专利名称：一种地衣芽孢杆菌的制备方法
技术领域：
本发明涉及发酵工程领域，具体涉及一种地衣芽孢杆菌的制备方法。
背景技术：
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)具有促进肠道内正常生理性厌氧菌的生长，调整肠道菌群失调，恢复肠道功能的作用，同时对肠道细菌感染具有特效。现有地衣芽孢杆菌的制备方法产物单一，目前的工艺仍有待改进。
发明内容
本发明的目的在于提供一种既能制备优良地衣芽孢杆菌，又能制备大量其他有益代谢产物的制备方法。为实现上述目的，本发明的技术解决方案是:提供一种地衣芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:
液态发酵:8%接种地衣芽孢杆菌于发酵罐中，边加边搅拌，添加结束后，控制一定的搅拌转速，好氧培养，保持一定温度，发酵过程pH值不低于6.5 ；
所述液体培养基成分为:淀粉0.5重量％,尿素0.5重量％,豆柏粉I重量％,磷酸氢二钾0.6重量％，磷酸二氢钾0.3重量％，酵母膏0.05重量％，硫酸镁0.1重量％，硫酸锰0.02重量% ；
固体发酵:50%接种 液态发酵所得到的发酵液于固体培养基中，进行封闭式厌氧发酵一定时间，保持一定温度，发酵过程pH值不低于6-6.5 ；
所述固体培养基成分为:红糖I重量％，玉米粉50重量％，麸皮37.35重量％，豆柏粉10重量％，硫酸镁0.6重量％，硫酸铵0.5重量％，磷酸氢二钾0.5重量％，吐温-80 0.05体积％ ;
烘干和检测。所述地衣芽孢杆菌为保藏号为CGMCC N0.2876的地衣芽孢杆。所述液态发酵为8%接种保藏号为CGMCC N0.2876的地衣芽孢杆菌于所述发酵罐中，边加边搅拌，搅拌速度60-80rpm,添加结束后,控制转速230_270rpm的条件下好氧培养48小时，保持温度37°C，发酵过程的初始通气量为1:0.5，pH值不低于6-6.5 ;发酵过程中灌压为 0.04—0.06Mpa ；
所述固体发酵为50%接种液态发酵所得到的发酵液于固体培养基中，进行封闭式厌氧发酵80-110小时，72小时之前35— 38°C，72-96小时升温至55_60°C。所述烘干采用气流干燥方式烘干，所述烘干温度不高于85°C，优选为80— 85°C。所述检测为NY1461-2007方法检测活菌总数；显微镜计数法检测芽孢数；液相色谱仪检测有机酸；碘-淀粉比色法检测淀粉酶；福林-酚试剂法检测蛋白酶。本发明还保护所述方法制备的地衣芽孢杆菌和或其他成分，所述其他成分为有机酸和或消化酶；优选的，所述有机酸为3-甲基丁酸，2-甲基-丁酸，苯乙酸，十五烷酸，软脂酸，亚油中的至少一种；所述消化酶为淀粉酶和蛋白酶中的至少一种。本发明与现有方法相比，增加了固体、厌氧式发酵阶段，在这个阶段中，地衣芽孢杆菌数量不再增加，但产生大量代谢产物，使得最终产品既含有益生菌-地衣芽孢杆菌，又含有益生元-代谢产物，这两类物质的综合作用，能显著改善动物的胃肠道功能，促进动物健康生长，效果优于单一的活菌。同时本发明的方法简单，成本低廉。便于工业化实施。
具体实施例方式下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1:液态发酵
1、培养基组份:淀粉0.5重量％，尿素0.5重量％，豆柏粉I重量％，磷酸氢二钾0.6重量％，磷酸二氢钾0.3重量％，酵母膏0.05重量％，硫酸镁0.1重量％，硫酸锰0.02重量％。2、接种量:8%地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),来自厦门大学化学化工学院，保藏于CGMCC，保藏号CGMCC N0.2876，保藏日期2009年01月14日，专利号:ZL201010269454，
公开日期是2010年12月01日。3、温度:37°C
4、初始通气量:1:0.5
5、发酵过程pH值:不低于6.5
6、搅拌转速:250rpm
7、发酵过程溶氧量相对值:不低于25%
8、发酵过程中灌压:0.04—0.06Mpa
9、发酵时间:好氧培养48小时。以1000升发酵罐为例:8%接种量接种地衣芽孢杆菌CGMCC N0.2876于800升培养基中，培养基加入在1000升发酵罐(江苏科海生物工程设备有限公司，KRH-CPJ1000L)中，边加边搅拌(搅拌速度:70rpm)，添加结束后，在转速250rpm的条件下好氧培养48小时。实施例2:固体发酵
1、培养基组份:红糖I重量％，玉米粉50重量％，麸皮37.35重量％，豆柏粉10重量％，硫酸镁0.6重量％，硫酸铵0.5重量％，磷酸氢二钾0.5重量％，吐温-80 0.05体积％
2、接种量:50%(使用实施例1所得到的发酵液)
3、发酵方式:封闭式厌氧发酵
4、发酵过程温度-J2小时之前35—38°C，72-96小时升温至55_60°C
5、发酵时间:96小时
实施例3:烘干及检测
采用低温沸腾干燥，烘干温度不高于85°C。实施例1使用1000升发酵罐，最终产量760千克(直接烘干后称重)，得率94.6%。(得率=最终产物重量*100%/ (800+液体培养基干物质重))
检测方法:1.地衣芽孢杆菌:活菌总数用NY1461-2007规定的方法检测，芽孢数用显微镜计数法检测，PH值用pH计进行检测。地衣芽孢杆菌活菌总数大于或等于200亿/克，其中芽孢数大于或等于180亿；pH值5-6。2.有机酸:用高效液相色谱仪进行定性定量检测，结果为含量0.50%，定性检测确定有机酸为3-甲基丁酸，2-甲基-丁酸，苯乙酸，十五烷酸，软脂酸，亚油酸；
3.消化酶(淀粉酶，蛋白酶):淀粉酶用碘-淀粉比色法进行定性、定量分析，蛋白酶用福林-酚试剂法进行定性、定量分析；结果为淀粉酶1000IU/克，蛋白酶500IU/克。尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上`述实施例进行变化、修改、替换和变型。
权利要求
1.一种地衣芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤 液态发酵8%接种地衣芽孢杆菌于发酵罐中，边加边搅拌，添加结束后，控制一定的搅拌转速，好氧培养，保持一定温度，发酵过程pH值不低于6. 5 ； 所述液体培养基成分为淀粉0. 5重量％,尿素0. 5重量％,豆柏粉I重量％,磷酸氢二钾0. 6重量％，磷酸二氢钾0. 3重量％，酵母膏0. 05重量％，硫酸镁0. I重量％，硫酸锰0. 02重量% ； 固体发酵50%接种液态发酵所得到的发酵液于固体培养基中，进行封闭式厌氧发酵一定时间，保持一定温度，发酵过程pH值不低于6-6. 5 ； 所述固体培养基成分为红糖I重量％，玉米粉50重量％，麸皮37. 35重量％，豆柏粉10重量％，硫酸镁0. 6重量％，硫酸铵0. 5重量％，磷酸氢二钾0. 5重量％，吐温-80 0. 05体积％ ; 烘干和检测。
2.权利要求I的地衣芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌为保藏号为CGMCC No. 2876的地衣芽孢杆。
3.权利要求I的地衣芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，所述液态发酵为8%接种保藏号为CGMCC No. 2876的地衣芽孢杆菌于所述发酵罐中，边加边搅拌，搅拌速度60-80rpm，添加结束后，控制转速230-270rpm的条件下好氧培养48小时，保持温度37°C，发酵过程的初始通气量为1:0. 5，pH值不低于6-6. 5 ;发酵过程中灌压为0. 04—0. 06Mpa。
4.权利要求I的地衣芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，所述固体发酵为50%接种液态发酵所得到的发酵液于固体培养基中，进行封闭式厌氧发酵80-110小时，72小时之前35—380C，72-96 小时升温至 55-60°C。
5.权利要求I的地衣芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，所述烘干采用气流干燥方式烘干。
6.权利要求5的地衣芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，所述烘干温度为80—85°C。
7.权利要求I的地衣芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，所述检测为NY1461-2007方法检测活菌总数；显微镜计数法检测芽孢数；液相色谱仪检测有机酸；碘-淀粉比色法检测淀粉酶；福林-酚试剂法检测蛋白酶。
8.权利要求1-7任一方法制备得到的地衣芽孢杆菌和或其他成分，其特征在于，所述其他成分为有机酸和或消化酶。
9.权利要求8制备得到的地衣芽孢杆菌和或其他成分，其特征在于，所述有机酸为·3-甲基丁酸，2-甲基-丁酸，苯乙酸，十五烷酸，软脂酸，亚油中的至少一种；所述消化酶为淀粉酶和蛋白酶中的至少一种。
全文摘要
本发明提出了一种地衣芽孢杆菌的制备方法。包括接种CGMCC No.2876的地衣芽孢杆菌进行液态发酵、固体发酵、烘干和检测的步骤。本发明的方法所制备得到的地衣芽孢杆菌还伴有大量其他有益代谢产物3-甲基丁酸，2-甲基-丁酸，苯乙酸，十五烷酸，软脂酸，亚油酸等有机酸和淀粉酶及蛋白酶等消化酶。使得最终产品既含有益生菌-地衣芽孢杆菌，又含有益生元-代谢产物，这两类物质的综合作用，能显著改善动物的胃肠道功能，促进动物健康生长，效果优于单一的活菌。同时本发明的方法简单，成本低廉，便于工业化实施。
文档编号C12P7/64GK103255094SQ20131018708
公开日2013年8月21日 申请日期2013年5月20日 优先权日2013年5月20日
发明者廖庄旺 申请人:厦门六维生物科技有限公司