专利名称：一种谷胱甘肽硫转移酶基因多态性检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及ー种检测试剂盒，尤其是涉及一种谷胱甘肽硫转移酶基因多态性检测试剂盒。
技术背景
研究发现95%以上的致癌物进入体内需经代谢途径激活后才能与DNA等生物大分子结合，引起早期生物学反应，最終导致癌变。在这种激活反应过程中涉及两种主要酶系即细胞色素 P450 (Cytochrome CYP450)和谷胱甘妝转硫酶(Glutathione s-transferaseGST)。CYP450是体内重要的激活酶(又称I相酶)，GST是体内重要的灭活酶(又称II相酶)。所以致癌物能否引起靶细胞的癌变很大程度取决于这两类酶的活性及彼此的平衡。GSTs即谷胱甘肽硫转移酶蛋白，是ー类多功能的ニ聚蛋白家族，主要催化还原性谷胱甘肽(GSH)与亲电子物质间的结合反应，使其失去DNA结合活性，此即通常意义上的I相代谢酶的解毒功能，GSTs可分为GSTA、GSTM、GSTP和GSTT四类。GSTMl和GSTTl都能催化CYP类代谢活化的产物或由于氧化应激所造成的脂质或DNA过氧化物的解毒过程，提示二者之间可能存在协同作用，而且人群中都存在其编码基因完全缺失的多态性现象。有研究指出有GSTMl和GSTTl缺失的个体更易患化学致癌物所致的癌症。GSTs可催化GSH与多种化疗药物结合，促进其降解，使肿瘤对化疗药物的敏感性减低，化疗失败。GSTMl基因的纯合缺失导致了机GST-μ同エ酶的缺乏，从而降低化疗药物的失活，提高疗效，増加患者存活几率。因此，化学致癌物代谢酶，即药物代谢酶基因多态性检测尤其是GSTs基因多态性的检查对于临床肿瘤病人的个体化用药及肿瘤发病机制研究至关重要。但目前临床检测GSTs基因多态性的检测试剂原料需多方配备，实验过程分步进行，耗时较长，容易污染，所以探索一种检测GSTs基因多态性快速可靠的方法已经成为临床实验研究的热点问题。
实用新型内容为了解决上述技术问题，本实用新型提供一种谷胱甘肽硫转移酶基因多态性检测试剂盒，包括盒体I、盒盖2、固定座3、装引物的试剂瓶4、装酶混合物的试剂瓶5，固定座3上设置有离心管6、加样器吸头7。进ー步地，所述固定座3还设置有孔8。孔8设置用来分别将离心管6、加样器吸头7固定，以防止遗撒。孔8的形状依据不同离心管、加样器吸头的形状和大小而设置。所述引物包括扩增引物和白蛋白内參。其中，扩增引物为特异性扩增GST区域的引物，包括GSTMl、GSTTl ;所述GSTMl的上游引物序列为gaactccctgaaaagctaaagc所述GSTMl的下游引物序列为gttgggctcaaatatacggtgg ;所述GSTTl的上游引物序列为ttccttactggtcctcacatctc ;所述GSTTl 的下游引物序列为 tcaccggatcatggccagca ;所述白蛋白内參的上游引物序列为gccctctgctaacaagtcctac ;所述白蛋白内參的下游引物序列为gccctaaaaagaaaatcgccaatc,引物浓度为 100pmol/L。[0009]所述酶混合物包括浓度为O. 4mmol/L 的 dNTPs, 3mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,I. 25U/25 μ I 的 rTaq。本实用新型与现有产品相比，具有如下积极有益的效果本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、制造容易、检测过程不易受污染；本试剂盒在检测谷胱甘肽硫转移酶基因多态性时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。
图I为本实用新型的整体结构示意图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型进行进ー步说明。 表I为本实用新型PCR反应体系。如图I所示，本实用新型的一个实施例为谷胱甘肽琉转移酶基因多态性检测试剂盒，包括盒体I、盒盖2、固定座3、装引物的试剂瓶4、装酶混合物的试剂瓶5，固定座3上设置有离心管6、加样器吸头7、孔8。离心管6和加样器吸头7放置在孔8内。孔8的形状依据不同离心管、加样器吸头的形状和大小而设置。所述引物包括扩增引物和白蛋白内參。其中，扩增引物为特异性扩增GST区域的引物，包括GSTMl、GSTTl ;所述GSTMl的上游引物序列为gaactccctgaaaagctaaagc所述GSTMl的下游引物序列为gttgggctcaaatatacggtgg ;所述GSTTl的上游引物序列为ttccttactggtcctcacatctc ;所述GSTTl 的下游引物序列为 tcaccggatcatggccagca ;所述白蛋白内參的上游引物序列为gccctctgctaacaagtcctac ;所述白蛋白内參的下游引物序列为gccctaaaaagaaaatcgccaatc,引物浓度为 100pmol/L。所述酶混合物包括浓度为O. 4mmol/L 的 dNTPs, 3mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,
I.25U/25 μ I 的 rTaq ο操作方法I)取模板 DNA取病人全血1ml，常规提取DNA，取IulDNA作为模板。2)反应体系将各反应物质按照如下表I中反应体系进行配比表I[0024]
权利要求1.一种谷胱甘肽硫转移酶基因多态性检测试剂盒，其特征在于，包括盒体(I)、盒盖(2)、固定座(3)、装引物的试剂瓶(4)、装酶混合物的试剂瓶(5)，固定座(3)上设置有离心管(6)、加样器吸头(7) ο
2.根据权利要求I所述的谷胱甘肽硫转移酶基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述固定座⑶还设置有孔(8)。
专利摘要本实用新型公开一种谷胱甘肽硫转移酶基因多态性检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2、固定座3、装引物的试剂瓶4、装酶混合物的试剂瓶5，固定座3上设置有离心管6、加样器吸头7、孔8。本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、制造容易、检测过程不易受污染；本试剂盒在检测谷胱甘肽硫转移酶基因多态性时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。
文档编号C12Q1/68GK202440522SQ20122007569
公开日2012年9月19日 申请日期2012年3月2日 优先权日2012年3月2日
发明者冯继锋, 吴建中, 唐金海, 曹海霞, 马蓉 申请人:冯继锋, 吴建中, 唐金海, 曹海霞, 马蓉