明包括编码这样的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子，所述乙酰辅酶A羧化酶具有下列置换中的仅一个置换在位置2075(Am)处的异亮氨酸,在位置2078 (Am)处的甘氨酸，或在位置2088 (Am)处的精氨酸。在优选的实施方案中，本发明包括编码这样的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子，所述乙酰辅酶A羧化酶具有下列置换中的仅一个置换在位置2039 (Am)处的甘氨酸，在位置2059 (Am)处的缬氨酸，在位置2075 (Am)处的甲硫氨酸，位置2075 (Am)的重复(即，在2074 (Am)和2075 (Am)之间插入缬氨酸，或在位置
2075(Am)和2076 (Am)之间插入缬氨酸)，氨基酸位置2088 (Am)的缺失，在位置2080 (Am)处的谷氨酸，位置2088 (Am)的缺失，或在位置2095 (Am)处的谷氨酸。在更优选的实施方案中，本发明包括编码这样的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子，所述乙酰辅酶A羧化酶具有下列置换中的仅一个置换在位置1785 (Am)处的甘氨酸，在位置1786 (Am)处的脯氨酸，在位置1811 (Am)处的天冬酰胺，在位置2075 (Am)处的亮氨酸，在位置2075 (Am)处的甲硫氨酸，在位置2078 (Am)处的苏氨酸，在位置2080 (Am)处的缺失，在位置2081 (Am)处的缺失，在位置2088 (Am)处的色氨酸，在位置2096 (Am)处的丝氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸，在位置2098 (Am)处的丙氨酸，在位置2098 (Am)处的甘氨酸，在位置2098 (Am)处的组氨酸，在位置2098(Am)处的脯氨酸，或在位置2098 (Am)处的丝氨酸。在最优选的实施方案中，本发明包括编码这样的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子，所述乙酰辅酶A羧化酶具有下列置换中的仅一个置换在位置1781 (Am)处的亮氨酸，在位置1781 (Am)处的苏氨酸，在位置1781 (Am)处的缬氨酸，在位置1781 (Am)处的丙氨酸，在位置1999 (Am)处的甘氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸，在位置2027 (Am)处的精氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，在位置2041 (Am)处的缬氨酸，在位置2096 (Am)处的丙氨酸，和在位置2096 (Am)处的丝氨酸。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置1999(Am)处的半胱氨酸或甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2027 (Am)处的半胱氨酸或精氨酸。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2041 (Am)处的天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781(Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2049 (Am)处的苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2075 (Am)处的亮氨酸或异亮氨酸。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781(Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2078 (Am)处的甘氨酸。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781(Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2088 (Am)处的精氨酸。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2096 (Am)处的丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，和在位置2098 (Am)处的丙氨酸。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨·酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸，和在位置2041 (Am)处的天冬酰胺。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所述乙酰辅酶A羧化酶包含在位置1781(Am)处的亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸，在位置2027 (Am)处的半胱氨酸，在位置2041 (Am)处的天冬酰胺，和在位置2096 (Am)处的丙氨酸。在一个实施方案中，本发明包括编码在位置2075(Am)处具有异亮氨酸和在位置1999 (Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2075 (Am)处具有甲硫氨酸和在位置2080 (Am)处具有谷氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置
2075(Am)处具有甲硫氨酸和在位置2095 (Am)处具有谷氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2041 (Am)处具有缴氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2078(Am)处具有甘氨酸和在位置2039 (Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2049 (Am)处具有丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2049 (Am)处具有半胱氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2049 (Am)处具有丝氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2049 (Am)处具有苏氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2059 (Am)处具有缬氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2079 (Am)处具有苯丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2079 (Am)处具有脯氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；或者编码在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子。在优选的实施方案中，本发明包括编码在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置1824 (Am)处具有脯氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2027 (Am)处具有精氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；或者编码在位置2078 (Am)处具有甘氨酸和在位置1824(Am)处具有脯氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子。在更优选的实施方案中，本发明包括编码在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2049 (Am)处具有苯丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2049 (Am)处具有亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2088 (Am)处具有组氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2088 (Am)处具有苯丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2088 (Am)处具有赖氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2088 (Am)处具有亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有丙氨酸和在位置2088 (Am)处具有苏氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具
有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有组氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098(Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有丝氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有苏氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有甘氨酸和在位置2088 (Am)处具有缬氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有半胱氨酸和在位置2088 (Am)处具有色氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置2098 (Am)处具有丝氨酸和在位置2088 (Am)处具有色氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；或者编码在位置2080 (Am)处具有缺失和在位置2081 (Am)处具有缺失的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子。在最优选的实施方案中，本发明包括编码在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2041 (Am)处具有天冬酰胺的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2027 (Am)处具有半胱氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置1864 (Am)处具有苯丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和在位置2098 (Am)处具有甘氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置1781 (Am)处具有亮氨酸和位置
2075(Am)的重复的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置1999 (Am)处具有甘氨酸和在位置1864 (Am)处具有苯丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置1999 (Am)处具有甘氨酸和在位置2049 (Am)处具有异亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；编码在位置1999 (Am)处具有甘氨酸和在位置2075 (Am)处具有亮氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子；或者编码在位置1999 (Am)处具有甘氨酸和在位置2098 (Am)处具有丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子。在一个实施方案中，本发明提供了水稻植物，其包含上面所描述的编码具有一个或多个置换的乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸。在一个实施方案中，本发明提供了 BEP进化枝植物，其包含上面所描述的编码具有一个或多个置换的乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸。在一个实施方案中，本发明提供了 BET亚进化枝植物，其包含上面所描述的编码具有一个或多个置换的乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸。在一个实施方案中，本发明提供了 BET作物植物，其包含上面所描述的编码具有一个或多个置换的乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸。在一个实施方案中，本发明提供了单子叶植物，其包含上面所描述的编码具有一个或多个置换的乙酰辅酶A羧化酶多肽的核酸。本发明的核酸分子可以是源自基因组DNA或cDNA的DNA，或者RNA。本发明的核酸分子可以是天然出现的，或者可以是合成的。本发明的核酸分子可以是分离的、重组的和/或经诱变的。在一个实施方案中，本发明的核酸分子编码其中在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸或丙氨酸的乙酰辅酶A羧化酶，或者与此类核酸分子互补。此类核酸分子包括但不限于用作用于初级RNA转录的模板的基因组DNA，编码乙酰辅酶A羧化酶的质粒分子，以及编码此类乙酰辅酶A羧化酶的mRNA。本发明的核酸分子可以包含非编码序列，其可以被转录或可以不被转录。可以在本发明的核酸分子中包括的非编码序列包括但不限于，5'和3' UTR、多腺苷酸化信号和控制基因表达的调节序列(例如，启动子)。本发明的核酸分子还可以包含编码转运肽、蛋白酶切割位点、共价修饰位点等的序列。在一个实施方案中，除了编码乙酰辅酶A羧化酶的序列外，本发明的核酸分子还编码叶绿体转运肽序列。在另一个实施方案中，本发明的核酸分子可以编码这样的乙酰辅酶A羧化酶，所·述乙酰辅酶A羧化酶与SEQ ID N0:2和3之一或两者的经修饰形式具有至少50%、60%、70%,75%,80%,85%,90%,95%或更高的序列同一性，其中所述序列经修饰，从而所编码的蛋白质包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置1824(Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1864 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或精氨酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置2049 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为缬氨酸；在位置2074 (Am)处的氨基酸为亮氨酸；在位置2075 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸或额外的缬氨酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为甘氨酸或苏氨酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置
2080(Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)处的氨基酸为精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为丙氨酸或丝氨酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸或丝氨酸；以及与所述编码序列的全部或部分互补的核酸分子。如本文中所使用的，“序列同一性百分比) ”被定义为在将序列进行比对和引入缺口(如有必要，以达到最大序列同一性百分比，如用设置为缺省值的搜索参数通过在http://blast. ncbi. nlm. nih. gov/Blast. cgi 处可得的BLAST程序所产生的)后，与在目标序列(或其特定部分)中的核苷酸或氨基酸相同的在候选衍生序列中的核苷酸或氨基酸的百分比。本发明还包括与编码本发明的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子杂交的核酸分子，以及与编码本发明的乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子的反向互补物(reverse complement)杂交的核酸分子。在一个实施方案中，本发明的核酸分子包括这样的核酸分子，其与编码SEQID NO 2和3之一或两者的经修饰形式中的一个或多个的核酸分子杂交，其中所述序列经修饰，从而所编码的蛋白质包含下列中的一个或多个在位置1781 (Am)处的氨基酸为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置1786 (Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1811 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置1824(Am)处的氨基酸为脯氨酸；在位置1864 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置1999 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)处的氨基酸为半胱氨酸或精氨酸；在位置2039 (Am)处的氨基酸为甘氨酸；在位置2041 (Am)处的氨基酸为天冬酰胺；在位置2049 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸；在位置2059 (Am)处的氨基酸为缬氨酸；在位置2074(Am)处的氨基酸为亮氨酸；在位置2075(Am)处的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸或甲硫氨 酸或额外的缬氨酸；在位置2078 (Am)处的氨基酸为甘氨酸或苏氨酸；在位置2079 (Am)处的氨基酸为苯丙氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2080 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)处的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)处的氨基酸为精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；在位置2095 (Am)处的氨基酸为谷氨酸；在位置2096 (Am)处的氨基酸为丙氨酸或丝氨酸；或者在位置2098 (Am)处的氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸或丝氨酸；以及与所述编码序列的全部或部分互补的核酸分子，或此类核酸分子的反向互补物(在严紧条件下)。杂交的严紧度可以通过在杂交和洗涤期间的温度、离子强度、PH和变性试剂(例如，甲酰胺)的存在来控制。可以使用的严紧条件包括，在Current Protocols in Molecular Biology,第 I 卷，第 2. 10 章,John Wiley & Sons, Publishers (1994)和 Sambrook 等人，MolecularCloning, Cold Spring Harbor (1989)中所定义的那些,这些文献特别地引入本文，因为它们涉及教导严紧条件。可以将在组合有目的基因的质粒中的任何上面所描述的突变体用于转化。在一个实施方案中，本发明提供了表达载体，其包含编码任何上面所描述的ACCase突变体的核酸分子。在一个实施方案中，本发明提供了上面所描述的突变型ACCase核酸和由此类突变型ACCase核酸编码的蛋白质作为选择标记的用途。在一个实施方案中，本发明的核酸分子包括可以用作杂交探针、测序引物和/或PCR引物的寡核苷酸。此类寡核苷酸可以例如用于确定在编码乙酰辅酶A羧化酶的核酸分子中在特定位置处的密码子序列，例如，通过等位基因特异性PCR。此类寡核苷酸的长度可以为大约15至大约30个核苷酸，大约20至大约30个核苷酸，或大约20-25个核苷酸。关于双突变型ACCase基因的测试“DBLM测定法”(I)在(例如，至少12株植物，和优选地至少20株植物的)受试群体中，包含I或2个拷贝的编码“至少双突变型ACCase”的转基因的ACCase基因(即，待测试的转基因的ACCase基因的最少I个和最多2个染色体插入)的整株水稻植物，
其中所述水稻植物为TO ( “T-零”)再生体(regenerant),并且平行地，具有用作未处理的校验(check)植物的此类植物的对照群体；(2)以200L/ha的喷洒体积向受试群体施用包含吡喃草酮(Al)和I %作物油浓缩物(Crop Oil Concentrate, C0C)的组合物，以提供等价于50g/ha的卩比喃草酮(Al)的Al施用率；(3)测定每株受试植物和校验植物的植物毒性得分，基于传统的植物损伤评定体系(例如，评价除草剂灼伤、叶形态学改变、萎蔫、黄化和其他形态学特征的目视证据，优选地根据典型的、至少5级的损伤评定量表)；(4)分析所收集的数据，以确定是否受试群体中至少75%的植物展示出平均植物毒性，即小于10%的相对于校验植物而言损伤的增加；和
(5)将如此确定的正向结果鉴定为证明了所述双突变型ACCase提供可接受的AIT。除草剂本发明提供了耐受通常抑制野生型植物生长的除草剂浓度的植物，例如水稻植物。一般地，所述植物抗干扰乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂。可以将任何抑制乙酰辅酶A羧化酶活性的除草剂与本发明的植物相结合地使用。合适的实例包括但不限于，环己烯酮类除草剂、芳氧苯氧丙酸酯类除草剂和苯基吡唑啉类除草剂。在一些控制杂草和/或使耐受除草剂的植物生长的方法中，至少一种除草剂选自烯禾定、噻草酮、吡喃草酮、吡氟氯禾灵、精吡氟氯禾灵或这些除草剂中任一种的衍生物。表I提供了环己烯酮类除草剂(DMs，也称为环己烯肟类、环己烯酮肟类；和CHD)的列表，所述环己烯酮类除草剂干扰乙酰辅酶A羧化酶活性并且可以与本发明的耐受除草剂的植物相结合地使用。本领域技术人员将会认识到，存在有在该类别中的其他除草剂并且它们可以与本发明的耐受除草剂的植物相结合地使用。表I中还包括芳氧苯氧丙酸酯类除草剂(也称为芳氧基苯氧基丙酸酯类；芳氧基苯氧基链烷酸酯类；羟苯氧基类(oxyphenoxy) ；APP ；A0PP ；APA ；APPA ;F0P，注意这些有时书写为带有后缀‘-oic’ )的列表，所述芳氧苯氧丙酸酯类除草剂干扰乙酰辅酶A羧化酶活性并且可以与本发明的耐受除草剂的植物相结合地使用。本领域技术人员将会认识到，存在有在该类别中的其他除草剂并且它们可以与本发明的耐受除草剂的植物相结合地使用。表I
权利要求
1.用于筛选单子叶植物质体ACCase的耐受除草剂的突变体的方法，其包括 a.提供来自单子叶植物的植物细胞或组织；和 b.在噻草酮存在下培养所述植物细胞或组织； 其中所述植物细胞或组织由于于在噻草酮存在下进行培养之前在该单子叶植物质体ACCase中不存在的突变而是耐受性的。
2.用于筛选单子叶植物质体ACCase的耐受除草剂的突变体的方法，其包括 a.提供在内源的质体ACCase活性方面缺陷的单子叶植物宿主细胞或组织，所述宿主细胞包含外源的源自单子叶植物的质体ACCase ;和 b.在噻草酮存在下培养所述宿主细胞或组织； 其中所述外源的源自单子叶植物的质体ACCase由于于在噻草酮存在下进行培养之前在该外源的单子叶植物质体ACCase中不存在的突变而对噻草酮是耐受性的。
3.权利要求2的方法，其中所述单子叶植物宿主细胞或组织由于内源的ACCase活性的失活而在内源的质体ACCase活性方面是缺陷的。
4.权利要求3的方法，其中内源的ACCase活性的失活归因于基因敲除。
5.权利要求I至4中任一项的方法，其中耐受噻草酮的突变频率大于O.03%。
6.权利要求I至4中任一项的方法，其还包括 a.在其他ACCase抑制剂存在下培养所述对噻草酮耐受的宿主细胞或组织；和 b.选择对噻草酮和其他ACCase抑制剂耐受的植物细胞或组织。
7.权利要求6的方法，其中所述在其他ACCase抑制剂存在下的培养以逐步增加噻草酮浓度的方式来进行。
8.权利要求I至4中任一项的方法，其中所述在噻草酮存在下的培养以逐步增加其他除草剂浓度的方式来进行。
9.权利要求I至4中任一项的方法，其中所述耐受性植物细胞或组织包含仅一个于在除草剂存在下进行培养之前在该单子叶植物质体ACCase中不存在的突变。
10.权利要求I至4中任一项的方法，其中所述耐受性植物细胞或组织包含两个或更多个于在除草剂存在下进行培养之前在该单子叶植物质体ACCase中不存在的突变。
11.权利要求I至4中任一项的方法，其中所述方法包括在膜上的细胞培养。
12.权利要求I至4中任一项的方法，其中所述的细胞培养在半固体培养基上进行。
13.权利要求2至4中任一项的方法，其中所述方法还包括鉴定所述至少一个于在噻草酮存在下进行培养之前在该外源的单子叶植物质体ACCase中不存在的突变。
14.权利要求I至4中任一项的方法，其中所述单子叶植物是水稻。
15.权利要求14的方法，其中所述外源的单子叶植物质体ACCase来自水稻。
16.权利要求I或2中任一项的方法，其中所述方法包括从经历噻草酮处理后存活的植物细胞再生出植物的步骤。
17.通过权利要求16的方法产生的植物的后代或后裔。
18.通过权利要求16的方法产生的植物的植物部分。
19.通过权利要求16的方法产生的植物的种子。
20.通过权利要求16的方法产生的植物的植物细胞。
21.处理通过权利要求16的方法产生的植物的方法，其包括使所述植物与农艺学上可接受的组合物相接触。
22.育种方法，所述方法包括 a.用第二植物来使通过权利要求16的方法产生的植物进行繁育，以获得后代植物；和 b.确定所述后代植物是否表达耐受除草剂的突变型ACCase； 其中所述耐受除草剂的突变型ACCase赋予所述后代植物以相比于所述第二植物而言增加的除草剂耐受性。
23.核酸分子，其中所述核酸分子编码在权利要求I或2中任一项之中所描述的耐受除草剂的突变型ACCase。
24.权利要求22的核酸作为选择标记的用途。
25.用于选择经转化的植物细胞的方法，所述方法包括 a.将权利要求23的核酸分子引入植物细胞中；和 b.使所述植物细胞与ACCase抑制剂相接触以鉴定经转化的植物细胞，其中所述ACCase展示出相比于相应野生型ACCase而言增加的对所述ACCase抑制剂的除草剂耐受性。
26.育种方法，所述方法包括 a.用第二植物来使包含权利要求25的细胞的植物进行繁育，以获得后代植物；和 b.确定所述后代植物是否表达所述突变型ACCase； 其中所述突变型ACCase赋予所述后代植物以相比于所述第二植物而言增加的除草剂耐受性。
全文摘要
本发明提供了耐受除草剂的植物。本发明还提供了用于通过施用本发明的耐受除草剂的植物对其耐受的除草剂来控制杂草生长的方法。本发明的植物可以表达对乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的作用耐受的乙酰辅酶A羧化酶。
文档编号C12N15/82GK102946714SQ201080047090
公开日2013年2月27日 申请日期2010年9月1日 优先权日2009年9月1日
发明者S·L·曼金, A·R·文克, H·洪 申请人:巴斯夫农业化学产品公司