专利名称：一株用于发酵小桐子饼粕制作生物菌肥的杂色曲霉菌的制作方法
技术领域：
本发明属于生物菌肥领域，涉及一种能发酵小桐子饼粕、降解其毒性成分并能促进多种植物生长的杂色曲霉菌。
背景技术：
随着石油资源的日益紧缺，大力发展生物质能源是我国提高能源安全、保障能源供应的必然战略选择。小桐子(Jatropha curcas L.又名膏桐、麻疯树等)属于大戟科麻疯树属，被认为是发展生物柴油的合适树种，但其工业发展还处于早期阶段，存在成本较高、 副产物无法充分利用等问题。小桐子饼粕含有丰富的营养物质，可以利用小桐子饼中的营养成分作为微生物生长的培养基发酵制作生物菌肥。通过制作高附加值的生物菌肥，可以降低小桐子生物柴油生产成本，从而使其具有较好的价格竞争力，有利于小桐子生物柴油的产业化。随着人民生活水平的不断提高，国内外都在积极发展绿色农业来生产安全、无公害的绿色食品。生产绿色食品过程中要求不用或尽量少用化学肥料、化学农药和其它化学物质。微生物肥料不但能缓和或减少农产品污染，而且能够改善农产品的品质，有广阔的市场前景。能加速各种有机物料(包括农作物秸秆、畜禽粪便、生活垃圾及城市污泥等)分解、腐熟的微生物活体制剂被称之为有机物料腐熟剂，是近年来刚发展起来的一类生物菌肥，现在的有机物料腐熟剂大部分是以农作物秸秆和畜禽粪便的快速腐熟为目标，尚未见到专用于小桐子饼这种既有毒性又含有高蛋白质含量的有机物料腐熟剂。利用小桐子饼制作肥料方面申请的专利较少。赵琪等申请了《一种麻疯树菌根菌复合肥及其制备方法O00710195056.7)》。本发明公开了一种麻疯树菌根菌复合肥，含有囊霉属(Glomus)和巨孢囊霉属(Gigaspora)的一种或多种丛枝菌根类真菌(Arbuscular mycorrhizal fungi)。这种方法存在的问题是由于囊霉是一种植物共生菌，不能离开活体植物，必须使用活体植物进行培养，不利于该菌的大规模、快速的培养。由于该菌不会在人工培养基上生长，小桐子饼粕仅起到载体的作用，不能发酵小桐子饼，无法对小桐子饼的毒性进行脱除。小桐子饼中含有毒性成分，当没有发酵的小桐子饼粕作为肥料施用于田间，饼中含有的毒性成分会溶入周围水体，会对环境会造成很大的污染，破坏生态平衡，会影响人的健康。由于小桐子饼中含有一定的抗菌物质，加上其含有高含量的蛋白质，很多微生物不能在小桐子饼上快速生长，不能降解小桐子饼中的毒性成分，尚未见到有关既能用于发酵小桐子饼发酵又能脱除小桐子饼毒性，还能促进植物生长的菌株的报道。杂色曲霉是一类环境中常见的微生物，经研究发现其可以在由小桐子饼为主要成分配制的培养基上快速生长，但尚未见到将杂色曲霉用于生物菌肥的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有快速发酵小桐子饼并能有效脱除小桐子饼粕中毒性成分，还能对多种农作物有显著促生长效应的微生物——杂色曲霉原变种A003菌株 (Aspergillus versicolor A003)。将该株微生物菌株接种于以小桐子饼为主要成分配制的培养基上，经培养后能够脱除小桐子饼粕中的毒性成分。经多种活体动物实验，经发酵后的饼粕，毒性成分已被脱除干净。经多种植物栽培实验，发酵后的小桐子饼对多种植物有明显的促生长效应。本发明所述的曲霉菌命名为杂色曲霉原变种A003 Aspergillus versicolor A003，保藏编号为 CCTCC NO :M 2011249o本发明所述的杂色曲霉菌系从我国云南楚雄的小桐子根部分离得到。现保藏在国家知识产权局指定的保藏单位保藏(保藏单位名称中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2011年7月11日，保藏编号为CCTCCN0:M2011M9。保藏单位地址武汉珞珈山，武汉大学内，邮政编码430072)。本发明所述的杂色曲霉菌在大多数培养基上都生长良好。由于小桐子饼含有抗菌物质，很多微生物并不能在由小桐子饼配制的培养基上良好生长。有一些菌虽然能在小桐子饼上快速生长，但不能脱除小桐子饼中的毒性成分。也有一些微生物，虽然能够在以小桐子饼粕为主要成分的培养基上生长良好，但没有促进植物生长的功效。经多种方法、多种指标筛选获得的杂色曲霉原变种A003菌株则可以在小桐子饼中加入或不加入一些能够疏松小桐子饼、增加通气或调整营养成分配比的物质时，都可以生长良好。生长有杂色曲霉原变种A003的小桐子饼粕培养物，毒性成分可以被该株微生物有效脱除。经脱毒后的小桐子饼及其上面生长的杂色曲霉菌，可以用作肥料，促进植物生长。
图1.菌株A003在查氏培养基上的菌落形态Fig. IColonial Morphological characteristics of Aspergillus versicolorA003on Czapek' s plate.图2菌株A003的孢子头及分生孢子Fig. 2-1ISpore and conidiophore morphological characteristics of Aspergillus versicolor A003 on Czapek' s plate.图3.杂色曲霉A003和在Genbank数据库中部分相关菌的系统发育树。Fig. 3Phylogeny tree of Aspergillus versicolor A003and related strains in Genbank database.菌株特征菌落在查氏琼脂上生长局限，25°C 7天直径16mm，10-12天为M_30mm. 质地为丝绒状。菌落不平，稍厚，中央部分隆起，呈不同程度的翘起。颜色为白色，或初为白色，后呈淡黄色，再后呈暗橄榄色。有辐射状沟纹，渗出液无。背面为淡黄褐色。分生孢子头呈辐射形，直径25-125 μ m，分子孢子梗光滑，无色。产孢子结构双层，梗基 5-8 μ mX 2-3 μ m，瓶梗6-8 μ mX 1. 5-2. 5 μ m ；顶囊半球形，直径9-20 μ m，约3/4的表面可育。分子孢子球形，直径2. 0-3. 0 μ m，具小刺。培养条件查氏培养基
斜面培养条件查氏培养基种子培养条件PDA液体培养基本菌株发酵小桐子饼制作脱毒肥料的工艺流程小桐子饼一加入一定比例的麦麸或小桐子的茎杆粉、水一灭菌一接种一培养一干燥一成品本发明所述的脱毒小桐子饼制作方法由以下步骤组成一、用麦麸培养基或者液体培养基培养杂色曲霉原变种A003。二、将培养好的菌种混入灭菌后的小桐子饼固体培养基上。三、在条件下培养3-5天。四、收获培养物，经干燥后即可用作肥料。本发明所述的小桐子饼粕，包括用压榨法获得的压榨饼，也包括用溶剂浸出法获得的小桐子粕。本发明要解决的技术问题是利用杂色曲霉能快速发酵小桐子饼粕、降解小桐子饼中毒性成分并能促进多种农作物生长的效应，解决限制小桐子饼的利用问题。该技术由以下的特征组成配制含小桐子饼的固体或液体培养基；将培养基灭菌，接种杂色曲霉原变种A003菌株，培养；将培养好的培养物经低温干燥后即可用作生物菌肥。有益效果是杂色曲霉能在小桐子饼上快速生长，有利于大规模生产；能专一性降解小桐子饼中的毒性成分，在小桐子施用于田间后，不会对环境造成污染；能促进植物生长，施用于田间后，能够提高作物的产量。
具体实施例1、按小桐子饼水按1 1的比例配制培养基，按常规方法灭菌60分钟后，冷却， 接种杂色曲霉原变种A003 (AspergiIlus versicolor A003)菌株，培养2天后，杂色曲霉菌长满培养基，将生长好的小桐子饼经干燥后即可得到脱毒的小桐子饼生物菌肥。2、按小桐子饼小桐子茎杆粉水7 3 10的比例配制液体培养基，在500ml 三角瓶中装入培养基50克，1个大气压灭菌1个小时后，冷却，接种杂色曲霉A003，28°C培养一周，低温干燥即得脱毒小桐子饼生物菌肥。
权利要求
1.一株杂色曲霉菌，其特征在于命名为杂色曲霉原变种(Aspergillus VersiCOlOrA003)，现在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2011年7月18 日，保藏单位名称为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO :M2011249o
2.如权利要求1所述的杂色曲霉，将其接种于以小桐子饼粕为主要成分的培养基上进行培养，能够在培养基上快速生长，并可以脱除小桐子饼粕中的毒性成分，其培养物及其活菌体可以用作生物菌肥，能够促进多种作物生长。
全文摘要
一株用于发酵小桐子饼粕制作生物菌肥的杂色曲霉菌，涉及肥料领域。本发明中所述的曲霉菌命名为杂色曲霉原变种(Aspergillus versicolor A003)，该菌株已在国家知识产权局专利局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2011年7月18日，保藏单位名称中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NOM 2011249。将本发明接种于以小桐子饼粕为主要成分配制的培养基上时，能够快速发酵并脱除小桐子饼粕中的毒性成分，脱除毒性后的小桐子饼粕及其上面生长的活菌体可以用作生物菌肥，能够多种促进作物生长。
文档编号C12N1/14GK102329739SQ20111025402
公开日2012年1月25日 申请日期2011年8月31日 优先权日2011年8月31日
发明者王兴红 申请人:云南大学