Fbn1基因突变体及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了FBN1基因突变体及其应用，具体涉及分离的编码FBN1突变体的核酸，分离的多肽，筛选易患马凡氏综合征的生物样品的方法，筛选易患马凡氏综合征的生物样品的系统，以及用于筛选易患马凡氏综合征的生物样品的试剂盒。其中，该分离的编码FBN1突变体的核酸，与SEQ?ID?NO：1相比，具有c.C2671T突变。通过检测该新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易患马凡氏综合征。
【专利说明】FBN1基因突变体及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及FBN1基因突变体及其应用。具体地，本发明涉及分离编码FBN1突变体 的核酸，分离的多肽，筛选易患马凡氏综合征的生物样品的方法，筛选遗憾马凡氏综合征的 生物样品的系统，用于筛选易患马凡氏综合征的生物样品的试剂盒，构建体以及重组细胞。
【背景技术】
[0002] 马凡氏综合征（Marfan' s Syndrome，MFS)是一种常染色体显性遗传性结缔组织 疾病。发病率为1/5000?1/10000。其中，25%?30%为散发病例。MFS为不完全外显性 遗传病，患者临床表现多样化，在不同家系之间甚至在同一家系的不同患者之间，都存在较 大的表型差异。典型的MFS临床表现主要涉及骨骼、眼和心血管系统。目前，马凡氏综合征 致病基因比较明确，已证实FBN1基因的突变与MFS的发病相关，但仍存在着相当一部分未 知致病基因位点。
[0003] 因而，目前对马凡氏综合征的研究仍有待深入。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的 在于提出一种能够有效筛选易患马凡氏综合征的生物样品的方法。
[0005] 本发明是基于发明人的下列工作完成的：发明人通过目标区域捕获测序联合候选 基因突变验证的方法确定了马凡氏综合征的新的致病突变--FBN1基因22号外显子上的 C.C2671T 突变）。
[0006] 根据本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的编码FBN1突变体的核酸。根据 本发明的实施例，所述核酸与SEQ ID N0:1相比，具有C.C2671T突变，即相对于野生型FBN1 基因，本发明的FBN1基因突变体的第2671位碱基从C突变为T。根据本发明的实施例，发 明人确定了 FBN1基因的新突变体，该突变体与马凡氏综合征的发病密切相关，从而通过检 测该新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易患马凡氏综合征。
[0007] 根据本发明的第二方面，本发明提出了一种分离的多肽。根据本发明的实施例，与 SEQID N0 :2相比，所述分离的多肽具有p. Gln891X突变，即该突变是由于c. C2671T的无义 突变而引起的，具体地，该突变表示：该分离的多肽，由于野生型FBN1的第891位Gin的密 码子突变为终止密码子，翻译提前终止。通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地 检测生物样品是否易患马凡氏综合征。
[0008] 根据本发明的第三方面，本发明提出了一种筛选易患马凡氏综合征的生物样品的 方法。根据本发明的实施例，该方法包括以下步骤：从所述生物样品提取核酸样本；确定所 述核酸样本的核酸序列；所述核酸样本的核酸序列与SEQ ID N0 :1相比，具有c. C2671T突 变是所述生物样品易患马凡氏综合征的指示。通过根据本发明实施例的筛选易患马凡氏综 合征的生物样品的方法，可以有效地筛选易患马凡氏综合征的生物样品。
[0009] 根据本发明的第四方面，本发明提出了一种筛选易患马凡氏综合征的生物样品的 系统。根据本发明的实施例，该系统包括：核酸提取装置，所述核酸提取装置用于从所述生 物样品提取核酸样本；核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装置与所述核酸提取装置相 连，用于对所述核酸样本进行分析，以便确定所述核酸样本的核酸序列；判断装置，所述判 断装置与所述核酸序列确定装置相连，以便基于所述核酸样本的核酸序列与SEQ ID NO :1 相比，是否具有c. C2671T突变，判断所述生物样品是否易患马凡氏综合征。利用该系统，能 够有效地实施前述筛选易患马凡氏综合征的生物样品的方法，从而可以有效地筛选易患马 凡氏综合征的生物样品。
[0010] 根据本发明的第五方面，本发明提出了一种用于筛选易患马凡氏综合征的生物样 品的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒含有：适于检测FBN1基因突变体的试剂，其中 与SEQ ID N0:1相比，该FBN1基因突变体具有C.C2671T突变。利用根据本发明的实施例 的试剂盒，能够有效地筛选易患马凡氏综合征的生物样品。
[0011] 根据本发明的第六方面，本发明还提出了一种构建体。根据本发明的实施例，该构 建体包含前面所述的分离的编码FBN1突变体的核酸。由此，利用本发明的构建体转化受体 细胞获得的重组细胞，能够有效地用于筛选治疗马凡氏综合征的药物。
[0012] 根据本发明的第七方面，本发明还提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例，该 重组细胞是通过前面所述的构建体转化受体细胞而获得的。根据本发明的一些实施例，利 用本发明的重组细胞，能够有效地筛选治疗马凡氏综合征的药物。
[0013] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【专利附图】
【附图说明】
[0014] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变 得明显和容易理解，其中 ：
[0015] 图1显示了根据本发明实施例的筛选易患马凡氏综合征的生物样品的系统及其 组成部分的示意图，其中，
[0016] 图1A为根据本发明实施例的筛选易患马凡氏综合征的生物样品的系统的示意 图，
[0017] 图1B为根据本发明实施例的核酸提取装置的示意图，
[0018] 图1C为根据本发明实施例的核酸序列确定装置的示意图；
[0019] 图2显示了根据本发明一个实施例的马凡氏综合征患者家系的家系图；
[0020] 图3显示了根据本发明的一个实施例，马凡氏综合征患者家系中患者及家系内正 常人的FBN1基因c. C2671T突变位点的Sanger测序验证峰图。
【具体实施方式】
[0021] 下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终 相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附 图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0022] FBN1基因突变体
[0023] 根据本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的编码FBN1突变体的核酸。根据 本发明的实施例，所述核酸与SEQ ID勵：1相比，具有〇.026711'突变。在本文中所使用的 表达方式"编码FBN1突变体的核酸"，是指与编码FBN1突变体的基因相对应的核酸物质， 即核酸的类型不受特别限制，可以是任何包含与FBN1突变体的编码基因相对应的脱氧核 糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根据本发明的一个 具体示例，前面所述的编码FBN1突变体的核酸为DNA。根据本发明的实施例，发明人确定 了 FBN1基因的新突变体，这些新突变体与马凡氏综合征的发病密切相关，从而通过检测该 新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易患马凡氏综合征，也可 以通过检测这些突变体在生物体中是否存在，可以有效地预测生物体是否易患马凡氏综合 征。
[0024] 对于本发明说明书和权利要求书中，提及核酸，本领域技术人员应当理解，实际包 括互补双链的任意一条，或者两条。为了方便，在本说明书和权利要求书中，虽然多数情况 下只给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。例如，提及SEQ ID N0 :1，实际 包括其互补序列。本领域技术人员还可以理解，利用一条链可以检测另一条链，反之亦然。
[0025] 该编码FBN1突变体的核酸，是本申请的发明人通过目标区域捕获测序联合候选 基因突变验证的方法确定的马凡氏综合征的致病基因 FBN1上的新突变。该突变位点在现 有技术中并未被提到。
[0026] 其中，野生型FBN1基因的cDNA具有如下所示的核苷酸序列：
[0027] 1 ATGCGTCGAG GGCGTCTGCT GGAGATCGCC CTGGGATTTA CCGTGCTTTT AGCGTCCTAC
[0028] 61 ACGAGCCATG GGGCGGACGC CAATTTGGAG GCTGGGAACG TGAAGGAAAC CAGAGCCAGT
[0029] 121 CGGGCCMGA GAAGAGGCGG TGGAGGACAC GACGCGCTTA AAGGACCCAA TGTCTGTGGA
[0030] 181 TCACGTTATA ATGCTTACTG TTGCCCTGGA TGGAMACCT TACCTGGCGG AAATCAGTGT
[0031] 241 ATTGTCCCCA TTTGCCGGCA TTCCTGTGGG GATGGATTTT GTTCGAGGCC AAATATGTGC
[0032] 301 ACTTGCCCAT CTGGTCAGAT AGCTCCTTCC TGTGGCTCCA GATCCATACA ACACTGCAAT
[0033] 361 ATTCGCTGTA TGAATGGAGG TAGCTGCAGT GACGATCACT GTCTATGCCA GAAAGGATAC
[0034] 421 ATAGGGACTC ACTGTGGACA ACCTGTTTGT GAAAGTGGCT GTCTCAATGG AGGAAGGTGT
[0035] 481 GTGGCCCCAA ATCGATGTGC ATGCACTTAC GGATTTACTG GACCCCAGTG TGAMGAGAT
[0036] 541 TACAGGACAG GCCCATGTTT TACTGTGATC AGCAACCAGA TGTGCCAGGG ACAACTCAGC
[0037] 601 GGGATTGTCT GCACAAMCA GCTCTGCTGT GCCACAGTCG GCCGAGCCTG GGGCCACCCC
[0038] 661 TGTGAGATGT GTCCTGCCCA GCCTCACCCC TGCCGCCGTG GCTTCATTCC AAATATCCGC
[0039] 721 ACGGGAGCTT GTCAAGATGT GGATGAATGC CAGGCCATCC CCGGGCTCTG TCAGGGAGGA
[0040] 781 AATTGCATTA ATACTGTTGG GTCTTTTGAG TGCAMTGCC CTGCTGGACA CAAACTTAAT
[0041] 841 GMGTGTCAC MAAATGTGA AGATATTGAT GAATGCAGCA CCATTCCTGG AATCTGTGM
[0042] 901 GGGGGTGAAT GTACAAACAC AGTCAGCAGT TACTTTTGCA AATGTCCCCC TGGTTTTTAC
[0043] 961 ACCTCTCCAG ATGGTACCAG ATGCATAGAT GTTCGCCCAG GATACTGTTA CACAGCTCTG
[0044] 1021 ACAAACGGGCGCTGCTCTAA CCAGCTGCCA CAGTCCATAA CCAAAATGCA GTGCTGCTGT
[0045] 1081 GATGCCGGCC GATGCTGGTC TCCAGGGGTC ACTGTCGCCC CTGAGATGTG TCCCATCAGA
[0046] 1141 GCAACCGAGG ATTTCAACAA GCTGTGCTCT GTTCCTATGG TAATTCCTGG GAGACCAGM
[0047] 1201 TATCCTCCCC CACCCCTTGG CCCCATTCCT CCAGTTCTCC CTGTTCCTCC TGGCTTTCCT
[0048] 1261 CCTGGACCTC MATTCCGGT CCCTCGACCA CCAGTGGAAT ATCTGTATCC ATCTCGGGAG
[0049] 1321 CCACCAAGGG TGCTGCCAGT MACGTTACT GATTACTGCC AGTTGGTCCG CTATCTCTGT
[0050] 1381 CMAATGGAC GCTGCATTCC MCTCCTGGG AGTTACCGGT GTGAGTGCAA CAAAGGGTTC
[0051] 1441 CAGCTGGACC TCCGTGGGGA GTGTATTGAT GTTGATGAAT GTGAGAAAAA CCCCTGTGCT
[0052] 1501 GGTGGTGAGT GTATTAACAA CCAGGGTTCG TACACCTGTC AGTGCCGAGC TGGATATCAG
[0053] 1561 AGCACACTCA CGCGGACAGA ATGCCGAGAC ATTGATGAGT GTTTACAGAA TGGCCGGATC
[0054] 1621 TGCAATMTG GACGCTGCAT CAACACAGAT GGCAGTTTTC ATTGCGTGTG TAATGCGGGC
[0055] 1681 TTTCATGTTA CACGAGATGG GAAGAACTGT GAAGATATGG ATGAATGCAG CATAAGGAAC
[0056] 1741 ATGTGCCTTA ATGGAATGTG TATCAATGAA GATGGCAGTT TTAAATGTAT TTGCAAACCT
[0057] 1801 GGATTCCAGC TGGCATCAGA TGGACGTTAT TGCAMGACA TTAACGAGTG TGAMCCCCT
[0058] 1861 GGGATCTGCA TGAATGGGCG TTGCGTCAAC ACTGATGGCT CCTACAGATG TGAATGCTTC
[0059] 1921 CCTGGACTGG CTGTGGGTCT GGATGGCCGT GTGTGTGTTG ACACACACAT GCGGAGCACA
[0060] 1981 TGCTATGGTG GATACAAGAG AGGCCAGTGT ATCAMCCTT TGTTTGGTGC TGTCACTAM
[0061] 2041 TCTGAATGCT GTTGCGCCAG CACTGAGTAT GCATTTGGGG AACCTTGCCA GCCGTGTCCT
[0062] 2101 GCACAGAATT CAGCGGMTA TCAGGCACTC TGCAGCAGTG GGCCAGGAAT GACGTCAGCA
[0063] 2161 GGCAGTGATA TAAATGMTG TGCACTAGAT CCTGATATTT GCCCMATGG AATCTGTGM
[0064] 2221 AACCTTCGTG GGACCTATAA ATGTATATGC AATTCAGGAT ATGAAGTGGA TTCAACTGGG
[0065] 2281 AMAACTGCG TTGATATTAA TGAATGTGTA CTGAACAGTC TCCTTTGTGA CAATGGACM
[0066] 2341 TGTAGAMTA CTCCTGGAAG TTTTGTCTGT ACCTGCCCCA AGGGATTTAT CTACAAACCT
[0067] 2401 GATCTAMAA CATGTGMGA CATTGATGAA TGCGMTCAA GTCCTTGCAT TAATGGAGTC
[0068] 2461 TGCAAGAACA GCCCAGGCTC TTTTATTTGT GAATGTTCTT CTGAMGTAC TTTGGATCCA
[0069] 2521 ACAAAAACCA TCTGCATAGA MCCATCAAG GGCACTTGCT GGCAGACTGT CATTGATGGG
[0070] 2581 CGATGTGAGA TCAACATCAA TGGAGCCACC TTAAAGTCCC AGTGCTGCTC CTCCCTCGGT
[0071] 2641 GCTGCGTGGG GAAGCCCGTG CACCCTATGCgAAGTTGATC CCATATGTGG TAAAGGGTAC
[0072] 2701 TCAAGAATTA MGGAACACA ATGTGMGAT ATAGATGAAT GTGAAGTGTT CCCAGGAGTG
[0073] 2761 TGTAAAMTG GCCTGTGTGT TAACACTAGG GGGTCATTCA AGTGTCAGTG TCCCAGTGGA
[0074] 2821 ATGACTTTGG ATGCCACAGG MGGATCTGT CTTGATATCC GCCTGGAAAC CTGCTTCCTG
[0075] 2881 AGGTACGAGG ACGAGGAGTG CACCCTGCCT ATTGCTGGCC GCCACCGCAT GGACGCCTGC
[0076] 2941 TGCTGCTCCG TCGGGGCAGC CTGGGGTACT GAGGMTGCG AGGAGTGTCC CATGAGMAT
[0077] 3001 ACTCCTGAGT ACGAGGAGCT GTGTCCGAGA GGACCCGGAT TTGCCACAAA AGAMTTACA
[0078] 3061 AATGGAMGC CTTTCTTCAA AGATATCAAT GAGTGCAAGA TGATACCCAG CCTCTGCACC
[0079] 3121 CACGGCMGT GCAGAAACAC CATTGGCAGC TTTAAGTGCA GGTGTGACAG CGGCTTTGCT
[0080] 3181 CTTGATTCTG MGAAAGGAA CTGCACAGAC ATTGACGAAT GCCGCATATC TCCTGACCTC
[0081] 3241 TGTGGCAGAG GCCAGTGTGT GAACACCCCT GGGGACTTTG AATGCAAGTG TGACGAAGGC
[0082] 3301 TATGAAAGTG GATTCATGAT GATGAAGAAC TGCATGGATA TTGATGAGTG TCAGAGAGAT
[0083] 3361 CCTCTCCTAT GCCGAGGTGG TGTTTGCCAT AACACAGAGG GAAGTTACCG CTGTGAATGC
[0084] 3421 CCGCCTGGCC ATCAGCTGTC CCCCAACATC TCCGCGTGTA TCGACATCAA TGAATGTGAG
[0085] 3481 CTGAGTGCAC ACCTGTGCCC CAATGGCCGT TGCGTGAACC TCATAGGGAA GTATCAGTGT
[0086] 3541 GCCTGCMCC CTGGCTACCA TTCAACTCCC GATAGGCTAT TTTGTGTTGA CATTGATGAA
[0087] 3601 TGCAGCATAA TGAATGGTGG TTGTGMACC TTCTGCACAA ACTCTGAAGG CAGCTATGAA
[0088] 3661 TGTAGCTGTC AGCCGGGATT TGCACTAATG CCTGACCAGA GATCATGCAC CGACATCGAT
[0089] 3721 GAGTGTGAAG ATAATCCCAA TATCTGTGAT GGTGGTCAGT GCACMATAT CCCTGGAGAG
[0090] 3781 TACAGGTGCT TGTGTTATGA TGGATTCATG GCATCTGAAG ACATGAAGAC TTGTGTAGAT
[0091] 3841 GTCAATGAGT GTGACCTGAA TCCAAATATC TGCCTAAGTG GGACCTGTGA AAACACGAM
[0092] 3901 GGCTCATTTA TCTGCCACTG TGATATGGGC TACTCCGGCA AAAAAGGAAA AACTGGCTGT
[0093] 3961 ACAGACATCA ATGAATGTGA MTTGGAGCA CACAACTGTG GCAAACATGC TGTATGTACC
[0094] 4021 AATACAGCAG GAAGCTTCAA ATGTAGCTGC AGTCCCGGGT GGATTGGAGA TGGCATTAAG
[0095] 4081 TGCACTGATC TGGACGMTG TTCCAATGGA ACCCATATGT GCAGCCAGCA TGCAGACTGC
[0096] 4141 AAGAATACCA TGGGATCTTA CCGCTGTCTG TGCAAGGAAG GATACACAGG TGATGGCTTC
[0097] 4201 ACTTGTACAG ACCTTGATGA GTGCTCTGAG AACCTGAATC TCTGTGGCAA TGGCCAGTGC
[0098] 4261 CTCAATGCAC CAGGAGGATA CCGCTGTGAA TGCGACATGG GCTTCGTGCC CAGTGCTGAC
[0099] 4321 GGGAAAGCCT GTGAAGATAT TGATGAGTGC TCCCTTCCGA ACATCTGTGT CTTTGGAACT
[0100] 4381 TGCCACMCC TCCCTGGCCT GTTCCGCTGT GAGTGTGAGA TAGGCTACGA ACTGGACAGA
[0101] 4441 AGCGGCGGGA ACTGCACAGA TGTGAATGAA TGCCTGGATC CAACCACGTG CATCAGTGGG
[0102] 4501 AACTGTGTCA ACACTCCAGG CAGCTATATC TGTGACTGCC CACCTGATTT TGAACTGAAC
[0103] 4561 CCAACTCGAG TTGGCTGTGT TGATACCCGC TCTGGAMTT GCTATTTGGA TATTCGACCT
[0104] 4621 CGAGGAGACA ATGGAGATAC AGCCTGCAGC AATGMATTG GAGTTGGTGT TTCCAAAGCT
[0105] 4681 TCCTGCTGCT GTTCTCTGGG TAAAGCCTGG GGTACTCCTT GTGAGATGTG TCCTGCTGTG
[0106] 4741 AACACATCCG AGTACAMAT TCTTTGTCCT GGAGGGGAAG GTTTCCGACC AAATCCTATC
[0107] 4801 ACCGTTATAT TGGAAGATAT TGATGAGTGC CAGGAGCTAC CAGGGCTGTG CCAAGGAGGA
[0108] 4861 AMTGTATCA ACACCTTTGG GAGTTTCCAG TGCCGCTGTC CMCCGGCTA CTACCTGAAT
[0109] 4921 GMGATACAC GAGTGTGTGA TGATGTGAAT GAATGTGAGA CTCCTGGAAT CTGTGGTCCA
[0110] 4981 GGGACATGTT ACAACACCGT TGGCAACTAC ACCTGTATCT GTCCTCCAGA CTACATGCM
[0111] 5041 GTGAATGGGG GAAATAATTG CATGGATATG AGAAGAAGTT TGTGCTACAG AAACTACTAT
[0112] 5101 GCTGACMCC AGACCTGTGA TGGAGMTTG TTATTCAACA TGACCAAGAA GATGTGCTGC
[0113] 5161 TGTTCCTACA ACATTGGCCG GGCGTGGAAC AAGCCCTGTG AACAGTGTCC CATCCCAAGT
[0114] 5221 ACAGATGAGT TTGCTACACT CTGTGGAAGT CAAAGGCCAG GCTTTGTCAT CGACATTTAT
[0115] 5281 ACCGGTTTAC CCGTTGATAT TGATGAGTGC CGGGAGATCC CAGGGGTCTG TGAMATGGA
[0116] 5341 GTGTGTATCA ACATGGTTGG CAGCTTCCGA TGTGMTGTC CAGTGGGATT CTTCTATAAT
[0117] 5401 GACAAGTTGT TGGTTTGTGA AGATATTGAC GAGTGTCAGA ACGGCCCAGT GTGCCAGCGC
[0118] 5461 AACGCCGAAT GCATCAACAC TGCAGGCAGC TACCGCTGTG ACTGTAAGCC CGGCTACCGC
[0119] 5521 TTCACCTCCA CAGGACAGTG CAATGATCGT AATGMTGTC AAGAMTCCC CAATATATGC
[0120] 5581 AGTCATGGGC AGTGCATTGA CACAGTTGGA AGCTTTTATT GCCTTTGCCA CACTGGTTTT
[0121] 5641 AMACAMTG ATGACCMAC CATGTGCTTG GACATAAATG AATGTGAAAG AGATGCCTGT
[0122] 5701 GGGAATGGAA CTTGCCGGAA CACAATTGGT TCCTTCAACT GCCGCTGCAA TCATGGTTTC
[0123] 5761 ATCCTTTCTC ACAACAATGA CTGTATAGAT GTTGATGAAT GTGCMGTGG AAATGGGAAT
[0124] 5821 CTTTGCAGAA ATGGCCAATG CATTAATACA GTGGGGTCTT TCCAGTGCCA GTGCMTGAA
[0125] 5881 GGCTATGAGG TGGCTCCAGA TGGGAGGACC TGTGTGGATA TCAATGAATG TCTTCTAGM
[0126] 5941 CCCAGAMAT GTGCACCAGG TACCTGTCAA AACTTGGATG GGTCCTACAG ATGCATTTGC
[0127] 6001 CCACCTGGAT ACAGTCTTCA MATGAGAAG TGTGMGATA TTGATGAGTG TGTCGAAGAG
[0128] 6061 CCAGAAATTT GTGCCCTGGG CACATGCAGT AACACTGAAG GCAGCTTCAA ATGTCTGTGT
[0129] 6121 CCAGAAGGGT TTTCCTTGTC CTCCAGTGGA AGAAGGTGCC AAGATTTGCG AATGAGCTAC
[0130] 6181 TGTTATGCGA AGTTTGMGG AGGAAAGTGT TCATCACCCA AATCCAGAAA TCACTCCAAG
[0131] 6241 CAGGAATGCT GCTGTGCCTT GAAGGGAGAA GGCTGGGGAG ACCCCTGCGA GCTCTGCCCC
[0132] 6301 ACGGAACCTG ATGAGGCCTT CCGCCAGATA TGTCCTTATG GAAGTGGGAT CATCGTGGGA
[0133] 6361 CCTGATGATT CAGCAGTTGA TATGGACGAA TGCAMGAAC CCGATGTCTG TAAACATGGA
[0134] 6421 CAGTGCATCA ATACAGATGG TTCCTATCGC TGCGAGTGTC CCTTTGGTTA TACTCTAGCA
[0135] 6481 GGGAATGAAT GTGTAGATAC TGATGMTGT TCTGTTGGCA ATCCTTGTGG AAATGGAACC
[0136] 6541 TGCAAGMTG TGATTGGAGG TTTTGMTGC ACCTGCGAGG AGGGATTTGA GCCCGGTCCA
[0137] 6601 ATGATGACAT GTGAAGATAT AMTGAATGT GCCCAGAATC CTCTGCTCTG TGCCTTCCGA
[0138] 6661 TGTGTGMCA CTTATGGGTC ATATGAATGC AAATGTCCCG TGGGATATGT GCTCAGAGM
[0139] 6721 GACCGTAGGA TGTGCAMGA TGAGGATGAG TGTGMGAGG GAAAACATGA CTGTACTGM
[0140] 6781 AMCAAATGG MTGCAAGAA CCTCATTGGC ACATATATGT GCATCTGTGG ACCCGGGTAT
[0141] 6841 CAGCGGAGAC CTGATGGAGA AGGCTGTGTA GATGAGAATG AATGTCAGAC GAAGCCAGGG
[0142] 6901 ATCTGTGAGA ATGGGCGCTG CCTCAACACC CGTGGGAGCT ACACCTGTGA GTGTAATGAT
[0143] 6961 GGGTTTACCG CCAGCCCCAA CCAGGACGAG TGCCTTGACA ATCGGGAAGG GTACTGCTTC
[0144] 7021 ACAGAGGTGC TACAAAACAT GTGTCAGATC GGCTCCAGCA ACAGGAACCC CGTCACCAM
[0145] 7081 TCGGAATGCT GCTGTGACGG AGGGAGAGGC TGGGGTCCCC ACTGTGAGAT CTGCCCTTTC
[0146] 7141 CAGGGGACTG TGGCTTTCAA GAAACTCTGT CCCCATGGCC GAGGATTCAT GACCAATGGA
[0147] 7201 GCAGATATCG ATGAATGCAA GGTTATTCAC GATGTTTGCC GMATGGGGA ATGTGTCAAT
[0148] 7261 GACAGAGGAT CATATCATTG CATTTGTAAA ACTGGGTACA CTCCAGATAT AACTGGGACT
[0149] 7321 TCCTGTGTAG ATCTGAACGA GTGCAACCAG GCTCCCAAAC CCTGCAATTT TATCTGCAM
[0150] 7381 AACACAGAAG GGAGTTACCA GTGTTCATGC CCGAMGGCT ACATTCTGCA AGAGGATGGA
[0151] 7441 AGGAGCTGCA MGATCTTGA TGAGTGTGCA ACCAAGCAAC ACAACTGCCA GTTCCTATGT
[0152] 7501 GTTAACACCA TTGGCGGCTT CACATGCAAA TGTCCTCCCG GATTTACCCA ACACCATACG
[0153] 7561 TCCTGCATTG ATAACAATGA ATGCACCTCT GACATCAATC TGTGCGGGTC TAAGGGCATT
[0154] 7621 TGCCAGMCA CTCCTGGAAG CTTCACCTGT GAATGCCAGC GGGGATTCTC ACTTGATCAG
[0155] 7681 ACCGGCTCCA GCTGTGMGA CGTGGACGAG TGTGAGGGTA ACCACCGCTG CCAGCATGGC
[0156] 7741 TGCCAGMCA TCATTGGGGG CTACAGGTGC AGCTGCCCCC AGGGCTACCT CCAGCACTAC
[0157] 7801 CAGTGGMCC AGTGTGTTGA TGAAAACGAA TGCCTCAGCG CTCACATCTG CGGAGGAGCC
[0158] 7861 TCCTGTCACA ACACCCTGGG GAGCTACAAG TGCATGTGTC CCGCCGGCTT CCAGTATGM
[0159] 7921 CAGTTCAGTG GAGGATGCCA AGACATCAAT GAATGTGGCT CTGCGCAGGC CCCCTGCAGC
[0160] 7981 TATGGCTGTT CCAATACCGA GGGCGGTTAC CTGTGTGGCT GTCCACCTGG TTACTTCCGC
[0161] 8041 ATAGGCCAAG GGCACTGTGT TTCTGGAATG GGCATGGGCC GAGGMACCC AGAGCCACCT
[0162] 8101 GTCAGTGGTG MATGGATGA CAATTCACTC TCCCCAGAGG CTTGTTACGA GTGTAAGATC
[0163] 8161 AATGGCTACC CCAAACGGGG CAGGAAACGG AGAAGCACAA ACGAAACTGA TGCCTCCAAT
[0164] 8221 ATCGAGGATC AGTCTGAGAC AGAAGCCAAT GTGAGTCTTG CAAGTTGGGA TGTTGAGAAG
[0165] 8281 ACAGCCATCT TTGCTTTCAA TATTTCCCAC GTCAGTAACA AGGTTCGAAT CCTAGAACTC
[0166] 8341 CTTCCAGCTC TTACAACTCT GACGAATCAC AACAGATACT TGATCGAATC TGGMATGM
[0167] 8401 GATGGCTTCT TTAAAATCAA CCAAAAGGAA GGGATCAGCT ACCTCCACTT CACMAGAAG
[0168] 8461 AAGCCAGTGG CTGGAACCTA TTCATTACAA ATCAGTAGTA CTCCACTTTA TAAMAGAM
[0169] 8521 GMCTTMCC AACTAGAAGA CAAATATGAC AAAGACTACC TCAGTGGTGA ACTGGGTGAT
[0170] 8581 AATCTGAAGA TGAAAATCCA GGTTTTGCTT CATTAA(SEQ ID N0：1),
[0171] 其编码的蛋白质具有如下所示的氨基酸序列：
[0172] 1 MRRGRLLEIA LGFTVLLASY TSHGADANLE AGNVKETRAS RAKRRGGGGH DALKGPNVCG
[0173] 61 SRYNAYCCPG WKTLPGGNQCIVPICRHSCG DGFCSRPNMC TCPSGQIAPS CGSRSIQHCN
[0174] 121 IRCMNGGSCS DDHCLCQKGY IGTHCGQPVC ESGCLNGGRC VAPNRCACTY GFTGPQCERD
[0175] 181 YRTGPCFTVISNQMCQGQLS GIVCTKQLCC ATVGRAWGHP CEMCPAQPHP CRRGFIPNIR
[0176] 241 TGACQDVDEC QAIPGLCQGG NCINTVGSFE CKCPAGHKLN EVSQKCEDID ECSTIPGICE
[0177] 301 GGECTNTVSS YFCKCPPGFY TSPDGTRCID VRPGYCYTAL TNGRCSNQLP QSITKMQCCC
[0178] 361 DAGRCWSPGV TVAPEMCPIR ATEDFNKLCS VPMVIPGRPE YPPPPLGPIP PVLPVPPGFP
[0179] 421 PGPQIPVPRP PVEYLYPSRE PPRVLPVNVT DYCQLVRYLC QNGRCIPTPG SYRCECNKGF
[0180] 481 QLDLRGECID VDECEKNPCA GGECINNQGS YTCQCRAGYQ STLTRTECRDIDECLQNGRI
[0181] 541 CNNGRCINTD GSFHCVCNAG FHVTRDGKNC EDMDECSIRN MCLNGMCINE DGSFKCICKP
[0182] 601 GFQLASDGRY CKDINECETP GICMNGRCVN TDGSYRCECF PGLAVGLDGR VCVDTHMRST
[0183] 661 CYGGYKRGQCIKPLFGAVTK SECCCASTEY AFGEPCQPCP AQNSAEYQAL CSSGPGMTSA
[0184] 721 GSDINECALD PDICPNGICE NLRGTYKCIC NSGYEVDSTG KNCVDINECV LNSLLCDNGQ
[0185] 781 CRNTPGSFVC TCPKGFIYKP DLKTCEDIDE CESSPCINGV CKNSPGSFIC ECSSESTLDP
[0186] 841 TKTICIETIK GTCWQTVIDG RCEININGAT LKSQCCSSLG AAWGSPCTLC QVDPICGKGY
[0187] 901 SRIKGTQCED IDECEVFPGV CKNGLCVNTR GSFKCQCPSG MTLDATGRIC LDIRLETCFL
[0188] 961 RYEDEECTLP IAGRHRMDAC CCSVGMWGT EECEECPMRN TPEYEELCPR GPGFATKEIT
[0189] 1021 NGKPFFKDIN ECKMIPSLCT HGKCRNTIGS FKCRCDSGFA LDSEERNCTDIDECRISPDL
[0190] 1081 CGRGQCVNTP GDFECKCDEG YESGFMMMKN CMDIDECQRD PLLCRGGVCH NTEGSYRCEC
[0191] 1141 PPGHQLSPNI SACIDINECE LSAHLCPNGR CVNLIGKYQC ACNPGYHSTP DRLFCVDIDE
[0192] 1201 CSMNGGCET FCTNSEGSYE CSCQPGFALM PDQRSCTDID ECEDNPNICD GGQCTNIPGE
[0193] 1261 YRCLCYDGFM ASEDMKTCVD VNECDLNPNICLSGTCENTK GSFICHCDMG YSGKKGKTGC
[0194] 1321 TDINECEIGA HNCGKHAVCT NTAGSFKCSC SPGWI⑶GIK CTDLDECSNG THMCSQHADC
[0195] 1381 KNTMGSYRCL CKEGYTGDGF TCTDLDECSE NLNLCGNGQC LNAPGGYRCE CDMGFVPSAD
[0196] 1441 GKACEDIDEC SLPNICVFGT CHNLPGLFRC ECEIGYELDR SGGNCTDVNE CLDPTTCISG
[0197] 1501 NCVNTPGSYICDCPPDFELN PTRVGCVDTR SGNCYLDIRP RGDNGDTACS NEIGVGVSKA
[0198] 1561 SCCCSLGKAff GTPCEMCPAV NTSEYKILCP GGEGFRPNPI TVILEDIDEC QELPGLCQGG
[0199] 1621 KCINTFGSFQ CRCPTGYYLN EDTRVCDDVN ECETPGICGP GTCYNTVGNY TCICPPDYMQ
[0200] 1681 VNGGNNCMDM RRSLCYRNYY ADNQTCDGEL LFNMTKKMCC CSYNIGRAWN KPCEQCPIPS
[0201] 1741 TDEFATLCGS QRPGFVIDIY TGLPVDIDEC REIPGVCENG VCINMVGSFR CECPVGFFYN
[0202] 1801 DKLLVCEDID ECQNGPVCQR NAECINTAGS YRCDCKPGYR FTSTGQCNDR NECQEIPNIC
[0203] 1861 SHGQCIDTVG SFYCLCHTGF KTNDDQTMCL DINECERDAC GNGTCRNTIG SFNCRCNHGF
[0204] 1921 ILSHNNDCID VDECASGNGN LCRNGQCINT VGSFQCQCNE GYEVAPDGRT CVDINECLLE
[0205] 1981 PRKCAPGTCQ NLDGSYRCIC PPGYSLQNEK CEDIDECVEE PEICALGTCS NTEGSFKCLC
[0206] 2041 PEGFSLSSSG RRCQDLRMSY CYAKFEGGKC SSPKSRNHSK QECCCALKGE GWGDPCELCP
[0207] 2101 TEPDEAFRQI CPYGSGIIVG PDDSAVDMDE CKEPDVCKHG QCINTDGSYR CECPFGYTLA
[0208] 2161 GNECVDTDEC SVGNPCGNGT CKNVIGGFEC TCEEGFEPGP MMTCEDINEC AQNPLLCAFR
[0209] 2221 CVNTYGSYEC KCPVGYVLRE DRRMCKDEDE CEEGKHDCTE KQMECKNLIG TYMCICGPGY
[0210] 2281 QRRPDGEGCV DENECQTKPG ICENGRCLNT RGSYTCECND GFTASPNQDE CLDNREGYCF
[0211] 2341 TEVLQNMCQI GSSNRNPVTK SECCCDGGRG WGPHCEICPF QGTVAFKKLC PHGRGFMTNG
[0212] 2401 ADIDECKVIH DVCRNGECVN DRGSYHCICK TGYTPDITGT SCVDLNECNQ APKPCNFICK
[0213] 2461 NTEGSYQCSC PKGYILQEDG RSCKDLDECA TKQHNCQFLC VNTIGGFTCK CPPGFTQHHT
[0214] 2521 SCIDNNECTS DINLCGSKGI CQNTPGSFTC ECQRGFSLDQ TGSSCEDVDE CEGNHRCQHG
[0215] 2581 CQNIIGGYRC SCPQGYLQHY QWNQCVDENE CLSAHICGGA SCHNTLGSYK CMCPAGFQYE
[0216] 2641 QFSGGCQDIN ECGSAQAPCS YGCSNTEGGY LCGCPPGYFR IGQGHCVSGM GMGRGNPEPP
[0217] 2701 VSGEMDDNSL SPEACYECKI NGYPKRGRKR RSTNETDASN IEDQSETEAN VSLASWDVEK
[0218] 2761 TAIFAFNISH VSNKVRILEL LPALTTLTNH NRYLIESGNE DGFFKINQKE GISYLHFTKK
[0219] 2821 KPVAGTYsLQ IssTPLYKKK ELNQLEDKYD KDYLsGELGD NLKMKIQVLL H * (SEQ ID NO :2)。本发明的FBNI基因突变体的cDNA序列如下所示：
[0220] 1 ATGCGTCGAG GGCGTCTGCT GGAGATCGCC CTGGGATTTA CCGTGCTTTT AGCGTCCTAC
[0221] 61 ACGAGCCATG GGGCGGACGC CAATTTGGAG GCTGGGAACG TGAAGGAAAC CAGAGCCAGT
[0222] 121 CGGGCCMGA GAAGAGGCGG TGGAGGACAC GACGCGCTTA AAGGACCCAA TGTCTGTGGA
[0223] 181 TCACGTTATA ATGCTTACTG TTGCCCTGGA TGGAMACCT TACCTGGCGG AAATCAGTGT
[0224] 241 ATTGTCCCCA TTTGCCGGCA TTCCTGTGGG GATGGATTTT GTTCGAGGCC AAATATGTGC
[0225] 301 ACTTGCCCAT CTGGTCAGAT AGCTCCTTCC TGTGGCTCCA GATCCATACA ACACTGCAAT
[0226] 361 ATTCGCTGTA TGAATGGAGG TAGCTGCAGT GACGATCACT GTCTATGCCA GAAAGGATAC
[0227] 421 ATAGGGACTC ACTGTGGACA ACCTGTTTGT GAAAGTGGCT GTCTCAATGG AGGMGGTGT
[0228] 481 GTGGCCCCAA ATCGATGTGC ATGCACTTAC GGATTTACTG GACCCCAGTG TGAMGAGAT
[0229] 541 TACAGGACAG GCCCATGTTT TACTGTGATC AGCAACCAGA TGTGCCAGGG ACAACTCAGC
[0230] 601 GGGATTGTCT GCACAAMCA GCTCTGCTGT GCCACAGTCG GCCGAGCCTG GGGCCACCCC
[0231] 661 TGTGAGATGT GTCCTGCCCA GCCTCACCCC TGCCGCCGTG GCTTCATTCC AAATATCCGC
[0232] 721 ACGGGAGCTT GTCAAGATGT GGATGMTGC CAGGCCATCC CCGGGCTCTG TCAGGGAGGA
[0233] 781 AATTGCATTA ATACTGTTGG GTCTTTTGAG TGCAMTGCC CTGCTGGACA CAAACTTAAT
[0234] 841 GMGTGTCAC MAAATGTGA AGATATTGAT GAATGCAGCA CCATTCCTGG AATCTGTGM
[0235] 901 GGGGGTGAAT GTACAAACAC AGTCAGCAGT TACTTTTGCA AATGTCCCCC TGGTTTTTAC
[0236] 961 ACCTCTCCAG ATGGTACCAG ATGCATAGAT GTTCGCCCAG GATACTGTTA CACAGCTCTG
[0237] 1021 ACAAACGGGC GCTGCTCTAA CCAGCTGCCA CAGTCCATAA CCAAMTGCA GTGCTGCTGT
[0238] 1081 GATGCCGGCC GATGCTGGTC TCCAGGGGTC ACTGTCGCCC CTGAGATGTG TCCCATCAGA
[0239] 1141 GCAACCGAGG ATTTCAACAA GCTGTGCTCT GTTCCTATGG TAATTCCTGG GAGACCAGM
[0240] 1201 TATCCTCCCC CACCCCTTGG CCCCATTCCT CCAGTTCTCC CTGTTCCTCC TGGCTTTCCT
[0241] 1261 CCTGGACCTC MATTCCGGT CCCTCGACCA CCAGTGGAAT ATCTGTATCC ATCTCGGGAG
[0242] 1321 CCACCAAGGG TGCTGCCAGT MACGTTACT GATTACTGCC AGTTGGTCCG CTATCTCTGT
[0243] 1381 CMAATGGAC GCTGCATTCC MCTCCTGGG AGTTACCGGT GTGAGTGCAA CAAAGGGTTC
[0244] 1441 CAGCTGGACC TCCGTGGGGA GTGTATTGAT GTTGATGAAT GTGAGAAAAA CCCCTGTGCT
[0245] 1501 GGTGGTGAGT GTATTAACAA CCAGGGTTCG TACACCTGTC AGTGCCGAGC TGGATATCAG
[0246] 1561 AGCACACTCA CGCGGACAGA ATGCCGAGAC ATTGATGAGT GTTTACAGAA TGGCCGGATC
[0247] 1621 TGCAATMTG GACGCTGCAT CAACACAGAT GGCAGTTTTC ATTGCGTGTG TAATGCGGGC
[0248] 1681 TTTCATGTTA CACGAGATGG GAAGAACTGT GAAGATATGG ATGAATGCAG CATAAGGAAC
[0249] 1741 ATGTGCCTTA ATGGAATGTG TATCAATGAA GATGGCAGTT TTAAATGTAT TTGCAAACCT
[0250] 1801 GGATTCCAGC TGGCATCAGA TGGACGTTAT TGCAMGACA TTAACGAGTG TGAMCCCCT
[0251] 1861 GGGATCTGCA TGAATGGGCG TTGCGTCAAC ACTGATGGCT CCTACAGATG TGAATGCTTC
[0252] 1921 CCTGGACTGG CTGTGGGTCT GGATGGCCGT GTGTGTGTTG ACACACACAT GCGGAGCACA
[0253] 1981 TGCTATGGTG GATACAAGAG AGGCCAGTGT ATCAAACCTT TGTTTGGTGC TGTCACTAAA
[0254] 2041 TCTGAATGCT GTTGCGCCAG CACTGAGTAT GCATTTGGGG AACCTTGCCA GCCGTGTCCT
[0255] 2101 GCACAGAATT CAGCGGMTA TCAGGCACTC TGCAGCAGTG GGCCAGGAAT GACGTCAGCA
[0256] 2161 GGCAGTGATA TAAATGMTG TGCACTAGAT CCTGATATTT GCCCMATGG AATCTGTGM
[0257] 2221 AACCTTCGTG GGACCTATAA ATGTATATGC AATTCAGGAT ATGAAGTGGA TTCMCTGGG
[0258] 2281 AMAACTGCG TTGATATTAA TGAATGTGTA CTGAACAGTC TCCTTTGTGA CAATGGACAA
[0259] 2341 TGTAGAMTA CTCCTGGAAG TTTTGTCTGT ACCTGCCCCA AGGGATTTAT CTACAAACCT
[0260] 2401 GATCTAMAA CATGTGMGA CATTGATGAA TGCGMTCAA GTCCTTGCAT TAATGGAGTC
[0261] 2461 TGCAAGAACA GCCCAGGCTC TTTTATTTGT GAATGTTCTT CTGAMGTAC TTTGGATCCA
[0262] 2521 ACAAAAACCA TCTGCATAGA MCCATCAAG GGCACTTGCT GGCAGACTGT CATTGATGGG
[0263] 2581 CGATGTGAGA TCAACATCAA TGGAGCCACC TTAAAGTCCC AGTGCTGCTC CTCCCTCGGT
[0264] 2641 GCTGCGTGGG GAAGCCCGTG CACCCTATGC 1 AAGTTGATC CCATATGTGG TAAAGGGTAC
[0265] 2701 TCAAGAATTA MGGAACACA ATGTGMGAT ATAGATGAAT GTGAAGTGTT CCCAGGAGTG
[0266] 2761 TGTAAAMTG GCCTGTGTGT TAACACTAGG GGGTCATTCA AGTGTCAGTG TCCCAGTGGA
[0267] 2821 ATGACTTTGG ATGCCACAGG MGGATCTGT CTTGATATCC GCCTGGAAAC CTGCTTCCTG
[0268] 2881 AGGTACGAGG ACGAGGAGTG CACCCTGCCT ATTGCTGGCC GCCACCGCAT GGACGCCTGC
[0269] 2941 TGCTGCTCCG TCGGGGCAGC CTGGGGTACT GAGGMTGCG AGGAGTGTCC CATGAGMAT
[0270] 3001 ACTCCTGAGT ACGAGGAGCT GTGTCCGAGA GGACCCGGAT TTGCCACAAA AGAMTTACA
[0271] 3061 AATGGAMGC CTTTCTTCAA AGATATCAAT GAGTGCAAGA TGATACCCAG CCTCTGCACC
[0272] 3121 CACGGCMGT GCAGAAACAC CATTGGCAGC TTTAAGTGCA GGTGTGACAG CGGCTTTGCT
[0273] 3181 CTTGATTCTG MGAAAGGAA CTGCACAGAC ATTGACGAAT GCCGCATATC TCCTGACCTC
[0274] 3241 TGTGGCAGAG GCCAGTGTGT GAACACCCCT GGGGACTTTG AATGCAAGTG TGACGAAGGC
[0275] 3301 TATGAAAGTG GATTCATGAT GATGAAGAAC TGCATGGATA TTGATGAGTG TCAGAGAGAT
[0276] 3361 CCTCTCCTAT GCCGAGGTGG TGTTTGCCAT AACACAGAGG GAAGTTACCG CTGTGAATGC
[0277] 3421 CCGCCTGGCC ATCAGCTGTC CCCCAACATC TCCGCGTGTA TCGACATCAA TGAATGTGAG
[0278] 3481 CTGAGTGCAC ACCTGTGCCC CAATGGCCGT TGCGTGAACC TCATAGGGAA GTATCAGTGT
[0279] 3541 GCCTGCMCC CTGGCTACCA TTCAACTCCC GATAGGCTAT TTTGTGTTGA CATTGATGAA
[0280] 3601 TGCAGCATAA TGAATGGTGG TTGTGMACC TTCTGCACAA ACTCTGAAGG CAGCTATGAA
[0281] 3661 TGTAGCTGTC AGCCGGGATT TGCACTAATG CCTGACCAGA GATCATGCAC CGACATCGAT
[0282] 3721 GAGTGTGAAG ATAATCCCAA TATCTGTGAT GGTGGTCAGT GCACMATAT CCCTGGAGAG
[0283] 3781 TACAGGTGCT TGTGTTATGA TGGATTCATG GCATCTGAAG ACATGAAGAC TTGTGTAGAT
[0284] 3841 GTCAATGAGT GTGACCTGAA TCCAAATATC TGCCTAAGTG GGACCTGTGA AAACACGAM
[0285] 3901 GGCTCATTTA TCTGCCACTG TGATATGGGC TACTCCGGCA AAAAAGGAAA AACTGGCTGT
[0286] 3961 ACAGACATCA ATGAATGTGA MTTGGAGCA CACAACTGTG GCAAACATGC TGTATGTACC
[0287] 4021 AATACAGCAG GAAGCTTCAA ATGTAGCTGC AGTCCCGGGT GGATTGGAGA TGGCATTAAG
[0288] 4081 TGCACTGATC TGGACGMTG TTCCAATGGA ACCCATATGT GCAGCCAGCA TGCAGACTGC
[0289] 4141 AAGAATACCA TGGGATCTTA CCGCTGTCTG TGCAAGGAAG GATACACAGG TGATGGCTTC
[0290] 4201 ACTTGTACAG ACCTTGATGA GTGCTCTGAG AACCTGAATC TCTGTGGCAA TGGCCAGTGC
[0291] 4261 CTCAATGCAC CAGGAGGATA CCGCTGTGAA TGCGACATGG GCTTCGTGCC CAGTGCTGAC
[0292] 4321 GGGAAAGCCT GTGAAGATAT TGATGAGTGC TCCCTTCCGA ACATCTGTGT CTTTGGAACT
[0293] 4381 TGCCACMCC TCCCTGGCCT GTTCCGCTGT GAGTGTGAGA TAGGCTACGA ACTGGACAGA
[0294] 4441 AGCGGCGGGA ACTGCACAGA TGTGAATGAA TGCCTGGATC CAACCACGTG CATCAGTGGG
[0295] 4501 AACTGTGTCA ACACTCCAGG CAGCTATATC TGTGACTGCC CACCTGATTT TGAACTGAAC
[0296] 4561 CCAACTCGAG TTGGCTGTGT TGATACCCGC TCTGGAMTT GCTATTTGGA TATTCGACCT
[0297] 4621 CGAGGAGACA ATGGAGATAC AGCCTGCAGC AATGMATTG GAGTTGGTGT TTCCAAAGCT
[0298] 4681 TCCTGCTGCT GTTCTCTGGG TAAAGCCTGG GGTACTCCTT GTGAGATGTG TCCTGCTGTG
[0299] 4741 AACACATCCG AGTACAMAT TCTTTGTCCT GGAGGGGAAG GTTTCCGACC AAATCCTATC
[0300] 4801 ACCGTTATAT TGGAAGATAT TGATGAGTGC CAGGAGCTAC CAGGGCTGTG CCAAGGAGGA
[0301] 4861 AMTGTATCA ACACCTTTGG GAGTTTCCAG TGCCGCTGTC CMCCGGCTA CTACCTGAAT
[0302] 4921 GMGATACAC GAGTGTGTGA TGATGTGAAT GAATGTGAGA CTCCTGGAAT CTGTGGTCCA
[0303] 4981 GGGACATGTT ACAACACCGT TGGCAACTAC ACCTGTATCT GTCCTCCAGA CTACATGCM
[0304] 5041 GTGAATGGGG GAAATAATTG CATGGATATG AGAAGAAGTT TGTGCTACAG AAACTACTAT
[0305] 5101 GCTGACMCC AGACCTGTGA TGGAGMTTG TTATTCAACA TGACCAAGAA GATGTGCTGC
[0306] 5161 TGTTCCTACA ACATTGGCCG GGCGTGGAAC AAGCCCTGTG AACAGTGTCC CATCCCAAGT
[0307] 5221 ACAGATGAGT TTGCTACACT CTGTGGAAGT CAAAGGCCAG GCTTTGTCAT CGACATTTAT
[0308] 5281 ACCGGTTTAC CCGTTGATAT TGATGAGTGC CGGGAGATCC CAGGGGTCTG TGAMATGGA
[0309] 5341 GTGTGTATCA ACATGGTTGG CAGCTTCCGA TGTGMTGTC CAGTGGGATT CTTCTATAAT
[0310] 5401 GACAAGTTGT TGGTTTGTGA AGATATTGAC GAGTGTCAGA ACGGCCCAGT GTGCCAGCGC
[0311] 5461 AACGCCGAAT GCATCAACAC TGCAGGCAGC TACCGCTGTG ACTGTAAGCC CGGCTACCGC
[0312] 5521 TTCACCTCCA CAGGACAGTG CAATGATCGT AATGMTGTC AAGAMTCCC CAATATATGC
[0313] 5581 AGTCATGGGC AGTGCATTGA CACAGTTGGA AGCTTTTATT GCCTTTGCCA CACTGGTTTT
[0314] 5641 AMACAMTG ATGACCMAC CATGTGCTTG GACATAAATG AATGTGAAAG AGATGCCTGT
[0315] 5701 GGGAATGGAA CTTGCCGGAA CACAATTGGT TCCTTCAACT GCCGCTGCAA TCATGGTTTC
[0316] 5761 ATCCTTTCTC ACAACAATGA CTGTATAGAT GTTGATGAAT GTGCMGTGG AAATGGGAAT
[0317] 5821 CTTTGCAGAA ATGGCCMTG CATTAATACA GTGGGGTCTT TCCAGTGCCA GTGCMTGAA
[0318] 5881 GGCTATGAGG TGGCTCCAGA TGGGAGGACC TGTGTGGATA TCAATGAATG TCTTCTAGM
[0319] 5941 CCCAGAMAT GTGCACCAGG TACCTGTCAA AACTTGGATG GGTCCTACAG ATGCATTTGC
[0320] 6001 CCACCTGGAT ACAGTCTTCA MATGAGAAG TGTGMGATA TTGATGAGTG TGTCGAAGAG
[0321] 6061 CCAGAAATTT GTGCCCTGGG CACATGCAGT AACACTGAAG GCAGCTTCAA ATGTCTGTGT
[0322] 6121 CCAGAAGGGT TTTCCTTGTC CTCCAGTGGA AGAAGGTGCC AAGATTTGCG AATGAGCTAC
[0323] 6181 TGTTATGCGA AGTTTGMGG AGGAAAGTGT TCATCACCCA AATCCAGAAA TCACTCCAAG
[0324] 6241 CAGGAATGCT GCTGTGCCTT GAAGGGAGAA GGCTGGGGAG ACCCCTGCGA GCTCTGCCCC
[0325] 6301 ACGGAACCTG ATGAGGCCTT CCGCCAGATA TGTCCTTATG GAAGTGGGAT CATCGTGGGA
[0326] 6361 CCTGATGATT CAGCAGTTGA TATGGACGAA TGCAMGAAC CCGATGTCTG TAAACATGGA
[0327] 6421 CAGTGCATCA ATACAGATGG TTCCTATCGC TGCGAGTGTC CCTTTGGTTA TACTCTAGCA
[0328] 6481 GGGAATGAAT GTGTAGATAC TGATGMTGT TCTGTTGGCA ATCCTTGTGG AAATGGAACC
[0329] 6541 TGCAAGMTG TGATTGGAGG TTTTGMTGC ACCTGCGAGG AGGGATTTGA GCCCGGTCCA
[0330] 6601 ATGATGACAT GTGAAGATAT AMTGAATGT GCCCAGAATC CTCTGCTCTG TGCCTTCCGA
[0331] 6661 TGTGTGMCA CTTATGGGTC ATATGAATGC AAATGTCCCG TGGGATATGT GCTCAGAGM
[0332] 6721 GACCGTAGGA TGTGCAMGA TGAGGATGAG TGTGMGAGG GAAAACATGA CTGTACTGM
[0333] 6781 AMCAAATGG MTGCAAGAA CCTCATTGGC ACATATATGT GCATCTGTGG ACCCGGGTAT
[0334] 6841 CAGCGGAGAC CTGATGGAGA AGGCTGTGTA GATGAGAATG AATGTCAGAC GAAGCCAGGG
[0335] 6901 ATCTGTGAGA ATGGGCGCTG CCTCAACACC CGTGGGAGCT ACACCTGTGA GTGTAATGAT
[0336] 6961 GGGTTTACCG CCAGCCCCAA CCAGGACGAG TGCCTTGACA ATCGGGAAGG GTACTGCTTC
[0337] 7021 ACAGAGGTGC TACAAAACAT GTGTCAGATC GGCTCCAGCA ACAGGAACCC CGTCACCAM
[0338] 7081 TCGGAATGCT GCTGTGACGG AGGGAGAGGC TGGGGTCCCC ACTGTGAGAT CTGCCCTTTC
[0339] 7141 CAGGGGACTG TGGCTTTCAA GAAACTCTGT CCCCATGGCC GAGGATTCAT GACCAATGGA
[0340] 7201 GCAGATATCG ATGAATGCAA GGTTATTCAC GATGTTTGCC GMATGGGGA ATGTGTCAAT
[0341] 7261 GACAGAGGAT CATATCATTG CATTTGTAAA ACTGGGTACA CTCCAGATAT AACTGGGACT
[0342] 7321 TCCTGTGTAG ATCTGAACGA GTGCAACCAG GCTCCCAAAC CCTGCAATTT TATCTGCAM
[0343] 7381 AACACAGAAG GGAGTTACCA GTGTTCATGC CCGAMGGCT ACATTCTGCA AGAGGATGGA
[0344] 7441 AGGAGCTGCA MGATCTTGA TGAGTGTGCA ACCAAGCAAC ACAACTGCCA GTTCCTATGT
[0345] 7501 GTTAACACCA TTGGCGGCTT CACATGCAAA TGTCCTCCCG GATTTACCCA ACACCATACG
[0346] 7561 TCCTGCATTG ATAACAATGA ATGCACCTCT GACATCAATC TGTGCGGGTC TAAGGGCATT
[0347] 7621 TGCCAGMCA CTCCTGGAAG CTTCACCTGT GAATGCCAGC GGGGATTCTC ACTTGATCAG
[0348] 7681 ACCGGCTCCA GCTGTGMGA CGTGGACGAG TGTGAGGGTA ACCACCGCTG CCAGCATGGC
[0349] 7741 TGCCAGMCA TCATTGGGGG CTACAGGTGC AGCTGCCCCC AGGGCTACCT CCAGCACTAC
[0350] 7801 CAGTGGMCC AGTGTGTTGA TGAAAACGAA TGCCTCAGCG CTCACATCTG CGGAGGAGCC
[0351] 7861 TCCTGTCACA ACACCCTGGG GAGCTACAAG TGCATGTGTC CCGCCGGCTT CCAGTATGM
[0352] 7921 CAGTTCAGTG GAGGATGCCA AGACATCAAT GAATGTGGCT CTGCGCAGGC CCCCTGCAGC
[0353] 7981 TATGGCTGTT CCAATACCGA GGGCGGTTAC CTGTGTGGCT GTCCACCTGG TTACTTCCGC
[0354] 8041 ATAGGCCAAG GGCACTGTGT TTCTGGAATG GGCATGGGCC GAGGMACCC AGAGCCACCT
[0355] 8101 GTCAGTGGTG MATGGATGA CAATTCACTC TCCCCAGAGG CTTGTTACGA GTGTAAGATC
[0356] 8161 AATGGCTACC CCAAACGGGG CAGGAAACGG AGAAGCACAA ACGAAACTGA TGCCTCCAAT
[0357] 8221 ATCGAGGATC AGTCTGAGAC AGAAGCCAAT GTGAGTCTTG CAAGTTGGGA TGTTGAGAAG
[0358] 8281 ACAGCCATCT TTGCTTTCAA TATTTCCCAC GTCAGTAACA AGGTTCGAAT CCTAGAACTC
[0359] 8341 CTTCCAGCTC TTACAACTCT GACGAATCAC AACAGATACT TGATCGAATC TGGMATGM
[0360] 8401 GATGGCTTCT TTAAAATCAA CCAAAAGGAA GGGATCAGCT ACCTCCACTT CACMAGAAG
[0361] 8461 AAGCCAGTGG CTGGAACCTA TTCATTACAA ATCAGTAGTA CTCCACTTTA TAAMAGAM
[0362] 8521 GMCTTMCC AACTAGAAGA CAAATATGAC AAAGACTACC TCAGTGGTGA ACTGGGTGAT
[0363] 8581 AATCTGAAGA TGAAAATCCA GGTTTTGCTT CATTAA(SEQ ID NO :3)，
[0364] 其编码的蛋白质具有如下所示的氨基酸序列：
[0365] 1 MRRGRLLEIA LGFTVLLASY TSHGADANLE AGNVKETRAS RAKRRGGGGH DALKGPNVCG
[0366] 61 SRYNAYCCPG WKTLPGGNQC I VPICRHSCG DGRCSRPNMC TCPSGQIAPS CGSRSIQHCN
[0367] 121 IRCMNGGSCS DDHCLCQKGY IGTHCGQPVC ESGCLNGGRC VAPNRCACTY GFTGPQCERD
[0368] 181 YRTGPCFTVI SNQMCQGQLS GIVCTKQLCC ATVGRAWGHP CEMCPAQPHP CRRGFIPNIR
[0369] 241 TGACQDVDEC QAIPGLCQGG NCINTVGSFE CKCPAGHKLN EVSQKCEDID ECSTIPGICE
[0370] 301 GGECTNTVSS YFCKCPPGFY TSPDGTRCID VRPGYCYTAL TNGRCSNQLP QSITKMQCCC
[0371] 361 DAGRCWSPGV TVAPEMCPIR ATEDFNKLCS VPMVIPGRPE YPPPPLGPIP PVLPVPPGFP
[0372] 421 PGPQIPVPRP PVEYLYPSRE PPRVLPVNVT DYCQLVRYLC QNGRCIPTPG SYRCECNKGF
[0373] 481 QLDLRGECID VDECEKNPCA GGECINNQGS YTCQCRAGYQ STLTRTECRDIDECLQNGRI
[0374] 541 CNNGRCINTD GSFHCVCNAG FHVTRDGKNC EDMDECSIRN MCLNGMCINE DGSFKCICKP
[0375] 601 GFQLASDGRY CKDINECETP GICMNGRCVN TDGSYRCECF PGLAVGLDGR VCVDTHMRST
[0376] 661 CYGGYKRGQCIKPLFGAVTK SECCCASTEY AFGEPCQPCP AQNSAEYQAL CSSGPGMTSA
[0377] 721 GSDINECALD PDICPNGICE NLRGTYKCIC NSGYEVDSTG KNCVDINECV LNSLLCDNGQ
[0378] 781 CRNTPGSFVC TCPKGFIYKP DLKTCEDIDE CESSPCINGV CKNSPGSFIC ECSSESTLDP
[0379] 841 TKTICIETIK GTCWQTVIDG RCEININGAT LKsQCCssLG AAWGsPCTLC * (SEQ ID NO :4)。
[0380] 发明人发现的新的新突变体与SEQ ID NO :1相比，具有c. C2671T突变，即相对于 野生型FBN1基因，本发明的FBN1基因突变体的第2671位碱基从C突变为T。由此，其所编 码的产物与野生型的FBN1相比，具有p. Gln891X突变，即该突变是由于c. C2671T的无义突 变而引起的，具体地，该突变表示：野生型FBN1的第891位Gin氨基酸突变为终止密码子， 翻译提前终止。
[0381] FBN1基因全长237,483bp，由66个外显子构成，定位于15q21. 1。其mRNA包含 9663个核苷酸，由5'端非翻译区、开放读码框和3'非翻译区组成，长度分别为134、8613和 916个核苷酸。由FBN1基因编码的FBN1是一种350ku的糖蛋白，为10?12nm结缔组织 微纤维的主要组成部分，广泛分布于弹性和非弹性组织中。该蛋白由47个与表皮生长因子 (EGF)表现同源的半胱氨酸富含基序组成，其中43个由于存在钙结合序列而被认为在稳定 钙依赖蛋白中发挥作用。这些钙结合EGF样基序长链结构中还穿插其他功能区域，包括7 个与转化生长因子1结合蛋白同源的结构及富含半胱氨酸，由EGF样结构和TGF-1样结构 融合而成的杂交区域。钙结合区域的突变及半胱氨酸的置换可引起FBN1功能障碍。目前 发现FBN1的突变会引起马凡氏综合征。但是，本发明的FBN1基因突变位点c. C2671T并未 见报道。
[0382] 根据本发明的第二方面，本发明提出了一种分离的多肽。根据本发明的实施例，与 野生型FBN1相比，该分离的多肽具有D. Gln891X突变，即该突变是由于c. C2671T的无义突 变而引起的，具体地，该突变表示：该分离的多肽野生型FBN1的第891位Gin氨基酸突变为 终止密码子，翻译提前终止。根据本发明的一些具体示例，该多肽是由前述分离的编码FBN1 突变体的核酸编码的。通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品是 否易患马凡氏综合征，也可以通过检测这些多肽在生物体中是否存在，可以有效地预测生 物体是否易患马凡氏综合征。
[0383] 根据本发明的第三方面，本发明提出了一种筛选易患马凡氏综合征的生物样品的 方法。根据本发明的实施例，该方法包括以下步骤：
[0384] 从所述生物样品提取核酸样本。根据本发明的实施例，生物样品的类型并不受特 别限制，只要从该生物样品中能够提取到反映生物样品FBN1是否存在突变的核酸样本即 可。根据本发明的实施例，生物样品可以为选自人体血液、皮肤、皮下组织的至少一种，优选 外周血。由此，可以方便地进行取样和检测，从而能够进一步提高筛选易患马凡氏综合征的 生物样品的效率。根据本发明的实施例，这里所使用的术语"核酸样本"应做广义理解，其可 以是任何能够反映生物样品中FBN1是否存在突变的样本，例如可以是从生物样品中直接 提取的全基因组DNA，也可以是该全基因组中包含FBN1编码序列的一部分，可以是从生物 样品中提取的总RNA，也可以是从生物样品中提取的mRNA。根据本发明的一个实施例，所述 核酸样本为全基因组DNA。由此，可以扩大生物样品的来源范围，并且可以同时对生物样品 的多种信息进行确定，从而能够提高筛选易患马凡氏综合征的生物样品的效率。另外，根据 本发明的实施例，针对采用RNA作为核酸样本，从生物样品提取核酸样本可以进一步包括： 从生物样品提取RNA样本，优选RNA样本为mRNA ;以及基于所得到的RNA样本，通过反转录 反应，获得cDNA样本，所得到的cDNA样本构成核酸样本。由此，可以进一步提高利用RNA 作为核酸样本筛选易患马凡氏综合征的生物样品的效率。
[0385] 接下来，在得到核酸样本之后，可以对核酸样本进行分析，从而能够确定所得到核 酸样本的核酸序列。根据本发明的实施例，确定所得到核酸样本的核酸序列的方法和设备 并不受特别限制。根据本发明的具体实施例，可以通过测序方法，确定核酸样本的核酸序 列。根据本发明的实施例，可以用于进行测序的方法和设备并不受特别限制。根据本发明的 实施例，可以采用第二代测序技术，也可以采用第三代以及第四代或者更先进的测序技术。 根据本发明的具体示例，可以利用选自Hiseq2000、S0LiD、454和单分子测序装置的至少一 种对核酸序列进行测序。由此，结合最新的测序技术，针对单个位点可以达到较高的测序 深度，检测灵敏度和准确性大大提高，因而能够利用这些测序装置的高通量、深度测序的特 点，进一步提高对核酸样本进行检测分析的效率。从而，能够提高后续对测序数据进行分析 时的精确性和准确度。由此，根据本发明的实施例，确定核酸样本的核酸序列可以进一步包 括：首先，针对所得到的核酸样本，构建核酸测序文库；以及对所得到的核酸测序文库进行 测序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果。根据本发明的一些实施例，可以采用选自 HiSeq2000、S0LiD、454和单分子测序装置的至少一种对所得到的核酸测序文库进行测序。 另外，根据本发明的实施例，可以对核酸样本进行筛选，富集FBN1外显子，该筛选富集可以 在构建测序文库之前，构建测序文库过程中，或者构建测序文库之后进行。根据本发明的一 个实施例，针对核酸样本，构建核酸测序文库进一步包括：利用FBN1外显子特异性引物，对 核酸样本进行PCR扩增；以及针对所得到的扩增产物，构建核酸测序文库。由此，可以通过 PCR扩增，富集FBN1外显子（尤其是第22号外显子），从而能够进一步提高筛选易患马凡 氏综合征的生物样品的效率。根据本发明的实施例，FBN1外显子特异性引物的序列不受特 别限制，根据本发明的优选实施例，这些FBN1外显子特异性引物（针对FBN1的22号外显 子）具有SEQ IDNO :5和6所示的核苷酸序列：
[0386] GTTGTTATACTTAATGTCAGCTTTT (SEQ ID NO ：5)
[0387] TTTTTGAAAGATAATCTGTACCTAT (SEQ ID NO ：6)
[0388] 发明人惊奇地发现，通过采用这些引物，可以在PCR反应体系中通过显著有效地 完成对FBN1外显子的扩增。需要说明的是，这些SEQ ID N0:5和SEQ ID N0:6所示的核苷 酸序列是本发明的发明人在付出了艰苦的劳动后，意外获得的。
[0389] 关于针对核酸样本，构建测序文库的方法和流程，本领域技术人员可以根据不 同的测序技术进行适当选择，关于流程的细节，可以参见测序仪器的厂商例如Illumina 公司所提供的规程，例如参见Illumina公司Multiplexing Sample Preparation Guide (Part#1005361;Feb2010)或 Paired-End SamplePrep Guide(Part#1005063; Feb2010)，通过参照将其并入本文。根据本发明的实施例，从生物样品提取核酸样本的方法 和设备，也不受特别限制，可以采用商品化的核酸提取试剂盒进行。
[0390] 需要说明的是，在这里所使用的术语"核酸序列"应作广义理解，其可以是在对核 酸样本进行测序得到的测序数据进行组装后，得到的完整的核酸序列信息，也可以是直接 采用通过对核酸样本进行测序所得到的测序数据（reads)作为核酸序列，只要这些核酸序 列中含有对应FBN1的编码序列即可。
[0391] 最后，在确定核酸样本的核酸序列之后，将所得到的核酸样本的核酸序列与SEQ ID N0 :1的序列相比对。如果在所得到的核酸序列中具有C.C2671T突变，则指示生物样品 易患马凡氏综合征。由此，通过根据本发明实施例的筛选易患马凡氏综合征的生物样品的 方法，可以有效地筛选易患马凡氏综合征的生物样品。根据本发明的实施例，对核酸序列与 SEQ ID N0 :1进行比对的方法和设备并不受特别限制，可以采用任意常规的软件进行操作， 根据本发明的具体实例，可以采用SOAP软件进行比对。
[0392] 需要说明的是，根据本发明实施例的"筛选易患马凡氏综合征的生物样品的方法" 的用途不受特别限制，例如可以用作非诊断目的的筛选方法。
[0393] 筛选易患马凡氏综合征的生物样品的系统和试剂盒
[0394] 根据本发明的第四方面，本发明提出了一种能够有效实施上述筛选易患马凡氏综 合征的生物样品的方法的系统。
[0395] 参考图1，根据本发明的实施例，该筛选易患马凡氏综合征的生物样品的系统 1000包括核酸提取装置100、核酸序列确定装置200以及判断装置300。
[0396] 根据本发明的实施例，核酸提取装置100用于从生物样品提取核酸样本。如前所 述，根据本发明的实施例，核酸样本的类型并不受特别限制，对于采用RNA作为核酸样本， 则核酸提取装置进一步包括RNA提取单元101和反转录单元102,其中，提取单元101用于 从生物样品提取RNA样本，反转录单元102与RNA提取单元101相连，用于对RNA样本进行 反转录反应，以便获得cDNA样本，所得到的cDNA样本构成核酸样本。
[0397] 根据本发明的实施例，核酸序列确定装置200与核酸提取装置100相连，用于对核 酸样本进行分析，以便确定核酸样本的核酸序列。如前所示，可以采用测序的方法确定核酸 样本的核酸序列。由此，根据本发明的一个实施例，所述核酸序列确定装置200可以进一步 包括：文库构建单元201以及测序单元202。文库构建单元201用于针对核酸样本，构建核 酸测序文库；测序单元202与文库构建单元201相连，用于对核酸测序文库进行测序，以便 获得由多个测序数据构成的测序结果。如前所述，可以通过PCR扩增，富集FBN1外显子，进 一步提商筛选易患马凡氏综合征的生物样品的效率。由此，文库构建单兀201可以进一步 包括PCR扩增模块（图中未示出），在该PCR扩增模块中设置有FBN1外显子特异性引物， 以便利用FBN1外显子特异性引物，对所述核酸样本进行PCR扩增，根据本发明的具体实施 例，FBN1外显子特异性引物（针对FBN1的22号外显子）具有如SEQ ID NO :3和4所示的 核苷酸序列。根据本发明的实施例，测序单元202可以包括选自HISEQ2000、S0LiD、454和 单分子测序装置的至少一种。由此，结合最新的测序技术，针对单个位点可以达到较高的测 序深度，检测灵敏度和准确性大大提高，因而能够利用这些测序装置的高通量、深度测序的 特点，进一步提高对核酸样本进行检测分析的效率。从而，提高后续对测序数据进行分析时 的精确性和准确度。
[0398] 根据本发明的实施例，判断装置300与核酸序列确定装置200相连，适于将核酸样 本的核酸序列进行比对，以便基于核酸样本的核酸序列与SEQ ID N0 :1的区别判断生物样 品是否易患马凡氏综合征。具体地，基于核酸样本的核酸序列与SEQ ID N0:1相比，是否具 有c. C2671T突变，判断生物样品是否易患马凡氏综合征。如前所述，根据本发明的一个实 施例，核酸样本的核酸序列与SEQ ID N0:1相比，具有C.C2671T突变，是生物样品易患马凡 氏综合征的指示。如前所述，根据本发明的实施例，对核酸序列与SEQ IDN0:1进行比对的 设备并不受特别限制，可以采用任意常规的软件进行操作，根据本发明的具体实例，可以采 用SOAP软件进行比对。
[0399] 由此，利用该系统，能够有效地实施前述筛选易患马凡氏综合征的生物样品的方 法，从而可以有效地筛选易患马凡氏综合征的生物样品。
[0400] 根据本发明的第五方面，本发明提出了一种用于筛选易患马凡氏综合征的生物样 品的试剂盒。根据本发明的实施例，该用于筛选易患马凡氏综合征的生物样品的试剂盒包 括：适于检测FBN1基因突变体的试剂，其中与SEQ ID N0 :1相比，该FBN1基因突变体具有 C.C2671T突变。利用根据本发明的实施例的试剂盒，能够有效地筛选易患马凡氏综合征的 生物样品。在本文中，所使用的术语"适于检测FBN1基因突变体的试剂"应做广义理解，即 可以是检测FBN1编码基因的试剂，也可以是检测FBN1突变体多肽的试剂，例如可以采用识 别特异性位点的抗体。根据本发明的一个实施例，所述试剂为核酸探针或引物，优选地，所 述核酸探针或引物具有如SEQ IDN0:5-6所示的核苷酸序列。由此，可以高效地筛选易患马 凡氏综合征的生物样品。
[0401] 需要说明的是，在本文前面筛选易患马凡氏综合征的生物样品的方法部分中所描 述的特征和优点，同样适用于筛选易患马凡氏综合征的生物样品的系统或者试剂盒，在此 不再赘述。
[0402] 构建体及重组细胞
[0403] 根据本发明的第六方面，本发明还提出了一种构建体。根据本发明的实施例，该构 建体包含前面所述的分离的编码FBN1突变体的核酸，即本发明的FBN1基因突变体。由此， 利用本发明的构建体转化受体细胞获得的重组细胞，能够有效地用于筛选治疗马凡氏综合 征的药物。其中，所述受体细胞的种类不受特别限制，例如可以为大肠杆菌细胞、哺乳动物 细胞，优选该受体细胞来源于哺乳动物。
[0404] 在本发明中所使用的术语"构建体"是指这样的一种遗传载体，其包含特定核酸序 列，并且能够将目的核酸序列转入宿主细胞中，以获得重组细胞。根据本发明的实施例，构 建体的形式不受特别限制。根据本发明的实施例，其可以为质粒、噬菌体、人工染色体、粘粒 (Cosmid)、病毒的至少一种，优选质粒。质粒作为遗传载体，具有操作简单，可以携带较大片 段的性质，便于操作和处理。质粒的形式也不受特别限制，既可以是环形质粒，也可以是线 性质粒，即可以是单链的，也可以是双链的。本领域技术人员可以根据需要进行选择。在本 发明中所使用的术语"核酸"可以是任何包含脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸的聚合物，包 括但不限于经过修饰的或者未经修饰的DNA、RNA，其长度不受任何特别限制。对于用于构建 重组细胞的构建体，优选所述核酸为DNA，因为DNA相对于RNA而言，其更稳定，并且易于操 作。根据本发明的第七方面，本发明还提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例，该重组 细胞是通过前面所述的构建体转化受体细胞而获得的。从而，本发明的重组细胞能够表达 构建体所携带的FBN1基因突变体。根据本发明的一些实施例，利用本发明的重组细胞，能 够有效地筛选治疗马凡氏综合征的药物。根据本发明的实施例，受体细胞的种类不受特别 限制，例如可以为大肠杆菌细胞、哺乳动物细胞，优选所述受体细胞来源于非人哺乳动物。
[0405] 下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明 性的，而不能理解为对本发明的限制。
[0406] 若未特别指明，实施例中所采用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手 段，可以参照《分子克隆实验指南》第三版或者相关产品进行，所采用的试剂和产品也均为 可商业获得的。未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法，所用试剂的来 源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特 殊说明，均以首次标明的内容相同。
[0407] 实施例1确定MFS致病突变
[0408] 1、样本收集
[0409] 发明人收集到一个马凡氏综合征（在本文中有时也简称为MFS)患者家系，其家系 图见图2。如图2所示，其中，□表示正常男性，〇表示正常女性，籲表示女性患者，0表 示无法确定是否患病的已逝男性，表示无法确定是否患病的已逝女性，箭头所指为先证 者。由图2可知，该家系目前共有9个成员，其中MFS患者3名，正常成员6名。具体地，先 证者（II :4)，46岁，医院就医时被确诊患有MFS。先证者的母亲（I :2)去世，父亲（I :1)健 在且为正常人；先证者的哥哥（II :1)去世，但育有一女（III :1)，其为MFS患者；先证者的 姐姐（II :2)健在，为正常人。先证者与丈夫（II :5)育有3个孩子：两个女儿（III :2,为 MFS患者；III :3,为正常人），1个儿子（III :4,为正常人）。
[0410] 2、全外显子组测序
[0411] 文献报道马凡氏综合征为显性遗传，且其有明确的致病基因 FBN1。因而，发明人结 合Illumina Hiseq2000的高通量测序技术，对图2所示的MFS患者家系中的三名患者（II : 4、III :1和III :2)的FBN1基因的66个外显子区域序列进行了测序。
[0412] 具体如下：
[0413] 2.1DNA 提取
[0414] 采集图2所示MFS患者家系中的三名患者（II :4、III :1和III :2)的外周血，利 用白细胞裂解法从该外周血样品中提取各患者的基因组DNA，并利用分光光度计测量DNA 的浓度及纯度，所得各基因组DNA的0D26(l/0D28(l均应位于1. 7-2. 0之间，浓度不少于200ng/ 微升，总量不少于3微克。
[0415] 2.2外显子捕获与测序
[0416] 利用超声波仪（CovarisS2，Massachusetts，USA)将各基因组DNA样本随机打断 成200-300bp左右的片段，随后按照制造商提供的操作说明书，在片段两端分别连接上接 头制备文库（可参见：http://www. illumina. com/提供的Illumina/Solexa标准建库说明 书，通过参照将其全文并入本文）。文库经纯化后经过Ligation-mediated PCR(LM-PCR) 的线性扩增与捕获试剂Biotinylated DNA Library进行杂交富集，再经过LM-PCR的线性 扩增，文库检测合格后即可上机测序，以便获得原始测序数据。其中，测序平台为Illumina Hi Seq2000,读取长度为90bp，各样本的平均测序深度最少为150 X。
[0417] 3、变异检测、注释及数据库比较
[0418] 利用Illumina basecalling Softwarel. 7对上述获得的原始测序数据进行处 理，经过过滤去污染后，使用S0APaligner/S0AP2(可参见：Li R，Li Y，Kristiansen K， et al, SOAP ：short oligonucleotide alignment program. Bioinformatics2008, 24(5)： 713-714 ；Li R, Yu C, Li Y, ea al, S0AP2 ：an improved ultrafast tool for short read alignment. Bioinformatics2009, 25 (15) : 1966-1967,通过参照将其全文并入本文）比对 到UCSC人类参考基因组（hgl9, build37. 1，http://genome. ucsc. edu/)，以便获得比对到 基因组上的唯一比对序列。然后利用SOAPsnp(可参见：Li R，Li Y，Fang X，Yang H，et al， SNP detection for massively parallel whole-genome resequencing. Genome Res2009, 19(6) :1124-1132,通过参照将其全文并入本文）确定靶区域的基因型。
[0419] 结果，在这些样本中，发明人发现：对于FBN1基因来讲，在患者II :4中发现有29 个单核苷酸多态性（SNPs)和12处的插入/缺失，在患者III :2中发现有30个SNP和13 处的Indels。随后通过dbSNP数据库
[0420] (http://hgdownload.cse. ucsc.edu/goldenPath/hgl9/database/snpl35.txt. gz. )、HapMap 数据库
[0421] (ftp://ftp. ncbi. nlm. nih. gov/hapmap)、千人基因组数据库
[0422] (ftp://ftp. lOOOgenomes. ebi. ac. uk/voll/ftp)、炎黄数据库（http:// yh. genomics, org. cn/)等公共数据库的过滤，去掉所有已知的且在数据库中等位基因频率 大于0.005的变异。
[0423] 结果，发明人发现，在上述三个患者中只有新无义突变c. 2671C> T为发生在FBN1 基因编码区中的非同义突变，其余均为内含子或同义突变。进一步，综合三个患者高度一致 的表型，以及患者II :4和III :2为母女关系，首先可以判断三个患者的致病位点应该是相 同的。接着，通过显性性遗传模式结合家系分析，可以推断：三个患者应该均携带上述突变 (c. 2671C > T)，且都为杂合突变类型，家系内正常人在此位置均未发生突变。
[0424] 随后在图2所示的上述MFS患者家系中对FBN1基因进行突变排查，即针对FBN1 基因中的无义突变c.2671C>T进行Sanger测序验证，结果确认在此家系中三名患者（II : 4、III :1和III :2)均携带FBN1基因中的新生无义突变c. 2671C > T(p.Gln891X)，而家系 中所有未受累的家族成员均未携带该突变，在家系内证明基因型与表型存在共分离。由此， 初步判定FBN1基因中的新生无义突变c. 2671C > T(p. Gln891X)为该马凡氏综合征家系中 患者的致病原因，FBN1基因的c. 2671C > T突变为马凡氏综合征的致病突变。
[0425] 实施例2 Sanger法测序验证
[0426] 分别对实施例1中所述的马凡氏综合征患者家系中的3名患者（II :4、III :2和 III :1)和2名家系内正常人（II :5和III :4)的FBN1基因进行检测：针对FBN1基因的 22号外显子上的c. C2671T突变设计引物，然后通过PCR扩增、产物纯化和测序的方法获得 FBN1有关序列，根据确定序列测定结果属于突变型还是野生型，验证FBN1基因的c. C2671T 突变与马凡氏综合征之间的相关性。
[0427] 具体方法步骤如下：
[0428] 1、DNA 提取
[0429] 按照实施例1中所述的提取DNA的方法，分别提取制备受试者外周静脉血中的基 因组DNA，备用。
[0430] 2、引物设计及PCR反应
[0431] 首先，参考人类基因组序列数据库GRCh37/hgl9,设计得到具有SEQ ID NO :5-6所 示的核苷酸序列的FBN1基因外显子特异性引物，具体序列见下表：
[0432]
【权利要求】
1. 一种分离的编码FBN1突变体的核酸，其特征在于，所述核酸与SEQ ID NO :1相比， 具有c. C2671T突变。
2. -种分离的多肽，其特征在于，与SEQ ID N0:2相比，所述分离的多肽具有 p.Gln891X 突变。
3. -种筛选易患马凡氏综合征的生物样品的方法，其特征在于，包括以下步骤： 从所述生物样品提取核酸样本； 确定所述核酸样本的核酸序列； 所述核酸样本的核酸序列与SEQ ID N0:1相比，具有C.C2671T突变是所述生物样品易 患马凡氏综合征的指示， 任选地，所述生物样本为选自人体血液、皮肤、皮下组织的至少一种， 任选地，所述核酸样本为全基因组DNA。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，从所述生物样品提取核酸样本进一步包 括： 从所述生物样品提取RNA样本，优选所述RNA样本为mRNA ;以及 基于所述RNA样本，通过反转录反应，获得cDNA样本，所述cDNA样本构成所述核酸样 本。
5. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，确定所述核酸样本的核酸序列进一步包 括： 针对所述核酸样本，构建核酸测序文库；以及 对所述核酸测序文库进行测序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果，任选地，采 用选自Hiseq2000、S0LiD、454和单分子测序装置的至少一种对所述核酸测序文库进行测 序， 任选地，针对所述核酸样本，构建核酸测序文库进一步包括： 利用FBN1基因外显子特异性引物，对所述核酸样本进行PCR扩增；以及 针对所得到的扩增产物，构建所述核酸测序文库， 任选地，所述特异性引物具有如SEQ ID NO :5-6所示的核苷酸序列。
6. -种筛选易患马凡氏综合征的生物样品的系统，其特征在于，包括： 核酸提取装置，所述核酸提取装置用于从所述生物样品提取核酸样本； 核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装置与所述核酸提取装置相连，用于对所述核 酸样本进行分析，以便确定所述核酸样本的核酸序列； 判断装置，所述判断装置与所述核酸序列确定装置相连，以便基于所述核酸样本的核 酸序列与SEQ ID N0:1相比，是否具有C.C2671T突变，判断所述生物样品是否易患马凡氏 综合征， 任选地，所述核酸提取装置进一步包括： RNA提取单元，所述RNA提取单元用于从所述生物样品提取RNA样本；以及 反转录单元，所述反转录单元与所述RNA提取单元相连，用于对所述RNA样本进行反转 录反应，以便获得cDNA样本，所述cDNA样本构成所述核酸样本。
7. 根据权利要求6所述的系统，其特征在于，所述核酸序列确定装置进一步包括： 文库构建单元，所述文库构建单元用于针对所述核酸样本，构建核酸测序文库；以及 测序单元，所述测序单元与所述文库构建单元相连，用于对所述核酸测序文库进行测 序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果， 任选地，所述文库构建单元进一步包括： PCR扩增模块，所述PCR扩增模块中设置有FBN1基因外显子特异性引物，以便利用所述 特异性引物，对所述核酸样本进行PCR扩增， 任选地，所述特异性引物具有如SEQ ID NO :5-6所示的核苷酸序列， 任选地，所述测序单元包括选自HISEQ2000、S0LiD、454和单分子测序装置的至少一 种。
8. -种用于筛选易患马凡氏综合征的生物样品的试剂盒，其特征在于，含有： 适于检测FBN1基因突变体的试剂，其中与SEQ ID N0:1相比，所述FBN1基因突变体具 有c. C2671T突变， 任选地，所述试剂为核酸探针或引物， 任选地，所述核酸探针或引物具有如SEQ ID NO :5-6所示的核苷酸序列。
9. 一种构建体，其特征在于，包含权利要求1所述的分离的编码FBN1突变体的核酸。
10. -种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是通过权利要求9所述的构建体转化受 体细胞而获得的。
【文档编号】C12Q1/68GK104120132SQ201310156634
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2013年4月28日 优先权日:2013年4月28日
【发明者】沈晓丽, 韩莉莉, 赖力, 陈点, 林赛梅, 朱庆燕, 朱倩, 张建国, 王俊, 汪建, 杨焕明 申请人:福建省立医院, 深圳华大基因科技有限公司