专利名称：假肥大型肌营养不良症致病基因突变检测试剂盒及应用的制作方法
技术领域：
本发明属生物技术领域，具体涉及检测假肥大型肌营养不良症致病基因是否发生突变的试剂盒。
背景技术：
假肥大型肌营养不良症是神经系统最常见的X连锁隐性遗传病，患者表现为骨骼肌进行性无力、萎缩、小腿腓肠肌假性肥大，分为两种类型。假肥大型肌营养不良症 (Duchenne muscular dystrophy，DMD)是较严重的类型，发病率为活产男婴的1/3500.通常于20岁左右因呼吸衰竭和(或)心力衰竭死亡。Becker’ s肌营养不良症(Becker’ s muscular dystrophy, BMD)是一种症状较DMD轻的类型，发病率为1/20000，一不影响患者寿命。假肥大型肌营养不良症(Duehenne muscular dystrophy, DMD)是由定位在Xp21 的编码抗肌萎缩蛋白(dystrophin)的dystroplun基因突变所致，约有60% -65%的DMD 患者是由于dystrophin基因外显子缺失所致，5%是由于dystrophin基因重复突变所致， 其余30% -35%的DMD发病是由于dystrophin基因点突变(碱基置换、颠换、缺失、重复或几个碱基的插入等)所致。假肥大型肌营养不良症的发病机制不甚明了，至今尚无有效的治疗方法。所以检出假肥大型肌营养不良症患者的DMD基因突变并查找出相应的女性携带者是减少或预防假肥大型肌营养不良症患儿出生的有效治疗措施。
发明内容
本发明的目的是提供一种采用DNA测序技术检测假肥大型肌营养不良症致病基因DMD是否突变的试剂盒。本检测试剂盒主要包括以下成分(I)DMD基因第1到第79外显子区PCR扩增与测序引物79对，各对引物序列见表 1 ；(2)常规PCR扩增试剂，如dNTP、Taq DNA聚合酶等；(3)常规PCR产物纯化试剂，如SAP酶、ExoI酶等；(4)常规DNA测序试剂，如BigDye mix、EDTA溶液、乙醇溶液、HIDI溶液等。表1 DMD基因第1-79外显子区的PCR扩增与测序引物序列
权利要求
1. 一种检测假肥大型肌营养不良症致病基因DMD基因是否发生突变的试剂盒，其特征在于包括以下成分=(I)DMD基因第1到第79外显子区PCR扩增与测序引物79对，(2)PCR 扩增试剂，(3) PCR产物纯化试剂，(4) DNA测序试剂； 所述的79对引物序列如下第 1对 F:5，_ tggcgaggaactctactattg -3，，R:5，- ttgaagagctcggcaacaa _3， 第 2 对 F:- aagtgatccgtcctcactgg -3^^:5^ - ccatatcttctgctgcttactcc-3'一3，-3:第 3 对 F:5，- tcggcagattaattatgcacac _3，，R:5，- tctgcaggcggtagagtatg第4对 第5对第6对F:atgcctcacaggctctgttc -3^^:5^- ccacaatcaggcatacacga F:aagcttcaatgctaagtctctga -3^^:5^- cagacgacatggtagtgtcaat- tggcatagataccaatgaatcag -3‘ , R 5 ‘-ggacatgatctggaaccatactg 一3，第 7 对F 5 ‘ - ttacactcaagacttaaggactatgg -3 ‘ , R 5 ‘-agtgcaagaaggctgaacatt 一3，第 8 对F 5‘ - gacattcatggacaattcactg - 3 ‘ , R 5 ‘-atgaatattgtagtcaatgaagcaa 一3，第 9 对F5‘ - tgatattaagtgccttcattctgg - 3 ‘ , R5‘-ccagctcttcacgaggagataa 一3，第 10 对- tgccagtggacagtcctagc -3^^:5^ - aatgccttcaatggttgctc第 11 对- gcctgcttctgaagaacttg -3^^:5^ - tgagaatcgtaacttaaccatcaa-3;-3;一3:一3:第 12 对- ccttctcaatgtccaatagatgc -3^^:5^ - ccatcaaccatgtcatctgtg第 13对 F:ggagtacctgagatgtagcagaa -3^^:5^- cacagcacttcagctgattatga 第 14 对 F: ccttccaacttctagcgtaca -3^^:5^- ttgaataatctatgatccaagcaa第 15 对- ccaagatccgtgccttctaa -3^^:5^ - tcaccaccattctccaacaa第 16 对F 5 ‘ - aaggtcaatctaccaacaagcaa - 3‘ , R 5 ‘-tctcactacattaactgacattacagg 一3’第 17 对 F:5，- agaggtgtcaggcaggagtc -3，，R:5，- cctagtcagtcacagaagaatcca-3，第 18 对F 5 ‘ - cacgtgataagctgacagagtga -3‘ , R 5 ‘-ttaacaagtgcttgtctgatataattc第 19 对- ttgttgtgacgcaagtctga -3^^:5^ - cacaatcaattagcgctgtg第 20 对 F:- ggctggtgatagaggcttgt -3，，R:5，- ttcgttccttgttaatacaggttg-3，第 21 对 F 5 ‘ - ggcatattacacatgtagcagga -3‘ , R 5 ‘-ttgagaatgtgacaggagttacaa 一3， 第22对一3:一3:-3:-3'第^对第24对第25对tcatctactttgtttacatgtttgaa -3^^:5^- taagcaaatcgccatccttt- gacttcacacaccagtgctca _3'，R:- caccagtagcatctaaccaccaF:atccatatgcaatgccatca _3，，R:5，_ aggaacaaagccttaaccaaa _3， F:5，- tcacacttatgggaaattgagtg _3，，R:5，_ gaaccaggaaagagcagactgt第 26 对 F:5，- ctgggatgttgtgagaaagaaa _3，，R:5，- gaatgaggaattcaagccaaa第 27 对- acctgctacaaagtaaaggtgaa - 3‘ , R 5 ‘-aagtaccagtgctgagtgataacat 一3，第 28 对- ccgcaacactgtcataatcc -3^^:5^ - tggcattggattgtctctga第 29 对 F:- ggaagctgcgaaatctgtct -3^^:5^ - cctccaaatagtcaaatcagtgaa-3，第 30 对- ggtggttgaggagagtttctg _3'，R:- ctcaaatccaatcttgccaat-3，第 31 对- tcctgtgttggatgaatgga -3^^:5^ - gccacaatacatgtgccaat第 32 对 F 5 ‘ - tcaaacatggaatagcaattaagg - 3‘ , R 5 ‘-gagagagagaggtgtttagaattgc 一3，第 33 对 F:ggacaaacgatgtcatctgc -3^^:5^- tcctgctaaagcttaccattg 第 34 对 F 5 ‘ - aaccttgcagaatcatagtaacca - 3‘ , R 5 ‘-gggaaagataaaggaaggaagaa 一3，第 35 对- tcttctcgctcacttgctca -3^^:5^ - gggaggagtggcgtttatct第 36 对F 5 ‘ - ttagcaacaggaggttgaataaa - 3‘ , R 5 ‘-ccataccatagtaattcagcatttg 一3’第 37 对 F 5 ‘ - gaaaggctatgagcacagtatctta -3‘ , R 5 ‘-ttctgatgactaagtctgaagcagat 一3，第 38 对 F:- aaagatgagggacgcaaatta _3'，R:- caaggaaatgcatcaaatcaaa一3，-3'一3，-3'第 39 对F:- aagggacaacagcctttgaa -3^^:5^ - aagcccaaagtgagggaaac第 40 对- ttcagcccagtttgtagattca _3'，R:- agatttctgaagccaaccaca第 41 对- ttgcaacaccatttgctacc _3'，R:- ttcagctcatttgtctgaattg第 42 对F:aaactctgcaaatgcaggaaa -3^^:5^- ttccatcacccttcagaacc第 43 对- ttctttgccagtacaactgcat _3'，R:- tagtgcctttcaccctgctt第 44 对 F: 5，- aaattgccatgtttgtgtcc -3'，R:5，- gaactgcagggttaagaagaaa-3，第 45 对 F:5'- ctcggtcaagtcgcttcatt -3，，R:5'- atccacataccagcctcctc -3'第 46 对F:5'- tgctgctaaaataacacaaatca -3'，R:5'- agtggtccctgtgcctattg-3'第 47 对: F:5'- tgatctgcaatacatgtggagt - 3' , R:5'-cactgattataaatagtccacgtca -3’第 48 对 F:tgcaaccacaatagatactcttcaa -3',R:5'- tgctcttctcttccttgtgg-3'第 49 对F:5'- ttgtccaggcatgagaatga -3'，R:5'- acagttgcctaagaactggtg-3'第 50 对F:5'- tggctggtctcacaattgtact -3'，R:5'- ggagagactggcatctccat-3'第 51 对F:5'- tcctgttgttcatcatcctagc -3'，R:5'- atgattgtgccactgcactt-3'第 52 对F:5'-gacctgaggattcagaagctg -3'，R:5'- gtctgagccaagtccgtgag -3'第 53 对F:5'- tgtcattcttgcatgccttc -3',R:5'- cctctgcctctctcctcctt-3'第 54 对F:5'-agaaggcaatacgccaagaa -3',R:5'- ttacgtagacatgtgagataccagtt-3'第 55 对F:5'- tctcagcattctgcatgtgg -3',R:5'- ttgttgatgtcttgatgagtacga-3'第 56 对F:5'-ggcattaactatccagaatgctc -3',R:5'- ttgcaacaatagaattcctcctc-3'第 57 对F:5'- ttgtggtatgcatcctaacg -3',R:5'- aataccatgtgaatgaagactgaa-3'第 58 对F:5'- tcctaataccattgccttaggtgt -3',R:5' - tacagcctgcagaactgagc-3'第 59 对F:5'-aacgagtctggaatactatatacgg -3',R:5'- atccaattggccttcctctt-3'第 60 对F:5'-cagcaggttaatccatcctgt -3',R:5'- tgtaggccaggctaatgtcg-3'第 61 对F:5' -gtagtgttccacattggatgg _3',R:5'- ttggataggaaggtgccact-3'第 62 对F:5'-ttgtggtggttgtagttattgg -3'，R:5'- gcaacaggaattgtgacagc-3'第 63 对F:5'-tcatcaacttagagtcgaggcata -3'，R:5'- gcattaggtccacagcttcc-3'第 64 对F:5'-attgcattgtaggtcatca -3'，R:5'- catgaggaatctgctgtcaa -3'第 65 对F:5'-agaattgctactggaattga - 3',R:5'-catacctactgcctactgaagagc -3’第 66 对F:5'-tcgctcaggtgtgtagtt -3'，R:5'- taacagcaactggcacagga
2.根据权利1所述的试剂盒用于检测DMD基因突变体。
全文摘要
本发明公开了一种检测假肥大型肌营养不良症致病基因DMD基因是否发生突变的试剂盒。该试剂盒的主要成分包括(1)DMD基因第1到第79外显子区PCR扩增与测序引物79对，(2)PCR扩增试剂，(3)PCR产物纯化试剂，(4)DNA测序试剂。本发明的试剂盒用于检测假肥大型肌营养不良症致病基因DMD的突变体，可以快速方便地查出致病基因的携带者以及病人，可应用于产前诊断、阻止患儿出生，降低假肥大型肌营养不良症的发病率。
文档编号C12Q1/68GK102230001SQ20111014860
公开日2011年11月2日 申请日期2011年6月3日 优先权日2011年6月3日
发明者王桢媚, 秦胜营, 贺林, 陈伟坚, 陈培华, 马端 申请人:上海佰真基因组学与人类健康研究院, 上海佰真生物科技有限公司