专利名称：利于家禽生长的胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备法及所用菌的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种利于家禽生长的胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备法及所用菌。
背景技术：
微生物多糖是细菌、真菌和蓝藻等微生物在次生代谢过程中产生的对微生物有保护作用的生物高聚物。近年来，越来越多的细菌多糖在生产和生活中发挥着广泛的作用，这些细菌多糖可以在人工控制条件下利用各种废渣、废液进行生产，减轻了环保压力，应用前景比动植物多糖更为广阔。美国生物技术副产品协会(the biotechnology byproductsconsortium，简称BBC，主要致力于增加农产品的附加值及防治农业活动中所产生的污染物)近年来的研究调查显示细菌多糖的应用已成为当前生物产品在农业领域中应用的五大主题之一。 随着畜禽业的迅速发展，畜禽养殖业规模呈逐年扩大趋势。现在畜禽养殖已从过去的粗放养殖转向高密度、集约化养殖，因此对配合饲料的需求量越来越大。在配合饲料中，促生长剂和抗生素的应用日益普及。促生长剂是指可刺激畜禽生长，提高畜禽增重速率和饲料利用率，并增进畜禽动物健康的添加剂。多糖作为免疫调节剂代替或部分代替促生长剂和抗生素显示了巨大的潜力，其中植物和真菌多糖作为饲料添加剂的研究较为普遍，而细菌多糖用于畜禽养殖的报道较为鲜见。细菌多糖来源广泛，生产周期短、成本低，因此相对于植物、真菌多糖更具优势。胶质类芽孢杆菌因具固氮、解钾、解磷与生物吸附等功能而广泛用于农业、冶金及环保领域。作为微生物肥料，胶质类芽孢杆菌已有20多年的应用历史。胶质类芽孢杆菌的重要特征是产生丰厚的荚膜多糖，其分子量可达2. 6X IO6 D，富含羧基和羟基的高分子多糖可高效络合离子、吸附悬浮颗粒和胶体物质，近几年作为絮凝剂、络合剂在废水处理和生物冶金行业中的应用研究极其活跃。2003年有报道将胶质类芽孢杆菌用于生产保健饮料。利用该菌荚膜多糖作为家禽饲料添加剂未见报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备方法及所用菌株。为了解决上述技术问题，本发明提供一种胶质类芽孢杆菌，保藏名称为胶质类芽抱杆菌YC-13 # (Paenibacillus mucilaginosus YC-13 #)，保藏单位中国典型培养物保藏中心，保藏地址中国武汉武汉大学；保藏日期2012年10月16日，保藏号CCTCC No:M 2012406。该菌以下简称胶质类芽孢杆菌CCTCC 2012406。本发明还同时提供了上述胶质类芽孢杆菌的用途利于和促进家禽生长。本发明还同时提供了利于家禽生长的胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备方法，包括以下步骤
I)、菌株活化胶质类芽孢杆菌CCTCC 2012406经选择性培养基于27 29 V (最佳为28°C)活化培养22 26 h (最佳为24h)，然后接种于种子菌生产培养基中，于27 29°C (最佳为28°C)，摇床转速20(T250r/min (最佳为220r/min)培养22 26 h (最佳为24h)，得种子菌；2)、发酵培养将种子菌按扩11% (最佳为10%)体积比的接种量接种于液体发酵培养基中，在29 31°C (最佳为30°C)，摇床转速20(T250r/min (最佳为220r/min)条件下发酵培养60 96h (最佳为72 h)，得发酵液；3)、提取粗多糖
在发酵液中加入2 3体积倍的灭菌去离子水进行稀释；然后离心(离心目的为去除菌体)，收集上清；将所得的上清减压浓缩，所得的浓缩液用体积浓度为94、6% (最佳为95%)酒精进行醇沉；备注说明所得的浓缩液约为发酵液体积的1/2 1/4 ;浓缩液与酒精的体积比一般为1:2 4 ;所得的沉淀用体积浓度为94、6% (最佳为95%)酒精进行洗涤，然后经冷冻处理，得胶质类芽孢杆菌粗多糖。备注说明冷冻处理为先于低温(_80°C)冰箱冷冻处理12 h，再于-110°C冻干处理16 24小时。作为本发明的胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备方法的改进选择性培养基为蔗糖7. 8 8. 2g/L，NaH2PO4 0. 7 0. 9g/L，MgSO4 7H20 0. 4 0. 6g/L，CaCO3 0. 08^0. 12 g/L，琼脂粉 16. 5 17. 5g/L，其余为水；pH 7. 0 ；种子菌生产培养基为蔗糖9. 5 10. 5 g/L, K2HPO4 0. 4 0. 6 g/L, MgSO4 7H200. 4 0. 6g/L, (NH4) SO41. 8 2. 2 g/L, CaCO3 0. 08 0. 12 g/L，其余为水；pH 7. 5 ；液体发酵培养基为蔗糖14. 5 15. 5 g/L, K2HPO4 0. 4 0. 6 g/L, MgSO4 7H200. 4 0. 6 g/L, FeCl3 0. 08 0. 12 g/L, CaCO31. 4 1. 6 g/L，其余为水；pH 7. 5。作为本发明的胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备方法的进一步改进选择性培养基为蔗糖8. Og/L，NaH2PO4 0. 8 g/L, MgSO4 *7H20 0. 5 g/L, CaCO3 0.1g/L，琼脂粉17 g/L，其余为水；pH 7.0 ；种子菌生产培养基为蔗糖10. 0 g/L, K2HPO4 0. 5 g/L, MgSO4 7H20 0. 5 g/L,(NH4) SO4 2. 0 g/L, CaCO3 0.1 g/L，其余为水；pH 7. 5 ；液体发酵培养基为蔗糖15.0 g/L, K2HPO4 0.5 g/L, MgSO4-7H20 0.5 g/L, FeCl30.1 g/L, CaCO31. 5 g/L，其余为水；pH 7. 5。本发明制备而得的胶质类芽孢杆菌粗多糖作为饲料添加剂用于家禽养殖，以代替或部分代替促生长剂和抗生素，促进家禽绿色养殖。胶质类芽孢杆菌粗多糖实际使用时，研细后添加于基础饲料中，充分混匀，从而获得改进型家禽饲料；每Ikg基础饲料中添加f 7 g的胶质类芽孢杆菌粗多糖。基础饲粮组成及营养水平见下表1:表I基础饲粮组成及营养水平(％)
权利要求
1.胶质类芽孢杆菌，其特征是保藏名称为胶质类芽孢杆菌YC-13# (Paenibacillus mucilaginosus YC-13 #)，保藏单位中国典型培养物保藏中心，保藏地址中国武汉武汉大学；保藏日期2012年10月16日，保藏号CCTCC No: M 2012406。
2.如权利要求1所述的胶质类芽孢杆菌的用途，其特征是制备利于家禽生长的饲料添加剂。
3.利于家禽生长的胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备方法，其特征是包括以下步骤1)、菌株活化胶质类芽孢杆菌CCTCC 2012406经选择性培养基于27 29 1活化培养22 26 h，然后接种于种子菌生产培养基中，于27 29°C，摇床转速20(T250r/min培养22 26 h，得种子囷；2)、发酵培养将种子菌按9 11%体积比的接种量接种于液体发酵培养基中，在29 31°C，摇床转速 20(T250r/min条件下发酵培养60 96 h，得发酵液；3)、提取粗多糖在发酵液中加入2 3体积倍的灭菌去离子水进行稀释；然后离心，收集上清；将所得的上清减压浓缩，所得的浓缩液用体积浓度为94、6%酒精进行醇沉；所得的沉淀用体积浓度为94、6%酒精进行洗涤，然后经冷冻处理，得胶质类芽孢杆菌粗多糖。
4.根据权利要求3所述的胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备方法，其特征是所述选择性培养基为蔗糖 7. 8 8. 2g/L，NaH2PO4 O. 7 O. 9g/L, MgSO4 · 7H20 O. 4 O. 6 g/L，CaCO3 O. 08 0· 12 g/L，琼脂粉 16. 5 17. 5g/L，其余为水；pH 7. O ；所述种子菌生产培养基为蔗糖9. 5 10. 5 g/L, K2HPO4 O. 4 0· 6 g/L, MgSO4 · 7H20 0. 4 0. 6g/L, (NH4) SO41. 8 2· 2 g/L, CaCO3 0. 08 0· 12 g/L，其余为水；pH 7. 5 ；所述液体发酵培养基为蔗糖 14. 5^15. 5 g/L, K2HPO4 O. 4^0. 6 g/L, MgSO4 · 7H20O.4 O. 6 g/L, FeCl3 O. 08 O. 12 g/L, CaCO31. 4 1. 6 g/L，其余为水；pH 7. 5。
5.根据权利要求3或4所述的胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备方法，其特征是所述选择性培养基为蔗糖 8. Og/L, NaH2PO4 0.8 g/L，MgSO4 ·7Η20 0.5 g/L, CaCO3 0.1g/L，琼脂粉17 g/L，其余为水；pH 7.0 ；所述种子菌生产培养基为蔗糖10. O g/L, K2HPO4 O. 5 g/L, MgSO4 · 7H20 O. 5 g/L, (NH4) SO4 2. 0 g/L, CaCO3 0.1 g/L，其余为水；pH 7. 5 ；所述液体发酵培养基为蔗糖 15. O g/L, K2HPO4 0.5 g/L, MgSO4 ·7Η20 0.5 g/L, FeCl3 0.1 g/L, CaCO31. 5 g/L，其余为水；pH 7. 5。
全文摘要
本发明公开了一种胶质类芽孢杆菌，保藏名称为胶质类芽孢杆菌YC-13﹟(Paenibacillus mucilaginosus YC-13﹟)，保藏单位中国典型培养物保藏中心，保藏地址中国 武汉 武汉大学；保藏日期2012年10月16日，保藏号CCTCC No: M 2012406。本发明还同时公开了上述胶质类芽孢杆菌的用途制备利于家禽生长的饲料添加剂。本发明还同时公开了一种利于家禽生长的胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备方法，包括菌株活化、发酵培养、提取粗多糖。
文档编号C12R1/07GK102994427SQ201210494869
公开日2013年3月27日 申请日期2012年11月28日 优先权日2012年11月28日
发明者胡秀芳, 伍渡清, 钱鹏 申请人:浙江理工大学