专利名称：促抗氧化剂生成的发酵培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及培养基。
背景技术：
自由基是生命活动中多种生化反应的中间代谢物质。自由基产生过多或清除过慢，会造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老过程并诱发各种疾病。在衰老过程中，机体内氧化和抗氧化系统之间的平衡发生了变化，表现为氧化作用增强，抗氧化能力减弱随着年龄的增长，抗氧化酶类如SOD等活性降低，体内除氧自由基的能力受到影响，氧自由基浓度升高，引起膜脂质的过氧化、蛋白质变性、酶活性降低和DNA损伤等危害，这些生物大分子结构与功能的改变，必然导致细胞功能的紊乱，从而导致各种疾病和引起衰老。因此说自由基攻击生命大分子和各种细胞器造成组织损伤，是引起机体衰老的根本原因，也是诱发肿瘤等恶性疾病的重大原因。抗氧化物质(抗氧化剂)是指能够清除氧自由基，抑制或消除以及减缓氧化反应的一类物质。抗氧化剂的开发与研究一直以来受到人们的广泛关注，特别是当科学家们发现人体的疾病与衰老是人体内自由基作用的结果后，抗氧化剂的研究更有了广阔的发展空间。天然抗氧化剂已从单纯作为油脂和含脂食品的抗氧化剂，发展到作为体内氧自由基的清除剂，起到保护人体细胞组织，保护心脑血管循环系统、抗癌及延缓衰老等生理作用。目前天然抗氧化物质主要是从动植物中提取的，如维生素类、酶类和天然药物类等。但是动植物中天然抗氧化物质含量较低，提取工艺复杂，而且从这些资源提取势必使这这些动植物资源遭到严重破坏，造成生物多样性和生态环境的损失。近年来，利用一些微生物具有产生和宿主相同或相似生理活性物质的特点，对植物来源菌进行了大量的研究，已从榛属植物中分离得到多株可以产生具有生理活性物质的菌株，其中包括可以产生抗氧化剂的青霉(产抗氧化剂的菌株为青霉JTLR-1，分类命名为青霉Penicillium sp，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年3月21日，保藏编号为CGMCC No. 4701)，但是促进青霉产抗氧化剂的营养配方仍未有报道。
发明内容
本发明目的是提供促抗氧化剂生成的发酵培养基。促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由5 IOOg的碳源营养成分、0. 1 6g的氮源营养成分、0. 001 0. 04mol的金属离子和余量的蒸馏水组成；其中碳源营养成分为葡萄糖、蔗糖、淀粉糖浆中的一种或几种；氮源营养成分为玉米浆、蛋白胨、酵母膏中的一种或几种；金属离子为锰离子、镁离子、锌离子中的一种或几种。促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由5 IOOg的碳源营养成分、0. 1 6g的氮源营养成分、1 IOOg的琼脂、0. 001 0. 04mol的金属离子和余量的蒸馏水组成；其中碳源营养成分为葡萄糖、蔗糖、淀粉糖浆中的一种或几种；氮源营养成分为玉米浆、蛋白胨、酵母膏中的一种或几种；金属离子为锰离子、镁离子、锌离子中的一种或几种。
本发明中促抗氧化剂生成的发酵培养基为液体培养基或固体培养基，培养基组分易得，成本低廉，可以促进抗氧化剂合成，每克发酵培养物(以去水干重计)含抗氧化剂 100. 7mg 214. 4mg。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由5 IOOg的碳源营养成分、0. 1 6g的氮源营养成分、0. 001 0. 04mol的金属离子和余量的蒸馏水组成；其中碳源营养成分为葡萄糖、蔗糖、淀粉糖浆中的一种或几种；氮源营养成分为玉米浆、蛋白胨、酵母膏中的一种或几种；金属离子为锰离子、镁离子、锌离子中的一种或几种。本实施方式中碳源营养成分为两种或两种以上物质组成时按任意比混合；氮源营养成分为两种或两种以上物质组成时按任意比混合；金属离子为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一的不同是促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由5g的碳源营养成分、0. Ig的氮源营养成分、0. OOlmol的金属离子和余量的蒸馏水组成。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一的不同是促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由IOOg的碳源营养成分、6g的氮源营养成分、0. 04mol的金属离子和余量的蒸馏水组成。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一的不同是促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由10 90g的碳源营养成分、0. 5 5g的氮源营养成分、0. 002 0. 03mol的金属离子和余量的蒸馏水组成。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一的不同是促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由30g的碳源营养成分、2g的氮源营养成分、0. 005mol的金属离子和余量的蒸馏水组成。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一的不同是促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由50g的碳源营养成分、3g的氮源营养成分、0. Olmol的金属离子和余量的蒸馏水组成。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
一的不同是促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由60g的碳源营养成分、4g的氮源营养成分、0. 02mol的金属离子和余量的蒸馏水组成。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
一至七之一的不同是锰离子来源于 MnSO4 · H2O0其它与具体实施方式
一至七之一相同。
具体实施方式
九本实施方式与具体实施方式
一至八之一的不同是镁离子来源于 MgSO4 · 7H20。其它与具体实施方式
一至八之一相同。
具体实施方式
十本实施方式与具体实施方式
一至九之一的不同是锌离子来源于 ZnCl20其它与具体实施方式
一至九之一相同。
具体实施方式
十一本实施方式促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由5 IOOg的碳源营养成分、0. 1 6g的氮源营养成分、1 IOOg的琼脂、0. 001 0. 04mol的金属离子和余量的蒸馏水组成；其中碳源营养成分为葡萄糖、蔗糖、淀粉糖浆中的一种或几种；氮源营养成分为玉米浆、蛋白胨、酵母膏中的一种或几种；金属离子为锰离子、镁离子、锌离子中的一种或几种。本实施方式中碳源营养成分为两种或两种以上物质组成时按任意比混合；氮源营养成分为两种或两种以上物质组成时按任意比混合；金属离子为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。
具体实施方式
十二 本实施方式与具体实施方式
十一的不同是促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由15g的碳源营养成分、Ig的氮源营养成分、IOg的琼脂、0. 03mol的金属离子和余量的蒸馏水组成。其它与具体实施方式
十一相同。
具体实施方式
十三本实施方式与具体实施方式
十一的不同是促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由20g的碳源营养成分、2g的氮源营养成分、20g的琼脂、0. Olmol的金属离子和余量的蒸馏水组成。其它与具体实施方式
十一相同。
具体实施方式
十四本实施方式与具体实施方式
十一的不同是促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由40g的碳源营养成分、5g的氮源营养成分、50g的琼脂、0. 02mol的金属离子和余量的蒸馏水组成。其它与具体实施方式
十一相同。
具体实施方式
十五本实施方式与具体实施方式
十一至十四之一的不同是锰离子来源于MnS04*H20。其它与具体实施方式
十一至十四之一相同。
具体实施方式
十六本实施方式与具体实施方式
十一至十五之一的不同是镁离子来源于MgSO4 · 7H20。其它与具体实施方式
十一至十五之一相同。
具体实施方式
十七本实施方式与具体实施方式
十一至十六之一的不同是锌离子来源于&iCl2。其它与具体实施方式
十一至十六之一相同。
具体实施方式
十八本实施方式促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由20g的蔗糖、 2g的酵母膏、0. Olmol的锰离子、0. Olmol的镁离子、0. Olmol的锌离子和余量的蒸馏水组成。将产抗氧化剂的菌株青霉JTLR-I，接种于种子培养基(PDA固体培养基，由IOOml 质量浓度为20%的马铃薯汁、2g的蔗糖和2g的琼脂组成)，在培养2天，然后转接于装有200mL促抗氧化剂生成的发酵培养基的500mL三角瓶中，于^°C、180r/min条件下摇瓶培养7天，收集发酵培养物；将发酵培养物用液氮冷冻并研碎后，以Ig发酵培养物加入 IOmL质量浓度50%的甲醇水的比例进行提取，用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后， 除去上层正己烷层，取下层冷冻干燥，即得抗氧化剂，经计算，每克发酵培养物(以去水干重计)含抗氧化剂164. 6mg。
具体实施方式
十九本实施方式促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由15g的蔗糖、 Ig的蛋白胨、IOg的琼脂、0. Olmol的锰离子、0. Olmol的镁离子、0. Olmol的锌离子和余量的蒸馏水组成。将产抗氧化剂的菌株青霉JTLR-I，接种于种子培养基(PDA固体培养基)，在培养3天，然后转接于装有50mL促抗氧化剂生成的发酵培养基的大平皿中，于25°C下培养 7天得培养物；将培养物用液氮冷冻并研碎后，以Ig培养物加入IOmL质量浓度50%的甲醇水的比例进行提取，用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后，除去上层正己烷层，取下层冷冻干燥，即得抗氧化剂，经计算，每克发酵培养物(以去水干重计)含抗氧化剂106. 2mgo具体实施方式
二十本实施方式促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由20g的葡萄糖、2g的酵母膏、IOg的琼脂、0. 02mol的锰离子、0. Olmol的镁离子、0. Olmol的锌离子和余
量的蒸馏水组成。 将产抗氧化剂的菌株青霉JTLR-I，接种于种子培养基(PDA固体培养基)，在培养3天，然后转接于装有50mL促抗氧化剂生成的发酵培养基的大平皿中，于25°C下培养7天得培养物；将培养物用液氮冷冻并研碎后，以Ig培养物加入IOmL质量浓度50% 的甲醇水的比例进行提取，用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后，除去上层正己烷层， 取下层冷冻干燥，即得抗氧化剂，经计算，每克发酵培养物(以去水干重计)含抗氧化剂 214. 4mg。
权利要求
1.促抗氧化剂生成的发酵培养基，其特征在于促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由 5 IOOg的碳源营养成分、0. 1 6g的氮源营养成分、0. 001 0. 04mol的金属离子和余量的蒸馏水组成；其中碳源营养成分为葡萄糖、蔗糖、淀粉糖浆中的一种或几种；氮源营养成分为玉米浆、蛋白胨、酵母膏中的一种或几种；金属离子为锰离子、镁离子、锌离子中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的促抗氧化剂生成的发酵培养基，其特征在于促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由10 90g的碳源营养成分、0. 5 5g的氮源营养成分、0. 002 0. 03mol的金属离子和余量的蒸馏水组成。
3.根据权利要求1所述的促抗氧化剂生成的发酵培养基，其特征在于促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由30g的碳源营养成分、2g的氮源营养成分、0. 005mol的金属离子和余量的蒸馏水组成。
4.根据权利要求1所述的促抗氧化剂生成的发酵培养基，其特征在于促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由50g的碳源营养成分、3g的氮源营养成分、0. Olmol的金属离子和余量的蒸馏水组成。
5.根据权利要求1所述的促抗氧化剂生成的发酵培养基，其特征在于促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由60g的碳源营养成分、4g的氮源营养成分、0. 02mol的金属离子和余量的蒸馏水组成。
6.根据权利要求1、2、3、4或5所述的促抗氧化剂生成的发酵培养基，其特征在于锰离子来源于MnSO4 · H2O。
7.根据权利要求6所述的促抗氧化剂生成的发酵培养基，其特征在于镁离子来源于 MgSO4 · 7H20。
8.根据权利要求7所述的促抗氧化剂生成的发酵培养基，其特征在于锌离子来源于 ZnCl20
9.促抗氧化剂生成的发酵培养基，其特征在于促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由 5 IOOg的碳源营养成分、0. 1 6g的氮源营养成分、1 IOOg的琼脂、0. 001 0. 04mol 的金属离子和余量的蒸馏水组成；其中碳源营养成分为葡萄糖、蔗糖、淀粉糖浆中的一种或几种；氮源营养成分为玉米浆、蛋白胨、酵母膏中的一种或几种；金属离子为锰离子、镁离子、锌离子中的一种或几种。
10.根据权利要求9所述的促抗氧化剂生成的发酵培养基，其特征在于促抗氧化剂生成的发酵培养基每L由15g的碳源营养成分、Ig的氮源营养成分、IOg的琼脂、0. 03mol的金属离子和余量的蒸馏水组成。
全文摘要
促抗氧化剂生成的发酵培养基，它涉及培养基。促抗氧化剂生成的发酵培养基由碳源营养成分、氮源营养成分、金属离子和余量的蒸馏水组成；其中碳源营养成分葡萄糖、蔗糖、淀粉糖浆中的一种或几种；氮源营养成分是玉米浆、蛋白胨、酵母膏中的一种或几种；金属离子是锰离子、镁离子、锌离子中的一种或几种。促抗氧化剂生成的发酵培养基由碳源营养成分、氮源营养成分、琼脂、金属离子和余量的蒸馏水组成。本发明中促抗氧化剂生成的发酵培养基为液体培养基或固体培养基，培养基组分易得，成本低廉，可以促进抗氧化剂合成，每克发酵培养物(以去水干重计)含抗氧化剂100.7mg～214.4mg。
文档编号C12R1/80GK102250955SQ201110127680
公开日2011年11月23日 申请日期2011年5月17日 优先权日2011年5月17日
发明者葛菁萍, 金涛 申请人:黑龙江大学