专利名称：一种洛伐他汀的制备方法
技术领域：
本发明总的来说涉及一种洛伐他汀的制备方法，尤其涉及一种通过发酵法制备洛伐他汀的方法。
背景技术：
洛伐他汀(Iavostatin)是HMG-CoA (3_羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A)还原酶抑制剂(HMG-CoA-RI)类微生物药物，它可以有效的降低冠心病和心肌梗塞的发病率和死亡率。洛伐他汀主要用土曲霉(aspergillus terreus)和红曲霉(monascus rubber)经深层发酵制取。红曲霉在我国有着广泛的应用，红曲霉(monascus rubber)不仅产生洛伐他汀(也称莫那可林K，monacolin K)，而且产生据推测为洛伐他汀生物合成的中间产物的聚酮类物质莫那可林J、L、X，这些物质都是HMG-CoA-RI类物质，具有很强的降低胆固醇、调节血 脂的功能。土曲霉是现在国内生产洛伐他汀的原始出发菌，它具有优良的发酵性能、较高的洛伐他汀产生能力、成熟的发酵工艺。但是目前生产中普遍存在产量偏低、生产成本偏高等问题。
发明内容
为解决上述问题，本发明的目的是提供一种洛伐他汀的制备方法，从而有效提高产量，降低生产成本。为实现上述目的，本发明所提供的一种洛伐他汀的制备方法，包括在发酵培养基中对土曲霉菌种进行发酵以获得洛伐他汀的步骤，其特征在于，在发酵过程中向发酵培养基中添加了苯丙氨酸和/或酪氨酸。优选的，在发酵过程中向发酵培养基中添加了苯丙氨酸和/或酪氨酸，所述苯丙氨酸的添加量为发酵培养基的0.001-0. 05% (w/w)，优选的为0.01-0.03% (w/w)，所述酪氨酸的添加量为发酵培养基的0.005-0. 05% (w/w)，优选的为0.01-0. 03% (w/w) 0根据本发明的一个优选实施方式，在发酵的过程中向发酵培养基中添加苯丙氨酸，添加时间为发酵后的0-110小时，更优选的为发酵后72-96小时。根据本发明的另一个优选实施方式，在发酵的过程中向发酵培养基中添加酪氨酸，添加时间为发酵后的0-110小时，更优选的为发酵后0-96小时。申请人:发现，在发酵过程中，添加苯丙氨酸和/或酪氨酸，均能提高洛伐他汀的产量，但是在发酵后的上述添加时间加入苯丙氨酸和/或酪氨酸，效果更好。其它发酵的条件本领域技术人员可以根据常规发酵方法进行选择。例如，可在发酵药瓶中，以200r/min在26± I°C的旋转式摇床中进行发酵180-230小时。本发明的洛伐他汀的制备方法中，通常还包括在发酵之前将菌种在种子培养基中进行培养的步骤，然后再将培养后获得的种子液接种于发酵培养基中，进行发酵。优选的，在种子培养基中进行培养的条件为在在温度26±1°C下培养90-96h。优选的，将培养后获得的种子液以5-15%的接种量接种于发酵培养基中。
本发明的洛伐他汀的制备方法中，通常还包括在发酵之后对发酵液进行分离提纯的步骤。例如对发酵液进行过滤、萃取、结晶、干燥，以获得洛伐他汀成品。根据本发明的一个具体实施方式
，可以先将菌种接种于种子培养基中，在温度26土 1°C下培养90-96h，然后按10%接种量将培养后获得的种子液接种于发酵培养基中，200r/min，26土 1°C旋转式摇床进行发酵，在发酵后0_96小时的过程中，添加占发酵培养基的重量百分比的0. 001-0. 05%的已灭菌苯丙氨酸，或者在发酵后0-110小时的过程中，添加占发酵培养基的重量百分比的0. 005-0. 05%已灭菌的酪氨酸。培养216h ;将所得发酵液按常规处理，过滤、萃取、结晶、干燥，即得洛伐他汀成品。本发明中，发酵培养基可以按照常规配制方法进行配制。例如，发酵培养基可以为(按重量百分比计)20%葡萄糖，4%豆柏，0.5%麦精，1%蛋白胨，0. 1% NaCl，0.05%MgSO4,0. 05% KH2PO4,0. 1% NaNO3,余量为水，pH6. 8。本申请的发明人在研究提高洛伐他汀产量的过程中惊奇的发现，向土曲霉的发酵 培养基中加入苯丙氨酸和/或酪氨酸，能显著提高洛伐他汀的产量，降低了生产成本。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。除特别说明外，以下实施例中所使用的％、％。均为重量比。在本发明的实施例中，将土曲霉菌(Aspergillus terreus)斜面(即菌种)接种于摇瓶种子培养基中，26±0. 5°C摇床转速200转/分，周期90-96小时；按10%接种量接入摇瓶发酵培养基中，发酵培养基按常规配制方法配制，发酵培养基的配方为20%葡萄糖，4%豆柏，0. 5%麦精，1%蛋白胨，0. 1% NaCl,0. 05% MgSO4,0. 05% KH2PO4,0. 1% NaNO3，余量为水，PH6.8，发酵温度为26±1°C。在本发明的实施例中，洛伐他汀的含量测定采用HPLC进行检测。实施例I添加苯丙氨酸对洛伐他汀产量的影响I. I苯丙氨酸的添加量对洛伐他汀生物合成的影响配制洛伐他汀的发酵培养基，向洛伐他汀发酵培养基中分别加入重量比如表I所示的苯丙氨酸，同时，以不添加苯丙氨酸的发酵培养基作为对照，接入土曲霉菌(Aspergillus terreus)发酵培养216小时后,取样测定洛伐他汀的含量。结果如表I所
/Jn o表I、添加苯丙氨酸对洛伐他汀产量的影响
苯丙氨酸加量(％ ) ~0 ~0.001 ~0. 01 ~0. 02 ~003~~0. 04 ~005~
相对含量100 105 120 U9 U7109 UO由表I的结果可见，在发酵培养基中添加苯丙氨酸可明显提高洛伐他汀的生物合成，优选的加量范围为0. 01-0. 03%I. 2苯丙氨酸的添加时间对洛伐他汀产量的影响配制洛伐他汀的发酵培养基，接入土曲霉菌(Aspergillus terreus)发酵培养,分别在0、24、48、72、96、110小时向培养基中添加重量比为0. 01%的苯丙氨酸，同时，以不加
苯丙氨酸的发酵培养基作为对照培养基，总发酵时间216小时，取样测定洛伐他汀的含量。结果如表2所示。表2、苯丙氨酸的添加时间对洛伐他汀产量的影响
权利要求
1.一种洛伐他汀的制备方法，包括在发酵培养基中对土曲霉菌种进行发酵以获得洛伐他汀的步骤，其特征在于，在发酵过程中向发酵培养基中添加了苯丙氨酸和/或酪氨酸。
2.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述苯丙氨酸的添加量为发酵培养基的O. 001-0. 05% (w/w)，更优选的为发酵培养基的O. 01-0. 03% (w/w);所述酪氨酸的添加量为发酵培养基的O. 005-0. 05% (w/w)，更优选的为O. 01-0. 03% (w/w) 0
3.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于，发酵条件为在26±1°C的条件下发酵.180-230 小时。
4.根据权利要求1-3中任一所述的制备方法，其特征在于，在发酵的过程中向发酵培养基中添加苯丙氨酸，添加时间为发酵后的0-110小吋，更优选的为发酵后的72-96小吋。
5.根据权利要求1-3中任一所述的制备方法，其特征在于，在发酵的过程中向发酵培养基中添加酪氨酸，添加时间为发酵后的0-110小吋，更优选的为发酵后0-96小吋。
6.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于，洛伐他汀的制备方法中，还包括在发酵之前将菌种在种子培养基中进行培养的步骤，然后再将培养后获得的种子液接种于发酵培养基中，进行发酵。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在种子培养基中进行培养的条件为在在温度26 ± I °C下培养90-96h。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将培养后获得的种子液以5-15%的接种量接种于发酵培养基中。
9.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于，洛伐他汀的制备方法还包括在发酵之后对发酵液进行分离提纯的步骤。
10.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于，发酵培养基为(按重量百分比计).20% 葡萄糖、4%豆柏、O. 5%麦精、I % 蛋白胨、O. 1% NaCUO. 05% MgS04、0. 05% KH2PO4'.O.1% NaNO3、余量为水，pH6. 8。
全文摘要
本发明公开了一种洛伐他汀的制备方法，包括在发酵培养基中对土曲霉菌种进行发酵以获得洛伐他汀的步骤，其特征在于，在发酵过程中向发酵培养基中添加了苯丙氨酸和/或酪氨酸。本发明的制备方法有效提高洛伐他汀的产量，降低了生产成本。
文档编号C12P17/06GK102676602SQ201110065430
公开日2012年9月19日 申请日期2011年3月17日 优先权日2011年3月17日
发明者任清华, 刘守强, 周淑梅, 孔德周, 张宏周, 时新生, 朱义彬, 李武德, 王青 申请人:河南天方药业股份有限公司