专利名称：一种红霉素发酵补料用混合糖及应用方法
技术领域：
本发明属于生物发酵技术领域，特别是涉及一种红霉素发酵补料用混合糖及其应用方法。
背景技术：
红霉素发酵是采用一种放线菌(红色链霉菌)作为产生菌，经过复壮、分离、孢子培养制备成斜面孢子备用，然后将斜面孢子接入种子罐进行种子扩大培养，最后接入发酵复 合培养基，通过对培养温度、PH、基质浓度等参数的控制，使其最大限度的产生红霉素的过程。红霉素发酵现行的发酵工艺，发酵过程中补料主要以补加单糖即葡萄糖为主。以葡萄糖为基础补料存在主要缺陷为(I)葡萄糖液本身的PH (4. 6 5. 2)较低，红霉素发酵代谢过程中PH更低，容易偏离红霉素合成的最佳PH值(6. 5 7. 5)。(2)葡萄糖在红霉素发酵过程中补入，葡萄糖的代谢速度较快，与红霉素产生菌的生长速率及产物合成速率不匹配，其结果导致葡萄糖中间代谢产物累积过多，从而抑制红霉素前体物质的合成，减慢了红霉素产物的合成速率，即降低了红霉素放罐的发酵单位。
发明内容
本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供确保一种PH、代谢PH及代谢速率均适合红霉素产生菌生长及产素能力，促进红霉素前体物质的合成，加快红霉素产物的合成速率，提高红霉素发酵单位的红霉素发酵补料用的混合糖。本发明的另一目的是提供上述混合糖的应用方法。为实现上述发明目的所采取的技术方案为
一种红霉素发酵补料用混合糖，其特征是将质量浓度为25 35%淀粉乳用中温淀粉酶在PH6. O 8. 0，温度75 80°C条件下水解至葡萄糖值为10 30%，继续升温至IOO0C,将中温淀粉酶灭活，然后降至室温，后按质量浓度20 30%投入灭菌罐进行灭菌处理，得到PH6. O 8. 0，浓度20 30%的混合糖。上述灭菌温度控制在118 121°C，压力O. IMPa，灭菌20 30分钟。上述混合糖的应用方法，其特征是在红霉素发酵补料过程中将混合糖以流加方式补入，根据发酵液中的还原糖参数控制补入量。在红霉素发酵至8 22h补入灭菌后的混合糖。发酵过程还原糖控制在O. 2 3. O %。红霉素发酵30h至放罐，效价增长速率无明显减慢。本发明通过将淀粉乳采用淀粉酶处理后变成含有单糖、双糖和多糖的混合糖，这种混合糖因含有部分淀粉乳，对高温高压灭菌的耐受性较单糖好，灭菌过程中不易产生其它副产物。此混合糖的PH为6. O 8. 0，应用到红霉素发酵补料中，代谢PH为6. 5 7. 5，与红霉素最佳产素PH相一致。包含单糖、双糖和多糖的混合糖，在红霉素发酵过程中代谢的速度与菌丝的生长速度、产素速率一致性较好，因此可促进红霉素前体物质的合成，加快红霉素产物的合成速率，提高红霉素发酵单位，自8 22h补入时有利于菌体的生长产素，发酵单位较正常对比罐平均高出15 20%。
具体实施例方式实施例对比案例
将按20 30%浓度配制好的葡萄糖进行灭菌，灭菌结束后葡萄糖液PH为4. 6 5. 2，质量浓度20 30%。将葡萄糖应用在红霉素发酵，流加补入，根据还原糖参数控制补入量。在红霉素发酵至8 22h补入灭菌后的葡萄糖液。发酵过程还原糖控制在O. 2 3. 0%。在30 40h出现粘度高峰，120h后粘度下降，效价增长速率明显减慢。发酵实验罐162h放罐，放罐效价6950u/ml。实施例I
将质量浓度为35%的淀粉乳，加入O. 2%的中温淀粉酶，PH在6. O 8. 0，升温温度在75 80°C之间，水解到DE值为20%，升温至100°C，再降至室温，PH在6. O 8. O。根据发酵要求配制浓度为30 %的补料糖，并进行灭菌，灭菌温度控制在118 121 °C，压力O. IMPa,灭菌20 30分钟。在红霉素发酵至22 h采用流加方式补入灭菌后的混合糖，代谢后其过程PH为6. 5 7. 5，过程还原糖控制在O. 2 3. 0%。166h放罐，放罐单位为8100u/ml，比对比实验提高16. 55%。实施例2
将质量浓度为25%的淀粉乳，加入O. 4%的中温淀粉酶，PH在6. O 8. O,升温温度在75 80°C之间，水解到DE值为20%，升温至100°C，再降至室温，PH在6. O 8. O。根据发酵要求配制浓度为20 %的补料糖，并进行灭菌，灭菌温度控制在118 121 °C，压力O. IMPa,灭菌20 30分钟。在红霉素发酵至19 h采用流加方式补入灭菌后的混合糖，代谢后其过程PH为6. 5 7. 5，过程还原糖控制在O. 2 3. 0%。162h放罐，放罐单位为7850u/ml，比对比实验提高12. 95%。实施例3
将质量浓度为30%的淀粉乳，加入O. 5%的中温淀粉酶，PH在6. O 8. 0，升温温度在75 80°C之间，水解到DE值为20%，升温至100°C，再降至室温，PH在6. O 8. O。根据发酵要求配制浓度为25 %的补料糖，并进行灭菌，灭菌温度控制在118 121 °C，压力O. IMPa,灭菌20 30分钟。在红霉素发酵至20 h补入灭菌后的混合糖，代谢后其过程PH为6. 5 7. 5，过程还原糖控制在O. 2 3. 0%。172h放罐，放罐单位为8450u/ml，比对比实验提高21. 58%。
权利要求
1.一种红霉素发酵补料用混合糖，其特征是将质量浓度为25 35%淀乳粉用中温淀粉酶在PH6. O 8. O，温度75 80°C条件下水解至葡萄糖值为10 30%，继续升温至100°C，将中温淀粉酶灭活，然后降至室温，按质量浓度20 30%投入灭菌罐进行灭菌处理，得到PH6. O 8. 0，浓度20 30%的混合糖。
2.按照权利要求I所述的红霉素发酵补料用混合糖，其特征是上述灭菌温度控制在118 121°C，压力O. IMPa，灭菌2O 3O分钟。
3.—种如权利要求I所述的混合糖的应用方法，其特征是在红霉素发酵补料过程中将混合糖以流加方式补入，根据发酵液中的还原糖参数控制补入量。
4.按照权利要求3所述的混合糖的应用方法，其特征是在红霉素发酵至8 22h补入灭菌后的混合糖。
5.按照权利要求3所述的混合糖的应用方法，其特征是发酵过程还原糖控制在O. 2 3. 0%。
6.按照权利要求3所述的混合糖的应用方法，其特征是红霉素发酵30h至放罐，效价增长速率无明显减慢。
全文摘要
本发明涉及一种红霉素发酵补料用混合糖及其应用方法，是将质量浓度为25～35%淀粉乳用中温淀粉酶在pH6.0～8.0,温度75～80℃条件下水解至葡萄糖值为10～30％，继续升温至100℃，将中温淀粉酶灭活，然后降至室温,后按质量浓度20～30％投入灭菌罐进行灭菌处理，得到pH6.0～8.0，浓度20～30％的混合糖。本发明通过将淀粉乳采用淀粉酶处理后变成含有单糖、双糖和多糖的混合糖，由于含淀粉乳，对高温高压灭菌的耐受性好，灭菌过程中不易产生其它副产物，且其pH、代谢pH及代谢速率均适合红霉素产生菌生长及产素能力,因此能够促进红霉素前体物质的合成,加快红霉素产物的合成速率,提高红霉素发酵单位。
文档编号C12P19/62GK102839204SQ20121036026
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月25日 优先权日2012年9月25日
发明者李学兵, 孙瑞君, 朱娜, 张志 申请人:宁夏启元药业有限公司