杀菌剂在液态系统中的应用的制作方法
【专利摘要】本公开内容提供了微藻生长的液体培养系统中检测有害生物的方法。本公开内容还提供了在液体系统中处理和控制有害生物的方法，和在液体培养系统中增加微藻产量的方法。提供了用于从液体培养系统中生长、监测、处理和收集微藻的方法。
【专利说明】杀菌剂在液态系统中的应用
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求美国临时专利申请61/547，473的权利，该申请于2011年10月14日提交，其用于所有目的的全部内容通过参考被引入到本文。
【技术领域】
[0003]本公开内容包括提供在液体系统，如水池、池塘等提高产量的方法。本公开内容还包括在这种系统中检测有害生物的方法。这种系统对于水生生物质的生产是有用的，例如藻类，特别是微藻和蓝藻。用本文所述方法生产的水生生物质可用于生产多种有用的产品。在一个【具体实施方式】中，生产的生物质被用于油料生产，可以精制成各种产品，包括但不限于运输燃料。
【背景技术】
[0004]微藻是单细胞非维管光合生物，通过光合作用产生氧气。其中一组，微藻，有很多种原因可使其在生物技术中应用，包括他们的高增长率和容忍不同的环境条件。已有报道微藻在商业重要产品的多种工业过程中的应用。例如，微藻已被用于生产营养补充剂、药物、天然染料、鱼类和甲壳类动物的食物原料、农业有害生物的生物控制，生产氧气和去除氮，磷和有毒物质的污水处理和污染控制，如塑料的生物降解或二氧化碳的吸收。
[0005]由于燃料产品的生产，微藻日益受到重视。燃料产品的需求日益增加，例如，油类、油类化学品、和对于石油化学品的生产有用的其他物质。
[0006]一年中，微藻可以生产陆生植·物10倍至100倍的物质。微藻还产生油(脂质)，可转化为生物燃料的蛋白质和淀粉。这些微藻几乎能在任何地方生长，但最常见于40N到40S之间的纬度。已有超过100，000种已知的硅藻(一种微藻)，40，000种已知的绿色植物样微藻，和较小数量的其他微藻品种，微藻将在几乎任何环境下迅速生长，几乎任何种类的水中，包括具有有限的或较差水质的边缘地区。
[0007]微藻可以以油或淀粉的形式储存能量。储存的油可以高达微藻重量的60%。已经证实，特定的种类增强了油或淀粉的生产，以及生长条件已进行了检测。也已经开发了提取和把这些物质转化为燃料的过程。
[0008]因此，那里存在迫切需要开发可再生的、可持续的、并且降低对环境危害的燃料产品的替代方法。
[0009]发明概沭
[0010]本公开内容包括减少真菌在液体系统中生长的方法，包括用微藻在液体系统中接种，检测真菌；提供有效浓度的杀真菌剂，相对于未使用杀真菌剂的真菌生长而言抑制真菌的生长，生长微藻。
[0011]本公开内容包括减少有害生物在液体系统中生长的方法，包括用微藻在液体系统中接种，检测有害生物；提供有效浓度的杀虫剂，相对于未使用杀虫剂的有害生物生长而言抑制有害生物的生长，生长微藻。[0012]本公开内容还提供了检测真菌在微藻液体系统中存在的方法，包括获得液体系统样品；和检测指不真菌的DNA序列的存在。
[0013]本公开内容还提供了检测有害生物在微藻液体系统中存在的方法，包括获得液体系统样品；和检测指不有害生物的DNA序列的存在。
[0014]本公开内容提供了在液体系统中增加微藻产量的方法，包括提供含有杀真菌剂的液体系统；和在存在杀真菌剂的液体系统中生长微藻至少10天。
[0015]本公开内容提供了在液体系统中增加微藻产量的方法，包括提供液体系统；和在液体系统中生长微藻至少10天，该液体系统依次提供一种或多种杀真菌剂以抑制有害生物生长。
[0016]此外，本公开内容提供了在液体微藻培育系统中预防真菌生长的方法，包括提供有效浓度的杀真菌剂，抑制真菌在液体中的生长，而该杀真菌剂并不明显抑制微藻的生长；在经杀真菌剂处理的液体中接种微藻；和生长微藻。
[0017]本公开内容还提供了处理液体微藻培育系统的方法，包括检测液体系统中真菌的存在；提供有效浓度杀真菌剂到液体系统中，抑制真菌生长，生长微藻；和至少监测一次所述液体系统中的所述真菌的存在。
[0018]本公开内容进一步提供了液体微藻培育系统，含有转基因微藻和杀真菌剂。
[0019]本公开内容进一步提供了壶菌的检测方法，包括获取样品，在样品中进行聚合酶链式反应，该聚合酶链式反应使用一对能够扩增核苷酸分子的寡核苷酸引物，该核苷酸分子具有的序列选自由SEQ ID NOs:1至6或其互补组成的组。
[0020]序列的简要i兑明·
[0021]SEQ ID NO:1给出了内部序列转录间隔区(ITS)域和壶菌FDOl的5.8sRNA。
[0022]SEQ ID NO:2给出了内部的序列转录间隔区(ITS)域和壶菌FD61的5.8sRNA。
[0023]SEQ ID NO:3给出了内部的序列转录间隔区(ITS)域和壶菌FD95的5.8sRNA。
[0024]SEQ ID NO:4给出了内部的序列转录间隔区(ITS)域和壶菌FD100的5.8sRNA。
[0025]SEQ ID NO:5给出了内部的序列转录间隔区(ITS)域和壶菌FDlOl的5.8sRNA。
[0026]SEQ ID NO:6给出了内部的序列转录间隔区(ITS)域和壶菌FDARG的5.8sRNA。
[0027]SEQ ID NO:7给出了肽核酸(PNA)抑制剂序列SE0004-PNA2的序列。
[0028]SEQ ID NO:8给出了肽核酸(PNA)抑制剂序列SE0107-PNA2的序列。
[0029]SEQ ID NO:9给出了肽核酸(PNA)抑制剂序列SE0087-PNA4的序列。
[0030]SEQ ID NO:10-37给出了用于聚合酶链式反应(PCR)检测的寡核苷酸序列。
[0031]附图的简要i兑明
[0032]图1是表示分离出的壶菌有害生物的进化分析结果的系谱树。
[0033]图2是结合了荧光增白剂(Calcofluor White)的被壶菌感染微藻培育样品的稀释系列的荧光测量结果的曲线图。
[0034]图3是被壶菌感染微藻培育样品的稀释系列的叶绿素荧光结果的曲线图。
[0035]图4提供了结合荧光增白剂的被壶菌感染的微藻培育图像。
[0036]图5是被壶菌感染的微藻样品中的荧光增白剂和叶绿素的荧光比率的曲线图。
[0037]图6是具有荧光增白剂荧光的被壶菌感染的微藻培养物的CT值的结果曲线图。
[0038]图7是显示了作为鼓藻有害生物的4种不同已知壶菌存在的鼓藻池塘的监测曲线图。
[0039]图8是显示了杀真菌剂氟啶胺对于未受污染微藻的生长影响的曲线图。
[0040]图9是显示了使用或未使用氟啶胺培养的受污染微藻的生长曲线图。(Ippm=Img/L)。
[0041]图?ο是显示了杀真菌剂Headline?对于未受污染微藻生长的影响曲线图。
[0042]图1i是使用或未使用杀真菌剂Headline?的受污染微藻的生长曲线图。(lppm=lmg/L)o
[0043]图12是Thimm 4寸于未受污染微藻培养物的生长影响的曲线图。(lppm=lmg/L)。
[0044]图13是使用或未使用杀真菌剂Thimmp培养的受污染微藻的生长曲线图。(lppm=lmg/L)0
[0045]图14是杀真菌剂处理对于室外开放池塘中生长的密度微藻P16的影响的曲线图。
[0046]图15是显示了使用或未使用杀真菌剂处理培养的微藻生长曲线图。
[0047]图16是在室外开放池塘中生长的微藻的生长和收集的图。
[0048]图17是显示了室外微藻培养物监测和处理的图。
[0049]发明详沭
[0050]除非另有定义，本文所用的技术和科学术语与本领域技术人员所通常理解的含义相同。本领域技术人员将认`识到，许多方法可用在本发明的实践中。实际上，本发明不以任何方式限制所描述的方法和材料。为了本公开的目的，下列术语定义如下。
[0051]“环境样品”指的是从微藻正在生长的或可能生长的周边环境中获得的样品。如本文所用，环境样品可能取自上述提到的环境或周边区域中的空气、土壤、植被和水。这些样品是按照用于采集微生物样品的标准采集规程采集的。
[0052]如本文所用的“生长微藻”、“生长的微藻”、“微藻生长”和“培养微藻”是指一个或多个步骤，包括微藻在培养液中到当微藻处于收集步骤开始前的悬浮液中。
[0053]如本文所用的，术语“有害生物”指的是样品培养液中的任何不需要的生物有机体。有害生物非限定性的例子是细菌和真菌。有害生物可能是不被需要的是因为，其降低了微藻培养的生长率。可替代的，有害生物可能是不被需要的是因为其降低了微藻生长的总体程度或每体积培养液微藻的总产率。有害生物可能是不被需要的是因为其导致微藻培养物的死亡。有害生物可能是不被需要的是因为其改变了培养的微藻的基因表达。有害生物可以是单个有机体的种群或是混合的种群。
[0054]“微藻”，如本文所用，指的是非维管光合生物，例如，划分为光合细菌的生物(包括蓝细菌)，蓝藻，原绿藻，红藻，绿藻，不等鞭毛类，tribophyta,灰色藻门，chlorarachniophytes，裸藻门，裸藻，定鞭藻门，金藻门，隐藻，淀粉鞭毛藻，甲藻，腰鞭毛目，鼓藻目，pyrmnesiophyta,娃藻门，黄藻，eustigmatophyta, raphidophyta,褐藻和浮游植物。微藻还可以是微藻种，包括但不限于衣藻。莱茵衣藻，盐藻，微绿球藻，微绿球藻occulata,栅藻二形，斜生栅藻，杜氏盐藻，或雨生红球。本文所公开的“微藻”可以是单细胞的非维管光合生物。在其他情况下，微藻可以是多细胞非维管光合生物的一个或多个细胞。
[0055]“真菌”如本文所用，是真菌界和芽枝霉门、壶菌门、球囊菌门、微孢子虫门、新丽鞭毛菌门、子囊菌门、担子菌门的一名成员。如本文所述，真菌包括壶菌纲和单毛壶菌纲以及壶菌spp.种或真菌任一组合的成员。如本文所述，真菌包括壶菌种的成员，壶菌种包含于真菌界壶菌门，真菌界含有壶菌目、裂壶菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetales>Cladochytriales、集壶菌目和单毛壶菌目。
[0056]如本文所述，“减少生长”、“抑制生长”、“生长减速”和“生长抑制”指的是相对于在缺少任何处理的相同或类似条件下的有害生物繁殖数量或分裂数量而言，减少了有害生物的繁殖或分裂。“减少生长”、“抑制生长”、“生长减速”和“生长抑制”也可以指有害生物通过处理而被杀死或死亡。
[0057]如本文所述，“收集”指的是在培养系统，包括液体培养系统中去除或分离全部或部分微藻。可以从成长培养液中连续或间歇收集，或者在培养的末尾阶段整体收集微藻。液体，如上清液，可以采用虹吸、流通或其他分离方式返回液体培养系统。相对收集数量指的是余下微藻数量与收集前含在液体培养系统中的数量相比。
[0058]如本文所述，“回收的液体”或“返回的液体”指的是从液体培养系统中收集或除去超过50%、60%、70%、80%、90%、95%或所有的微藻后余下的液体。
[0059]如本文所述，“培养时间”、或“生长的长度”、或“收集时间”是从液体培养系统用微藻接种的时间开始计算的。
[0060]如本文所述，术语“产率”指的是收集时每单位体积的微藻数量，以及可以表述为，例如，每体积培养液的细胞数量，每体积培养液的质量，等。本文所述的产率还可以表述为每培养面积的质量。产率的改变被表述为接受或未接受处理的产率的增加或降低所带来的改变。
[0061]如本文所述，术语“液体系统”、“液体培养系统”、或“培养系统”指的是用于培养微藻的系统。液体系统可包括封闭的和开放的培养系统。开放的液体系统可包括，例如开放的或封闭的光生物反应器、半封闭·的池塘、开放的池塘，或湖泊。
[0062]如本文所述，术语“处理”指的是抑制有害生物生长的方法或组合物。处理可以包括杀死有害生物的方法或组合物。
[0063]如本文所述，术语“有效浓度”指的是，当被用于液体系统中生长的微藻培养物的持续生长，或生存时，足以控制有害生物生长或杀死有害生物的杀虫剂或杀真菌剂的浓度。
[0064]本公开内容提供了在液体微藻培养物中减少有害生物生长的方法，其中液体系统用微藻接种，该系统被监视有害生物的存在，以及相对于未使用杀真菌剂的有害生物生长，提供有效浓度的杀真菌剂以抑制有害生物的生长，以及养殖微藻。本公开内容进一步提供了液体系统中活的有害生物的减少。
[0065]一方面，本公开内容提供了减少有害生物生长的方法，其中该方法测量在抑制剂存在下有害生物生长相对于在相似条件下没有抑制剂的有害生物生长的减少。一方面，有害生物生长的减少是由有害生物死亡实现的。另一方面，有害生物生长的减少是由有害生物分裂抑制来实现的。一方面，有害生物生长减少了 99%或更多。另一方面，有害生物生长减少了 95%或更多。在又一方面，有害生物生长减少90%或更多。在另一方面，有害生物生长减少至少80%。另一方面，有害生物生长减少至少70%。另一方面，有害生物生长减少至少60%。另一方面，有害生物生长减少至少50%。另一方面。有害生物生长减少至少90-99%，至少95-99%，至少80-95 %，至少80-99%，或75-99 %。在又一个方面，一种有害生物的生长减少不低于90 %，95%或99 %。
[0066]一方面，有害生物可以是真菌界的成员。另一方面，有害生物可以是壶菌门的成员。另一方面，有害生物可以是壶菌纲的成员。又一方面，有害生物可以是壶菌spp.种的成员。另一方面，有害生物可由选自壶菌的核酸序列识别，该壶菌可用选自由SEQ ID NOs: 1-6组成的组的核酸序列来识别。
[0067]微藻培养物的有害生物的例子是真菌界的成员，和包括芽枝霉门、壶菌门、球囊菌门、微孢子虫门、新丽鞭毛菌门、子囊菌门、担子菌门。如本文所述，真菌包括壶菌纲和单毛壶菌纲以及壶菌spp.种的成员。一方面，作为真菌界成员的有害生物可由分子系统发育进行鉴别，例如使用James等的方法“有鞭毛真菌(壶菌门)的分子系统发育和一种新的门(芽枝霉门)的说明”，真菌学，98 (6): 860-71 (2006)，其全部内容通过参考引用到本文。
[0068]另一方面,有害生物可以是壶菌门罗兹属的成员。一方面，有害生物可以是壶菌门的壶菌目/根生壶菌属的分支的成员。又一方面,有害生物可以是Amoeboaphelidium属的成员。又一方面，有害生物可能与SEQ ID NOs: 1-6标不的壶菌最为系统上相关。另一方面，有害生物可能与壶菌门的分支系统上相关，壶菌门包括壶菌目、裂壶菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetales、Cladochytriales、集壶菌目和单毛壶菌目。一方面，有害生物可与罗兹spp.系统上相关。
[0069]感染微藻培养物的真菌例子有壶菌纲的成员和壶菌spp.的成员。壶菌是原始的真菌，和主要是腐生的(降解几丁质和角蛋白)。有些种是单细胞的。与其他真菌类似，壶菌的细胞壁由几丁质构成。许多壶菌种是水生的(大多在淡水中找到)。有大约1，000个壶菌种，127个属，分布在5个目中。某些壶菌种是寄生的，可能感染植物，包括微藻。
[0070]包括在本公开内容中的壶菌特定非限定性例子包括:Achlyogeton、Allochytridium、Allochytridium expandens、Allochytridium luteum、Allomyces、Allomyces (subgenus)、Allomyces attomyces、Allomyces catenoides、Allomycesreticulatus、Amoeboaphelid`ium protococcarum、Alphamycetaceae> Alphamyces、Alphamyces chaetiferum、Amphicypellus、Amphicypellus elegans、Anaeromyces、Anaeromyces elegans、Anaeromyces mucronatus、Angulomycetaceae> Angulomyces、Angulomyces argentinensis、Aquamycetaceae、Aquamyces、Aquamyces chlorogoni1、Arnaudovia、Arnaudovia hyponeustonica、Asterophlycti s irregularis、Asterophlyctis sarcoptoides、Batrachochytrium> Batrachochytrium dendrobatidis、Blastocladia arborata、Blastocladia caduca、Blastocladia coronata、Blastocladiacristata、Blastocladia didyma、Blastocladia elegans、Blastocladia excelsa、Blastocladia filamentosa、Blastocladia fruticosa、Blastocladia fusiformis、Blastocladia globosa var.Minutissima>Blastocladia heterosporangia>Blastocladiamammilata、Blastocladia picaria、Blastocladia pileota、Blastocladia pusilla、Blastocladia sessi I is、BI astocIadia spiciformis、BI astoe Iadie11 a、Blastocladiella anabaenae、 Blastocladiella britannica、 Blastocladiellaco1mbiensis、Blastocladiel la nova—zeylandiae、Blastocladiomycota、Blastocladiopsis elegans、 Blyttiomyces bartsch、 Blyttiomyces aureus booth、Blyttiomyces conicus、Blyttiomyces exuviae> Blyttiomyces gregarum、Blyttiomyces
【权利要求】
1.减少液体系统中真菌生长的方法，包括: 在所述液体培养物中接种微藻； 检测所述真菌； 提供有效浓度的杀真菌剂，相对于未使用所述杀真菌剂的所述真菌的生长而言，抑制所述真菌的生长；和 使所述微藻生长。
2.如权利要求1所述方法，其中，所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美双、百菌清、二噻农、多果定、和二溴氰基乙酰胺组成的组。
3.如权利要求1所述方法，其中，所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组。
4.如权利要求1所述方法，进一步提供了第二有效浓度的杀真菌剂，选自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美双、百菌清、二噻农、多果定、和二溴氰基乙酰胺组成的组。
5.如权利要求1所述方法，进一步提供了第二有效浓度的杀真菌剂，选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组。
6.如权利要求1所述方法，其中，所述微藻通常是基因工程改造的。
7.如权利要求1所述方法，其中，所述真菌是真菌界壶菌门的成员。
8.如权利要求7所述方法，其中所述的真菌界壶菌门成员选自由壶菌目、裂壶菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetales> Cladochytriales、集壶菌目和单毛壶菌目组成的组。·
9.如权利要求2所述方法，其中所述微藻选自由衣藻、微绿球藻、链带藻、栅藻和螺旋藻组成的组。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述液体系统是单培养。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述生长提供的微藻产率大于每升(g/L)0.4克AFDff0
12.如权利要求11所述的方法，其中，所述产率选自由大于0.5g/L、大于0.6g/L、大于0.7g/L、大于0.8g/L、大于0.9g/L和大于1.0g/L组成的组。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述生长提供的微藻产率至少是收集自未感染且未施用杀真菌剂的微藻液体培养物产率的80%。
14.如权利要求13所述的方法，其中，所述产率是选自由收集自未感染且未施用杀真菌剂的微藻液体培养物产率的至少85%，至少90%，至少95%，至少97.5%，至少99%和100%组成的组。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述生长提供的微藻产率至少比收集自具有所述真菌而又未施用所述杀真菌剂的微藻液体培养物的微藻产率高10%。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述产率选自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述杀真菌剂的微藻液体培养物的微藻产率高至少15%，至少20%，至少25%，至少50%，至少75%和100%所组成的组。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述产率选自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述杀真菌剂的微藻液体培养物的微藻产率高至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，5.0倍，7.5倍，10倍，15倍所组成的组。
18.如权利要求11所述的方法，其中所述产率当微藻处于对数生长期时进行测量。
19.如权利要求11所述的方法，其中所述产率当微藻处于稳定生长期时进行测量。
20.如权利要求1所述的方法，其中所述液体系统具有至少10000升的体积。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述液体系统是开放式室外培养系统。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述开放式室外培养系统具有体积至少20，000L,40，000L, 80，000L, 100，000L, 150，000L, 200，000L, 250，000L, 500，000L, 600，000L, I, 000，O00L, 10，000 至 20，000L, 10，000 至 40，000L, 10，000 至 80，000L, 10，000 至 100，000L, 10，000至 150, 000L, 10, 000 至 200, 000L, 10, 000 至 250, 000L, 10, 000 至 500, 000L, 10, 000至 600，000L, 10，000 至 1，000, 000L, 20，000 至 40，000L, 20，000 至 80，000L, 20，000 至100, 000L, 20, 000 至 150, 000L, 20, 000 至 200, 000L, 20, 000 至 250, 000L, 20, 000 至500, 000L, 20, 000 至 600, 000L, 20, 000 至 I, 000, 000L, 40, 000 至 80，000L, 40，000 至100, 000L, 40, 000 至 150, 000L, 40, 000 至 200, 000L, 40, 000 至 250, 000L, 40, 000 至500, 000L, 40, 000 至 600, 000L, 40, 000 至 I, 000, 000L, 80, 000 至 100, 000L, 80, 000 至150, 000L, 80, 000 至 200, 000L, 80, 000 至 250, 000L, 80, 000 至 500, 000L, 80, 000 至600，000L, 80，000 至 I, 000，000L, 100，000 至 150，000L, 100，000 至 200，000L, 100，000 至250，000L, 100，000 至 500，000L, 100，000 至 600，000L, 100，000 至 I, 000，000L, 200，000 至250，000L, 200，000 至 500，000L, 200，000 至 600，000L, 200，000 至 I, 000，000L, 250，000 至500，000L, 250，000 至 600，000L, 250，000 至 I, 000，000L, 500，000 至 600，000L, and500, 000至 I, 000，OOOL0
23.如权利要求21所述的方法，其中所述开放式室外培养系统具有表面积选自在面积上至少0.25英亩，至少0.5英亩，至少1.0英亩，至少1.5英亩，至少2.0英亩，至少2.5英亩，至少5.0英亩，7.5或更多英亩，0.25至0.5英亩，0.25至1.0英亩，0.25至1.5英亩，0.25至2.0英亩，0.25至2.5英亩，0.25至5.0英亩，0.25至7.5英亩，0.5至1.0英亩，0.5至1.5英亩，0.5至2.0英亩，0.5至2.5英亩，0.5至5.0英亩，0.5至7.5英亩，1.0至1.5英亩，1.0至2.0英`亩，1.0至2.5英亩，1.0至5.0英亩，1.0至7.5英亩，2.0至2.5英亩，2.0至5.0英亩，2.0至7.5英亩，2.5英亩至5.0英亩，2.5至7.5英亩，2.5至10英亩，5至12英亩，5至15英亩，5至18英亩，5至20英亩，10至25英亩，10至30英亩，10至35英亩，10至40英亩，10至45英亩，和10至50英亩。
24.如权利要求21所述的方法，其中所述液体系统是连续的培养系统。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述连续培养系统提供所述微藻在对数生长期的生长。
26.在微藻液体培养系统中检测真菌存在的方法，包括: 获取所述液体培养系统的样品；和 检测提示所述真菌的DNA序列的存在。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述真菌是真菌界壶菌门的成员。
28.如权利要求27所述方法，其中所述的真菌界壶菌门成员选自由壶菌目、裂壶菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetales> Cladochytriales、集壶菌目和单毛壶菌目组成的组。
29.如权利要求26所述的方法，其中所述核糖体DNA序列选自由以下组成的组:NC_003053 根生壶菌属 136 线粒体、NC_003048Hyaloraphidium curvatum 线粒体、NC_003052SpizeI1myces 毛虫线粒体染色体 l、NC_003061Spizellomyces 毛虫线粒体染色体 2、NC_003060Spizellomyces 毛虫线粒体染色体 3、NC_004760Harpochytrium 属 JEL94 线粒体、NC_004624MonobIephareIla 属 JEL15 线粒体和 NC_004623Harpochytrium 属 JEL105线粒体。在本公开内容的另一个方面，有害生物可以使用PCR检测，其放大选自SEQ ID NO:1-6的序列。
30.微藻在液体系统中生长的方法，包括: 用微藻接种所述液体系统； 接种后在所述液体系统中生长所述微藻至少10天； 针对真菌的存在监测所述液体系统至少一次，其中所述监测可检测所述真菌在为每毫升至少IO6个细胞的水平(细胞/mL)，以及 从所述液体的系统的至少一个部分收集微藻。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述真菌是真菌界壶菌门的成员。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述的真菌界壶菌门成员选自由壶菌目、裂壶菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetales> Cladochytriales、集壶菌目和单毛壶菌目组成的组。
33.如权利要求30所述的方法，进一步包括向所述液体系统提供杀真菌剂。
34.如权利要求33所述方法，其中，所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美双、百菌清、二噻农、多果定、和二溴氰基乙酰胺组成的组。
35.如权利要求33所述方法，其中，所述杀真菌剂是选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组的有效浓度的杀真菌剂。
36.如权利要求30所述的方法，其中所述生长天数选自以下组成的组，在所述接种后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
37.进一步包括检测所述真菌的存在。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述检测包括荧光增白剂与所述液体培养物样品组合。
39.如权利要求30所述的方法，其中所述监测能够检测所述真菌在由以下组成的组的水平，至少IO5细胞/mL, IO4细胞/mL, IO3细胞/mL, IO2细胞/mL,和IO1细胞/mL。
40.如权利要求30所述的方法，其中所述收集包括从所述液体中分离至少90%所述微藻以生成微藻贫液，和所述至少一部分是指所述液体系统总体积的至少2%。
41.如权利要求40所述的方法，其中所述至少一部分选自由以下组成的组，占所述液体系统总体积的至少2.5%，至少5%，至少7.5%，至少10%，至少12.5%，至少15%，至少20%，从2%至5%，从2至7.5%，从2至20%，从2%至12.5%，从2%至15%，从2%至 20%，从 2.5%至 5%，从 2.5 至 7.5%，从 2.5%至 10%，从 2.5%至 12.5%，从 2.5%至15 % 从 2.5 到 20 %，从 5 至 7.5 %，从 5 % 至 10 %，从 5 % 至 12.5 %，从 5 % 至 15 %，从 5 %至 20%，从 7.5%至 10%，从 7.5%至 12.5%，从 7.5 至 15%，从 7.5%至 20%，从 10%至12.5%，从 10%至 15%，和 10 至 20%。
42.如权利要求40所述的方法，其中所述移除的液体系统的所述部分在所述微藻收集后返回到所述液体系统中。
43.如权利要求30所述的方法，进一步包括加热所述液体系统至33°C，以杀死或一致所述真菌的生长。
44.如权利要求30所述的方法，进一步包括用CO2所述液体系统。
45.如权利要求44所述的方法，其中所述CO2的补充是提供CO2的浓度在由20ppm，25ppm, 30ppm, 35ppm 组成的组。
46.如权利要求44所述的方法，其中所述CO2的补充是提供pH在8.8和9.2之间，和所述微藻是绿藻。
47.如权利要求44所述的方法，其中所述CO2的补充是提供pH在9.8和10.2之间，和所述微藻是蓝绿藻。
48.如权利要求30所述的方法，进一步包括用营养物质补充所述液体系统，营养物质选自由氮，磷，钾，铁，锌，钙和镁组成的组。
49.如权利要求48所述的方法，其中所述氮的补充选自由硝酸(HNO3),尿素，硝酸钾(KNO3)和硝酸钠(NaNO3)组成的组。
50.如权利要求30所述的方法，其中所述液体系统具有至少10000升的体积。
51.如权利要求30所述的方法，其中所述液体系统是开放式室外系统。
52.如权利要求30所述的方法，其中所述开放式室外系统的体积至少具有20，000L,40,000L, 80，000L, 100，000L, 150，000L, 200，000L, 250，000L, 500，000L, 600，000L, I, 000，000L, 10，000 至 20，000L, 10，000 至 40，000L, 10，000 至 80，000L, 10，000 至 100，000L, 10，000至 150，000L, 10，000 ·至 200，000L, 10，000 至 250，000L, 10，000 至 500，000L, 10，000 至600，000L, 10，000 至 1，000，000L, 20，000 至 40，000L, 20，000 至 80，000L, 20，000 至100, 000L, 20, 000 至 150, 000L, 20, 000 至 200, 000L, 20, 000 至 250, 000L, 20, 000 至500, 000L, 20, 000 至 600, 000L, 20, 000 至 I, 000, 000L, 40, 000 至 80，000L, 40，000 至100, 000L, 40, 000 至 150, 000L, 40, 000 至 200, 000L, 40, 000 至 250, 000L, 40, 000 至500, 000L, 40, 000 至 600, 000L, 40, 000 至 I, 000, 000L, 80, 000 至 100, 000L, 80, 000 至150, 000L, 80, 000 至 200, 000L, 80, 000 至 250, 000L, 80, 000 至 500, 000L, 80, 000 至600，000L, 80，000 至 I, 000，000L, 100，000 至 150，000L, 100，000 至 200，000L, 100，000 至250，000L, 100，000 至 500，000L, 100，000 至 600，000L, 100，000 至 I, 000，000L, 200，000 至250，000L, 200，000 至 500，000L, 200，000 至 600，000L, 200，000 至 I, 000，000L, 250，000 至500，000L, 250，000 至 600，000L, 250，000 至 I, 000，000L, 500，000 至 600，000L,和 500，000至 I, 000，OOOL0
53.如权利要求51所述的方法，其中所述开放式室外培养系统具有面积选自在面积上至少0.25英亩，至少0.5英亩，至少1.0英亩，至少1.5英亩，至少2.0英亩，至少2.5英亩，至少5.0英亩，7.5或更多英亩，0.25至0.5英亩，0.25至1.0英亩，0.25至1.5英亩，0.25至2.0英亩，0.25至2.5英亩，0.25至5.0英亩，0.25至7.5英亩，0.5至1.0英亩，0.5至1.5英亩，0.5至2.0英亩，0.5至2.5英亩，0.5至5.0英亩，0.5至7.5英亩，1.0至1.5英亩，1.0至2.0英亩，1.0至2.5英亩，1.0至5.0英亩，1.0至7.5英亩，2.0至2.5英亩，2.0至5.0英亩，2.0至7.5英亩，2.5英亩至5.0英亩，2.5至7.5英亩，2.5至10英亩，5至12英亩，5至15英亩，5至18英亩，5至20英亩，10至25英亩，10至30英亩，10至35英亩，10至40英亩，10至45英亩，和10至50英亩。
54.如权利要求51所述的方法，其中所述液体系统是连续的培养系统。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述连续培养系统提供所述微藻在对数生长期的生长。
56.如权利要求55所述的方法，其中所述所述对数生长期的生长用FbwCami进行监测。
57.如权利要求40所述的方法，进一步包括将所述微藻贫液返回到所述液体系统中。
58.如权利要求30所述的方法，其中所述液体系统维持pH在8-10.5之间。
59.如权利要求30所述的方法，其中所述液体系统维持温度选自以下组成的组，在O至35°C之间，5至35°C之间，10至35°C之间，15至35°C之间，20至35°C之间，25至35°C之间，30至35°C之间，大于5°C，大于10°C，大于15°C，大于20°C和大于30°C。
60.如权利要求30所述的方法，进一步包括提供第一剂量有效浓度的杀真菌剂，所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美双、百菌清、二噻农、多果定、和二溴氰基乙酰胺组成的组。
61.如权利要求37所述的方法，进一步包括提供第一剂量有效浓度的杀真菌剂，所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组。
62.如权利要求60所述的方法，进一步包括添加一种或多种附加剂量的所述杀真菌剂，以维持所述有效浓度。
63.如权利要求60所述的方法,其中所述有效浓度选自由每百万0.5份(ppm), lppm,2ppm,5ppm, IOppm,和 IOppm 以上组成的组。
64.如权利要求60所述的方法，进一步包括连续添加所述杀真菌剂以维持所述杀真菌剂的有效浓度。·
65.如权利要求30所述的方法，其中所述微藻经过基因工程改造。
66.如权利要求30所述的方法,其中所述微藻选自由衣藻、微绿球藻、链带藻、栅藻和螺旋藻组成的组。
67.如权利要求65所述的方法，其中所述液体系统是单培养。
68.如权利要求60所述的方法，进一步包括向所述液体系统提供有效数量的第二杀真菌剂，所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组。
69.如权利要求60所述的方法，进一步包括进一步包括向所述液体系统提供有效数量的第二杀真菌剂，所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组。
70.如权利要求30所述的方法，其中所述的收集提供了微藻产率大于0.4克每升(g/DAFDff0
71.如权利要求70所述的方法，其中，所述产率选自由大于0.5g/L、大于0.6g/L、大于0.7g/L、大于0.8g/L、大于0.9g/L和大于1.0g/L组成的组。
72.如权利要求33所述的方法，其中所述生长提供的微藻产率至少是收集自未感染且未施用杀真菌剂的微藻液体培养物产率的80%。
73.如权利要求72所述的方法，其中，所述产率是选自由收集自未感染且未施用杀真菌剂的微藻液体培养物产率的至少85%，至少90%，至少95%，至少97.5%，至少99%和100%组成的组。
74.如权利要求37所述的方法，其中所述收集提供的微藻产率至少比收集自具有所述真菌而又未施用所述杀真菌剂的微藻液体培养物的微藻产率高10%。
75.如权利要求74所述的方法，其中所述产率选自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述杀真菌剂的微藻液体培养物的微藻产率高至少15%，至少20%，至少25%，至少50%，至少75%和100%所组成的组。
76.如权利要求75所述的方法，其中所述产率选自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述杀真菌剂的微藻液体培养物的微藻产率高至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，5.0倍，7.5倍，10倍，15倍所组成的组。
77.如权利要求30所述的方法，其中所述的收集当微藻处于对数生长期时进行测量。
78.如权利要求30所述的方法，其中所述的收集当微藻处于晚对数生长期时进行测量。
79.如权利要求30所述的方法，其中所述的收集当微藻处于稳定生长期时进行测量。
80.增强微藻液体系统产率的方法,包括: 向所述液体系统提供优先水平的杀真菌剂；和 在所述杀真菌剂存在的情况下，在所述液体系统中生长所述微藻至少10天。
81.如权利要求80所述的方法，其中所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美双、百菌清、二噻农、多果定、和二溴氰基乙酰胺组成的组。
82.如权利要求80所述的方法，其中所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组。
83.如权利要求80所述的方法，其中所述生长天数选自以下组成的组，在所述接种后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
84.如权利要求80所述的方法，其中所述优先水平的杀真菌剂防止真菌的生长，该真菌是壶菌门的一员。
85.如权利要求80所述的方法，其中所述优先水平选自由每百万0.5份(ppm),1.0ppm, 2.0ppm, 5.0ppm, IOppm,和 IOppm 以上组成的组。
86.如权利要求80所述的方法，其中所述液体系统是开放式室外培养系统。
87.如权利要求86所述的方法，其中所述开放式室外系统的体积至少具有20，000L,4O, 000L, 80，000L, 100，000L, 150，000L, 200，000L, 250，000L, 500，000L, 600，000L, 1, 000，000L, 10，000 至 20，000L, 10，000 至 40，000L, 10，000 至 80，000L, 10，000 至 100，000L, 10，000至 150，000L, 10，000 至 200，000L, 10，000 至 250，000L, 10，000 至 500，000L, 10，000 至.600，000L, 10，000 至 1，000，000L, 20，000 至 40，000L, 20，000 至 80，000L, 20，000 至.100, 000L, 20, 000 至 150, 000L, 20, 000 至 200, 000L, 20, 000 至 250, 000L, 20, 000 至.500, 000L, 20, 000 至 600, 000L, 20, 000 至 1, 000, 000L, 40, 000 至 80，000L, 40，000 至.100,000L, 40, 000 至 150, 000L, 40, 000 至 200, 000L, 40, 000 至 250, 000L, 40, 000 至.500, 000L, 40, 000 至 600, 000L, 40, 000 至 1, 000, 000L, 80, 000 至 100, 000L, 80, 000 至.150, 000L, 80, 000 至 200, 000L, 80, 000 至 250, 000L, 80, 000 至 500, 000L, 80, 000 至.600，000L, 80，000 至 I, 000，000L, 100，000 至 150，000L, 100，000 至 200，000L, 100，000 至.250，000L, 100，000 至 500，000L, 100，000 至 600，000L, 100，000 至 1, 000，000L, 200，000 至.250，000L, 200，000 至 500，000L, 200，000 至 600，000L, 200，000 至 1, 000，000L, 250，000 至.500，000L, 250，000 至 600，000L, 250，000 至 1, 000，000L, 500，000 至 600，000L,和 500，000至 I, 000，OOOLo
88.如权利要求86所述的方法，其中所述开放式室外培养系统具有面积选自至少0.25英亩，至少0.5英亩，至少1.0英亩，至少1.5英亩，至少2.0英亩，至少2.5英亩，至少5.0英亩，7.5或更多英亩，0.25至0.5英亩，0.25至1.0英亩，0.25至1.5英亩，0.25至2.0英亩，0.25至2.5英亩，0.25至5.0英亩，0.25至7.5英亩，0.5至1.0英亩，0.5至1.5英亩，0.5至2.0英亩，0.5至2.5英亩，0.5至5.0英亩，0.5至7.5英亩，1.0至1.5英亩，1.0至2.0英亩，1.0至2.5英亩，1.0至5.0英亩，1.0至7.5英亩，2.0至2.5英亩，2.0至5.0英亩，2.0至7.5英亩，2.5英亩至5.0英亩，2.5至7.5英亩。
89.如权利要求80所述的方法，其中所述微藻经过基因工程改造。
90.如权利要求80所述的方法，其中所述微藻选自由衣藻、微绿球藻、链带藻、栅藻和螺旋藻组成的组。
91.如权利要求80所述的方法，其中所述液体系统是单培养。
92.如权利要求80所述的方法，其中所述的生长提供了微藻产率大于0.4克每升(g/L) AFDff0
93.如权利要求92所述的方法，其中，所述产率选自由大于0.5g/L、大于0.6g/L、大于0.7g/L、大于0.8g/L、大于0.9g/L和大于1.0g/L组成的组。
94.如权利要求80所述的方法，其中所述生长提供的微藻产率至少比收集自具有所述真菌而又未施用所述杀真菌剂的微藻液体培养物的微藻产率高10%。
95.如权利要求94所述的方法，其中所述产率选自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述杀真菌剂的微·藻液体培养物的微藻产率高至少15%，至少20%，至少25%，至少50%，至少75%和100%所组成的组。
96.如权利要求95所述的方法，其中所述产率选自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述杀真菌剂的微藻液体培养物的微藻产率高至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，5.0倍，7.5倍，10倍，15倍所组成的组。
97.如权利要求90所述的方法，其中所述的产率当微藻处于对数生长期时进行测量。
98.如权利要求90所述的方法，其中所述的产率当微藻处于稳定生长期时进行测量。
99.增强微藻液体系统产率的方法,包括: 提供含有杀真菌剂的液体系统；和 在所述杀真菌剂存在的情况下，在所述液体系统中生长所述微藻至少10天。
100.如权利要求99所述的方法，其中所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美双、百菌清、二噻农、多果定、和二溴氰基乙酰胺组成的组。
101.如权利要求99所述的方法，其中所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组。
102.如权利要求99所述的方法，其中所述微藻经过基因工程改造。
103.如权利要求99所述的方法，其中所述微藻选自由衣藻、微绿球藻、链带藻、栅藻和螺旋藻组成的组。
104.如权利要求99所述的方法，其中所述生长天数选自以下组成的组，在所述接种后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
105.如权利要求99所述的方法，其中所述微藻的所述产率大于缺少所述杀真菌剂的液体系统的90%。
106.如权利要求99所述的方法，其中所述微藻的产率大于0.4克每升(g/L) AFDff,以及所述微藻在对数生长期收集。
107.如权利要求99所述的方法，其中所述的生长提供了微藻产率大于0.4克每升(g/L) AFDff,以及所述微藻在稳定期收集。
108.如权利要求106所述的方法，其中，所述产率选自由大于0.5g/L、大于0.6g/L、大于0.7g/L、大于0.8g/L、大于0.9g/L和大于1.0g/L组成的组。
109.如权利要求99所述的方法，其中所述产率选自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述杀真菌剂的微藻液体培养物的微藻产率高至少15%，至少20%，至少25%，至少50%，至少75%和100%所组成的组。
110.如权利要求99所述的方法，其中所述产率选自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述杀真菌剂的微藻液体培养物的微藻产率高至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，5.0倍，7.5倍，10倍，15倍所组成的组。
111.如权利要求99所述的方法，其中所述液体系统是开放式室外培养系统。
112.如权利要求111所述的方法，其中所述开放式室外系统的体积至少具有20，000L,40，000L, 80，000L, 100，000L, 150，000L, 200，000L, 250，000L, 500，000L, 600，000L, I, 000，O00L, 10，000 至 20，000L, 10，000 至 40，000L, 10，000 至 80，000L, 10，000 至 100，000L, 10，000至 150, 000L, 10, 000 至 200, 000L, 10, 000 至 250, 000L, 10, 000 至 500, 000L, 10, 000至 600，000L, 10，000 至 I, 000，000L, 20，000 至 40，000L, 20，000 至 80，000L, 20，000 至100, 000L, 20, 000 至 ·150, 000L, 20, 000 至 200, 000L, 20, 000 至 250, 000L, 20, 000 至500, 000L, 20, 000 至 600, 000L, 20, 000 至 I, 000, 000L, 40, 000 至 80，000L, 40，000 至100, 000L, 40, 000 至 150, 000L, 40, 000 至 200, 000L, 40, 000 至 250, 000L, 40, 000 至500, 000L, 40, 000 至 600, 000L, 40, 000 至 I, 000, 000L, 80, 000 至 100, 000L, 80, 000 至150, 000L, 80, 000 至 200, 000L, 80, 000 至 250, 000L, 80, 000 至 500, 000L, 80, 000 至600，000L, 80，000 至 I, 000，000L, 100，000 至 150，000L, 100，000 至 200，000L, 100，000 至250，000L, 100，000 至 500，000L, 100，000 至 600，000L, 100，000 至 I, 000，000L, 200，000 至250，000L, 200，000 至 500，000L, 200，000 至 600，000L, 200，000 至 I, 000，000L, 250，000 至500，000L, 250，000 至 600，000L, 250，000 至 I, 000，000L, 500，000 至 600，000L,和 500，000至 I, 000，OOOL0
113.如权利要求111所述的方法，其中所述开放式室外培养系统具有面积选自至少0.25英亩，至少0.5英亩，至少1.0英亩，至少1.5英亩，至少2.0英亩，至少2.5英亩，至少5.0英亩，7.5或更多英亩，0.25至0.5英亩，0.25至1.0英亩，0.25至1.5英亩，0.25至2.0英亩，0.25至2.5英亩，0.25至5.0英亩，0.25至7.5英亩，0.5至1.0英亩，0.5至1.5英亩，0.5至2.0英亩，0.5至2.5英亩，0.5至5.0英亩，0.5至7.5英亩，1.0至1.5英亩，1.0至2.0英亩，1.0至2.5英亩，1.0至5.0英亩，1.0至7.5英亩，2.0至2.5英亩，2.0至5.0英亩，2.0至7.5英亩，2.5英亩至5.0英亩，2.5至7.5英亩。
114.如权利要求99所述的方法，其中所述微藻经过基因工程改造。
115.如权利要求99所述的方法，其中所述微藻选自由衣藻、微绿球藻、链带藻、栅藻和螺旋藻组成的组。
116.如权利要求99所述的方法，其中所述液体系统是单培养。
117.防止真菌在微藻液体培养系统中生长的方法，包括:向液体提供有效浓度的杀真菌剂以抑制真菌生长，其中所述杀真菌剂没有明显抑制微藻的生长； 用所述微藻接种所述液体；和 使所述微藻生长。
118.如权利要求117所述的方法，其中所述真菌是真菌界壶菌门的一员。
119.如权利要求117所述的方法，其中所述的真菌界壶菌门成员选自由壶菌目、裂壶菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetal es> Cladochytriales、集壶菌目和单毛壶菌目组成的组。
120.如权利要求117所述的方法，其中所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美双、百菌清、二噻农、多果定、和二溴氰基乙酰胺组成的组。
121.如权利要求117所述的方法，其中所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组。
122.如权利要求117所述的方法，其中所述生长天数选自以下组成的组，在所述接种后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
123.如权利要 求117所述的方法，进一步包括提供一种或多种附加数量的所述杀真菌剂以维持所述杀真菌剂在所述生长过程中的有效浓度。
124.如权利要求123所述的方法，其中所述有效浓度选自由每百万0.5份(ppm)，1.0ppm, 2.0ppm, 5.0ppm, IOppm,和 IOppm 以上组成的组。
125.处理液体系统中微藻培养物的方法，包括: 检测所述液体系统中真菌的存在； 向所述液体系统中提供有效浓度的杀真菌剂以抑制所述真菌的生长；使微藻生长；和 所述液体系统对所述真菌的存在至少监测一次。
126.如权利要求125所述的方法，其中所述真菌是真菌界壶菌门的一员。
127.如权利要求126所述的方法，其中所述的真菌界壶菌门成员选自由壶菌目、裂壶菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetal es> Cladochytriales、集壶菌目和单毛壶菌目组成的组。
128.如权利要求125所述的方法，其中所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美双、百菌清、二噻农、多果定、和二溴氰基乙酰胺组成的组。
129.如权利要求125所述的方法，其中所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组。
130.如权利要求125所述的方法，其中所述生长天数选自以下组成的组，在所述接种后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
131.如权利要求125所述的方法，进一步包括提供一种或多种附加数量的所述杀真菌剂以维持所述杀真菌剂在所述生长后的有效浓度。
132.如权利要求131所述的方法，其中所述有效浓度选自由每百万0.5份(ppm)，1.0ppm, 2.0ppm, 5.0ppm, IOppm,和 IOppm 以上组成的组。
133.—种含有微藻和杀真菌剂的液体系统，其中所述微藻是转基因微藻。
134.如权利要求133所述的液体系统，其中所述的转基因微藻选自由衣藻、微绿球藻、链带藻、栅藻和螺旋藻组成的组。
135.如权利要求133所述的液体系统，其中所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美双、百菌清、二噻农、多果定、和二溴氰基乙酰胺组成的组。
136.如权利要求133所述的液体系统，其中所述杀真菌剂选自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美双组成的组。
137.如权利要求133所述的液体系统，其中所述系统在使用所述微藻接种所述液体系统后的10天或更多天后，提供所述微藻的生长。
138.如权利要求137所述的液体系统，其中所述系统提供微藻的生长天数选自以下组成的组，在接种后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
139.如权利要求133所述的液体系统，其中所述系统补充C02。
140.如权利要求131所述的液体系统，其中所述液体系统是开放式室外培养系统。
141.如权利要求140所述的方法，其中所述开放式室外系统的体积至少具有20，000L,40，000L, 80，000L, 10·0，000L, 150，000L, 200，000L, 250，000L, 500，000L, 600，000L, I, 000，O00L, 10，000 至 20，000L, 10，000 至 40，000L, 10，000 至 80，000L, 10，000 至 100，000L, 10，000至 150, 000L, 10, 000 至 200, 000L, 10, 000 至 250, 000L, 10, 000 至 500, 000L, 10, 000至 600，000L, 10，000 至 I, 000，000L, 20，000 至 40，000L, 20，000 至 80，000L, 20，000 至100, 000L, 20, 000 至 150, 000L, 20, 000 至 200, 000L, 20, 000 至 250, 000L, 20, 000 至500, 000L, 20, 000 至 600, 000L, 20, 000 至 I, 000, 000L, 40, 000 至 80，000L, 40，000 至100,000L, 40, 000 至 150, 000L, 40, 000 至 200, 000L, 40, 000 至 250, 000L, 40, 000 至500, 000L, 40, 000 至 600, 000L, 40, 000 至 I, 000, 000L, 80, 000 至 100, 000L, 80, 000 至150, 000L, 80, 000 至 200, 000L, 80, 000 至 250, 000L, 80 , 0 0 0 至 500, 000L, 80, 000 至600，000L, 80，000 至 I, 000，000L, 100，000 至 150，000L, 100，000 至 200，000L, 100，000 至250，000L, 100，000 至 500，000L, 100，000 至 600，000L, 100，000 至 I, 000，000L, 200，000 至250，000L, 200，000 至 500，000L, 200，000 至 600，000L, 200，000 至 I, 000，000L, 250，000 至500，000L, 250，000 至 600，000L, 250，000 至 I, 000，000L, 500，000 至 600，000L,和 500，000至 I, 000，OOOL0
142.如权利要求140所述的方法，其中所述开放式室外培养系统具有面积选自至少·0.25英亩，至少0.5英亩，至少1.0英亩，至少1.5英亩，至少2.0英亩，至少2.5英亩，至少5.0英亩，7.5或更多英亩，0.25至0.5英亩，0.25至1.0英亩，0.25至1.5英亩，0.25至2.0英亩，0.25至2.5英亩，0.25至5.0英亩，0.25至7.5英亩，0.5至1.0英亩，0.5至1.5英亩，0.5至2.0英亩，0.5至2.5英亩，0.5至5.0英亩，0.5至7.5英亩，1.0至1.5英亩，1.0至2.0英亩，1.0至2.5英亩，1.0至5.0英亩，1.0至7.5英亩，2.0至2.5英亩，2.0至5.0英亩，2.0至7.5英亩，2.5英亩至5.0英亩，2.5至7.5英亩。
143.如权利要求140所述的方法，其中所述液体系统是连续培养系统。
144.如权利要求143所述的方法，其中所述连续培养系统提供所述微藻在对数生长期的连续生长。
145.检测壶菌游动孢子FD100的方法，包括: 获取样品； 使用一对寡核苷酸引物在所述样品上进行聚合酶链式反应，该引物能够扩增核酸分子，该核酸分子具有选自由SEQ ID NOs: 1-6,或其互补组成的组的序列。
146.如权利要求145所述的方法，其中所述寡核苷酸引物对的一个引物是兼并引物。
147.如权利要求146所述的方法，其中所述寡核苷酸引物对的两个引物都是兼并引物。
148.如权利要求145所述的方法，进一步包括第三寡核苷酸引物。
149.如权利要求145所述的方法，其中所述寡核苷酸引物对包括SEQID N0s:28和29的序列，或其互补。`
【文档编号】C12N1/13GK103857785SQ201280049439
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年10月12日 优先权日:2011年10月14日
【发明者】R·麦克布赖德, C·贝恩克, K·博施, N·海普斯, C·梅纳施 申请人:蓝宝石能源公司